01 - Doutorado - Ciência Animal

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Estratégias técnicas e farmacológicas para o incremento da eficiência reprodutiva em fêmeas bovinas
(Universidade Estadual de Londrina, 2020-02-18) Bonato, Denis Vinicius; Seneda, Marcelo Marcondes; Morotti, Fábio; Zanin, Roberta Garbelini Gomes; Santos, Gustavo Martins Gomes dos; Cavalieri, Fábio Luiz Bim
Resumo: O objetivo do primeiro trabalho foi avaliar o efeito das categorias nulíparas, primíparas e multíparas sobre a taxas de manifestação de estro e de prenhez de fêmeas tratadas com GnRH no momento da inseminação artificial em tempo-fixo (IATF). Foram utilizadas matrizes da raça Nelore alocadas por categoria, compreendendo 144 nulíparas, 132 primíparas e 255 multíparas. As matrizes foram submetidas a um protocolo de IATF. Para identificar a manifestação de estro, no oitavo dia do protocolo, a região sacrococcígea foi pintada e no dia da inseminação artificial, a ausência da tinta indicava o estro. As fêmeas que não manifestaram estro foram tratadas com 10μg de GnRH. A taxas de manifestação de estro e prenhez foram analisadas por um modelo de regressão logística. A taxa de manifestação de estro foi inferior (P = 0.006) na categoria das primíparas (61,36%) em comparação com as nulíparas (76,39%) e as multíparas (75,69%). As taxas de prenhez entre as categorias foram semelhantes, tanto para as que manifestaram estro (nulíparas 84,54%, primíparas 86,42% e multíparas 80,31%; P = 0.398) quanto para as que não manifestaram estro (nulíparas 41,18%, primíparas 56,86% e multíparas 58,06%; P = 0.244), inclusive a taxa de prenhez total (nulíparas 74,3%, primíparas 75% e multíparas 74,9%; P = 0.989). As primíparas apresentaram menor taxa de manifestação de estro e não houve diferença da taxa de prenhez entre as categorias. No segundo trabalho para compreender melhor a relação da contagem de folículos antrais (CFA) e o desempenho reprodutivo, foram realizados dois experimentos. No primeiro, o objetivo foi avaliar a repetibilidade da CFA nos dias do protocolo de indução de ovulação, enquanto no segundo foi comparar a dinâmica e hemodinâmica ovariana de vacas com baixa e alta CFA. Para avaliar a repetibilidade da CFA, 20 vacas foram submetidas à sincronização de ovulação e avaliação da CFA por ultrassonografia diariamente. Para comparar dinâmica folicular de fêmeas de alta e baixa CFA, a CFA de 80 vacas da raça Holandesa foi aferida e destas selecionadas 9 fêmeas para o grupo de baixa (≤ 15 folículos) e 9 para o grupo de alta (≥ 25 folículos). A dinâmica folicular foi acompanhada diariamente por ultrassonografia nos modos B e Doppler, durante os dias do protocolo e onze dias após a ovulação, para avaliar o corpo lúteo (CL). Para determinar a constância da CFA realizou-se o cálculo de repetibilidade. Para os dados da dinâmica, as variáveis paramétricas foram analisadas pelo teste T. Adotou-se significância quando p ≤ 0,1. A repetibilidade da CFA nos diferentes dias do protocolo foi de 0.98. Os animais de baixa CFA demonstraram maior diâmetro do folículo pré-ovulatório (FO) (16,09 x 15,00mm; P = 0.059), maior área de vascularização do FO (17,36 x 8,16mm2; P = 0.005), maior área de CL (579,10 x 405,80mm2; P = 0.0001) e maior área de perfusão sanguínea do CL (97,16 x 68,30 mm2; P = 0.021). A CFA tem alta repetibilidade nos diferentes dias do protocolo e as vacas de baixa CFA demonstraram FOs e CLs maiores e com maior perfusão sanguínea. Abstract: The objective of first study was to evaluate the effect of nulliparous, primiparous and multiparous categories on the rates of estrus and pregnancy of females who did not manifest estrus and are treated with GnRH at the time of fixed-time artificial insemination (FTAI). 531 matrices were used, all of the Nellore breed allocated by category, comprising 144 nulliparous, 132 primiparous and 255 multiparous. The matrices were submitted to an FTAI protocol. To identify the manifestation of estrus, on the eighth day of the protocol, the sacrococcygeal region was painted and on the day of artificial insemination, females that showed estrus demonstrated absence of paint in this region. Females that did not show estrus were treated with 10 μg of GnRH. The rates of estrus and pregnancy manifestation were analyzed using a logistic regression model. The rate of estrus manifestation was lower (P = 0.006) in the primiparous (61.36%) category compared to nulliparous (76.39%) and multiparous (75.69%). Pregnancy rates between categories were similar, both for those who manifested estrus (nulliparous 84.54%, primiparous 86.42% and multiparous 80.31%; P = 0.398) and for those who did not manifested estrus (nulliparous 41.18%, primiparous 56.86% and multiparous 58.06%; P = 0.244), including the total pregnancy rate (nulliparous 74.3%, primiparous 75% and multiparous 74.9%; P = 0.989). Primiparous presented a lower rate of manifestation of estrus and there was no difference in pregnancy rates between categories. In the second study to better understand the relationship between antral follicle count (AFC) and reproductive performance, two experiments were performed. In the first, the objective was to evaluate the repeatability of AFC in the days of the ovulation induction protocol, while in the second it was to compare the dynamics and hemodynamics of cows with low and high AFC. To evaluate the repeatability of the AFC, 20 cows were submitted to synchronization of ovulation and evaluation of the AFC by ultrasonography daily in the protocol and eleven days after ovulation. To compare follicular dynamics of females with high and low AFC, the AFC of 80 cows was measured and from these 9 females were selected for the low group (≤ 15 follicles) and 9 for the high group (≥ 25 follicles). Follicular dynamics were monitored daily by B-mode and Doppler ultrasonography, during the days of the protocol and eleven days after ovulation, to evaluate the corpus luteum (CL). To determine the constancy of AFC, a repeatability calculation was performed. For the dynamics data of the low and high animals, the parametric variables were analyzed by the T test. Significance was adopted when p ≤ 0.1. The repeatability of the AFC on the different days of the protocol was 0.98. The animals with low AFC showed a larger diameter of the preovulatory follicle (POF) (16.09 x 15.00mm; P = 0.059), a greater vascularization area of the POF (17.36 x 8.16mm2; P = 0.005), larger area of CL (579.10 x 405.80mm2; P = 0.0001) and greater area of blood perfusion of CL (97.16 x 68.30 mm2; P = 0.021). AFC has high repeatability on the different days of the protocol and cows with low AFC demonstrated larger POFs and CLs with greater blood perfusion.
Relação da contagem de folículos antrais com o comportamento de estro e mérito genético da progênie de fêmeas Bos taurus indicus
(Universidade Estadual de Londrina, 2020-02-19) Moraes, Fábio Lucas Zito de; Seneda, Marcelo Marcondes; Morotti, Fábio; Barca Junior, Flávio Antonio; Santos, Gustavo Martins Gomes dos; Cavalieri, Fábio Luiz Bim
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a relação da contagem de folículos antrais (CFA) de vacas Bos taurus indicus submetidas à IATF com a manifestação de estro, taxa de concepção, CFA das filhas e mérito genético de seus filhos. No primeiro estudo 450 vacas Nelore multíparas, avaliadas por ultrassonografia foram classificadas em baixa (≤ 15 folículos; n= 150), intermediária (≥ 19 e ≤ 26 folículos; n= 150) ou alta (≥ 30 folículos; n= 150) CFA. No primeiro dia do protocolo hormonal (D0), as vacas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,2 g de progesterona e administrado via IM 2,0 mg de benzoato de estradiol. Após 8 dias (D8), os dispositivos de P4 foram removidos e foram administrados via IM 450 μg de cloprostenol sódico, 300 UI de gonadotrofina coriônica equina e 1,0 mg de cipionato de estradiol. Após 48 horas (D10), no momento da inseminação artificial (IA), foi realizada a avaliação da manifestação de estro. Trinta dias após a IA procedeu- se o diagnóstico de gestação por ultrassonografia. Os dados foram analisados por teste de regressão logística binária (p < 0.05). A taxa de concepção de fêmeas do grupo de baixa CFA (69,3%) foi maior (p < 0.05) em relação aos de intermediária (60%) e a alta (56,7%); e maior (p < 0.05) para a vacas que manifestaram cio (67,3%) em relação às que manifestaram cio parcial (58,2%) e as que não manifestaram cio (45,4%). A taxa de concepção foi influenciada pela CFA (p=0,04) e pelo cio (p=0,006), mas não houve efeito da interação entre CFA e cio (p=0,511). No segundo estudo, foram utilizados 444 animais Bos taurus indicus, da raça Nelore. Durante a estação de monta, foram avaliadas 222 vacas recém paridas quanto á CFA em baixa (≤ 15 folículos; n= 52), intermediária (≥ 16 e ≤ 29 folículos; n= 37) ou alta (≥ 30 folículos; n= 38) contagem. Avaliou- se 95 filhas e 127 filhos dessas vacas provenientes de IA, para análise de uma possível relação entre a CFA de mães e filhas e o mérito genético dos filhos. As filhas foram analisadas quantos sua CFA e os filhos foram avaliados num programa de melhoramento genético que utiliza matriz de parentesco além de dados de perímetro escrotal (PE) e peso corporal para classificação dos animais quanto seu mérito genético. Para análise da prole foi incluso o efeito paterno. O modelo linear generalizado de efeito misto (GLIMMIX) foi utilizado para análise da CFA, PE, peso e mérito genético. A CFA das filhas não teve relação com efeitos maternos e paternos e vacas de alta CFA apresentaram filhos com melhor mérito genético (p= 0,09). Embora esse estudo demonstre uma relação positiva da CFA com o mérito genético, mais estudos dever realizados sobre a atuação da CFA em provas de melhoramento animal. Contudo, em vacas selecionados geneticamente, as fêmeas de baixa CFA apresentam maior taxa de concepção à IATF Abstract: The aim of this study was to evaluate the relationship between the antral follicles count (AFC) of in Bos taurus indicus cows submitted to a TAI with the manifestation of estrus, conception rate, AFC of the female offspring and the genetic merit of their male offspring. In the first study, 450 multiparous Nelore cows, evaluated by ultrasound, were classified as low (≤ 15 follicles; n= 150), intermediate (≥ 19 and ≤ 26 follicles; n= 150) or high (≥ 30 follicles; n= 150) AFC. On the first day of the hormonal protocol (D0), the cows received an intravaginal device containing 1.2 g of progesterone and administered by IM 2.0 mg of estradiol benzoate. After 8 days (D8), the P4 devices were removed and IM 450 μg of sodium cloprostenol, 300 UI of equine chorionic gonadotrophin and 1.0 mg of estradiol cypionate were administered by IM. After 48 hours (D10), at the time of artificial insemination (AI), the evaluation of the estrus manifestation was performed. Thirty days after the AI, a pregnancy diagnosis was made by ultrasound. The data were analyzed by binary logistic regression test (p <0.05). The conception rate of females in the low AFC group (69.3%) was higher (p <0.05) in relation to intermediate (60%) and high (56.7%); and higher (p <0.05) for cows that showed estrus (67.3%) in relation to those that showed partial estrus (58.2%) and those that did not show estrus (45.4%). The conception rate was influenced by AFC (p = 0.04) and estrus (p= 0.006), but there was no effect of the interaction between AFC and estrus (p= 0.511). In the present study, the conception of Nelore cows was influenced by the estrus manifestation (67.3%) and low CFA (69.3%). In the second study, 444 Bos taurus indicus of the Nelore breed were used. During the breeding season, 222 cows recently calved for low CFA (≤ 15 follicles; n= 52), intermediate (≥ 16 and ≤ 29 follicles; n= 37) or high (≥ 30 follicles; n= 38) score were evaluated. 95 female offspring and 127 male offspring of these cows from AI were evaluated to analyze a possible relationship between the AFC of mothers and female offspring AFC and the genetic merit of their male offspring. The female offspring were analyzed about their AFC and male offspring were evaluated in a genetic improvement program that uses a kinship matrix in addition to scrotal perimeter (SP) and body weight data to classify the animals according to their genetic merit. For the analysis of offspring, the paternal effect was included. The generalized mixed effect linear model (GLIMMIX) was used to analyze AFC, SP, weight and genetic merit. The female offspring AFC was not related to maternal and paternal effects and high CFA cows had male offspring with better genetic merit (p= 0.09). Although this study demonstrates a positive relationship between AFC and genetic merit, more studies should be carried out on AFC performance in animal breeding tests. However, in genetically selected cows, females with low AFC have a higher conception rate at TAI.
Diarreia osmótica induzida em bezerros neonatos e tratamento com soluções eletrolíticas orais com diferentes composições
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-01-29) Bregadioli, Gabriela de Castro; Lisbôa, Júlio Augusto Naylor; Leal, Marta Lizandra do Rêgo; Carvalho, Antônio Último de; Ribeiro Filho, José Dantas; Gonçalves, Roberto Calderon
Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar os desequilíbrios hídrico, eletrolíticos e ácido base em bezerros com diarreia osmótica e desidratação induzidas, alimentados com leite integral natural, compará-los entre bezerros com acesso livre à água ou com privação de água por 12 horas noturnas e comparar os efeitos de cinco soluções eletrolíticas orais (SEO) com diferentes composições sobre esses desequilíbrios. Para isto, dois estudos foram desenvolvidos e em ambos todos os bezerros foram submetidos ao protocolo de indução de diarreia osmótica e desidratação com leite (16,5 mL/kg) acrescido de sacarose (4 g/kg, em solução 20%), espironolactona (2 mg/kg) e hidroclorotiazida (2 mg/kg), administrados por via oral, a cada 8 horas, durante 48 horas. Foram mensurados ou calculados: PPT, glicose, lactato D, lactato L, pH, pCO2, HCO3-, BE, Na+, K+, Cl-, SID3, SIG, AG, Atot e variação percentual do volume plasmático (VVP). Exames físicos foram realizados a cada 8 horas e pesagens a cada 24 horas. Análise de variância de medidas repetidas bifatorial foi utilizada nos dois estudos. No primeiro estudo, 38 bezerros (42,89 ± 3,70 kg) com 10 dias de vida, alimentados com leite natural, foram distribuídos aleatoriamente por dois grupos: GSP (n=17) com acesso livre à água durante o período de indução e GCP (n=21) com privação de água durante as 12 horas noturnas. Colheitas de sangue venoso foram realizadas nas horas 0, 24 e 48. Todos desenvolveram diarreia osmótica, desidratação leve (GSP) a moderada (GCP), hiponatremia e hipercloremia relativa e acidose metabólica moderada (GSP) a acentuada (GCP). Potassemia e glicemia não se alteraram, AG e lactato D foram mais altos no GCP, SIG foi mais baixo no GCP, e não houve hiperlactatemia L ou D. Estes desequilíbrios eletrolíticos e ácido base assemelham-se aos observados em casos naturais de diarreia. O protocolo de indução de diarreia osmótica e desidratação deve ser aplicado em bezerros alimentados com leite integral que não sejam completamente privados de água. No segundo estudo, 30 bezerros (43,12 ± 0,70 kg), com 10 dias de vida, alimentados com leite natural, foram distribuídos, por meio de sorteio, em cinco grupos de tratamento (n=6) de acordo com a SEO testada (comerciais: SEO A, B, C e D; e não comercial: SEO UEL). No dia do tratamento os bezerros continuaram recebendo leite e sacarose a cada 8 horas e receberam 6 L da SEO, divididos em duas vezes. Amostras de sangue venoso foram colhidas nas horas: -48, -24, 0, 8, 16, 24, 48 e 72. Todos os bezerros desenvolveram diarreia profusa, desidratação leve a moderada, hiponatremia e hipercloremia relativa e acidose metabólica moderada a acentuada. As SEO estudadas foram bem aceitas pelos bezerros e eficientes para a correção da desidratação, dos desequilíbrios eletrolíticos e da acidose metabólica. A SEO D não foi capaz de corrigir completamente a hiponatremia, e a SEO B provocou hiperglicemia transitória. Todas as SEO testadas são seguras e eficazes para o tratamento de bezerros diarreicos com graus moderados de desidratação e de acidose metabólica, o que indica que possuem composição adequada para esta finalidade. Abstract: The aim of the study was to evaluate water, electrolyte and acid-base imbalances in calves with induced osmotic diarrhea and dehydration, fed with natural whole milk, compare them between calves with free access to water or with water deprivation for 12 hours at night and compare the effects of five oral electrolyte solutions (OES) with different compositions on these imbalances. For this, two studies were developed and in both calves they were submitted to the protocol of induction of osmotic diarrhea and dehydration with milk (16.5 ml/kg) plus sucrose (4 g/kg, in 20% solution), spironolactone (2 mg/kg) and hydrochlorothiazide (2 mg/kg), administered orally, every 8 hours, for 48 hours. Were measured or calculated: TPP, glucose, D-lactate, L-lactate, pH, pCO2, HCO3-, BE, NA+, K+, Cl-, SID3, SIG, AG, Atot and percentage change in plasma volume (%PV). Physical exams were performed every 8 hours and weighings every 24 hours. Two-way repeated measures ANOVA was used in both studies. In the first study, 38 calves (42.89 ± 3.70 kg) aged 10 days old, fed natural milk, were randomly assigned into two groups: FWG (n=17) with free access to water during the induction period and DWG (n=21) with water deprivation during 12 hours at night. Venous blood samples were taken at hours 0, 24 and 48. All calves developed osmotic diarrhea, mild (FWG) to moderate (DWG) dehydration, hyponatremia and relative hyperchloremia and moderate (FWG) to severe (DWG) metabolic acidosis. Plasma K+ and glucose did not change, AG and D-lactate were higher in DWG, SIG was lower in DWG, and there was no L- and D-hyperlactatemia. These electrolyte and acid-base imbalances are similar to those observed in natural cases of diarrhea. The protocol for inducing osmotic diarrhea and dehydration should be applied to calves fed whole milk that are not kept totally deprived of water. In the second study, 30 calves (43.12 ± 0.70 kg), 10 days old, fed natural milk, were distributed, by lot, into five treatment groups (n=6) according to tested OES (commercial: OES A, B, C and D; non-commercial: OES UEL). On the day of treatment the calves continued to receive milk and sucrose every 8 hours and received 6 L of OES, divided twice. Venous blood samples were collected at -48, -24, 0, 8, 16, 24, 48 and 72. All calves developed profuse diarrhea, mild to moderate dehydration, hyponatremia and relative hyperchloremia and moderate to severe metabolic acidosis. The studied OES were well accepted by the calves and were effective in reversing the dehydration, the electrolyte imbalances and the metabolic acidosis. OES D was unable to completely correct hyponatremia, and OES B caused transient hyperglycemia. All tested OES are safe and effective for the treatment of diarrheal calves with moderate degrees of dehydration and metabolic acidosis, which indicates that they have adequate composition for this purpose.
Efeito da suplementação com antioxidantes no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas Bos taurus indicus
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-02-19) Bergamo, Larissa Zamparone; Seneda, Marcelo Marcondes; Landim, Fernanda da Cruz; Silva-Santos, Katia Cristina; Blaschi, Wanessa; Morotti, Fábio
Resumo: A adição de antioxidantes no meio de cultivo in vitro de folículos ovarianos préantrais bovinos contribui para o adequado desenvolvimento dos folículos, para a manutenção da integridade folicular e do estresse oxidativo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação com antioxidantes no desenvolvimento e na manutenção da integridade folicular e do estresse oxidativo no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas Bos taurus indicus. Para a realização do experimento A (Ácido Ascórbico) e do experimento B (Ácido Alfa Lipóico), ovários (n=20 e n=24, respectivamente) obtidos em abatedouro foram fragmentados e um fragmento, escolhido aleatoriamente de cada par de ovário, foi fixado em Bouin (controle não cultivado; D0). Esses fragmentos foram destinados para análise da morfologia e do crescimento folicular (histologia clássica). Um fragmento, escolhido aleatoriamente de cada par de ovário, foi congelado a -80º C (controle não cultivado; D0), para análise do estresse oxidativo (TBARS, NBT e FRAP). Os demais fragmentos foram cultivados in vitro por 6 (D6) ou 12 (D12) dias, em Meio Essencial Mínimo (MEM+) ou MEM+ suplementado com Ácido Ascórbico (50 ou 100 ng/mL) ou Ácido Alfa Lipóico (50, 100 ou 250 ng/mL), com uma matriz extracelular de gel de agarose, em estufa a 38,5º C, com ar e umidade saturada. A cada dois dias, realizou-se a troca total do meio de cultivo por meio fresco. Diferenças entre as proporções de folículos primordiais e em desenvolvimento (primário e secundário), para cada tratamento (controle não cultivado, controle cultivado e diferentes concentrações de antioxidantes testadas nos diferentes tempos), foram analisadas pelo teste de Qui-quadrado e/ou teste Exato de Fisher. Na ocorrência de um efeito significativo, as proporções foram comparadas por um teste de proporção 2x2 para se estabelecer o ranking entre os tratamentos. Os dados das análises de estresse oxidativo foram submetidos à ANOVA seguido pelo teste de Bonferroni. Os valores foram considerados significativos quando p ≤ 0,05. No experimento A, a suplementação com 100 ng/mL (33,56%; 49/146; p < 0,0001) de Ácido Ascórbico no meio de cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais, após 6 dias de cultivo, foi a mais eficiente em promover o desenvolvimento, manter a integridade folicular e os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) estáveis. No experimento B, a suplementação com 100 ng/mL (36,88%; 52/141; p < 0,0001) de Ácido Alfa Lipóico, aos 6 dias de cultivo in vitro foi a mais eficiente em promover o desenvolvimento, manter a integridade folicular e os níveis de EROs estáveis. Conclui-se que os folículos ovarianos pré-antrais inclusos em fragmentos ovarianos bovinos, provenientes de abatedouro, podem ser cultivados in vitro ao longo de 6 dias, com meio suplementado com antioxidantes, o que permite o desenvolvimento e a manutenção da integridade folicular e níveis de espécies reativas de oxigênio estáveis. Abstract: The addition of antioxidants in the in vitro culture medium of bovine preantral ovarian follicles contributes to the adequate development of the follicles, maintenance of follicular integrity and oxidative stress. Thus, our objective was to evaluate the effect of supplementation with antioxidants on the development and maintenance of follicular integrity and oxidative stress in the in vitro culture of preantral ovarian follicles from Bos taurus indicus females. For the experiment A (Ascorbic Acid) and experiment B (Alpha Lipoic Acid), ovaries (n=20 and n=24, respectively) obtained from a slaughterhouse were fragmented and a randomly obtained fragment from each pair of ovaries, was fixed in Bouin (non-cultivated control; D0). These fragments were submitted to the analysis of morphology and folicular growth (classical histology). A randomly obtained fragment from each pair of ovaries was frozen at - 80º C (non-cultivated control; D0) for analysis of oxidative stress (TBARS, NBT and FRAP). The other fragments were in vitro cultured for 6 (D6) or 12 (D12) days, in Minimum Essential Medium (MEM+) or MEM+ supplemented with Ascorbic Acid (50 or 100 ng/mL) or Alpha Lipoic Acid (50, 100 or 250 ng/mL), with an extracelular matrix of agarose gel, in an oven at 38.5º C, with air and saturated humidity. Every two days, 100% of the culture medium was replaced. Differences between the proportions of primordial and developing follicles (primary and secondary), for each treatment (uncultivated control, cultured control and different concentrations of antioxidants tested at different times), were analyzed using the Chi-square test and/or Exact Fisher test. In the event of a significant effect, the proportions were compared using a 2x2 proportion test to establish the ranking between treatments. The oxidative stress analysis data were submitted to ANOVA followed by the Bonferroni test. Values were considered significant when P ≤ 0.05. In experiment A, supplementation with 100 ng/mL (33.56%; 49/146; P < 0.0001) of Ascorbic Acid in the in vitro culture medium of preantral ovarian follicles, after 6 days of culture, was the most efficient in promoting development, maintaining integrity follicular and reactive oxygen species (ROS) levels stability. In experiment B, supplementation with 100 ng/mL (36.88%; 52/141; P < 0.0001) of Alpha Lipoic Acid, at 6 days of in vitro culture, was the most efficient in promoting development, maintaining folicular integrity and ROS levels stability. It is concluded that the preantral ovarian follicles included in bovine ovarian fragments, from slaughterhouse, can be grown in vitro over 6 days, with medium supplemented with antioxidants, which allows the development and maintenance of follicular integrity and levels of stable reactive oxygen species.
‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochoerus’ e Bartonella spp. em Capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) do Município de Pinhais, Paraná, Brasil
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-05-21) Santos, Nelson Jessé Rodrigues dos; Vieira, Rafael Felipe da Costa; Barros, Luiz Daniel de; Almeida, Jonatas Campos de; André, Marcos Rogério; Barros Filho, Ivan Roque de
Resumo: As capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris), maior espécie de roedor do mundo, estão distribuídas em todos os países da América do Sul que ficam a leste da Cordilheira dos Andes. Os desequilíbrios ecológicos causados pela presença humana provocam o deslocamento e expansão de suas populações, que convivem nos campos de cultivo e em parques urbanos, além das matas nativas. Esta espécie é fortemente associada ao parasitismo por carrapatos, potenciais transmissores de agentes infecciosos a animais e seres humanos. Existe, no entanto, uma lacuna a respeito de dois gêneros de bactérias hemotrópicas nestes roedores, a saber: Bartonella spp., reconhecida em várias espécies da mesma ordem, e os micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas), já descritos em capivaras. Neste sentido, o presente estudo objetivou detectar e caracterizar molecularmente hemoplasmas e verificar a ocorrência de Bartonella spp. em grupo de capivaras de vida livre. Para execução do estudo foram capturadas 17 capivaras (10 fêmeas e 7 machos) em armadilha tipo curral, instalada às margens de fragmento da Mata Atlântica, no município de Pinhais, Paraná. Após contenção química com uso de zarabatana e dardos contendo associação de anestésicos, foram anotados os dados de cada animal e coletadas amostras de sangue total e carrapatos. Uma alíquota de sangue de cada amostra foi submetida à avaliação de hematócrito e proteínas plasmáticas totais, outra submetida à extração de DNA para testes moleculares. Todos os carrapatos encontrados nos animais foram coletados e identificados por suas características morfológicas. Destes, onze tiveram suas glândulas salivares dissecadas e testadas pela PCR. Todas as amostras de sangue foram inicialmente submetidas à PCR para gene endógeno gapdh. Na sequência foram testadas para o gene 16S rRNA de Mycoplasma coccoides e 16S rRNA para o grupo dos hemoplasmas por meio de ensaios de PCR convencional. Aquelas que apresentaram resultado positivo foram testadas para o gene 23S rRNA de hemoplasmas. Para investigação de Bartonella spp. foi utilizada a PCR em tempo real (qPCR) baseada no gene nuoG. Todos os animais apresentavam parasitismo por carrapatos no momento da coleta, os quais foram identificados como Amblyomma dubitatum (26 machos, 16 fêmeas, 122 ninfas e 3 larvas; taxa de infestação: 9,82). Todas as amostras de sangue foram positivas para o gene gapdh e 16/17 (94,12%; IC 95% 73,02 - 98,95%) foram positivas para hemoplasmas, porém nenhuma foi positiva para Bartonella spp. Todas foram positivas para o gene gapdh e uma (9,09%) para o gene 16S rRNA. Oito amostras foram sequenciadas pelo método de Sanger em ambos os genes testados e apresentaram query coverage entre 97% e 100% para sequência de micoplasmas hemotrópicos depositadas no GenBank. Sequências do gene 16S rRNA dos hemoplasmas detectados demonstraram identidade variando de 99 -100% com hemoplasmas associados às capivaras. As sequências do gene 23S rRNA demonstraram identidade variando de 91,7% a 92,4% com ‘Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus’. Os dados indicam a existência de uma nova espécie de hemoplasma em capivaras do Brasil, aqui proposta como ‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochaeris’. Com os achados também não é possível provar a participação das capivaras na epidemiologia de Bartonella spp. Abstract: Capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris), largest living rodent in the world, are widely distributed for all South America countries located in East Andes. The ecological imbalances caused by human presence favor the displacement and expansion of its population, who live in cultivated fields and in urban parks, in addition to native habitat. This species is strongly associated with tick parasitism, potential vectors of infectious agents to animals and humans. However there is a gap regarding two genera of hemotropic bacteria in these rodents, Bartonella spp., recognized in several species of the same order, and the group of hemotropic mycoplasmas (hemoplasmas), already described in capybaras. Thereby, the present study aimed to detect and molecularly characterize of hemoplasmas and to verify the occurrence of Bartonella spp. in a group of free-living capybaras. For the study execution, 17 capybaras (10 females and 7 males) were captured in a corral trap, positioned by side of an Atlantic Forest fragment, in the municipality of Pinhais, Paraná. After chemical restraint with blowguns and darts containing an association of anesthetic, the data of each animal were recorded and whole blood and tick samples were collected. One aliquot of blood of each sample was evaluated for packed cell volume and total plasma proteins, another was subjected to DNA extraction for molecular tests. All ticks found on animals were colected and identified by their morphological characteristics. Of these, eleven had their salivary glands dissected and tested by PCR. All blood samples were initially tested for endogenous gene gapdh by PCR. After, the 16S rRNA of Mycoplasma coccoides and the 16S rRNA for the group of hemoplasmas were tested by conventional PCR. Those that tested positive were also tested for the 23S rRNA hemoplasma gene. For Bartonella spp. screening a quantitative PCR (qPCR) was used based on nuoG gene. All animals presented tick parasitism at the time of sampling, which were identified as Amblyomma dubitatum (26 males, 16 females, 122 nymphs and 3 larvae; infestation rate: 9.82); All blood samples were positive for gapdh gene and 16/17 (94.12; CI: 73.02 - 98.95%) were positive for hemoplasmas, but none were positive for Bartonella spp. All salivary glands were positive for gapdh gene and one (9.09%) for 16S rRNA gene. Eight samples were sequenced by Sanger method in both tested genes and showed query coverage between 97% and 100% for hemotropic mycoplasma sequences archived on GenBank. Sequences of 16S rRNA gene of hemoplasmas detected showed identity ranging from 99% to 100% with capybaras-associated hemoplasmas. The sequences of 23S rRNA gene showed identity ranging from 91.7% to 92.4% to 'Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus'. The data indicate the existence of a new species of hemoplasma in capybaras from Brazil, here proposed as ‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochaeris’. By the findings it is also not possible to prove the participation of capybaras in the epidemiology of Bartonella spp.
Microbiota vaginal avaliada por sequenciamento de DNA de nova geração e aspectos reprodutivos de vacas leiteiras
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-06-18) Candotti, Anne Kemmer Souza; Seneda, Marcelo Marcondes; Costa, Márcio Carvalho da; Chiaratti, Marcos Roberto; Lorenzetti, Elis; Zangirolamo, Amanda Fonseca
Resumo: A microbiota vaginal tem demonstrado relevância no âmbito da reprodução de bovinos pois alterações em sua composição podem influenciar a fertilidade. A tecnologia de sequenciamento de nova geração (SNG), Illumina, tem sido utilizada como padrão, contudo, para uma maior precisão nas análises, a tecnologia de leituras longas, PacBio, vem sendo utilizada para melhorar a sensibilidade e especificidade do perfil taxonômico, além de reduzir o risco de falsos positivos. Com o objetivo de caracterizar a microbiota vaginal de vacas leiteiras por SNG e relacionar com aspectos reprodutivos, dois estudos foram desenvolvidos. Em ambos, após o SNG, foi analisado a abundância relativa das bactérias, e calculado os índices de Alfa e Beta diversidade. O primeiro estudo identificou a microbiota vaginal de vacas da raça holandês preto e branco (HPB; n = 13) por meio do sequenciamento de leituras longas de DNA (PacBio sequencing) e comparou os dados com a técnica convencional de leituras curtas (Illumina sequencing). Este é um dos primeiros estudos a buscar leituras em nível de espécie nas bactérias do ambiente vaginal de vacas. Por meio da plataforma PacBio foram obtidas 366.509 leituras e 631.586 leituras pela Illumina. Foi possível a identificação de 27 versus 28 filos e 677 versus 662 gêneros, no sequenciamento por PacBio e Illumina, respectivamente. Ainda, foram identificadas 677 espécies pelo PacBio. A alfa diversidade demonstrou uma forte correlação (r= 0,758), de maneira significativa (p=0,003), entre o número de espécies (PacBio) e gêneros (Illumina) considerando as diferentes técnicas. O segundo estudo teve como objetivo investigar a microbiota vaginal em vacas gestantes e não gestantes por meio da plataforma de sequenciamento PacBio. Para esse estudo foram colhidos swabs vaginais de vacas leiteiras (n=13), das quais 5 ficaram gestantes (GE) e 8 permaneceram não gestantes (NG) após a inseminação artificial realizada posterior à identificação de cio natural nessas fêmeas. Foram obtidas 366.509 leituras bacterianas, sendo agrupadas em 27 filos e 677 gêneros. Os filos mais abundantes em todas as amostras avaliadas foram Firmicutes (58%) e Bacterioidetes (32%). Na análise de beta diversidade foi observado diferença comparando as comunidades bacterianas dos grupos GE (p = 0,004) e NG (p = 0,011). Além disso, houve um agrupamento evidente das vacas que permaneceram não gestantes, demostrando que suas comunidades bacterianas são mais semelhantes quando comparado com aquelas presentes em vacas gestantes. Abstract: The vaginal microbiota has been shown to be relevant in the field of bovine reproduction, as changes in its composition can influence fertility. The next generation sequencing technology (NGS), Illumina, has been used as a standard, however, for greater accuracy in the analysis, the long-read technology, PacBio, has been used to improve the sensitivity and specificity of the taxonomic profile, in addition to reduce the risk of false positives. To characterize the vaginal microbiota of dairy cows by NGS and relate it to reproductive aspects, two studies were developed. In both, after NGS, the relative abundance of bacteria was analyzed, and the Alpha and Beta diversity indices were calculated. The first study identified the vaginal microbiota of black and white Dutch cows (HPB; n = 13) by sequencing long DNA reads (PacBio sequencing) and compared the data with the conventional technique of short readings (Illumina sequencing). This is one of the first studies to look for species-level readings on bacteria in the vaginal environment of cows. Through the PacBio platform, 366,509 readings and 631,586 readings were obtained by Illumina. It was possible to identify 27 versus 28 phyla and 677 versus 662 genera, in sequencing by PacBio and Illumina, respectively. Furthermore, 677 species were identified by PacBio. Alpha diversity showed a strong correlation (r= 0.758), significantly (p=0.003), between the number of species (PacBio) and genera (Illumina) considering the different techniques. The second study aimed to investigate the vaginal microbiota in pregnant and non-pregnant cows using the PacBio sequencing platform. For this study, vaginal swabs were collected from dairy cows (n=13), of which 5 became pregnant (PG) and 8 remained non-pregnant (NP) after artificial insemination performed after the identification of natural heat in these females. 366,509 bacterial readings were obtained, being grouped into 27 phyla and 677 genera. The most abundant phyla in all samples evaluated were Firmicutes (58%) and Bacterioidetes (32%). In the beta diversity analysis, a difference was observed comparing the bacterial communities of the PG (p = 0.004) and NG (p = 0.011) groups. Furthermore, there was a clear grouping of cows that remained NP, demonstrating that their bacterial communities are more similar when compared to those present in PG cows.
Relação da concentração de proAKAP4 e fertilidade do sêmen bovino Bos indicus empregado em programas de IATF
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-02-17) Almeida, Ana Beatriz Marques; Martins, Maria Isabel Mello; Rizzoto, Guilherme; Crespilho, André Maciel; Barreiros, Thales Ricardo Rigo; Morotti, Fábio
Resumo: O sucesso da Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF) se deve, em parte, a touros férteis que produzem doses de sêmen de qualidade. A avaliação seminal pré e pós descongelação, podem ser conduzidas por meio da cinética espermática, morfologia e morfo funcionalidade. Entretanto, estudos têm demonstrado que somente estas análises in vitro não são suficientes para predizer a fertilidade de um ejaculado. Neste contexto, nos últimos anos, experimentos têm buscado por biomarcadores proteicos que apresentem relação com a fertilidade. A AKAP4 e sua precursora, proAKAP4, ganharam destaque, por serem polipeptídios de presentes no flagelo espermático, que demonstraram, relação com a motilidade dos espermatozoides e com taxas de fertilidade a campo. Diante do exposto, objetivou-se quantificar as concentrações de proAKAP4 em doses convencionais (n:8) e sexadas (n:6) de espermatozoides criopreservados de reprodutores Bos indicus; além de relacionar a proAKAP4 em doses de sêmen de touros Nelore (n:9) a taxas de prenhez obtidas por meio de programa de IATF. Além disso, 1507 vacas foram inseminadas artificialmente em tempo fixo com doses de 9 partidas de sêmen convencional avaliadas. As doses foram descongeladas à 37ºC por 30 segundos, em seguida foi conduzida a análise da cinética espermática, morfologia e morfo funcionalidade. As concentrações de proAKAP4 foram mensuradas por meio de kit ELISA seguindo as recomendações do fabricante. O teste T foi utilizado para comparar variáveis entre dois grupos (sêmen sexado para fêmea vs. sêmen convencional), a correlação de Pearson avaliou as relações entre a proAKAP4 e as características cinéticas e morfofuncionais, e para mensurar a influência da proAKAP4 sobre parâmetros in vitro foi conduzida uma regressão linear. Considerou-se significância estatística quando p<0,05. As doses de sêmen sexadas carreadoras do cromossomo X apresentaram maior concentração de proAKAP4 (67,54±17,40 ng/106 de espermatozoides) quando comparadas às doses convencionais (29,76±4,16 ng/106 de espermatozoides) (p=0,033). Contudo, não foram encontradas relações entre a quantidade de proAKAP4 e as variáveis cinéticas e morfofuncionais nos espermatozoides sexados (p>0,05). Nas doses seminais convencionais a proAKAP4 influenciou a motilidade espermática (TM: r2 = 0.49, P = 0.03); PM: r2 = 0.63, P=0.01) e as taxas de concepção obtidas na IATF (r2 = 0.51, P=0.03). Finalmente, concluiu-se que a proAKAP4 não é um biomarcador fidedigno para sêmen sexado para fêmea, contudo é um excelente indicador de fertilidade em doses de sêmen convencional, e assim, acredita-se que futuramente poderá ser uma ferramenta na seleção de touros Bos indicus férteis. Abstract: The success of Fixed Time Artificial Insemination (FTAI) is related to fertile bulls which produces sperm presenting high quality. The sperm evaluation before and post thawing is conducted through sperm kinetics, morphology and morphofunctionality. However, studies have shown that these in vitro analyzes may not be sufficient to predict the fertility of an ejaculate. In recent years, experiments have searched for protein biomarkers that are related to fertility. AKAP4 and its precursor, proAKAP4, are being recognized, since these polypeptides are present in the sperm flagellum, and demonstrated relationship to sperm motility and fertility rates. The study aimed to quantify the concentrations of proAKAP4 in conventional (n:8) and X-sorted (n:6) doses of cryopreserved sperm from Bos indicus breeders; in addition to relating the proAKAP4 from sperm straws of Nelore bulls (n:9) to pregnancy rates obtained by a FTAI program. Besides, 1507 cows were artificially inseminated at a fixed time with doses of 9 batches of conventional semen evaluated. The doses were thawed at 37ºC for 30 seconds, then the analysis of sperm kinetics, morphology and morphofunctionality was conducted. ProAKAP4 concentrations were measured using an ELISA kit following the manufacturer's recommendations. The T test was used to compare variables between two groups (X-sorted sperm vs. conventional sperm), the Pearson's correlation evaluated the relationships between proAKAP4 and kinetic and morphofunctional characteristics, and to measure the influence of proAKAP4 on in vitro parameters a linear regression was carried out, considering statistical significance when P<0.05. The X-sorted sperm had a higher concentration of proAKAP4 (67.54±17.40 ng/106spermatozoa) when compared to conventional doses (29.76±4.16 ng/106spermatozoa) (P= 0.033). However, no relationships were found between the proAKAP4 and the kinetics or morphofunctional variables in X-sorted sperm (P>0.05). At conventional sperm straws, proAKAP4 influenced sperm motility (TM: r2=0.49, P=0.03); PM: r2=0.63, P=0.01) and the conception rates obtained in the FTAI (r2=0.51, P=0.03). Finally, it was concluded that proAKAP4 is not a reliable biomarker for X-sorted sperm, however it is an excellent indicator of fertility in conventional sperm samples, and thus, it is believed that in the future it may be a helpful tool to selecting Bos indicus bulls.
Uso de silagem de grão de milho reidratado com soro de leite na alimentação de leitões desmamados
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-02-24) Zanin, Ediane; Bumbieris Junior, Valter Harry; Carvalho, Rafael Humberto; Oba, Alexandre; Santos, José Maurício Gonçalves dos; Silva, Marcos Augusto Alves da; Silva, Caio Abércio da
Resumo: Leitões desmamados necessitam de dietas que assegurem seu desempenho zootécnico e estimulem a iniciação alimentar. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos do soro de leite fluído na qualidade da silagem de grãos de milho reidratados, bem como o uso da silagem sob o desempenho zootécnico e a preferência alimentar de leitões desmamados. Foram realizados dois experimentos, no primeiro foi avaliado a qualidade de silagens de grãos de milho reidratados com Água; Soro de leite em pó (SLP); Soro de leite fluído (SLF); Soro de leite em pó, acrescido de aditivo (SLPA); e Soro de leite fluído, acrescido de aditivo (SLFA). A SLP apresentou o menor valor de FDA (14,7 g/kg) e a SLF apresentou os menores valores de lignina (3,3 g/kg) e das N-NH3 às 240 horas de exposição ao ar (0,7 g/kg), com valor de pH final de 4,40. O uso de soro de leite se apresenta como alternativa sustentável à água para reidratar grãos de milho, além de proporcionar boa qualidade e estabilidade das silagens. No segundo experimento foram avaliados 120 leitões com 21 dias de idade, durante a fase pré-inicial I (21 a 32d) quanto ao desempenho produtivo submetidos com as seguintes dietas experimentais: ração controle a base de milho grão seco (RC); ração com silagem de grão de milho reidratado com água (SGMR+A); ração com SGMR com água, acrescido com inoculante (SGMR+AI); e ração com SGMR com soro de leite (SGMR+SL). Para avaliar a preferência alimentar, 20 leitões desmamados foram submetidos a duas fases de avaliação, a fase restrita envolveu o fornecimento da dieta referência (D1, grão de milho seco), seguido da dieta teste (D2, silagem de grão reidratado com soro de leite) por cinco dias cada, e na livre escolha foram ofertadas as duas dietas por 6 dias. Na fase pré-inicial I não houve diferença para o ganho de peso diário (GPD), consumo diário de ração (CDR) e conversão alimentar (CA) (p>0,05). Leitões dos grupos SGMR+AI e SGMR+SL não apresentaram ocorrências de magreza e depressão. Foi observado tendência (p=0,06) de menor ocorrência e severidade de diarreia em leitões de SGMR + A e SGMR+AI, ou seja, os quadros diarreicos diminuíram, refletindo num GPD nas primeiras semanas pós-desmame equivalente a dietas com grãos secos. Os leitões permaneceram mais tempo deitados na fase restrita para D1 (276,7 min/d), maior tempo gasto em pé (74,4 min/d) e maior consumo de ração (649,1 g de MS) para D2. Durante a livre escolha os leitões gastaram mais tempo consumindo (118,7 min/d) e maior consumo (761,3 g de MS) para D1, com preferência de 56,39% para dieta referência. A SGMR apresentou superioridade nutricional e promoveu melhor aceitabilidade e desempenho dos leitões nas primeiras semanas pós-desmame. Abstract: Weaned piglets need diets that ensure their performance and encourage feeding initiation. The aim of this study was to evaluate the effects of acid whey on the quality of rehydrated corn grain silage, as well as the use of silage on performance and feed preference of weaned piglets. Three experiments were carried out. In the first, the quality was evaluated of corn grain silages rehydrated with Water; Whey powder reconstituted with water (WPW); Acid whey (AW); Whey powder reconstituted with water, plus additive (WPA); Acid whey, plus additive (AWA). The SLP had the lowest observed value of ADF (14.7 g/kg) and SLF had the lowest values of lignin (3.3 g/kg) and N-NH3 at 240 hours of exposure to air (0.7 g/kg), with a final pH value of 4.40. The use of whey is a sustainable alternative to water to rehydrate corn grains, in addition to providing good quality and stability of the silages. In the second experiment, 120 piglets with 21 days of age were evaluated, during the pre-initial phases I (21 to 32d) and II (33 to 50d) to the following experimental diets: a control ration with dry corn grain (CR); rehydrated corn grain silage with water (CGSR+W); rehydrated corn grain silage with water and inoculant (CGSR+WI); rehydrated corn grain silage with acid whey (CGSR+AW). There was no difference for zootechnical performance in pre-initial phase I for daily weight gain (DWG), daily feed intake (DFI), and feed conversion (FC) (p>0,05). Piglets from the CGSR+WI and CGSR+AW groups did not show occurrences of thinness and depression. A trend towards (p=0,06) a lower occurrence and severity of diarrhea was observed in piglets of CGSR+W and CGSR+WI, that is, the diarrheal symptoms decreased, reflecting a DWG in the first weeks post-weaning equivalent to diets with dry grains. Piglets remained lying longer in the restricted phase for D1 (276.7 min/d), and the longest time spent standing (74.4 min/d) and feed intake (649.1 g DM) for D2. During free choice, the piglets spent more time consuming (118.7 min/d) and higher consumption (761.3 g DM) for D1, with a preference of 56.39% for the reference diet. The CGSR+AW showed nutritional superiority and promoted greater acceptability and performance of piglets in the first weeks after weaning.
Padronização e avaliação de um teste de Elisa competitivo utilizando a proteína recombinante MSP5-PR1 para o diagnóstico sorológico da anaplasmose bovina
Marana, Elizabete Regina Marangoni; Vidotto, Odilon [Orientador]; Machado, Rosângela Zacarias; Garcia, João Luis; Vidotto, Marilda Carlos; Pereira, Ademir Benedito da Luz
Resumo: Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) é o agente etiológico da anaplasmose bovina que se encontra distribuída mundialmente afetando regiões tropicais e subtropicais É transmitido por vetores, sendo a doença caracterizada clinicamente por febre, anemia hemolítica, perda de peso, aborto e morte A marginale possui seis Proteínas Majoritárias de Superfície (MSPs) caracterizadas e designadas MSP1a (15 kDa), MSP1b (1 kDa), MSP2 (36 kDa), MSP3 (86 kDa), MSP4 (31 kDa), MSP5 (19 kDa) Estas proteínas estão envolvidas em importantes eventos entre as células do hospedeiro e o parasita, como respostas humoral e celular, transporte de nutrientes, adesão e invasão de eritrócitos e variação antigênica A MSP5 é uma proteína altamente conservada entre o isolados estudados de diferentes regiões geográficas, inclusive centrale de Anaplasma centrale e A ovis O presente trabalho teve como objetivo padronizar e avaliar um teste imunoenzimático um teste imunoenzimático competitivo (cELISA-PR1), utilizando a rMSP5 do isolado PR1 de A marginale desenvolvido para o diagnóstico sorológico de anaplasmose O gene msp5 foi clonado no plasmídio pRSETB e expresso em Escherichia coli BL21 Star (DE3) One Shot (Invitrogen®) O seqüenciamento do gene msp5 mostrou 98% identidade com os isolados Florida e Saint Maries, 97% com isolados Brasil-Pernambuco e Havana; e 91% com A centrale A proteína recombinante rMSP5 a partir do isolado PR1 (rMSP5-PR1) foi reconhecida pelo anticorpo de monoclonal ANAF16C1 em Western blotting O cELISA-PR1 e a IFI foram comparados com cELISA pela análise de 283 soros bovinos, sendo 135 amostras negativas oriundas da região de Santa Vitória do Palmar - RS, e 147 amostras de soros positivas de bovinos naturalmente infectados com A marginale que obtiveram densidade óptica inferior a ,49 em 49nm (DO49) através do cELISA foram selecionadas de 245 amostras da região Sul do Brasil Os testes apresentaram especificidade de 1% e 99,3%, sensibilidade de 1% e 98%, com um coeficiente kappa de ,993 e ,978, respectivamente Na comparação de cELISA-PR1 e IFI com cELISA, a análise de 245 amostras de soros de bovinos naturalmente infectados com A marginale na região de Sul do Brasil apresentou uma prevalência de 77,55%, 81,63% e 76,73% respectivamente, com especificidade de 96,7% e 98,9%, sensibilidade de 98,9%, 96,3% e um coeficiente kappa de ,956 e ,699, respectivamente Conclui-se, através dos resultados obtidos, que cELISA-PR1 pode ter uso semelhante ao cELISA em testes diagnósticos contra A marginale durante a infecção aguda, avaliação sorológica, e identificação de bovinos portadores sãos A soroprevalência de A marginale foi determinada em 223 amostras de soros de bovinos com dois anos de idade ou mais, da Região de Centro-Sul no Estado de Paraná: região de Ponta Grossa, Guarapuava e Laranjeiras; através da pesquisa de anticorpos da classe IgG contra A marginale por ensaio imunoenzimático de competição cELISA-PR1 De todos os soros bovinos analisados, 13 (58,74%) reagiram ao cELISA-PR1, uma porcentagem significativa de animais, sendo esta região de instabilidade de enzoótica, susceptível à infecção por A marginale e ao desenvolvimento de anaplasmose O tipo de exploração da propriedade, sistema de criação e manejo, a presença de outros animais (ovino, caprino, eqüinos, animais silvestres), forma de comercialização de animais não apresentou diferença significativa entre as variáveis analisadas apresentando p>,1
Palma forrageira Orelha de Elefante Mexicana (Opuntia stricta Haw), em substituição ao feno de capim Tífton-85, na alimentação de cordeiros em terminação
Oliveira, Graciliano Paiva; Mizubuti, Ivone Yurika [Orientador]; Ribeiro, Edson Luis de Azambuja; Simonelli, Sandra Maria; Grecco, Fabíola Cristine de Almeida Rêgo; Poveda-Parra, Ângela Rócio; Medeiros, Geovergue Rodrigues de [Coorientador]
Resumo: Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da substituição do feno de capim Tifton-85 por palma forrageira Orelha de Elefante Mexicana (Opuntia stricta Haw) como fonte de forragem, sobre o consumo, a digestibilidade aparente dos nutrientes, desempenho, características de carcaça e qualidade de carne de cordeiros em confinamento Quatro dietas isoprotéicas foram formuladas, em que a palma forrageira substituiu , 3, 6 e 9% a matéria seca do feno de capim Tifton-85 na dieta, a qual tinha relação volumoso:concentrado de 5:5 Foram utilizados 48 ovinos sem raça definida, machos inteiros, pesando 21, ± 2,93 kg, distribuídos em um delineamento inteiramente ao acaso, com 12 repetições O período experimental teve duração de 75 dias, sendo 15 para adaptação Foram realizadas pesagens dos animais, para obtenção dos pesos inicial e final, do ganho de peso médio diário e da eficiência alimentar Diariamente foram pesadas e colhidas amostras das sobras para posteriores análises bromatológicas Após 3 dias do início do experimento iniciou-se o ensaio de digestibilidade com coleta de fezes, ração e sobras de ração em todos os animais, duas vezes ao dia por sete dias As amostras foram pre-secas, moídas e incubadas in situ, seguida da determinação da fibra em detergente ácido indigestível, que foi utilizada como indicador interno para determinação da digestibilidade Após abate dos animais e avaliações de carcaça, a perna e o Longissimus dorsi foram retirados para análises de composição tecidual e de qualidade da carne Houve efeito quadrático no consumo de matéria seca, matéria orgânica, proteína bruta, extrato etéreo, fibra em detergente neutro, carboidratos totais, carboidratos não fibrosos e energia metabolizável Houve efeito linear crescente dos níveis de substituição sobre a digestibilidade da ateria seca e da matéria orgânica, e não houve efeito sobre os coeficientes de digestibilidade da proteína bruta, fibra em detergente neutro, carboidratos totais e carboidratos não fibrosos Os níveis substituição do feno por palma forrageira afetaram de forma linear crescente o peso da carcaça quente, o peso da carcaça fria e o índice de compacidade da carcaça, mas não houve efeito sobre rendimento das carcaça quente e rendimento de carcaça fria, área de olho de lombo, conformação, acabamento, espessura de gordura subcutânea, rendimento dos cortes comerciais e composição tecidual da perna As médias para os rendimentos dos componentes teciduais foram: músculo (64,94%), osso (16,92%), gordura (14, 92%) e outros tecidos (2,71%) Também não houve efeito dos tratamentos sobre as medidas aferidas no Longissimus dorsi Não houve efeito sobre os percentuais de umidade, proteína bruta e matéria mineral do músculo Longissimus dorsi No entanto, houve efeito linear crescente no percentual de extrato etéreo Conclui-se que a substituição do feno de Tifton-85 por palma forrageira Orelha de Elefante Mexicana em dietas para cordeiros, até o nível de 9%, afeta positivamente a ingestão de nutrientes e o desempenho produtivo dos animais No entanto, não afeta a digestibilidade dos nutrientes, os parâmetros da carcaça e a qualidade da carne
Fusariotoxinas em suínos : efeitos tóxicos in vivo e ex vivo
Gerez, Juliana Rubira; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro [Orientador]; Silva, Caio Abércio da; Di Santis, Giovana Wingeter; Santos, Joice Sifuentes dos; Scussel, Vildes
Resumo: Com objetivo de avaliar os efeitos sistêmicos da contaminação alimentar por micotoxinas, enfatizando aspectos morfológicos e imunohistoquímicos, dois experimentos foram realizados No primeiro experimento, 2 leitões de cinco semanas de idade foram divididos em quatro grupos experimentais Os animais receberam durante 28 dias os seguintes tratamentos: dieta controle, dieta contaminada com desoxinivalenol (DON) (1,5 mg/kg), dieta contaminada com DON (2 mg/kg) + nivalenol (NIV) (1,3 mg/kg) + zearalenona (ZEA) (1,5 mg/kg) ou dieta contaminada com DON (3 mg/kg) + NIV (1,3 mg/kg) + ZEA (1,5 mg/kg) A dieta mono-contaminada não alterou o ganho de peso, entretanto os animais expostos à dieta multi-contaminada apresentaram uma diminuição significativa no ganho de peso final A ingestão crônica das dietas contaminadas induziu alterações histológicas no intestino, como atrofia e fusão de vilosidades, diminuição na altura de vilosidades e na profundidade de criptas, redução no número de células caliciformes e linfócitos O fígado, os linfonodos mesentéricos e o baço dos animais expostos às dietas contaminadas apresentaram um aumento significativo de lesões Um aumento significativo na expressão de caspase-3 nos órgãos linfoides foi observado nos animais que receberam as dietas contaminadas No segundo experimento, 12 leitões de 4 a 5 semanas de idade foram eutanasiados para obtenção de explantes jejunais, os quais foram expostos a cinco tratamentos por 4 horas, sob agitação constante a 37ºC em atmosfera umidificada a 5% de CO2 No tratamento controle foi utilizado meio de cultura William E sem ou com o diluente DMSO a ,1% Nos demais tratamentos os explantes foram expostos a DON, NIV (1, 3, 1 µM) e fusarenona X (FX) (,3, 1 e 3 µM) Após incubação, as amostras de tecidos foram processadas histologicamente e analisadas utilizando-se escore histológico Não foi observada diferença significativa no escore histológico entre amostras não incubadas e incubadas com meio de cultura na ausência ou presença de DMSO As principais alterações observadas nos explantes expostos às micotoxinas foram atrofia de vilosidades, células epiteliais cúbicas e pavimentosas, edema na lâmina própria e desnudamento apical com perda de enterócitos Os tratamentos individuais com DON, NIV e FX induziram uma diminuição do escore histológico a partir das doses de 3µM, 1µM e ,3 µM, respectivamente Em conclusão, os dados obtidos fornecem uma melhor compreensão dos efeitos das fusariotoxinas isoladas ou em combinação sobre a morfologia intestinal e de órgãos linfoides, as quais podem predispor os animais a infecções secundárias
Parâmetros fenotípicos e genéticos de características de crescimento de cordeiros Santa Inês do nascimento ao desmame
Koritiaki, Natália Albieri; Ribeiro, Edson Luis de Azambuja [Orientador]; Fortaleza, Ana Paula de Souza; Koetz Junior, Celso; Castro, Filipe Alexandre Boscaro de; Simonelli, Sandra Maria; Muniz, Carolina Amália de Souza Dantas [Coorientadora]
Resumo: O objetivo deste estudo foi estimar os parâmetros fenotípicos e genéticos de características de crescimento de uma população de cordeiros Santa Inês do nascimento ao desmame Assim sendo, foram identificados os fatores ambientais (sexo do cordeiro, tipo de parto, ano de nascimento, época de nascimento, data juliana de nascimento, peso e idade da mãe ao parto) que influenciam o peso e as medidas bioméricas Foi definido o modelo estatístico mais apropriado para avaliar desenvolvimento das características de crescimento Foram estimadas as inter-relações entre o peso e as medidas biométricas, utilizando a técnica de componentes principais (análise multivariada), e foram calculados os parâmetros genéticos, herdabilidades e covariâncias, do peso e medidas corporais de cordeiros Santa Inês do nascimento ao desmame A princípio os fatores ambientais foram analisados isoladamente, submetidos à análise de variância Foram avaliadas dois modelos cada um com diferentes formações de grupos de contemporâneos O grupo de contemporâneo um (GC1) incluiu os efeitos ano de nascimento, sexo do cordeiro e tipo de parto, enquanto que o grupo de contemporâneo dois (GC2) incluiu os efeitos ano de nascimento, sexo do cordeiro e tipo de parto mais o efeito da data juliana de nascimento As características de crescimento, como peso e medidas corporais foram influenciadas por fatores ambientais, portanto para que as avaliações genéticas dessas variáveis sejam realizadas de maneira correta é importante considerá-las nas análises Uma maneira eficiente de reduzir os efeitos não genéticos é a utilização de grupos de contemporâneos O modelo contendo data juliana de nascimento não foi eficiente, pois ocorreu maior perda de informações quando comparado a análise com o grupo de contemporâneo sem data juliana O uso de componentes principais na seleção de animais de corte permite a geração de índices precisos, ponderando as variáveis econômicas a serem selecionadas O primeiro componente principal da relação entre o peso e as medidas biométricas é considerado um indicador do tamanho e do volume dos animais Os demais componente são indicativos da conformação dos animais Desta forma, os componentes principais entre o peso e as medidas biométricas possibilitam a observação das diferenças na forma do corpo dos cordeiros, sendo possível a seleção de animais mais compactos, precoces e com boas conformação para corte As herdabilidades para o peso e medidas biométricas ao desmame foram de magnitude alta, as herdabilidade maternas foram maiores ao nascimento Dessa forma podem constituir boas características para selecionar os animais superiores
Modelo hepático ex vivo em suínos : efeito do acetaminofeno, da fumonisina e do ácido fítico
Weinert, Nádia Cristine; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro [Orientador]; Flaiban, Karina Keller Marques da Costa; Bertagnon, Heloisa Godoi; Gerez, Juliana Rubira; Seki, Meire Christina
Resumo: Devido à similaridade orgânica ao homem, suínos são utilizados como modelos experimentais Os explantes ex vivo são promissores na avaliação de xenobióticos no organismo Assim, objetivou-se avaliar os efeitos da fumonisina (FB1), acetaminofeno e do ácido fítico (IP6) utilizando-se o modelo de explante hepático de suínos Foram realizados dois experimentos, nos quais foram analisados: resposta ao estresse oxidativo, morfologia e biomarcadores hepáticos O experimento (E1) avaliou o efeito de IP6 (5mM) nos explantes expostos ao acetaminofeno (2mM) Utilizou-se nove suínos de terminação provenientes de frigoríficos (grupo experimental 1 - GE1) e seis suínos com 4 dias (grupo experimental 2 - GE2), estes eutanasiados Os explantes (8 mm) passaram pelos seguintes tratamentos durante quatro horas: controle 4h (somente meio); IP6 (5mM); acetaminofeno (2mM) e IP6 + acetaminofeno Explantes não incubados (Ctrl h) foram colhidos para comparação com incubados (Ctrl 4h) Os sobrenadantes foram colhidos após 1/2h, 2h e 4h de incubação para análise de biomarcadores (ALT, AST, FA, GGT, proteína e colesterol) Após 4h, (3/tratamento) foram fixados, processados para análise histológica ou congelados (2/tratamento) a - 8ºC, para avaliação do estresse oxidativo: substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), tetrazólio de nitroazul (NBT), capacidade antioxidante por meio da glutationa reduzida (GSH), potencial de redução do ferro (FRAP) e capacidade de eliminação de radicais livres (ABTS) Para GE1 e GE2, na presença de IP6, observou-se atividade enzimática menor de GGT e FA em relação ao controle Com acetaminofeno, a atividade enzimática (FA, AST, ALT), PT e colesterol reduziram comparado ao controle Para o GE2, notou-se queda de FA e ALT para acetaminofeno mais IP6 em relação ao controle Os explantes incubados apenas com meio de cultura (Ctrl 4h) apresentaram aspectos histológicos similares aos não incubados (Ctrl h) Assim, a incubação não interferiu na integridade do tecido Para o ensaio TBARS (GE1), ocorreu diferença entre controle 4h e acetaminofeno, menor para este último Estes achados indicam que provavelmente não houve peroxidação lipídica nos explantes expostos ao acetaminofeno Houve redução da GSH no grupo exposto ao IP6 Para o GE2, houve aumento da capacidade antioxidante (GSH, FRAP e ABTS) do grupo acetaminofeno comparado com controle 4h, IP6 e acetaminofeno acrescido de IP6 e para o NBT diferença entre controle 4h e acetaminofeno, maior para este último, indicando possível lesão oxidativa No segundo experimento (E2), a metodologia foi similar ao primeiro, sendo os explantes submetidos aos tratamentos: controle h; controle 4h; IP6 (5mM); FB1 (1 µM); FB1 + IP6 Não houve diferença no escore da lesão entre GE1 e GE2 Para o GE1 e GE2, os tratamentos IP6 e FB1 + IP6 diminuíram a atividade de FA em relação ao controle e FB1 Quando o IP6 foi adicionado ao FB1, reduziu a atividade de ALT e PT comparado ao FB1 e ao controle Para o GE1 e GE2, a FB1 induziu ao aumento de GSH comparado ao IP6 e controle, respectivamente, enquanto a incubação com FB1 + IP6 dimininui GSH em comparação ao FB1 Os resultados obtidos evidenciaram uma ação protetora do IP6
Palatabilidade de diferentes ingredientes e aromas para gatos domésticos
Menolli, Kássia Amariz Pires; Mizubuti, Ivone Yurika [Orientador]; Cardoso, Mauro José Lahm; Prado-Calixto, Odimari Pricila; Félix, Ananda Portella; Trevizan, Luciano; Vasconcellos, Ricardo Souza [Coorientador]
Resumo: Palatabilidade representa a escolha do animal frente a um determinado alimento Odor, sabor, textura, temperatura e formato do kibble são medidas importantes que interferem na referência alimentar O gato é um carnívoro estrito, com preferências pouco conhecidas, mas muito seletivo na escolha da dieta Devido a esta seletividade é importante conhecer as preferências alimentares dos gatos visando desenvolver alimentos comerciais mais palatáveis O objetivo do trabalho foi determinar as preferências alimentares de gatos domésticos por meio de um protocolo padronizado e por análises visuais, comportamentais e laboratoriais Para atender o objetivo foi realizado uma revisão sistemática de protocolos de palatabilidade para cães e gatos, cuja observação direciona a falta de padronização Um experimento para definição de protocolo foi feito, atravez de três ensaios com o uso de 4 gatos, recebendo alimentação quatro vezes ao dia, durante vinte minutos, em gaiolas individuais, por dez dias O protocolo ficou definido em um dia de adaptação ao manejo e um dia de coleta de dados Observou-se que o número de animais depende de cada ensaio, se usar desvio padrão de ,2, 23 gatos são suficientes dentro da confiança estatística O sexo não interfere na escolha e avaliação da primeira escolha que poderá ser feita pela manhã ou à tarde Este protocolo foi utilizado para avaliar o confronto de rações de diferentes fontes de proteina (concentrado proteico de soja, glúten de milho, farinha de vísceras de frango, farinha de carne), lipídeos (óleo de frango, óleo de peixe, sebo e banha), amido (batata, milho, arroz e sorgo) e aromas (bacon, baunilha, carne, laranja, manteiga, queijo) Para este experimento foram utilizados 35 gatos, com duração de 2 dias em cada confronto e avaliação da primeira escolha pela manhã, razão de ingestão e observação do comportamento alimentar com uso de câmeras Como resultado, observou-se no ensaio com ingredientes proteicos, a rejeição pelo glúten de milho Na comparação entre fontes de lipídeos, houve rejeição pelo sebo No ensaio com amido houve preferência pelo arroz em relação ao sorgo e nos ensaios com aromas, houve preferência nas rações sem aromas Em relação a análise de comportamento por imagens de câmeras, verificou-se que os gatos são animais que utilizam olfato e paladar para escolha de um alimento Por meio dos dados de razão de ingestão, pode-se perceber que o alto consumo foram em rações que eles escolhiam pelo paladar Conclui-se que um protocolo definido é necessário para maior confiança nos resultados, para gatos o ensaio de preferência alimentar dará em um dia de adaptação ao manejo e um dia de coleta de dados Uso de 23 animais é suficiente, desde que use um desvio padrão ,2, as avaliações podem ser feitas em qualquer horário e sexo de animais castrados não interfere na resposta A Tabela do poder do teste ou o comando no Rstudio (versão 333) dará maior confiança no número de animais a ser utilizado O uso de rações com sebo bovino, glúten de milho e aromas demonstraram rejeição em gatos domésticos
Cryptosporidium spp. e Giardia spp. e amostras de água e de fezes de animais e humanos, presença de praguicidas organofosforados e carbamatos em água e leite e associação à fatores de risco em propriedades de bovinocultura leiteira
Toledo, Roberta dos Santos; Freire, Roberta Lemos [Orientador]; Garcia, João Luis; Breganó, Regina Mitsuka; Franco, Regina Maura Bueno; Osaki, Sílvia Cristina
Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalência e identificar Cryptosporidium spp e Giardia spp em amostras de fezes e de água, além de verificar a presença de organofosforados e carbamatos em amostras de água e leite em propriedades de bovinocultura leiteira e associar os resultados a fatores de exposição Amostras de fezes de bovinos, suínos, e humanos e de água foram coletadas em 55 propriedades localizadas em Araruna e Campo Mourão, PR Pesquisa de (oo)cistos nas fezes foi realizada por meio da coloração de Ziehl Neelsen e centrifugo-flutuação em sulfato de zinco Amostras positivas nestas técnicas foram submetidas à nested-PCR para amplificação do gene SSU rRNA Análise microbiológica foi realizada em amostras de água de todas as propriedades Análise parasitológica da água foi realizada em 31 propriedades por imunofluorescência direta e nested-PCR A identificação das espécies de Cryptosporidium foi realizada por sequenciamento e, no caso de infecções mistas, por PCR-RFLP A pesquisa de organofosforados e carbamatos foi realizada pela técnica de cromatografia em camada delgada Variáveis de exposição foram obtidas por meio de questionário epidemiológico A prevalência de infecção por Giardia spp em todos os bovinos foi 7,6% e em bezerros até dois meses 17,1%; por Cryptosporidium spp foi 1,2% em todos os bovinos e 25,3% em bezerros até dois meses Entre as amostras de fezes de bovino positivas na PCR, C parvum foi identificado em 41 (64%), C ryanae em 8 (12,5%), C bovis em 4 (6,3%), C andersoni em 5 (7,8%) e infecção mista em 2 (31,3%) Apenas um pool de fezes de suíno foi positivo para Giardia spp e cinco foram positivos para Cryptosporidium spp Estes parasitos não foram identificados nas amostras de fezes humanas Em amostras de água, coliformes termotolerantes foram identificados em 25 (45,5%) propriedades Giardia e Cryptosporidium foram identificados em três amostras de água, as quais também possuíam coliformes termotolerantes C parvum foi identificado em uma das amostras, cuja propriedade possuía bezerros positivos para a mesma espécie A presença de coliformes foi associada à origem da água, estrutura e degradação de nascentes, chuva e turbidez Organofosforado e carbamato foram identificados em 51% e 23,6% das amostras de leite e em 31% e 9,1% das amostras de água respectivamente Organofosforados se destacaram entre os mais utilizados como praguicidas nas lavouras e ectoparasiticidas nos animais O uso de orgnofosforados nas lavouras demonstrou associação com sua presença em leite e água Conclui-se maior prevalência de Cryptosporidium e Giardia em bezerros e presença de C parvum e Giardia duodenalis em água de propriedades leiteiras A maioria das fontes de água não possui proteção adequada, principalmente nascentes, com alta frequência de coliformes de origem fecal Resíduos de praguicidas também estão presentes em água e leite, principalmente organofosforados Há a necessidade de monitoramento de resíduos no leite, conscientização e assistência a produtores rurais para uso de praguicidas, manejo de animais, preservação de fontes naturais de água e tratamento da água de consumo humano e animal
Toxoplasma gondii e gatos domésticos : uso de uma vacina para diminuir a eliminação de oocistos e avaliação da re-eliminação
Zulpo, Dauton Luiz; Garcia, João Luis [Orientador]; Falavigna-Guilherme, Ana Lucia; Biazzono-Nabut, Luciane; Breganó, Regina Mitsuka; Navarro, Italmar Teodorico
Resumo: O presente estudo teve como objetivos, avaliar o uso de uma vacina de proteína recombinante (rROP2) em gatos domésticos para prevenir a eliminação de oocistos do Toxoplasma gondii, bem como, acompanhar a eliminação de oocistos em gatos infectados e re-infectados com diferentes cepas do parasita Doze gatos foram utilizados no experimento para formar três grupos, G1, G2 e G3 O G1 foi imunizado com 1µg de rROP2 mais 2µg de Quil-A O G2 recebeu 1µg de BSA mais 2µg de Quil-A O G3 recebeu solução fisiológica, permanecendo como controle Todos os tratamento de imunização foram administrados via nasal e realizados no dia , 21, 42, 63 do experimento O desafio foi efetuado no dia 7, com 8 cistos da cepa ME-49 As fezes foram examinadas e o numero de oocistos por grama de fezes foi determinado O G1 eliminou 86,7% e 34,1% menos oocistos que os grupos controles, solução fisiológica e BSA + Quil-A, respectivamente Os anticorpos IgG e IgA foram avaliados pelo ELISA Dois gatos apresentaram IgG e IgA antes do desafio, mas não houve relação com uma menor eliminação de oocistos Todos os gatos soroconverteram após o desafio Para avaliar a re-eliminação de oocistos em gatos, dez gatos soronegativos ao T gondii foram utilizados para o estudo Os gatos foram infectados com cistos da cepa ME-49 Após esta infecção os gatos foram divididos em três grupos, G1 (n: 2), G2 (n: 5), e G3 (n: 3) Os animais do G1 e G2 foram re-infectados após 12 meses com cistos da cepa VEG e PB-1, respectivamente O G2 e G3 foram re-infectados novamente com 36 meses recebendo cistos da cepa VEG As infecções foram realizadas com aproximadamente 8 cistos teciduais Os gatos foram avaliados quanto a eliminação de oocistos e produção de anticorpos Todos os gatos elimiram oocistos quando infectados com a cepa ME-49 Apenas um gato (1/2) do G1 quando re-infectados após 12 meses com a cepa VEG eliminou oocisto O G2 não eliminou oocistos quando re-infectados após 12 meses com a cepa PB-1 e quanfo re- infectados novamente após 36 meses com a cepa VEG, três gatos (3/4) eliminaram oocistos No G3, dois gatos (2/3) eliminaram oocistos quando re-infectado após 36 meses com a cepa VEG Portanto, seis de nove gatos re-eliminaram oocistos quando re-infectados com cepa heteróloga Todos os gatos foram IgM, IgG e IgA positivos após a primeira infecção com a cepa ME-49 e permaneceram até a ultima análise experimento
Efeitos da fumonisina B1, desoxinivalenol e ácido fítico sobre explantes jejunais de suínos : avaliação morfológica, imuno-histoquímica, expressão de citocinas e estresse oxidativo
Silva, Elisângela Olegário da; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro [Orientador]; Silva, Caio Abércio da; Venâncio, Emerson José; Luciano, Fernando Bittencourt; Santos, Joice Sifuentes dos
Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos tóxicos das micotoxinas desoxinivalenol (DON) e fumonisina B1 (FB1) sobre o intestino e investigar a ação moduladora do ácido fítico (IP6) por meio de um modelo ex vivo, analisando a morfologia, proliferação celular, apoptose, expressão de E-caderina e ciclooxigenase-2 (cox-2), estresse oxidativo e expressão de citocinas em jejuno de suínos Para tal, no primeiro experimento, foram utilizados cinco suínos com 24 dias de idade, os quais foram eutanasiados, o jejuno foi excisado, os explantes colhidos (4 explantes/animal) com um punch de 8 mm de diâmetro e submetidos a oito tratamentos (seis explantes/tratamento) : controle (somente meio de cultura), IP6 5mM, FB1 7µM, DON 1 µM, DON 1 µM+ FB1 7 µM, DON 1µM + IP6 5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM e DON 1 µM+ FB1 7 µM+IP6 5 mM, incubados durante quatro horas sob agitação constante em estufa a 37°C Após esse período, três explantes de cada tratamento foram fixados em solução de formalina tamponada a 1% e processados para realização do exame histológico e imuno-histoquímico para os anticorpos anti-ki-67, anti-caspase-3, anti-E-caderina e anti-cicloxigenase-2 Para a análise do estresse oxidativo, três explantes foram congelados em nitrogênio líquido, armazenados a -8C° e posteriormente processados para a avaliação dos níveis de glutationa reduzida (GSH), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e capacidade da atividade antioxidante por meio dos testes de 2, 2–azinobis-3-etil–benzotiazolina-6-ácido sulfônico (ABTS) e poder de redução do ferro (FRAP) Alterações morfológicas, diminuição da expressão de E-caderina, aumento da proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e ocorrência de estresse oxidativo foram mais evidentes nos explantes expostos aos tratamentos com DON A presença de IP6 reduziu significativamente as alterações morfológicas, proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e estresse oxidativo, e aumentou a expressão de E-caderina nos explantes jejunais expostos às micotoxinas Para avaliação da expressão de citocinas e peptídeos antimicrobianos, um segundo experimento com metodologia similar ao primeiro foi realizado Explantes jejunais foram colhidos (21 explantes/animal) e submetidos aos seguintes tratamentos (três explantes/tratamento): controle (somente meio de cultura), FB1 7µM, FB1 7 µM+IP6 2,5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM, DON 1 µM, DON 1µM + IP6 2,5 mM e DON 1µM + IP6 5 mM Após a incubação, os explantes foram congelados em nitrogênio liquido e armazenados a - 8°C para avaliação da expressão das citocinas pró-inflamatórias (IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-1, IFN-?, TNF-a) e anti-inflamatórias (IL-1) e ß-defensinas 1 (pBD-1) e 2 (pBD-2) por meio da reação em cadeia pela polimerase em tempo real A exposição às micotoxinas induziu a alterações na expressão das citocinas e ß-defensinas A presença de IP6, principalmente na dose de 5mM modulou os efeitos das micotoxinas, tornando a expressão da resposta inflamatória e antimicrobiana similar aos explantes controle Os resultados do presente estudo evidenciaram os efeitos tóxicos da FB1 e DON sobre o jejuno de suínos, assim como o efeito protetor do IP6 em modular as alterações morfológicas, imunológicas e do estresse oxidativo induzido por tais micotoxinas
Suporte social em bezerros leiteiros após a mochação : dor, interação social e consumo de alimentos sólidos
Camiloti, Tatiane Vito; Fregonesi, José Antônio [Orientador]; Bridi, Ana Maria; Cestari, Andressa Amorim; Vieira, Andreia de Paula; Ludovico, Agostinho
Resumo: O suporte social pode ajudar o animal a enfrentar melhor às adversidades encontradas durante a vida Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do ambiente social no comportamento de bezerros leiteiros após a mochação com ferro quente No primeiro experimento, 14 bezerros machos da raça Holandesa foram alojados em baias individuais ou em grupo dinâmico com outros bezerros e presença de suas mães no período noturno e foram mochados aos 37 ± 3 dias de idade Comportamentos como movimentos rápidos de orelhas e cabeça, coçar a cabeça com os membros traseiros ou contra paredes e objetos e auto lamber-se foram observados diretamente por 2 minutos em cada uma das seguintes horas após a mochação 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 12 e 24 Nas primeiras horas observadas (1, 2, 3 e 4), bezerros criados individualmente apresentaram mais movimentos de coçar a cabeça do que animais em grupo (P=,1) e também mais comportamentos de lamber-se (P=4) No período equivalente as horas 5, 7 e 9, bezerros criados individualmente também apresentaram mais comportamento de coçar a cabeça (P=,2) que bezerros criados em grupo Houve interação entre observaçao e ambiente social no período equivalente as horas 12 e 24 para o comportamento de lamber-se e bezerros individuais expressaram mais desse comportamento que os animais criados em grupo social complexo após a mochação No segundo experimento, 24 bezerros machos da raça Holandesa foram alocados em baias individuais ou em pares, e a idade e procedimento de mochação foram os mesmos utilizados no primeiro experimento, porém dessa vez metade dos animais passou pelo procedimento de mochação sem aplicação do ferro quente primeiro e a outra metade sofreu a mochação propriamente dita primeiro Todos os animais em pares foram expostos duas vezes ao ambiente experimental, sendo a primeira vez como atores (mochados) e a segunda vez como observadores (parceiro mochado) Comportamentos relacionados a dor como coçar a cabeça, movimentos rápidos de cabeça e interações sociais entre os pares foram observados diretamente por 2 minutos nas horas 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 12, 24 e 36 após o procedimento de mochação sem aplicação do ferro quente e a mochação propriamente dita, e o consumo de alimentos sólidos foi mensurado toda manhã Não houve nenhum efeito do ambiente social nos comportamentos de dor e no consumo de ração total misturada O consumo de grãos foi maior para os bezerros criados em pares que bezerros criados individualmente (P=,3) Os bezerros expressaram mais interações sociais quando o segundo bezerro passou pelos procedimentos nos pares do que quando o primeiro bezerro passou pelos procedimentos nas horas 1, 2, 3 e 4 após a mochação (P=,3) Nesse mesmo período de tempo houve uma diminuição de movimentos rápidos de cabeça quando o segundo bezerro passou pelos procedimentos comparando com o primeiro Nas horas 12 e 24 após a mochação, as interações sociais entre os animais foram maiores quando o segundo bezerro foi mochado Conclui-se que a mochação a ferro quente é dolorosa em bezerros dessa idade e somente um parceiro não foi suficiente para diminuir a expressão de comportamentos de dor Interações sociais podem ajudar na recuperação da dor Outros estudos devem ser realizados para melhor compreender os efeitos de grupos sociais na superação da dor e outros estados afetivos de bezerras leiteiras
Difratometria de raios X como ferramenta na detecção de fraudes em leite
Battaglini, Ana Paula Pavão; Beloti, Vanerli [Orientador]; Urbano, Alexandre; Fagan, Éder Paulo; Médici, Kerli Cristina; Pretto-Giordano, Lucienne Garcia
Resumo: A adição de água ao leite é a fraude mais praticada e dificilmente é realizada de forma isolada A detecção de fraudes em leite é uma tarefa difícil tanto para a indústria como para os órgãos de fiscalização Assim, métodos alternativos para a inspeção de leite podem auxiliar na identificação de substâncias fraudulentas A difração de raios X (DRX) é capaz de identificar substâncias quando presentes na forma de cristais, produzindo difratogramas com picos característicos Substâncias intencionalmente adicionadas ao leite podem alterar os padrões cristalográficos e influenciar a cristalização da lactose do leite O objetivo deste trabalho foi estabelecer metodologia alternativa de detecção de fraudes em leite, verificando a capacidade da DRX em detectar alterações no perfil cristalográfico do leite Para isso, substâncias adicionadas ao leite com a intenção de fraude, leite in natura e soluções padrão de lactose a 4,5% adicionadas de ureia, citrato de sódio e sacarose e foram submetidas à analise de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e DRX A MEV e a DRX mostrou a lactose como principal componente cristalizado no leite liofilizado A intensidade dos picos de lactose do leite liofilizado variou dependendo da quantidade de sólidos e gordura naturalmente presentes no leite A quantidade de sólidos totais do leite também influenciou a formação dos cristais de lactose A técnica DRX foi capaz de detectar com precisão e rapidez o citrato de sódio e açúcar antes de serem adicionadas ao leite, ou quando adicionadas em altas concentrações A DRX também foi capaz de identificar a presença de ureia em solução padrão de lactose a 4,5% nas três concentrações testadas Porém, não foi capaz de detectar a presença de citrato de sódio e sacarose quando adicionadas em solução de lactose 4,5% nas concentrações comumente utilizadas na fraude de leite A intensidade dos picos de lactose variou naturalmente no leite liofilizado, portanto não deve ser considerada quando se analisa alterações cristalográficas causadas pela adição de substâncias ao leite
Análise molecular de cepas incomuns de rotavírus suíno grupo A
Lorenzetti, Elis; Alfieri, Amauri Alcindo [Orientador]; Vilas-Bôas, Laurival Antônio; Barreiros, Marco Antônio Bacellar; Lunardi, Michele; Headley, Selwyn Arlington
Resumo: A diarreia neonatal é um dos principais problemas sanitários que acomete leitões em todo o mundo Em sistemas intensivos de produção o rotavírus suíno grupo A (RVA) é uma das principais etiologias de diarreia em leitões lactentes e recém-desmamados A caracterização dos genotipos das cepas de RVA detectadas em surtos de diarreia é de grande importância para a identificação de novos genotipos virais, para a análise da diversidade genética, identificação de eventos de ressortimento e transmissão interespécies O objetivo deste estudo foi realizar análises filogenéticas em três cepas de RVA identificadas em fezes diarreicas de leitões As duas cepas virais do primeiro estudo (BRA381 e BRA382) foram selecionadas durante um estudo retrospectivo de genotipagem realizado em amostras fecais diarreicas positivas para o RVA pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida, por apresentarem resultados negativos em testes de genotipagem utilizando primers genotipo-específico para os principais protótipos de RVA de origem humana e animal (bovino e suíno) A cepa viral do segundo estudo (BRA843) foi selecionada para a análise de todos os genes por ser uma cepa G4P[6] diferente do protótipo suíno, a cepa Gottfried No primeiro estudo os produtos da RT-PCR dos genes VP7 (G) e VP4 (P) foram sequenciados e a análise filogenética possibilitou a identificação do genotipo G26P[13] e G26P[X] nas cepas BRA381 e BRA382, respectivamente G26 é um genotipo raro que, até então, somente havia sido identificado em cepas de RVA suíno da Ásia (Japão e China) e, possivelmente, em uma cepa de origem humana da Tailândia O genotipo P[13] é o terceiro genotipo mais comum em RVA suíno, porém a associação G26P[13] ainda não havia sido descrita em cepas de RVA em todo o mundo No segundo estudo, a análise dos 11 genes de uma cepa (BRA843) de RVA suíno G4-IX P[6]-If, anteriormente caracterizada como distinta do protótipo G4P[6] (Gottfried) de origem suína, revelou estreita relação com cepas de RVA detectadas em suínos e também com cepas detectadas em humanos e animais provenientes de ressortimento com cepas suínas Estas características sugerem que a cepa BRA843 seja de origem suína A constelação de genotipos (G4-P[6]-I5-R1-C1-M1-A8-C1-T7-E1-H1) identificada nesta cepa brasileira de RVA suíno tem estrutura Wa-like com genotipos comumente detectados em cepas de RVA de origem suína O genotipo T7 é um genotipo raro que foi primeiramente descrito na cepa de RVA UK (protótipo) de origem bovina Posteriormente, o genotipo T7 foi relatado em cepas de RVA de humanos provenientes de ressortimento com cepas suínas e bovinas Recentemente, o genotipo T7 foi também identificado em cepas de RVA suíno reforçando a origem suína deste genotipo No Brasil, este é o primeiro estudo com análise de todos os genes de uma cepa suína de RVA G4P[6], bem como a primeira descrição de uma cepa G4P[6] suína detectada em um hospedeiro suíno carreando o genotipo T7 Os dois estudos revelaram a complexidade de genotipos de RVA circulantes em rebanhos suínos brasileiros, bem como a importância da análise de todos os genes para a compreensão dos mecanismos de evolução das cepas de rotavírus e o papel dos suínos como reservatórios de uma constelação de genotipos de RVA passíveis de infectar tanto animais quanto humanos

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