01 - Doutorado - Ciência Animal

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Capacidade de detecção de adulterações e suficiência das provas oficiais para assegurar a qualidade do leite pasteurizado
(2013-02-19) Silva, Livia Cavaletti Corrêa da; Beloti, Vanerli; Fagan, Eder Paulo; Santana, Elsa Helena Walter de; Giordano, Luciene Garcia Pretto; Mattos, Marcos Rodrigues de
O leite é um alimento sujeito à fraudes. As mais frequentes são a adição de água, reconstituintes, conservantes e neutralizantes. Apesar da legislação determinar a pesquisa diária dessas substâncias, a avaliação do leite pelas indústrias geralmente é realizada apenas por análises físico-químicas genéricas como densidade e crioscopia. Contudo, essas fraudes muitas vezes são calculadas para impedir sua identificação por provas de rotina não específicas. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a ocorrência de fraudes, resíduos de antibióticos e irregularidades físico-químicas e microbiológicas em leite pasteurizado, bem como avaliar a capacidade de detecção de adulterações e a suficiência das provas oficiais específicas e inespecíficas na identificação da adição de reconstituintes, conservantes e neutralizantes. Foram avaliadas 100 amostras de leite pasteurizado, produzido no Paraná, para a presença de reconstituintes, conservantes, neutralizantes e antibióticos e demais parâmetros físico-químicos e microbiológicos determinados pela legislação. Em outro experimento, a capacidade de detecção das provas oficiais para pesquisa de sacarose, cloretos, amido, formaldeído, cloro, hipoclorito, peróxido de hidrogênio e neutralizantes da acidez foi avaliada utilizando-se de amostras adulteradas em laboratório. Foram avaliados adicionalmente testes não oficiais para avaliar a presença de inibidores do crescimento microbiano e o efeito inibidor de algumas substâncias conservantes e neutralizantes sobre a microbiota do leite cru. Os resultados mostraram que das 100 amostras de leite pasteurizado, 51% apresentaram problemas, das quais 25% estavam fora dos padrões nas análises físico-químicas e 10% nas análises microbiológicas, 14% apresentaram resíduos de antibióticos e a adição de reconstituintes foi detectada em 13% das amostras. Observou-se que a avaliação do leite apenas por análises físico-químicas de rotina, como densidade e crioscopia não é suficiente para identificar fraudes por adição de água e reconstituintes. As provas para a pesquisa específica de substâncias reconstituintes apresentaram boa capacidade de detecção, assim como a prova para pesquisa de formaldeído. A adição de sacarose em amostras adulteradas no laboratório elevou a porcentagem de lactose detectada por equipamentos que utilizam infravermelho e ultrassom, demonstrando que estes equipamentos não quantificam especificamente a lactose. Quanto às amostras adicionadas de conservantes e neutralizantes no laboratório, a prova inespecífica da cultura de iogurte foi capaz de detectar a inibição de crescimento nas amostras adicionadas de formaldeído, peróxido de hidrogênio, hipoclorito e hidróxido de sódio, apresentando resultados próximos aos das provas oficiais para a pesquisa dessas substâncias. A adição de formaldeído, peróxido de hidrogênio e hipoclorito promoveu reduções significativas nas contagens de micro-organismos aeróbios mesófilos no leite cru adulterado no laboratório. o entanto, não foi possível detectar peróxido de hidrogênio e compostos clorados após 24 horas de refrigeração, provavelmente em consequência da degradação e /ou inativação dessas substâncias no leite. A prova para a pesquisa de neutralizantes da acidez detecta a substância apenas quando a alcalinização é excessiva. A neutralização equilibrada do ácido lático resulta na anulação da capacidade de detecção da prova. A pesquisa de inibidores microbianos, neutralizantes e reconstituintes é obrigatória apenas para leite cru, porém, a presença de grande parcela de amostras positivas para reconstituintes e antimicrobianos no leite pasteurizado demonstra falhas no controle de qualidade e pode indicar a prática de adulteração do leite também pela indústria.
Neospora caninum em vacas leiteiras e bezerras da região oeste do Paraná: associação entre soropositividade e histórico de aborto, e a expressão gênica das citocinas IFN-y e IL-10
(2017-08-31) Frigotto, Tiago Andre; Garcia, João Luis; Vidotto, Odilon; Chryssafidis, Andreas Lazaros; Guimarães Junior, José da Silva; Bogado, Alexey Leon Gomel
O protozoário Neospora caninum é considerado um dos principais agentes causadores de abortamentos em bovinos leiteiros, promovendo severos prejuízos econômicos à atividade. Há duas formas de transmissão, sendo a transplacentária a forma mais importante para a manutenção da infecção no rebanho. Durante a gestação de vacas infectadas, há resposta imune do hospedeiro frente ao parasita pela produção de citocinas inflamatórias, como o Interferon Gamma (IFN-?) e a Interleucina 10 (IL-10), no intuito de conter a infecção do N. caninum impedindo que ocorra o abortamento. Os objetivos deste trabalho foram, inicialmente, associar a presença de anticorpos contra N. caninum com histórico de abortamento em vacas leiteiras. Em seguida, objetivou-se avaliar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum em vacas leiteiras recém-paridas e em suas progênies; e a expressão gênica das citocinas pró-inflamatórias IFN-? e IL-10 na interface materno-fetal para caracterizar as respostas imunes que ocorrem em associação com infecção por N. caninum em vacas parturientes e em suas progênies. A sorologia foi realizada por meio da reação de imunofluorescência indireta (IFI) (sendo consideradas positivas quando os títulos foram maiores ou iguais a 1:100) e a expressão gênica das citocinas foi realizada pela qPCR (de células provindas da papa de leucócitos) e avaliada pelo método de Quantificação Relativa (QR). Em nove propriedades leiteiras que possuíam vacas com histórico de abortamento, avaliou-se um total de 46 vacas leiteiras, sendo 28 com histórico de um ou mais abortamentos e 18 sem histórico de abortamentos. A soro ocorrência de anticorpos contra N. caninum entre todas as vacas avaliadas foi de 39,1% (18/46), entre as vacas com histórico de abortamento foi de 57,1% (16/28) e de 11,1% (2/18) nas vacas que não haviam abortado. Dentre as vacas soropositivas, 88,9% possuíam histórico de aborto. Todas as propriedades avaliadas apresentaram animais com anticorpos contra o N. caninum. Vacas soropositivas apresentaram 10,6 vezes mais chances de serem sororreagentes ao Neospora caninum do que vacas sem histórico de abortamento, concluindo-se que existe associação entre histórico de abortamento e presença de anticorpos contra Neospora caninum. Para a determinação da ocorrência de anticorpos anti-N. caninum e a expressão gênica das citocinas em vacas leiteiras e em bezerras sororreagentes, utilizou-se oito propriedades leiteiras de quatro municípios da região oeste do Paraná. Coletou-se amostras de sangue de vacas e das progênies no primeiro dia após o parto, totalizando 54 animais adultos e 55 bezerras (houve um parto gemelar). Nova colheita foi realizada nas bezerras aos seis meses de idade. A ocorrência de anticorpos anti-N. caninum nas vacas recém-paridas foi de 9,23% e das progênies ao nascimento foi de 23,2%. Aos seis meses de idade, 23% (3/13) das bezerras foram novamente sororreagentes. Nos oito rebanhos monitorados, 37,5% (3/8) possuíam animais reagentes. Os grupos de animais sororreagentes e não sororreagentes não diferiram entre si quando avaliado os níveis de IFN-? e IL-10, tanto para as vacas quanto para as bezerras (p>0,05). A expressão gênica das citocinas IFN-? e IL-10 foi menor, apesar de não significativamente, em bezerras e vacas soropositivas em relaçãoàs soronegativas ao Neospora caninum.
Inteligência computacional e lógica fuzzy na classificação da qualidade tecnológica da carne suína
(2018-02-27) Peres, Louise Manha; Bridi, Ana Maria; Nicolau, Juliana Pampana; Ayrosa, Pedro Paulo da Silva; Barbon Junior, Sylvio
A classificação da qualidade da carne suína é de extrema importância, uma vez que a partir desta podemos avaliar direta e indiretamente as ações tomadas na cadeia produtiva. Inúmeros são os padrões de classificação descritos na literatura, não havendo consenso entre eles no que se refere a quantidade de classes nem tampouco em relação aos limiares entre classes. E estes limiares são rígidos, ou seja, para uma amostra ser classificada ela tem que se encaixar numericamente nos limiares máximo e mínimo de uma classe e por isso é comum haver amostras que não se enquadram em nenhuma classe devido aos fatores intrínsecos e extrínsecos que afetam a qualidade da carne, sendo nesta ocasião denominadas amostras não factíveis. "Qual padrão escolher para classificar a qualidade tecnológica da carne?" e "O que fazer para classificar uma amostra quando ela não se enquadra em nenhuma classe?". As soluções para esta problemática são apresentadas nos dois artigos que compõem esta tese. ARTIGO I: "Meta-recommendation of pork quality standards" - através da meta- recomendação, utilizando o algoritmo de árvore de decisão J48 obtivemos resultado de máximo desempenho para o meta-modelo, considerando as medidas de acurácia, coeficiente kappa, verdadeiro-positivo, falso-positivo, precisão, revocação e F-measure (média ponderada entre precisão e revocação). Sendo assim, é notória a contribuição destes resultados para direcionar com confiabilidade o padrão de qualidade de carne suína mais adequado a qualquer dataset em estudo. ARTIGO II: "Fuzzy approach for classification of pork into quality grades: coping with unclassifiable samples" - quando classificamos as amostras com a lógica clássica, segundo os limiares rígidos dos padrões descritos, facilmente encontramos amostras não factíveis. Em função disto, muitos lotes de carne podem ser direcionadas para nichos de mercados não condizentes com suas características tecnológicas. Os resultados encontrados nesse artigo foram relevantes, pois a porcentagem de amostras não factíveis foi reduzida consideravelmente quando utilizada a lógica fuzzy em comparação a lógica clássica. Com este trabalho conseguimos preencher satisfatoriamente várias lacunas da classificação da qualidade da carne suína. Inicialmente fizemos a meta-recomendação do padrão mais adequado ao dataset e na sequência aplicamos a lógica fuzzy para aumentar a porcentagem de amostras classificáveis. Assim, é notória a contribuição da lógica fuzzy como uma ferramenta viável e confiável para comercializar produtos cárneos estrategicamente em função de sua classe de qualidade.
Efeito do tanino condensado e diferentes níveis de suplementação sobre a verminose, metabolismo e desempenho produtivo de ovelhas e seus cordeiros
(2018-02-28) Grandis, Fernando Augusto; Ribeiro, Edson Luis de Azambuja; Silva, Leandro das Dores Ferreira da; Schuntzemberger, Amanda Massaneira de Souza; Porto, Petrônio Pinheiro; Cunha Filho, Luiz Fernando Coelho da
Objetivou-se avalair o efeito do tanino condensado, associado a níveis de suplementação, sobre a verminose, metabolismo e desempenho produtivo de ovelhas e seus cordeiros, durante o final de gestação e lactação. Testou-se três níveis de suplementação alimentar: 0,6%, 1,2% e 1,8% do peso corporal (PC), associados à presença ou ausência de extrato de acácia-negra (1,08g/kg PC). Os animais foram alimentados com essas rações durante os últimos 21 dias de gestação e durante a lactação, até o desmame, realizado aos 70 dias. Estudou-se também o efeito de estado fisiológico (dias em relação ao parto). Constatou-se efeito de suplemento sobre OPG. Não foi observada interação entre TC e suplemento. Os animais que receberam os maiores níveis apresentaram contagem média inferior (460,33, 416,54 e 148,10 para 0,6, 1,2 e 1,8%, respectivamente). Obteve-se efeito de estado fisiológico sobre o OPG. As ovelhas apresentaram menores OPGs com o aproximar do desmame (média de 24 OPG aos 70 dias). Não foi verificado efeito do TC no OPG. No hemograma, observou-se apenas efeitos de dias, de maneira próxima à observada no OPG. O FAMACHA© não refletiu as variações do OPG e hemograma. O TC proporcionou menores escores corporais aos 28 e 42 dias. O perfil metabólico sofreu influência apenas de dias, exceto para uréia, em que houve interação dias-suplemento. Os volumes de leite aos 56 e 70 dias foram afetados pelos níveis de suplementação, em que os animais que receberam 1,8% produziram mais (506,81, 1016,20, 1280,94 e 674,02, 668,74, 973,87 mL, para 0,6, 1,2 e 1,8%, aos dias 56 e 70 respectivamente). Os dias de lactação também afetaram a produção de leite, em que os valores aos 21 e 28 dias (1171,05 e 1200,00 mL) foram superiores ao obtido aos 70 (722,21 mL). Os níveis de suplementação também afetaram os teores de lactose (4,69, 4,79 e 4,91 %) para 0,6, 1,2 e 1,8%, respectivamente. Em relação a dias, os menores teores de lactose foram obtidos aos 56 e 70 dias (4,54 e 4,51% vs valor nos demais períodos médio de 4,92%). A presença de tanino na dieta afetou os teores de gordura do leite do experimento (7,17 e 7,75% para sem e com tanino, respectivamente). Os níveis de suplemento afetaram o peso ao desmame e a perda de peso média diária durante a lactação, em que as ovelhas que receberam 1,8% apresentaram os maiores valores de peso e menores perdas (45,98, 47,72 e 50,90 kg e 0,123, 0,137 e 0,080 kg, para 0,6, 1,2 e 1,8%, respectivamente). O TC não afetou o desempenho das ovelhas, entretanto, cordeiros de ovelhas que receberam tanino foram desmamados mais leves (18,54 e 16,38 kg, para sem e com tanino). Conclui-se que não ficou evidenciado o efeito do TC sobre a verminose, porém a suplementação foi importante para a redução na contagem de OPG. O extrato natural de acácia-negra pode ser utilizado na alimentação de ovelhas durante o final de gestação e lactação, sem trazer prejuízos aos seus desempenhos, podendo ser utilizado visando o aumento da produção de queijo e derivados, visto que houve incremento nos teores de gordura. Entretanto, o contato de animais jovens com este produto não é recomendado
Desenvolvimento de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos
(2018-02-28) Cardim, Sérgio Tosi; Garcia, João Luis; Crhyssafidis, Andréas Lazaros; Breganó, Regina Mitsuka; Guimarães Junior, José da Silva; Alexey Leon Gomel Bogado
A coccidiose bovina é uma enfermidade de grande importância em rebanhos bovinos ao redor do mundo. Esta enfermidade é causada por protozoários, do gênero Eimeria e afeta principalmente animais com menos de 12 meses, sendo as espécies E. bovis e E. zuernii as de maior importância clínica, podendo causar diarréia severa com sangue em bezerros infectados. O diagnóstico de rotina desta doença é realizado através da observação morofológica dos oocisto, os quais precisam estar esporulados para identificação da espécie envolvida, o que leva em torno de 10 a 15 dias,tornando o mesmo muito laborioso e com necessidade de alto treinamento do leitor, dificuldando um diagnóstico mais rápido e consequente tratamento mais rápido dos animais. Devido as estes fatores, o objetivo deste trabalho foi desenvolver técnicas de qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria e das espécies de maior patogenia, E. bovis e E. zuernii. Para isto foram selecionados o gene 18S rRNA para o gênero Eimeria e o gene ITS-1 para diferenciação das espécies, isto porque o gene 18S tem pouca variabilidade entre as espécies enquanto o gene ITS-1 tem uma alta variabilidade interespecifica, com baixa variabilidade dentro da espécie, visando assim uma alternativa de diagnóstico mais rápida e sensível. As PCRs foram realizadas utilizando SYBR Green como fonte de fluorenscencia. Tanto os primers desenvolvidos para o gênero, quanto os desenvolvidos para a espécie E. zuernii apresentaram alta sensibilidade, tendo a capacidade de amplificar amostrar contendo apenas um oocisto do parasita. Já os primers desenvolvidos para E. bovis apresentaram uma sensibilidade inferior, sendo capazes de detectar positividade em amostras de campo contendo 50 oocistos por grama de fezes. Para avaliação da especificidade das técnicas foram utilizadas amostras contendo Cryptosporidium spp. e Giardia spp., sendo que todas as técnicas apresentaram negatividade tanto para Giardia spp., quanto para Cryptosporidium spp. Baseado nos resultados encontrados neste estudo, conclui-se que os primers desenvolvidos apresentaram alta sensibilidade e especificidade no diagnóstico de Eimeria em bovinos
Estratégias técnicas e farmacológicas para o incremento da eficiência reprodutiva em fêmeas bovinas
(Universidade Estadual de Londrina, 2020-02-18) Bonato, Denis Vinicius; Seneda, Marcelo Marcondes; Morotti, Fábio; Zanin, Roberta Garbelini Gomes; Santos, Gustavo Martins Gomes dos; Cavalieri, Fábio Luiz Bim
Resumo: O objetivo do primeiro trabalho foi avaliar o efeito das categorias nulíparas, primíparas e multíparas sobre a taxas de manifestação de estro e de prenhez de fêmeas tratadas com GnRH no momento da inseminação artificial em tempo-fixo (IATF). Foram utilizadas matrizes da raça Nelore alocadas por categoria, compreendendo 144 nulíparas, 132 primíparas e 255 multíparas. As matrizes foram submetidas a um protocolo de IATF. Para identificar a manifestação de estro, no oitavo dia do protocolo, a região sacrococcígea foi pintada e no dia da inseminação artificial, a ausência da tinta indicava o estro. As fêmeas que não manifestaram estro foram tratadas com 10μg de GnRH. A taxas de manifestação de estro e prenhez foram analisadas por um modelo de regressão logística. A taxa de manifestação de estro foi inferior (P = 0.006) na categoria das primíparas (61,36%) em comparação com as nulíparas (76,39%) e as multíparas (75,69%). As taxas de prenhez entre as categorias foram semelhantes, tanto para as que manifestaram estro (nulíparas 84,54%, primíparas 86,42% e multíparas 80,31%; P = 0.398) quanto para as que não manifestaram estro (nulíparas 41,18%, primíparas 56,86% e multíparas 58,06%; P = 0.244), inclusive a taxa de prenhez total (nulíparas 74,3%, primíparas 75% e multíparas 74,9%; P = 0.989). As primíparas apresentaram menor taxa de manifestação de estro e não houve diferença da taxa de prenhez entre as categorias. No segundo trabalho para compreender melhor a relação da contagem de folículos antrais (CFA) e o desempenho reprodutivo, foram realizados dois experimentos. No primeiro, o objetivo foi avaliar a repetibilidade da CFA nos dias do protocolo de indução de ovulação, enquanto no segundo foi comparar a dinâmica e hemodinâmica ovariana de vacas com baixa e alta CFA. Para avaliar a repetibilidade da CFA, 20 vacas foram submetidas à sincronização de ovulação e avaliação da CFA por ultrassonografia diariamente. Para comparar dinâmica folicular de fêmeas de alta e baixa CFA, a CFA de 80 vacas da raça Holandesa foi aferida e destas selecionadas 9 fêmeas para o grupo de baixa (≤ 15 folículos) e 9 para o grupo de alta (≥ 25 folículos). A dinâmica folicular foi acompanhada diariamente por ultrassonografia nos modos B e Doppler, durante os dias do protocolo e onze dias após a ovulação, para avaliar o corpo lúteo (CL). Para determinar a constância da CFA realizou-se o cálculo de repetibilidade. Para os dados da dinâmica, as variáveis paramétricas foram analisadas pelo teste T. Adotou-se significância quando p ≤ 0,1. A repetibilidade da CFA nos diferentes dias do protocolo foi de 0.98. Os animais de baixa CFA demonstraram maior diâmetro do folículo pré-ovulatório (FO) (16,09 x 15,00mm; P = 0.059), maior área de vascularização do FO (17,36 x 8,16mm2; P = 0.005), maior área de CL (579,10 x 405,80mm2; P = 0.0001) e maior área de perfusão sanguínea do CL (97,16 x 68,30 mm2; P = 0.021). A CFA tem alta repetibilidade nos diferentes dias do protocolo e as vacas de baixa CFA demonstraram FOs e CLs maiores e com maior perfusão sanguínea.
Relação da contagem de folículos antrais com o comportamento de estro e mérito genético da progênie de fêmeas Bos taurus indicus
(Universidade Estadual de Londrina, 2020-02-19) Moraes, Fábio Lucas Zito de; Seneda, Marcelo Marcondes; Morotti, Fábio; Barca Junior, Flávio Antonio; Santos, Gustavo Martins Gomes dos; Cavalieri, Fábio Luiz Bim
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a relação da contagem de folículos antrais (CFA) de vacas Bos taurus indicus submetidas à IATF com a manifestação de estro, taxa de concepção, CFA das filhas e mérito genético de seus filhos. No primeiro estudo 450 vacas Nelore multíparas, avaliadas por ultrassonografia foram classificadas em baixa (≤ 15 folículos; n= 150), intermediária (≥ 19 e ≤ 26 folículos; n= 150) ou alta (≥ 30 folículos; n= 150) CFA. No primeiro dia do protocolo hormonal (D0), as vacas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,2 g de progesterona e administrado via IM 2,0 mg de benzoato de estradiol. Após 8 dias (D8), os dispositivos de P4 foram removidos e foram administrados via IM 450 μg de cloprostenol sódico, 300 UI de gonadotrofina coriônica equina e 1,0 mg de cipionato de estradiol. Após 48 horas (D10), no momento da inseminação artificial (IA), foi realizada a avaliação da manifestação de estro. Trinta dias após a IA procedeu- se o diagnóstico de gestação por ultrassonografia. Os dados foram analisados por teste de regressão logística binária (p < 0.05). A taxa de concepção de fêmeas do grupo de baixa CFA (69,3%) foi maior (p < 0.05) em relação aos de intermediária (60%) e a alta (56,7%); e maior (p < 0.05) para a vacas que manifestaram cio (67,3%) em relação às que manifestaram cio parcial (58,2%) e as que não manifestaram cio (45,4%). A taxa de concepção foi influenciada pela CFA (p=0,04) e pelo cio (p=0,006), mas não houve efeito da interação entre CFA e cio (p=0,511). No segundo estudo, foram utilizados 444 animais Bos taurus indicus, da raça Nelore. Durante a estação de monta, foram avaliadas 222 vacas recém paridas quanto á CFA em baixa (≤ 15 folículos; n= 52), intermediária (≥ 16 e ≤ 29 folículos; n= 37) ou alta (≥ 30 folículos; n= 38) contagem. Avaliou- se 95 filhas e 127 filhos dessas vacas provenientes de IA, para análise de uma possível relação entre a CFA de mães e filhas e o mérito genético dos filhos. As filhas foram analisadas quantos sua CFA e os filhos foram avaliados num programa de melhoramento genético que utiliza matriz de parentesco além de dados de perímetro escrotal (PE) e peso corporal para classificação dos animais quanto seu mérito genético. Para análise da prole foi incluso o efeito paterno. O modelo linear generalizado de efeito misto (GLIMMIX) foi utilizado para análise da CFA, PE, peso e mérito genético. A CFA das filhas não teve relação com efeitos maternos e paternos e vacas de alta CFA apresentaram filhos com melhor mérito genético (p= 0,09). Embora esse estudo demonstre uma relação positiva da CFA com o mérito genético, mais estudos dever realizados sobre a atuação da CFA em provas de melhoramento animal. Contudo, em vacas selecionados geneticamente, as fêmeas de baixa CFA apresentam maior taxa de concepção à IATF
Efeitos da reposição estrogênica na adiposidade e na microbiota fecal de gatas previamente castradas
(2020-02-20) Haddad Neta, Jamile; Martins, Maria Isabel Mello; Lopes, Maria Denise; Derrussi, Ana Augusta Pagnano; Gava, Fábio Nelson; Flaiban, Karina Keller Marques da Costa
A castração felina é fator de risco para obesidade e diabetes mellitus. O tratamento da obesidade é desafiador e busca por estratégias inovadoras, como a restauração dos efeitos hipofágicos do estrógeno por meio de sua reposição e a manipulação da microbiota de perfil magro. Este trabalho avaliou os efeitos do valerato de 17 ß-estradiol sobre o consumo alimentar, ganho de peso, perfil bioquímico, morfometria adipocitária e microbiota em 12 gatas divididas em três grupos: OH+E2 (gatas ovariohisterectomizadas com reposição estrogênica), OH (gatas ovariohisterectomizadas sem reposição estrogênica) e SHAM (gatas submetidas apenas à celiotomia). Utilizou-se a dose de 4 µg durante três meses (E1), e após um intervalo de 20 dias a dose foi aumentada para 12 µg durante três meses (E2). O registro do consumo alimentar e do peso foi diário e semanal, respectivamente. Amostras de sangue para exames bioquímicos e esfregaço vaginal para colpocitologia foram obtidos a cada seis semanas, sob sedação, e amostras de tecido adiposo subcutâneo foram colhidas sob anestesia no momento anterior ao experimento e ao final de E1 e E2. Amostras de fezes foram colhidas no último dia do experimento, armazenadas a -80°C e submetidas ao sequenciamento das regiões V3/V4 do gene 16S rRNA. A reposição com 4 µg não exerceu os efeitos hipofágicos e de perda de peso, enquanto a reposição com 12 µg resultou em perda de peso (p= 0,03), hipofagia nas primeiras quatro semanas e presença de células superficiais na colpocitologia. As dosagens bioquímicas apresentaram-se dentro dos valore de referência, com aumento de triglicérides (p=0,004) e ALT no grupo OH, enquanto a reposição com 12 µg mantiveram-nas em declínio. Houve aumento da área dos adipócitos em todos os grupos, sendo significativo no grupo OH (p= 0,026). A hipertrofia adipocitária foi mais discreta no grupo com reposição. Não houve diferença quanto à alfa diversidade da microbiota fecal entre os grupos, enquanto a beta diversidade mostrou uma diferença entre a estrutura das comunidades nos grupos. A relação Firmicutes/Bacteroidetes foi maior nos grupos OH e OH+E2 em comparação com SHAM, impulsionada pela maior abundância de Megasphaera, Megamonas e Dialister (p= 0,020) no grupo OH+E2, em comparação com SHAM. Como conclusão, a reposição de 17 ß-estradiol na dose de 12 µg promoveu um maior controle da adiposidade associado à presença de células superficiais na colpocitologia e diferença na beta diversidade da microbiota fecal
Diarreia osmótica induzida em bezerros neonatos e tratamento com soluções eletrolíticas orais com diferentes composições
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-01-29) Bregadioli, Gabriela de Castro; Lisbôa, Júlio Augusto Naylor; Leal, Marta Lizandra do Rêgo; Carvalho, Antônio Último de; Ribeiro Filho, José Dantas; Gonçalves, Roberto Calderon
Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar os desequilíbrios hídrico, eletrolíticos e ácido base em bezerros com diarreia osmótica e desidratação induzidas, alimentados com leite integral natural, compará-los entre bezerros com acesso livre à água ou com privação de água por 12 horas noturnas e comparar os efeitos de cinco soluções eletrolíticas orais (SEO) com diferentes composições sobre esses desequilíbrios. Para isto, dois estudos foram desenvolvidos e em ambos todos os bezerros foram submetidos ao protocolo de indução de diarreia osmótica e desidratação com leite (16,5 mL/kg) acrescido de sacarose (4 g/kg, em solução 20%), espironolactona (2 mg/kg) e hidroclorotiazida (2 mg/kg), administrados por via oral, a cada 8 horas, durante 48 horas. Foram mensurados ou calculados: PPT, glicose, lactato D, lactato L, pH, pCO2, HCO3-, BE, Na+, K+, Cl-, SID3, SIG, AG, Atot e variação percentual do volume plasmático (VVP). Exames físicos foram realizados a cada 8 horas e pesagens a cada 24 horas. Análise de variância de medidas repetidas bifatorial foi utilizada nos dois estudos. No primeiro estudo, 38 bezerros (42,89 ± 3,70 kg) com 10 dias de vida, alimentados com leite natural, foram distribuídos aleatoriamente por dois grupos: GSP (n=17) com acesso livre à água durante o período de indução e GCP (n=21) com privação de água durante as 12 horas noturnas. Colheitas de sangue venoso foram realizadas nas horas 0, 24 e 48. Todos desenvolveram diarreia osmótica, desidratação leve (GSP) a moderada (GCP), hiponatremia e hipercloremia relativa e acidose metabólica moderada (GSP) a acentuada (GCP). Potassemia e glicemia não se alteraram, AG e lactato D foram mais altos no GCP, SIG foi mais baixo no GCP, e não houve hiperlactatemia L ou D. Estes desequilíbrios eletrolíticos e ácido base assemelham-se aos observados em casos naturais de diarreia. O protocolo de indução de diarreia osmótica e desidratação deve ser aplicado em bezerros alimentados com leite integral que não sejam completamente privados de água. No segundo estudo, 30 bezerros (43,12 ± 0,70 kg), com 10 dias de vida, alimentados com leite natural, foram distribuídos, por meio de sorteio, em cinco grupos de tratamento (n=6) de acordo com a SEO testada (comerciais: SEO A, B, C e D; e não comercial: SEO UEL). No dia do tratamento os bezerros continuaram recebendo leite e sacarose a cada 8 horas e receberam 6 L da SEO, divididos em duas vezes. Amostras de sangue venoso foram colhidas nas horas: -48, -24, 0, 8, 16, 24, 48 e 72. Todos os bezerros desenvolveram diarreia profusa, desidratação leve a moderada, hiponatremia e hipercloremia relativa e acidose metabólica moderada a acentuada. As SEO estudadas foram bem aceitas pelos bezerros e eficientes para a correção da desidratação, dos desequilíbrios eletrolíticos e da acidose metabólica. A SEO D não foi capaz de corrigir completamente a hiponatremia, e a SEO B provocou hiperglicemia transitória. Todas as SEO testadas são seguras e eficazes para o tratamento de bezerros diarreicos com graus moderados de desidratação e de acidose metabólica, o que indica que possuem composição adequada para esta finalidade.
Efeito da suplementação com antioxidantes no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas Bos taurus indicus
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-02-19) Bergamo, Larissa Zamparone; Seneda, Marcelo Marcondes; Landim, Fernanda da Cruz; Silva-Santos, Katia Cristina; Blaschi, Wanessa; Morotti, Fábio
Resumo: A adição de antioxidantes no meio de cultivo in vitro de folículos ovarianos préantrais bovinos contribui para o adequado desenvolvimento dos folículos, para a manutenção da integridade folicular e do estresse oxidativo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação com antioxidantes no desenvolvimento e na manutenção da integridade folicular e do estresse oxidativo no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas Bos taurus indicus. Para a realização do experimento A (Ácido Ascórbico) e do experimento B (Ácido Alfa Lipóico), ovários (n=20 e n=24, respectivamente) obtidos em abatedouro foram fragmentados e um fragmento, escolhido aleatoriamente de cada par de ovário, foi fixado em Bouin (controle não cultivado; D0). Esses fragmentos foram destinados para análise da morfologia e do crescimento folicular (histologia clássica). Um fragmento, escolhido aleatoriamente de cada par de ovário, foi congelado a -80º C (controle não cultivado; D0), para análise do estresse oxidativo (TBARS, NBT e FRAP). Os demais fragmentos foram cultivados in vitro por 6 (D6) ou 12 (D12) dias, em Meio Essencial Mínimo (MEM+) ou MEM+ suplementado com Ácido Ascórbico (50 ou 100 ng/mL) ou Ácido Alfa Lipóico (50, 100 ou 250 ng/mL), com uma matriz extracelular de gel de agarose, em estufa a 38,5º C, com ar e umidade saturada. A cada dois dias, realizou-se a troca total do meio de cultivo por meio fresco. Diferenças entre as proporções de folículos primordiais e em desenvolvimento (primário e secundário), para cada tratamento (controle não cultivado, controle cultivado e diferentes concentrações de antioxidantes testadas nos diferentes tempos), foram analisadas pelo teste de Qui-quadrado e/ou teste Exato de Fisher. Na ocorrência de um efeito significativo, as proporções foram comparadas por um teste de proporção 2x2 para se estabelecer o ranking entre os tratamentos. Os dados das análises de estresse oxidativo foram submetidos à ANOVA seguido pelo teste de Bonferroni. Os valores foram considerados significativos quando p ≤ 0,05. No experimento A, a suplementação com 100 ng/mL (33,56%; 49/146; p < 0,0001) de Ácido Ascórbico no meio de cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais, após 6 dias de cultivo, foi a mais eficiente em promover o desenvolvimento, manter a integridade folicular e os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) estáveis. No experimento B, a suplementação com 100 ng/mL (36,88%; 52/141; p < 0,0001) de Ácido Alfa Lipóico, aos 6 dias de cultivo in vitro foi a mais eficiente em promover o desenvolvimento, manter a integridade folicular e os níveis de EROs estáveis. Conclui-se que os folículos ovarianos pré-antrais inclusos em fragmentos ovarianos bovinos, provenientes de abatedouro, podem ser cultivados in vitro ao longo de 6 dias, com meio suplementado com antioxidantes, o que permite o desenvolvimento e a manutenção da integridade folicular e níveis de espécies reativas de oxigênio estáveis.
‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochoerus’ e Bartonella spp. em Capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) do Município de Pinhais, Paraná, Brasil
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-05-21) Santos, Nelson Jessé Rodrigues dos; Vieira, Rafael Felipe da Costa; Barros, Luiz Daniel de; Almeida, Jonatas Campos de; André, Marcos Rogério; Barros Filho, Ivan Roque de
Resumo: As capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris), maior espécie de roedor do mundo, estão distribuídas em todos os países da América do Sul que ficam a leste da Cordilheira dos Andes. Os desequilíbrios ecológicos causados pela presença humana provocam o deslocamento e expansão de suas populações, que convivem nos campos de cultivo e em parques urbanos, além das matas nativas. Esta espécie é fortemente associada ao parasitismo por carrapatos, potenciais transmissores de agentes infecciosos a animais e seres humanos. Existe, no entanto, uma lacuna a respeito de dois gêneros de bactérias hemotrópicas nestes roedores, a saber: Bartonella spp., reconhecida em várias espécies da mesma ordem, e os micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas), já descritos em capivaras. Neste sentido, o presente estudo objetivou detectar e caracterizar molecularmente hemoplasmas e verificar a ocorrência de Bartonella spp. em grupo de capivaras de vida livre. Para execução do estudo foram capturadas 17 capivaras (10 fêmeas e 7 machos) em armadilha tipo curral, instalada às margens de fragmento da Mata Atlântica, no município de Pinhais, Paraná. Após contenção química com uso de zarabatana e dardos contendo associação de anestésicos, foram anotados os dados de cada animal e coletadas amostras de sangue total e carrapatos. Uma alíquota de sangue de cada amostra foi submetida à avaliação de hematócrito e proteínas plasmáticas totais, outra submetida à extração de DNA para testes moleculares. Todos os carrapatos encontrados nos animais foram coletados e identificados por suas características morfológicas. Destes, onze tiveram suas glândulas salivares dissecadas e testadas pela PCR. Todas as amostras de sangue foram inicialmente submetidas à PCR para gene endógeno gapdh. Na sequência foram testadas para o gene 16S rRNA de Mycoplasma coccoides e 16S rRNA para o grupo dos hemoplasmas por meio de ensaios de PCR convencional. Aquelas que apresentaram resultado positivo foram testadas para o gene 23S rRNA de hemoplasmas. Para investigação de Bartonella spp. foi utilizada a PCR em tempo real (qPCR) baseada no gene nuoG. Todos os animais apresentavam parasitismo por carrapatos no momento da coleta, os quais foram identificados como Amblyomma dubitatum (26 machos, 16 fêmeas, 122 ninfas e 3 larvas; taxa de infestação: 9,82). Todas as amostras de sangue foram positivas para o gene gapdh e 16/17 (94,12%; IC 95% 73,02 - 98,95%) foram positivas para hemoplasmas, porém nenhuma foi positiva para Bartonella spp. Todas foram positivas para o gene gapdh e uma (9,09%) para o gene 16S rRNA. Oito amostras foram sequenciadas pelo método de Sanger em ambos os genes testados e apresentaram query coverage entre 97% e 100% para sequência de micoplasmas hemotrópicos depositadas no GenBank. Sequências do gene 16S rRNA dos hemoplasmas detectados demonstraram identidade variando de 99 -100% com hemoplasmas associados às capivaras. As sequências do gene 23S rRNA demonstraram identidade variando de 91,7% a 92,4% com ‘Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus’. Os dados indicam a existência de uma nova espécie de hemoplasma em capivaras do Brasil, aqui proposta como ‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochaeris’. Com os achados também não é possível provar a participação das capivaras na epidemiologia de Bartonella spp.
Microbiota vaginal avaliada por sequenciamento de DNA de nova geração e aspectos reprodutivos de vacas leiteiras
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-06-18) Candotti, Anne Kemmer Souza; Seneda, Marcelo Marcondes; Costa, Márcio Carvalho da; Chiaratti, Marcos Roberto; Lorenzetti, Elis; Zangirolamo, Amanda Fonseca
Resumo: A microbiota vaginal tem demonstrado relevância no âmbito da reprodução de bovinos pois alterações em sua composição podem influenciar a fertilidade. A tecnologia de sequenciamento de nova geração (SNG), Illumina, tem sido utilizada como padrão, contudo, para uma maior precisão nas análises, a tecnologia de leituras longas, PacBio, vem sendo utilizada para melhorar a sensibilidade e especificidade do perfil taxonômico, além de reduzir o risco de falsos positivos. Com o objetivo de caracterizar a microbiota vaginal de vacas leiteiras por SNG e relacionar com aspectos reprodutivos, dois estudos foram desenvolvidos. Em ambos, após o SNG, foi analisado a abundância relativa das bactérias, e calculado os índices de Alfa e Beta diversidade. O primeiro estudo identificou a microbiota vaginal de vacas da raça holandês preto e branco (HPB; n = 13) por meio do sequenciamento de leituras longas de DNA (PacBio sequencing) e comparou os dados com a técnica convencional de leituras curtas (Illumina sequencing). Este é um dos primeiros estudos a buscar leituras em nível de espécie nas bactérias do ambiente vaginal de vacas. Por meio da plataforma PacBio foram obtidas 366.509 leituras e 631.586 leituras pela Illumina. Foi possível a identificação de 27 versus 28 filos e 677 versus 662 gêneros, no sequenciamento por PacBio e Illumina, respectivamente. Ainda, foram identificadas 677 espécies pelo PacBio. A alfa diversidade demonstrou uma forte correlação (r= 0,758), de maneira significativa (p=0,003), entre o número de espécies (PacBio) e gêneros (Illumina) considerando as diferentes técnicas. O segundo estudo teve como objetivo investigar a microbiota vaginal em vacas gestantes e não gestantes por meio da plataforma de sequenciamento PacBio. Para esse estudo foram colhidos swabs vaginais de vacas leiteiras (n=13), das quais 5 ficaram gestantes (GE) e 8 permaneceram não gestantes (NG) após a inseminação artificial realizada posterior à identificação de cio natural nessas fêmeas. Foram obtidas 366.509 leituras bacterianas, sendo agrupadas em 27 filos e 677 gêneros. Os filos mais abundantes em todas as amostras avaliadas foram Firmicutes (58%) e Bacterioidetes (32%). Na análise de beta diversidade foi observado diferença comparando as comunidades bacterianas dos grupos GE (p = 0,004) e NG (p = 0,011). Além disso, houve um agrupamento evidente das vacas que permaneceram não gestantes, demostrando que suas comunidades bacterianas são mais semelhantes quando comparado com aquelas presentes em vacas gestantes.
Vírus da diarreia viral bovina e herpesvírus linfotrópico suíno em javalis de vida livre (Sus scrofa Linnaeus, 1758) provenientes de fragmentos de Mata Atlântica
(2021-10-01) Porto, Gisele da Silva; Alfieri, Alice Fernandes; Silva, Virgínia Santiago; Lorenzetti, Elis; Orsi, Mário Luís; Zotti, Éverson; Alfieri, Amauri Alcindo
Espécies não nativas invasoras têm se tornado um problema ambiental de interesse público. Quando somadas as suas distribuições exóticas e nativas o javali (Sus scrofa) é o suídeo com a maior distribuição geográfica do mundo. Os suínos asselvajados têm motivado estudos ambientais, sociais e sanitários, inclusive no Brasil, envolvendo principalmente o potencial de atuação desses animais como reservatório de doenças passíveis de serem transmitidas a animais silvestres, domésticos e humanos. A preocupação com o status sanitário das populações brasileiras de javalis de vida livre tem origem na característica continental e ambiental do país, que tem proporcionado a rápida dispersão desse invasor e, principalmente, pelo fato de javalis serem hospedeiros de doenças com alto impacto na saúde humana e animal. Considerando a capacidade de dispersão de javalis no ambiente natural e a possibilidade de contato com espécies domésticas de animais de produção, este estudo investigou a presença de pestivírus (vírus da diarreia viral bovina – BVDV) e gammaherpesvirus suíno (Herpesvírus linfotrópico suíno – PLHV) em javalis de vida livre provenientes das regiões Norte e dos Campos Gerais, no estado do Paraná, Brasil. Amostras de pulmões e soros de javalis abatidos por controladores colhidas entre 2017 e 2019 foram utilizadas para a investigação da presença de RNA de BVDV, de anticorpos anti-BVDV e de DNA de PLHV. Adicionalmente, pulmões e baços de seis fetos provenientes de uma fêmea abatida foram investigados quanto à presença de PLHV. No primeiro estudo, para investigação de BVDV, 49 amostras de pulmão foram avaliadas por RT-PCR para amplificação de um fragmento de 288 pb da região genômica 5'UTR e 42 amostras de soros pela técnica de vírusneutralização. Nenhuma das amostras de soro avaliadas apresentou anticorpos anti-BVDV. Porém, em três (6,12%) amostras de pulmão foi possível obter um fragmento do tamanho esperado para BVDV. Por meio de sequenciamento, uma cepa de BVDV foi classificada como subgenotipo 1a e duas cepas como subgenotipo 1d. No segundo estudo, 50 amostras de pulmões foram utilizadas para investigação da presença de DNA de PLHV a partir da amplificação do gene da DNA polimerase. Primeiramente, foram realizadas reações de PCR com primers consensuais (pan-herpesvírus) e, para classificação das espécies de PLHV-1, PLHV-2 e PLHV-3, novas reações de PCR foram feitas com primers específicos para amplificação de 393pb, 334pb e 148pb, respectivamente. DNA de PLHV foi amplificado em 48 (96%) das 50 amostras de pulmões analisadas, das quais, 33 (68,75%) amostras foram positivas para pelo menos duas espécies de PLHV. Apesar de serem provenientes de uma fêmea PLHV-positiva, as amostras de órgãos dos seis fetos analisadas foram negativas. O estudo permitiu concluir que i) ocorre circulação de BVDV em javalis de vida livre na região estudada; ii) as infecções por PLHV são endêmicas nessas populações; iii) e não há evidências de transmissão vertical de PLHV na fêmea avaliada. Esses resultados alertam sobre o potencial de javalis de vida livre atuarem como reservatórios e transmissores de doenças para animais de produção e evidenciam a importância do constante monitoramento sanitário desses animais.
Doppler velocimetria e graus de lesões histológicas testiculares associados à cinética espermática em felinos domésticos
(2022-02-02) Trautwein, Luiz Guilherme Corsi; Martins, Maria Isabel Mello; Morotti, Fábio; Gava, Fabio Nelson; Souza, Mírley Barbosa de; Sant'Anna, Marcos Cezar
Os testículos são muito sensíveis a alterações hemodinâmicas e, para garantir a viabilidade espermática, é necessário que haja uma correta perfusão sanguínea, à qual é realizada pela artéria testicular. É possível realizar a mensuração da hemodinâmica vascular da artéria testicular por meio da Ultrassonografia Doppler. Foi demonstrado, em diversas espécies, que há correlações entre as variáveis Doppler com a qualidade espermática, porém, em felinos estes relatos são escassos, assim como outros parâmetros da análise reprodutiva nesta espécie, como é o caso da avaliação histopatológica de degeneração testicular e sua comparação com resultados da análise de sêmen. Sendo assim, os objetivos foram comparar a velocidade do fluxo sanguíneo na artéria testicular em gatos sedados com dexmedetomidina e cetamina e não sedados, bem como comparar entre os diferentes graus de degeneração histopatológica testicular e as características de cinética e movimento espermático em gatos. Este estudo foi dividido em três manuscritos: a) foram utilizados 27 gatos, alocados em dois grupos: grupo sedado (SG – dexmedetomidina (10 μg/kg) e cetamina (12 mg/kg); n=20) e grupo não sedado (NSG; n=7). Ambos os grupos foram submetidos à análise Doppler da artéria testicular e, após serem submetidos à orquiectomia, foi realizada a recuperação dos espermatozoides, por meio da compressão da cauda do epidídimo e a avaliação da cinética espermática no sistema CASA, morfologia e integridade de membrana espermática. Os dados de Doppler velocimetria dos grupos SG e NSG foram comparados utilizando o teste de Mann-Whitney, bem como foi realizado o teste de correlação entre as variáveis Doppler e de qualidade espermática. O NSG apresentou menor velocidade de fluxo nas regiões supratesticular e marginal (velocidade de pico sistólico – PSV de 5,56 cm/s e 5,91 cm/s, valor de p = 0,002 e < 0,001; velocidade diastólica final - EDV 2,89 cm/s e 3,96 cm/s, valor de p = < 0,001 e < 0,001) quando comparado com o SG (PSV 7,42 cm/s e 11,51 cm/s; EDV 4,42 cm/s e 7,72 cm/s), assim como não houve diferença entre as regiões no NSG (p=0.550). Houve correlação negativa entre a porcentagem de espermatozoides rápidos com o PSV e EDV da região marginal do SG (r=-0,382; r=-0,314), bem como entre a velocidade curvilínea (VCL) e a EDV da região supratesticular no NSG (r=-0,565); b) Foram utilizados 25 gatos, submetidos à orquiectomia eletiva e, após a recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo, os testículos foram fixados e processados histologicamente. Foi possível categorizar os testículos em diferentes graus de degeneração testicular e extensão da lesão no parênquima. Os achados de grau de degeneração e extensão da lesão foram comparados com as variáveis do espermograma por análise de variância. Testículos com lesões focais ou multifocais não apresentaram diferença nos valores de cinética espermática e análise Doppler velocimétrica; c) Revisão de literatura acerca da análise ultrassonográfica reprodutiva em cães e gatos. Conclui-se que houve diferença entre a hemodinâmica testicular de animais sedados com dexmedetomidina/cetamina e não sedados, assim como houve a correlação entre variáveis Doppler velocimétricas e características de cinética espermática. Além disso, testículos com lesões degenerativas difusas apresentaram espermatozoides com piores características de movimento cinético.
Relação da concentração de proAKAP4 e fertilidade do sêmen bovino Bos indicus empregado em programas de IATF
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-02-17) Almeida, Ana Beatriz Marques; Martins, Maria Isabel Mello; Rizzoto, Guilherme; Crespilho, André Maciel; Barreiros, Thales Ricardo Rigo; Morotti, Fábio
Resumo: O sucesso da Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF) se deve, em parte, a touros férteis que produzem doses de sêmen de qualidade. A avaliação seminal pré e pós descongelação, podem ser conduzidas por meio da cinética espermática, morfologia e morfo funcionalidade. Entretanto, estudos têm demonstrado que somente estas análises in vitro não são suficientes para predizer a fertilidade de um ejaculado. Neste contexto, nos últimos anos, experimentos têm buscado por biomarcadores proteicos que apresentem relação com a fertilidade. A AKAP4 e sua precursora, proAKAP4, ganharam destaque, por serem polipeptídios de presentes no flagelo espermático, que demonstraram, relação com a motilidade dos espermatozoides e com taxas de fertilidade a campo. Diante do exposto, objetivou-se quantificar as concentrações de proAKAP4 em doses convencionais (n:8) e sexadas (n:6) de espermatozoides criopreservados de reprodutores Bos indicus; além de relacionar a proAKAP4 em doses de sêmen de touros Nelore (n:9) a taxas de prenhez obtidas por meio de programa de IATF. Além disso, 1507 vacas foram inseminadas artificialmente em tempo fixo com doses de 9 partidas de sêmen convencional avaliadas. As doses foram descongeladas à 37ºC por 30 segundos, em seguida foi conduzida a análise da cinética espermática, morfologia e morfo funcionalidade. As concentrações de proAKAP4 foram mensuradas por meio de kit ELISA seguindo as recomendações do fabricante. O teste T foi utilizado para comparar variáveis entre dois grupos (sêmen sexado para fêmea vs. sêmen convencional), a correlação de Pearson avaliou as relações entre a proAKAP4 e as características cinéticas e morfofuncionais, e para mensurar a influência da proAKAP4 sobre parâmetros in vitro foi conduzida uma regressão linear. Considerou-se significância estatística quando p<0,05. As doses de sêmen sexadas carreadoras do cromossomo X apresentaram maior concentração de proAKAP4 (67,54±17,40 ng/106 de espermatozoides) quando comparadas às doses convencionais (29,76±4,16 ng/106 de espermatozoides) (p=0,033). Contudo, não foram encontradas relações entre a quantidade de proAKAP4 e as variáveis cinéticas e morfofuncionais nos espermatozoides sexados (p>0,05). Nas doses seminais convencionais a proAKAP4 influenciou a motilidade espermática (TM: r2 = 0.49, P = 0.03); PM: r2 = 0.63, P=0.01) e as taxas de concepção obtidas na IATF (r2 = 0.51, P=0.03). Finalmente, concluiu-se que a proAKAP4 não é um biomarcador fidedigno para sêmen sexado para fêmea, contudo é um excelente indicador de fertilidade em doses de sêmen convencional, e assim, acredita-se que futuramente poderá ser uma ferramenta na seleção de touros Bos indicus férteis.
Uso de silagem de grão de milho reidratado com soro de leite na alimentação de leitões desmamados
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-02-24) Zanin, Ediane; Bumbieris Junior, Valter Harry; Carvalho, Rafael Humberto; Oba, Alexandre; Santos, José Maurício Gonçalves dos; Silva, Marcos Augusto Alves da; Silva, Caio Abércio da
Resumo: Leitões desmamados necessitam de dietas que assegurem seu desempenho zootécnico e estimulem a iniciação alimentar. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos do soro de leite fluído na qualidade da silagem de grãos de milho reidratados, bem como o uso da silagem sob o desempenho zootécnico e a preferência alimentar de leitões desmamados. Foram realizados dois experimentos, no primeiro foi avaliado a qualidade de silagens de grãos de milho reidratados com Água; Soro de leite em pó (SLP); Soro de leite fluído (SLF); Soro de leite em pó, acrescido de aditivo (SLPA); e Soro de leite fluído, acrescido de aditivo (SLFA). A SLP apresentou o menor valor de FDA (14,7 g/kg) e a SLF apresentou os menores valores de lignina (3,3 g/kg) e das N-NH3 às 240 horas de exposição ao ar (0,7 g/kg), com valor de pH final de 4,40. O uso de soro de leite se apresenta como alternativa sustentável à água para reidratar grãos de milho, além de proporcionar boa qualidade e estabilidade das silagens. No segundo experimento foram avaliados 120 leitões com 21 dias de idade, durante a fase pré-inicial I (21 a 32d) quanto ao desempenho produtivo submetidos com as seguintes dietas experimentais: ração controle a base de milho grão seco (RC); ração com silagem de grão de milho reidratado com água (SGMR+A); ração com SGMR com água, acrescido com inoculante (SGMR+AI); e ração com SGMR com soro de leite (SGMR+SL). Para avaliar a preferência alimentar, 20 leitões desmamados foram submetidos a duas fases de avaliação, a fase restrita envolveu o fornecimento da dieta referência (D1, grão de milho seco), seguido da dieta teste (D2, silagem de grão reidratado com soro de leite) por cinco dias cada, e na livre escolha foram ofertadas as duas dietas por 6 dias. Na fase pré-inicial I não houve diferença para o ganho de peso diário (GPD), consumo diário de ração (CDR) e conversão alimentar (CA) (p>0,05). Leitões dos grupos SGMR+AI e SGMR+SL não apresentaram ocorrências de magreza e depressão. Foi observado tendência (p=0,06) de menor ocorrência e severidade de diarreia em leitões de SGMR + A e SGMR+AI, ou seja, os quadros diarreicos diminuíram, refletindo num GPD nas primeiras semanas pós-desmame equivalente a dietas com grãos secos. Os leitões permaneceram mais tempo deitados na fase restrita para D1 (276,7 min/d), maior tempo gasto em pé (74,4 min/d) e maior consumo de ração (649,1 g de MS) para D2. Durante a livre escolha os leitões gastaram mais tempo consumindo (118,7 min/d) e maior consumo (761,3 g de MS) para D1, com preferência de 56,39% para dieta referência. A SGMR apresentou superioridade nutricional e promoveu melhor aceitabilidade e desempenho dos leitões nas primeiras semanas pós-desmame.
Piroplasmose e hemoplasmose em ovinos do norte do Paraná
(2022-05-05) Abate, Hugo Luca; Garcia, João Luis; Barros, Luiz Daniel de; Vieira, Rafael Felipe da Costa; Pacheco, Richard de Campos; Rodrigues, Fernando de Souza
As hemoparasitoses ovinas são causadas por vários microrganismos, entre eles estão os micoplasmas hemotropicos e os piroplasmas. Poucos relatos quanto a presença de micoplasmose em ovinos existem no Brasil e no caso dos piroplasmas a sua descrição em ovinos no brasil é inexistente na literatura. Apesar da presença de uma grande quantidade de animais no rebanho de ovinos brasileiro pouco se sabe sobre a prevalência e transmissão de hemoparasitoses de ovinos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a prevalência molecular de hemoparasitas em ovinos oriundos da região Norte do Estado do Paraná, Brasil. identificar piroplasmas e Mycoplasma hemotropicos em Ovinos do Norte do Paraná. determinar as espécies de hemoparasitas encontradas nos Ovinos do Norte do Paraná. Foram coletadas 347 amostras de sangue por venopunção em ovinos das cidades de Londrina, Cambé, Ibiporã, Apucarana, Sertanópolis, Jaguapitã e Guaraci, todas localizadas no Norte do Paraná, Brasil. Destes animais foram coletados também os carrapatos aderidos aos animais quando presente. Para os piroplasmas o alvo foi o gene ribossomal 18S e para micoplasmas hemotropicos um fragmento do gene 16S rRNA. Das 347 amostras analisadas 92 (26%) foram positivas, dentre estas positivas duas foram selecionadas para sequenciamento e após analise apresentaram uma semelhança de 99% com isolados de Mycoplasma ovis. Para o gene 18S de piroplasmas uma amostra se apresentou positiva, após seu envio para sequenciamento e analise, foi demonstrado uma semelhança de 100% com isolados de Babesia caballi previamente depositados no GenBank. Com bases nos resultados se obteve como considerações finais: Uma espécie de Babesia próxima a Babesia caballi está presente em ovinos no estado do Paraná, Sul do Brasil; Uma espécie de Micoplasma hemotropico próximo a Mycoplasma ovis está presente em ovinos no estado do Paraná, Sul do Brasil; A criação de múltiplas espécies em associação, com ênfase entre as espécies ovina e equina, situação encontrada neste trabalho, demonstra o potencial de infeção por hemopasitas encontrados em outros hospedeiros na mesma região; Estudos para identificar e quantificar os ectoparasitas e o potencial de transmissão de hemoparasitas para os ovinos são necessários para elucidar aspectos epidemiológicos destas moléstias incidentes na região.
Líquido cerebroespinhal de ruminantes: conservação, estabilidade e validação
(2022-09-30) Curti, Juliana Massitel; Flaiban, Karina Keller Marques da Costa; Marquez, Ellen de Souza; Lisbôa, Julio Augusto Naylor; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro; Queiroz, Gustavo Rodrigues
A análise do líquido cerebroespinhal (LCE) traz informações importantes ao clínico como apoio ao diagnóstico de enfermidades neurológicas inflamatórias/infecciosas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a estabilidade e comparar os métodos para determinar a concentração de lactato liquórico de bovinos, caprinos e ovinos sadios sob refrigeração e congelamento. Foram colhidas e avaliadas 30 amostras de LCE de bovinos (n=10), caprinos (n=10) e ovinos (n=10). O LCE foi colhido por punção no espaço atlanto-occiptal sob sedação. Após a colheita as amostras foram distribuídas em sete alíquotas de acordo com o momento de sua análise 0h, 24h, 48h, 72h refrigeradas a 4°C, e 3 meses, 6 meses e 12 meses congeladas a -20°C. A concentração de lactato foi mensurada pelo lactímetro portátil (LP) e pelo analisador bioquímico automatizado (ABA), padrão ouro. Nas amostras refrigeradas foram realizadas as análises físicas, bioquímicas (proteína e glicose) e celulares rotineiras. Nas amostras congeladas foram mensurados concentração de eletrólitos sódio (Na+), potássio (K+) e cloreto (Cl-) e concentração de lactato. A análise de variância bifatorial foi empregada para comparação entre os diferentes momentos em cada espécie e o teste de Bland-Altman foi utilizado para observar se havia concordância entre os métodos. A correlação de Pearson foi empregada para verificar as relações entre o lactímetro portátil e o analisador bioquímico automatizado. O lactímetro portátil avaliado não pode ser empregado como método de avaliação do lactato liquórico em bovinos, caprinos e ovinos. Constatou-se que no LCE as espécies avaliadas possuem estabilidade de até 72 horas sob refrigeração a 4°C para a densidade, concentração de proteína e glicose e contagem total de células (leucócitos e hemácias), e congelado a -20°C por até 12 meses de eletrólitos. A estabilidade do lactato no LCE no ABA variou de acordo com a espécie, nos bovinos apresentou estabilidade por até 72 horas refrigerado, nos caprinos por até 3 meses congelado e nos ovinos por até 12 meses congelado. Os resultados encontrados indicam que o LCE pode ser colhido a campo e encaminhado ao laboratório a 4°C em até 72 horas sem comprometer a análise.
Transplante de microbiota fecal no tratamento de cães com diarreia
(2023-02-24) Pereira, Giorgio Queiroz; Gomes, Lucas Alécio; Pereira, Patrícia Mendes; Alfieri, Alice Fernandes; Souza, Mirian Siliane Batista de; Basso, Karina Maria
A diarreia é uma manifestação clínica comum em cães, sendo a gastrenterite hemorrágica causada por parvovirose mais prevalente em jovens. Estabelecer o diagnóstico pode ser um desafio, porém, o tratamento é igual ou semelhante na maioria dos casos. Assim sendo, o objetivo geral desse trabalho foi investigar o efeito do transplante de microbiota fecal (TMF) na recuperação clínica de cães filhotes com gastrenterite hemorrágica comparando o uso de diferentes alíquotas de fezes. Foram avaliados 18 cães com gastrenterite hemorrágica por parvovirose, sem restrição de raça, sexo e com idade entre 2 e 12 meses. Os animais foram distribuídos em três grupos com seis indivíduos cada. O grupo controle (CON) recebeu apenas terapia convencional/padrão (fluidoterapia, antibiótico, protetores de mucosa, antieméticos e antiácidos), o grupo TMF10 recebeu terapia convencional mais o TMF com 10 gramas de fezes, e o grupo TMF20 tratamento convencional mais TMF com 20 gramas de fezes. Os cães foram avaliados diariamente por meio de exame clínico e registrou-se as características das fezes quanto a consistência, ou seja, se líquida, pastosa ou normal. Considerou-se como recuperação clínica o exame físico normal, a evolução de diarreia para fezes pastosas e a presença de apetite sem vômitos. Os resultados em relação a consistência das fezes demostrando o período de recuperação clínica dos animais e alta, foram analisados utilizando ANOVA seguida de teste de Tukey para fins de comparação. Nos grupos TMF o tempo de recuperação clínica foi mais rápido quando comparados ao grupo controle. Quando comparados entre si, não houve diferença estatística entre os grupos que receberam o transplante, porém, observou-se que a recuperação clínica no grupo TMF20 foi discretamente melhor que no grupo TMF10. Conclui-se que o TMF proporciona melhora clínica mais rápida e menor tempo de hospitalização dos cães e que um maior volume fecal no TMF poderá proporcionar melhores resultados
Imunomoduladores contra bacterioses em tilápias: avaliação de ácidos orgânicos contra Francisella orientalis e determinação de potencial probiótico de cepas contra Streptococcus agalactiae
(2023-02-27) Silva, Vanessa Gomes da; Pereira, Ulisses de Pádua; Di Santis, Giovana Wingeter; Caldart, Eloiza Teles; Pilarski, Fabiana; Campos, Guilherme
A aquicultura tornou-se um dos setores mais proeminentes do agronegócio mundial. A produção brasileira de peixe de cultivo alcançou 860mil toneladas em 2022, e a tilápia permanece como a espécie mais cultivada no país. Porém, os sistemas intensivos trazem reveses como a alta incidência de doenças bacterianas, em especial a franciselose e estreptococose, que causam surtos com alta mortalidade nas pisciculturas. Para controlar esses surtos, vários antimicrobianos são utilizados tanto terapêutica quanto profilaticamente. O uso excessivo e indiscriminado implica no surgimento de cepas resistentes que se acumulam na água, nos sedimentos, no pescado comercializado e oferecem risco para o tratamento de infecções em animais e humanos. Assim, a aquicultura moderna tem visado práticas mais sustentáveis a fim de fornecer produtos seguros para o consumidor final. Nesse sentido, esta pesquisa buscou avaliar novos aditivos alimentares quanto à sua capacidade de promover ganhos à imunidade e maior resistência às enfermidades de maior ocorrência na tilapicultura nacional. No trabalho A, diferentes concentrações (3 g.kg-1 e 5 g.kg-1) de um aditivo composto por ácidos orgânicos foi incorporado à ração, fornecido durante 21 dias para juvenis de tilápia que, em seguida, foram desafiadas com Francisella orientalis. Os animais alimentados com 0,5% de Bacti-nil®Aqua apresentaram melhoras em parâmetros imunológicos, como lisozima e atividade antibacteriana do soro, e menor mortalidade quando comparados com grupos controles. A microbiota intestinal manteve características pré-desafio entre os grupos tratados, o que pode ser considerado um efeito benéfico do produto sobre o microbioma intestinal. No trabalho B, diferentes cepas de microrganismos tiveram seu potencial probiótico avaliado e, posteriormente foram testados quanto ao efeito imunomodulador e à resistência contra Streptococcus agalactiae sorotipo Ib. Lactococcus lactis apresentou boa tolerância a baixo pH, sais biliares e NaCl, assim como demonstrou antagonismo contra Enterococcus faecium e S. agalactiae in vitro. As cepas da levedura Yarrowia lipolytica demonstraram boa resistência nos testes in vitro. Na avaliação histomorfológica do fígado, os grupos alimentados com Y. lipolytica tiveram escores gerais mais baixos, indicando que a levedura ajudou a preservar a integridade do fígado. A adição de L. lactis e Y. lipolytica teve um efeito benéfico no sistema imune, com resultados significativos na atividade bactericida do soro e na sobrevivência após o desafio bacteriano. Os trabalhos desenvolvidos indicam que a adição de ácidos orgânicos e probióticos à ração são importantes ferramentas no estímulo da imunidade dos animais, assim como no combate a enfermidades, propagando uma aquicultura mais sustentável. Os microrganismos testados poderão ser amplamente utilizados como aditivos na ração e as técnicas desenvolvidas permitem a exploração de novas cepas probióticas, em especial, cepas autóctones que oferecem maior adaptação e segurança para os animais e para cadeia produtiva

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Navegando 01 - Doutorado - Ciência Animal por Data de Publicação

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