‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochoerus’ e Bartonella spp. em Capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) do Município de Pinhais, Paraná, Brasil
Data
2021-05-21
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Universidade Estadual de Londrina
Resumo
Resumo: As capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris), maior espécie de roedor do mundo, estão distribuídas em todos os países da América do Sul que ficam a leste da Cordilheira dos Andes. Os desequilíbrios ecológicos causados pela presença humana provocam o deslocamento e expansão de suas populações, que convivem nos campos de cultivo e em parques urbanos, além das matas nativas. Esta espécie é fortemente associada ao parasitismo por carrapatos, potenciais transmissores de agentes infecciosos a animais e seres humanos. Existe, no entanto, uma lacuna a respeito de dois gêneros de bactérias hemotrópicas nestes roedores, a saber: Bartonella spp., reconhecida em várias espécies da mesma ordem, e os micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas), já descritos em capivaras. Neste sentido, o presente estudo objetivou detectar e caracterizar molecularmente hemoplasmas e verificar a ocorrência de Bartonella spp. em grupo de capivaras de vida livre. Para execução do estudo foram capturadas 17 capivaras (10 fêmeas e 7 machos) em armadilha tipo curral, instalada às margens de fragmento da Mata Atlântica, no município de Pinhais, Paraná. Após contenção química com uso de zarabatana e dardos contendo associação de anestésicos, foram anotados os dados de cada animal e coletadas amostras de sangue total e carrapatos. Uma alíquota de sangue de cada amostra foi submetida à avaliação de hematócrito e proteínas plasmáticas totais, outra submetida à extração de DNA para testes moleculares. Todos os carrapatos encontrados nos animais foram coletados e identificados por suas características morfológicas. Destes, onze tiveram suas glândulas salivares dissecadas e testadas pela PCR. Todas as amostras de sangue foram inicialmente submetidas à PCR para gene endógeno gapdh. Na sequência foram testadas para o gene 16S rRNA de Mycoplasma coccoides e 16S rRNA para o grupo dos hemoplasmas por meio de ensaios de PCR convencional. Aquelas que apresentaram resultado positivo foram testadas para o gene 23S rRNA de hemoplasmas. Para investigação de Bartonella spp. foi utilizada a PCR em tempo real (qPCR) baseada no gene nuoG. Todos os animais apresentavam parasitismo por carrapatos no momento da coleta, os quais foram identificados como Amblyomma dubitatum (26 machos, 16 fêmeas, 122 ninfas e 3 larvas; taxa de infestação: 9,82). Todas as amostras de sangue foram positivas para o gene gapdh e 16/17 (94,12%; IC 95% 73,02 - 98,95%) foram positivas para hemoplasmas, porém nenhuma foi positiva para Bartonella spp. Todas foram positivas para o gene gapdh e uma (9,09%) para o gene 16S rRNA. Oito amostras foram sequenciadas pelo método de Sanger em ambos os genes testados e apresentaram query coverage entre 97% e 100% para sequência de micoplasmas hemotrópicos depositadas no GenBank. Sequências do gene 16S rRNA dos hemoplasmas detectados demonstraram identidade variando de 99 -100% com hemoplasmas associados às capivaras. As sequências do gene 23S rRNA demonstraram identidade variando de 91,7% a 92,4% com ‘Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus’. Os dados indicam a existência de uma nova espécie de hemoplasma em capivaras do Brasil, aqui proposta como ‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochaeris’. Com os achados também não é possível provar a participação das capivaras na epidemiologia de Bartonella spp.
Abstract: Capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris), largest living rodent in the world, are widely distributed for all South America countries located in East Andes. The ecological imbalances caused by human presence favor the displacement and expansion of its population, who live in cultivated fields and in urban parks, in addition to native habitat. This species is strongly associated with tick parasitism, potential vectors of infectious agents to animals and humans. However there is a gap regarding two genera of hemotropic bacteria in these rodents, Bartonella spp., recognized in several species of the same order, and the group of hemotropic mycoplasmas (hemoplasmas), already described in capybaras. Thereby, the present study aimed to detect and molecularly characterize of hemoplasmas and to verify the occurrence of Bartonella spp. in a group of free-living capybaras. For the study execution, 17 capybaras (10 females and 7 males) were captured in a corral trap, positioned by side of an Atlantic Forest fragment, in the municipality of Pinhais, Paraná. After chemical restraint with blowguns and darts containing an association of anesthetic, the data of each animal were recorded and whole blood and tick samples were collected. One aliquot of blood of each sample was evaluated for packed cell volume and total plasma proteins, another was subjected to DNA extraction for molecular tests. All ticks found on animals were colected and identified by their morphological characteristics. Of these, eleven had their salivary glands dissected and tested by PCR. All blood samples were initially tested for endogenous gene gapdh by PCR. After, the 16S rRNA of Mycoplasma coccoides and the 16S rRNA for the group of hemoplasmas were tested by conventional PCR. Those that tested positive were also tested for the 23S rRNA hemoplasma gene. For Bartonella spp. screening a quantitative PCR (qPCR) was used based on nuoG gene. All animals presented tick parasitism at the time of sampling, which were identified as Amblyomma dubitatum (26 males, 16 females, 122 nymphs and 3 larvae; infestation rate: 9.82); All blood samples were positive for gapdh gene and 16/17 (94.12; CI: 73.02 - 98.95%) were positive for hemoplasmas, but none were positive for Bartonella spp. All salivary glands were positive for gapdh gene and one (9.09%) for 16S rRNA gene. Eight samples were sequenced by Sanger method in both tested genes and showed query coverage between 97% and 100% for hemotropic mycoplasma sequences archived on GenBank. Sequences of 16S rRNA gene of hemoplasmas detected showed identity ranging from 99% to 100% with capybaras-associated hemoplasmas. The sequences of 23S rRNA gene showed identity ranging from 91.7% to 92.4% to 'Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus'. The data indicate the existence of a new species of hemoplasma in capybaras from Brazil, here proposed as ‘Candidatus Mycoplasma haematohydrochaeris’. By the findings it is also not possible to prove the participation of capybaras in the epidemiology of Bartonella spp.
Descrição
Palavras-chave
Hemoplasma, Bartonella, Amblyommma dubitatum, Roedor silvestre, PCR