Comunidades no RIUEL
Selecione uma comunidade para navegar por suas coleções
Submissões Recentes
Obtenção, purificação, caracterização e atividade antibiofilme de vesículas de membrana externa de Burkholderia thailandensis
(2025-02-20) Thomé, Maria Luiza Francisconi Lubanco; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Nakazato, Gerson; Cyoia, Paula Signolfi
As cepas de Escherichia coli Enteroagregativa (EAEC) são patógenos que causam inflamação intestinal, resultando em diarréia aguda e persistente, especialmente em crianças e indivíduos imunocomprometidos. Essas infecções contribuem para cerca de 500.000 mortes anuais por diarreia em crianças menores de cinco anos. A resistência bacteriana aos antimicrobianos, especialmente devido à formação de biofilmes, reduz a eficácia dos antimicrobianos e prejudica a resposta imunológica, dificultando o tratamento. Biofilmes aumentam a resistência aos antimicrobianos em até 1000 vezes e estão envolvidos em cerca de 80% das infecções bacterianas. Este estudo avaliou a ação antibiofilme de vesículas de membrana externa (OMVs) isoladas de Burkholderia thailandensis , observando inibição de 95,86% e 94,83% na formação de biofilme e destruição de 88,55% e 62,52% de biofilme pré-formado de EAEC 042 com OMVs obtidas por ultracentrifugação (OMVs-UC) e OMVs obtidas pelo uso do kit de isolamento de exossomos (OMVs-Kit), respectivamente. Além disso, o uso de OMVs apresentou baixo efeito citotóxico contra células VERO CCL-81. Além disso, comparamos os padrões, a composição geral e a concentração de vesículas obtidas por dois métodos de obtenção: ultracentrifugação e uso de kit de isolamento de exossomos. Os resultados indicaram que o uso do kit apresenta vantagens em termo de simplicidade, além de recuperar quantidades e padrões de vesículas muito semelhantes àqueles obtidos pela técnica tradicional de ultracentrifugação e apresentar ação contra biofilme de EAEC.
Otimização de PCR em tempo real para detecção do gênero Leishmania e diferenciação das espécies Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis
(2025-12-10) Correia, Guilherme Ferreira; Nakamura, Celso Vataru; Toma, Helena Keiko; Tavares, Eliandro Reis; Ogatta, Sueli Fumie Yamada
Neste estudo foi desenvolvido e validado uma multiplex-PCR em tempo real (M-qPCR), com alta sensibilidade e especificidade, para diferenciação de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis. Também foi otimizado um ensaio qPCR para a detecção do gênero Leishmania. Oligonucleotídeos iniciadores gênero-específicos e espécie-específicos foram desenhados com base na análise das sequências do minicírculo do kDNA (várias espécies), e da região espaçadora interna transcrita 2 (ITS2) do locus do RNA ribossomal de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis, respectivamente. O vetor plasmidial pUC57 contendo as sequências consensos alvos foi utilizado como controle positivo. Os amplicons nos ensaios de qPCR e M-qPCR apresentaram curvas de dissociação distintas, com picos de temperatura de fusão de 76 °C, para o gênero Leishmania, 82 °C para L. amazonensis e 81°C para L. braziliensis. Nenhuma amplificação foi observada nos controles negativos. O desempenho analítico da M-qPCR foi avaliado utilizando análise in silico e um painel de cepas de referência e clínicas, abrangendo espécies de protozoários, bactérias e fungos, exibindo 100% de especificidade. Além disso, o ensaio apresentou um limite de deteção de 1 cópia por reação para todos os alvos utilizando o controle positivo. Em síntese, o ensaio qPCR e a M-qPCR mostraram elevado desempenho diagnóstico, sendo capazes de detectar o gênero Leishmania e diferenciar L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis em amostras clínicas, respectivamente, superando as limitações observadas nas metodologias convencionais para diagnóstico da leishmaniose.
Identificação precoce de caquexia e sarcopenia no câncer colorretal: potencial de biomarcadores salivares e avaliação da força muscular na predição de desfechos clínicos
(2026-07-07) Godinho, Loriane Rodrigues de Lima Costa; Deminice, Rafael; Pitta, Fábio de Oliveira; Hernandes, Nidia Aparecida; Miola, Thais Manfrinato; Santos, Livia Alves Amaral
Introdução: O câncer colorretal (CCR) é uma das neoplasias de maior incidência e mortalidade global. O prognóstico e a qualidade de vida dos pacientes estão associados a complicações sistêmicas como a sarcopenia, caracterizada pela perda de força, massa e função muscular, e a caquexia, uma síndrome multifatorial de comprometimento progressivo, tais condições são frequentemente subdiagnosticadas devido à escassez de métodos diagnósticos acessíveis e padronizados. Objetivos: Identificar e validar biomarcadores salivares para detecção precoce de caquexia relacionada ao CCR, utilizando uma abordagem que integra análise metabolômica e parâmetros clínicos, além de avaliar a concordância de três métodos de avaliação de força muscular para o diagnóstico de sarcopenia em idosos com câncer colorretal e sua associação com o prognóstico de morbidade e mortalidade. Metodologia: Para a identificação de biomarcadores de caquexia, realizou-se um estudo transversal com 39 pacientes com CCR (20 caquéticos e 19 não caquéticos), submetidos à análise metabolômica salivar por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS), seguida de validação experimental. Para a avaliação da sarcopenia, conduziu-se uma coorte prospectiva com 71 idosos com CCR submetidos a tratamento cirúrgico. A sarcopenia foi diagnosticada e comparada utilizando-se três critérios de avaliação de força muscular: força de preensão manual (FPM) pelo critério europeu (FPM/EWGSOP2), FPM pelos pontos de corte brasileiros (FPM/ELSI-Br) e o teste de sentar e levantar da cadeira de cinco repetições (TSLC). Resultados: A análise metabolômica identificou oito metabólitos diferencialmente expressos, significativamente subexpressos nos pacientes caquéticos. Quatro aminoácidos apresentaram acurácia diagnóstica isolada (AUC > 0,8): valina, fenilalanina, leucina e isoleucina. A combinação dos aminoácidos de cadeia ramificada (BCAAs: leucina, isoleucina e valina) demonstrou forte potencial diagnóstico (AUC = 0,8294). A coorte exploratória confirmou a redução de isoleucina, leucina, valina e do pool total de BCAAs na saliva de pacientes caquéticos, correlacionando-se negativamente com o tamanho do tumor. Na comparação dos métodos de avaliação de força muscular, observou-se que a prevalência de sarcopenia variou significativamente conforme o critério adotado: 34% por FPM/EWGSOP2, 69% por TSLC e 75% por FPM/ELSI-Br. Independentemente do critério, a sarcopenia esteve associada a piores desfechos pós-operatórios, como maior tempo de internação hospitalar, maior taxa de readmissão em 30 dias e maior tempo em Unidade de Terapia Intensiva (UTI). O óbito em 90 dias, ocorrido em 12,7% da amostra, foi significativamente associado aos diagnósticos estabelecidos pelos critérios FPM/EWGSOP2 e TSLC. Conclusão: Nossos achados demonstram que os BCAAs salivares e a fenilalanina podem atuar como biomarcadores não invasivos promissores para detecção precoce da caquexia associada ao CCR. Paralelamente, embora a prevalência de sarcopenia seja sensível ao critério de força muscular escolhido, sua identificação por qualquer um dos métodos constitui um preditor robusto de pior prognóstico clínico.