02 - Mestrado - Fisiopatologia Clínica e Laboratorial

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Associação entre marcadores inflamatórios, anti-inflamatórios e metabólicos com a doença carotídea aterosclerótica subclínica em pacientes vivendo com HIV/AIDS
(2019-08-16) Bellinati, Philipe Quagliato; Reiche, Edna Maria Vissoci; Breganó, José Wander; Capobiango, Jaqueline Dario
Introdução: O uso da terapia antirretroviral combinada (cART) pelas pessoas infectadas pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) tem proporcionado maior sobrevida destes indivíduos. Com isto, são expostos aos efeitos da idade e a outros fatores de risco relacionados à doença cardiovascular (DCV). A espessura da camada íntima-média da carótida interna (cIMT) tem sido associada com marcadores inflamatórios. No entanto, estudos da associação entre marcadores anti-inflamatórios com a cIMT são escassos e com resultados conflitantes. Objetivo: Determinar a associação entre marcadores da resposta inflamatória, anti-inflamatória e metabólica com a doença carotídea aterosclerótica subclínica em um grupo de pacientes infectados pelo HIV-1. Métodos: Foi realizado um estudo transversal em 49 pacientes com infecção pelo HIV-1 sem sintomas de doença aterosclerótica estabelecida, adultos, ambos os sexos e em tratamento com cART há, pelo menos, cinco anos, atendidos no Ambulatório de Especialidades do Hospital Universitário da Universidade Estadual de Londrina (AEHU/UEL). Foram inseridos, também 85 controles. A ultrassonografia doppler (USGD) de carótida foi realizada nos pacientes que foram, posteriormente, categorizados de acordo com a cIMT (<0,9 ou =0,9mm), grau de estenose (<50,0 ou = 50,0%) e presença de placa (=1,5 mm). Dados demográficos, fatores de estilo de vida e história médica foram coletados pela avaliação clínica e aplicação de um questionário padrão. Os marcadores avaliados foram leucócitos periféricos, níveis plasmáticos de fator de necrose tumoral (TNF)-a, interleucina (IL)-6, IL-10, adiponectina, proteína C reativa com método ultrassensível (usPCR), perfil lipídico, glicose, insulina e homocisteína. Além disso, foram avaliadas a contagem de linfócitos T CD4+ e a quantificação plasmática do RNA do HIV-1. As variáveis significativas obtidas no teste de análise de variância (ANOVA) entre os grupos com cIMT < 0,09 mm versus = 0,9 mm foram avaliadas usando três modelos diferentes de análise de regressão logística binária automática controlada por covariáveis que poderiam confundir a associação de interesse. Além disso, avaliamos a cIMT em dados contínuos por regressão linear em duas etapas e em 5 modelos, com os dados sociodemográficos (modelo #1), a presença de comorbidades (modelo #2), metabólicas (modelo #3), biomarcadores inflamatórios (modelo # 4) e dados associados à infecção pelo HIV-1 (modelo #5). Posteriormente, avaliamos as variáveis significativas na primeira etapa, os demais dados sociodemográficos e variáveis relacionadas ao HIV-1. Correlação de Spearman foi empregada para verificar a correlação entre cIMT, biomarcadores inflamatórios, anti-inflamatórios e metabólicos e variáveis relacionadas ao HIV-1. Odds ratio (OR) e intervalo de confiança de 95% (IC) também foram determinados. Resultados: Pacientes com HIV-1 apresentaram níveis mais elevados de usPCR (p=0,032), TNF-a (p<0,001), IL-6 (p=0,006), IL-10 (p=0,003), triglicerídeos (p=0,001) e insulina (p<0,001), e baixos níveis de adiponectina (p<0,001), colesterol total (p=0,015) e colesterol de lipoproteína de baixa densidade (LDL-C) (p=0,024) do que os controles, após ajuste por idade, sexo, etnia, circunferência abdominal e uso de hipolipemiantes. A cIMT = 0,9 mm ou placa aterosclerótica nas artérias carótidas foi observada em 24 (48,9%) pacientes. Níveis diminuídos de adiponectina foram independentemente associados com cIMT = 0,9 mm, após ajustados por covariáveis de interesse [OR: 0,267, intervalo de confiança (IC) 95%: 0,089-0,801, p=0,019] e explicaram 18,7% dos resultados da variância da cIMT. A idade e tabagismo foram positivamente associados com cIMT (p=0,033 e p=0,028, respectivamente) e os níveis de adiponectina foram negativamente associados com cIMT (p=0,008); estas três variáveis explicaram 27,3% da variância dos valores da cIMT. As variáveis cART, contagem de LT CD4+ e a carga viral de HIV-1 não apresentaram associação com a cIMT, estenose e presença de placa. Além disso, os níveis plasmáticos de adiponectina foram negativamente correlacionados com cIMT (r=-0,319, p=0,026), tempo de diagnóstico do HIV-1 (r=-327, p=0,009), leucócitos periféricos (r=-0,442 , p=0,002), IL-6 (r=-0,370, p=0,009), IL-10 (r=-0,394, p=0,005), triglicerídeos (r=-0,564, p <0,001) e insulina (r=-0,487, p <0,001) em pacientes infectados pelo HIV-1. Ademais, a adiponectina foi correlacionada positivamente com o HDL-colesterol (r=0,573, p <0,001). Conclusão: Os resultados mostraram a elevada frequência de aterosclerose subclínica nos pacientes com infecção pelo HIV-1, bem como a associação entre os níveis reduzidos de adiponectina com a aterosclerose subclínica. Juntamente com a idade e tabagismo, a diminuição de adiponectina pode contribuir para o aumento do risco de DCV nestes pacientes. Portanto, os níveis de adiponectina podem ser um bom candidato para a previsão de aterosclerose subclínica. É um teste de baixo custo, fácil de usar em larga escala, mais acessível e pode ser útil para o manejo de pacientes com HIV-1 nos cuidados de saúde pública, principalmente onde o USGD não está disponível.
Efeito sinérgico do óleo essencial de orégano com nanopartículas de prata sobre Leishmania amazonensis
(2020-04-17) Alves, Alex Barbosa; Costa, Ivete Conchon; Bidóia, Danielle Lazarin; Simão, Andréa Name Colado
A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma zoonose causada por protozoários do gênero Leishmania. O tratamento atual apresenta vários problemas como a dificuldade de administração, baixa eficiência, toxicidade e resistência dos parasitos, levando a busca de novas substâncias ou associações como terapias alternativas. Produtos naturais como o óleo essencial de orégano (OEO), extraído da planta selvagem Origanum vulgare, possui uma gama de efeitos já estudados, como ação antiparasitária, antibacteriana e antifúngica. A associação do OEO com nanopartículas de prata (AgNp), que também possuem ações antimicrobianas, apresentaram efeitos sinérgicos em bactérias. Entretanto, não havia estudos desta associação em Leishmania. Portanto, o presente estudo investigou o efeito sinérgico leishmanicida da associação do OEO com AgNp sobre L. amazonensis. Para isso, foram utilizadas diferentes proporções de associação do OEO com AgNp para obtenção de uma dose que eliminasse 50% dos parasitos. Os dados obtidos das doses das combinações de OEO+AgNp foram avaliadas matematicamente verificando o efeito sinérgico entre elas. O ensaio antipromastigota foi realizado através da contagem em câmara de Neubauer, onde verificamos o efeito antileishmania do tratamento. Após isso, por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET), foram observadas alterações morfológicas e ultraestruturais em promastigotas tratadas com a associação OEO+AgNp, como rugosidade da superfície celular, arredondamento e redução do corpo celular, flagelo reduzido, extravazamento de conteúdo citoplasmático, inchaço mitocondrial, acúmulo de corpos lipídicos e de vacúolos autofágicos no citoplasma, desorganização do DNA nuclear e danos à membrana plasmática. Além disso, o tratamento com a associação induziu em promastigotas um aumento de espécies oxidantes, despolarização mitocondrial e exposição da fosfatidilserina, que acarretaram na morte celular por apoptose tardia. Em seguida, verificamos o efeito anti-amastigota da associação em macrófagos infectados com L. amazonensis e a formação de marcadores microbicidas como óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (EROs). Ao final, conclui-se que a associação de OEO+AgNp possui um efeito sinérgico em sua ação leishmanicida e induz a morte de promastigotas por um processo de apoptose tardia e apresenta um efeito anti-amastigota através da produção de EROs e NO por macrófagos infectados. Assim, a associação OEO+AgNp se apresenta como uma potencial alternativa de tratamento em uma realidade onde fármacos tóxicos e de baixa eficiência são utilizados no tratamento de LTA.
Produção de anticorpos IgY e sua interação com beta-lactâmicos contra Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa multirresistentes
(2020-12-18) Gameiro, Juliana Gutschow; Venâncio, Emerson José; Costa, Ivete Conchon; Fernandes, Eduardo Vignoto; Marroni, Floristher Elaine Carrara
A preocupação com a resistência bacteriana a antimicrobianos tem levado a investigação de novas estratégias para o tratamento de infecções bacterianas, especialmente as causadas por Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa. Imunoglobulina Y (IgY) é uma classe de anticorpos presente na gema de ovos de aves que tem sua ação antimicrobiana investigada contra diversas espécies de bactérias. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi obter anticorpos IgY específicos e avaliar in vitro a sua atividade contra P. aeruginosa e A. baumannii multirresistentes em combinação com beta-lactâmicos. Para isso, galinhas poedeiras receberam sete inoculações com amostras inativadas das cepas selecionadas com intervalos de 15 a 45 dias entre as inoculações. A partir da terceira semana os ovos foram coletados e a IgY extraída. Inicialmente foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos antibióticos ceftazidima, meropenem e imipenem para microrganismos testados e a atividade antibacteriana dos anticorpos IgY produzidos contra Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa multirresistentes. A seguir foi avaliada a interação dos antibióticos e os anticorpos IgY produzidos. Como resultados, após a terceira imunização foi obtido IgY específica, com variações no tempo para a estabilização da produção de IgY entre as diferentes cepas. Houve uma redução de quatro vezes na CIM da cepa OXA-253 para o meropenem e duas vezes para as CIMs do meropenem e ceftazidima da cepa OXA-23 quando associado à IgY. Este estudo demonstrou que há diferenças na produção de IgY em resposta as diferentes cepas. Além disso, houve redução nos valores de CIM no teste de sinergismo, para meropenem nas cepas OXA-23 e OXA-253 e ceftazidima na cepa OXA-253, nas demais cepas essa ação não foi observada. Como opções terapêuticas em microrganismos multirresistentes é limitada, estes resultados abrem caminhos para a aplicação da IgY como um complemento de terapias antimicrobianas entre bactérias multirresistentes.
Radiodermite e estresse oxidativo no câncer de mama
(2021-07-21) Casagrande, Renan Capitani; Armani, Alessandra Lourenço Cecchini; Costa, Ivete Conchon; Armani, André
O câncer de mama é a neoplasia maligna mais frequente em mulheres no Brasil e no mundo, com exceção dos cânceres de pele não-melanomas. Dentre as três principais modalidades de tratamento, a radioterapia é utilizada como tratamento adjuvante com intenção curativa em cerca de metade dos casos, tendo como principal efeito colateral agudo a radiodermite. Tanto a própria patologia como os tratamentos realizados podem influenciar no status redox. O objetivo deste estudo foi caracterizar os graus de radiodermite e os padrões de estresse oxidativo apresentados por pacientes com câncer de mama submetidas a tratamento radioterápico adjuvante. Pacientes com indicação de tratamento (n=50) foram convidadas a participar desta pesquisa. Após serem esclarecidas sobre o projeto e assinarem o TCLE (termo de consentimento livre e esclarecido), responderam a um questionário e foram submetidas a exame clínico e à coleta de sangue para análise de marcadores de estresse oxidativo. As coletas foram feitas em três fases distintas do tratamento: M1 (dia do início), M2 (metade das sessões), M3 (dia do término da radioterapia). Foram realizadas, com a amostra sanguínea, técnicas para a quantificação de lipoperóxidos de membrana pela técnica de quimiluminescência (QL) com tert-butil-hidroperoxil, quantificação de malondialdeído (MDA) por cromatografia líquida de alta performance e a quantificação espectrofotométrica de glutationa reduzida (GSH) e oxidada (GSSG). Avaliou-se ainda a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) por espectrofotometria. As análises sanguíneas de estresse oxidativo foram comparadas com um grupo controle (n=30). Não houve aumento dos níveis marcadores de estresse oxidativo ao longo do tratamento no grupo de fracionamento convencional (FC). Redução no níveis de QL (peroxidação lipídica por quimioluminescência, CAT (catalase), GSH ( glutationa reduzida) e GSSG ( glutatina oxidada) e aumento de MDA ( malondialdeído) foram observados no grupo FC em relação ao controle. Pacientes tratadas com esquema hipofracionado (HF) apresentaram menores graus de radiodermite e de outros efeitos colaterais avaliados. Tratamentos com esquemas de dose diferentes, período de realização da coleta e tratamentos prévios poderiam interferir nos níveis destes marcadores. Não foi possível estabelecer uma relação entre o aumento destes marcadores e a radiodermite. Novos estudos com número maior de participantes que receberam tratamento com esquema hipofracionado poderiam elucidar melhor uma possível relação do estresse oxidativo com a radiodermite.
Avaliação das variantes do gene IL18 (rs360717 e rs187238) e de biomarcadores clínicos e laboratoriais como preditores de gravidade e mortalidade da COVID-19
(2021-09-01) Mori, Mayara Tiemi Enokida; Lozovoy, Marcell Alysson Batisti; Reiche, Edna Maria Vissoci; Oliveira, Sayonara Rangel de
INTRODUÇÃO: A Coronavirus disease 2019 (COVID-19) é uma infecção aguda causada pelo novo coronavírus denominado Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2), com mais de mais de 180 milhões de casos confirmados e aproximadamente quatro milhões de casos fatais registrados pelo mundo. A COVID-19 grave está ligada a uma resposta inflamatória excessiva, incluindo o nível elevado de citocinas pró-inflamatórias e biomarcadores inflamatórios sistêmicos como proteína C reativa, dímero-D, ferritina e relação neutrofílo/linfócito. A tempestade de citocinas é um dos principais agravantes observados na COVID-19 grave, levando à falência de múltiplos órgãos ou choque séptico. Níveis séricos elevados da interleucina (IL)-18 são associados a gravidade da COVID-19 e pior prognóstico. Variantes genéticas no IL18 podem influenciar os níveis da citocina e podem estar relacionadas a fisiopatologia da COVID-19. OBJETIVO: Avaliar as variantes genéticas IL18-105G>A (rs360717) e IL18-137C>G (rs187238) e sua associação com a gravidade e o desfecho da COVID-19, bem como sugerir modelos preditores para prognóstico e mortalidade em pacientes com COVID-19. SUJEITOS E MÉTODOS: O estudo transversal incluiu 528 pacientes com COVID-19 atendidos no Hospital Universitário de Londrina e Unidade de Pronto Atendimento de Londrina. A gravidade clínica da COVID-19 foi avaliada usando a classificacação da Organização Mundial da Saúde e os pacientes foram categorizados de acordo com a gravidade leve (157 pacientes), moderado (63 pacientes) e grave (308 pacientes). A genotipagem das variantes de nucleotídeo único de IL18 foram realizadas pela reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa (qPCR). RESULTADOS: A IL18-105G>A está associado a um efeito protetor sobre a gravidade da COVID-19, com o genótipo GA no modelo co-dominante [Odds ratio (OR): 0,55, intervalo de confiança (IC) 95%: 0,34-0,89, p= 0,015], modelo overdominante (OR: 0,56, IC 95%: 0,35-0,89, p= 0,014) e os genótipos AA + GA em um modelo dominante (OR: 0,61; IC 95%: 0,38-0,96, p=0,031). Assim, a presença do alelo A em homozigose ou heterozigose foi associado a proteção ao desenvolvimento de casos moderados e graves. Similarmente, o genótipo IL18-137CG foi associado a um efeito protetor à gravidade da COVID-19 (OR: 0,55, IC 95%: 0,34-0,89, p= 0,015). Para o modelo overdominante, o genótipo CG foi associado a um efeito protetor à gravidade da COVID-19 (OR: 0,57, IC 95%: 0,36-0,91, p= 0,018). No modelo dominante, os genótipos GG + CG também foram associados a um efeito protetor à gravidade da COVID-19 (OR: 0,59, IC 95%: 0,37-0,93, p= 0,025) e a presença do alelo G em homozigose ou a heterozigose foi associado a proteção ao desenvolvimento de casos moderados e graves. Nós propomos um modelo de biomarcador capaz de predizer a gravidade da COVID-19 com IL18-105 GA (negativamente associado), e idade, alterações na tomografia computadorizada de tórax (CCTA - do inglês chest computed tomography scan alteration), índice de massa corpórea, doenças cardíacas, diabetes mellitus tipo 2, hipertensão e índice de inflamação (positivamente associados), podem ser usados para predizer o desenvolvimento de doença moderada ou grave com uma precisão de 84,3% (sensibilidade: 83,3% e especificidade: 86,5%). A não sobreviventes (versus sibreviventes) foi mais bem prevista por idade elevada, demência, inflamação, redução de SpO2, admissão na unidade de terapia intensiva, intubação, índice de massa corpórea e doença grave; 85,7% dos casos foram classificados corretamente com uma sensibilidade de 83,3% e especificidade de 86,7%. CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que as variantes genéticas IL18-105G>A e IL18-137C>G possam exercer um efeito protetor significativo em relação à gravidade da COVID-19, mas não sobre a mortalidade. Propomos modelos preditivos para prognóstico e mortalidade que podem auxiliar na identificação precoce de pacientes com maior chance de evoluir para um pior prognóstico, necessitando de tratamento individualizado.
Análise dos fatores associados à letalidade por sepse relacionada a assistência à saúde em crianças hospitalizadas em unidade de terapia intensiva
(2022-02-04) Amarante, Ana Cristina Alba; Capobiango, Jaqueline Dario; Perugini, Marcia Regina Eches; Lopes, Gilselena Kerbauy
Objetivo: Analisar os fatores associados a letalidade por sepse associada às infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) em crianças internadas em unidade de terapia intensiva (UTI) de um hospital universitário público do sul do Brasil. Métodos: Estudo caso-controle, cuja amostra foi composta por 90 crianças internadas na UTI pediátrica no período de janeiro de 2014 a dezembro de 2018. A coleta das informações foi realizada por meio de pesquisa em prontuários e informações das fichas de notificação de IRAS da Comissão de Controle de Infecção Hospitalar. Os dados foram analisados no software Statistical Package for the Social Science, onde as associações entre as variáveis e o óbito foram avaliadas por meio do teste Quiquadrado (X2) ou Exato de Fisher quando apropriado, regressão logística simples e regressão logística múltipla, a medida de associação foi a Odds Ration (OR), com intervalos de confiança (IC) de 95%. O nível de significância adotado foi de 5% (p <0,05). Resultados: A análise bivariada demonstrou que o óbito esteve associado a idade menor ou igual a 12 meses (OR 5; IC 1,07-23,33; p 0,029); presença de comorbidade (OR 14,25, IC 1,80-112,46, p < 0.001), mal formação congênita (OR 3,28, IC 1,17-9,15, p 0,021), cardiopatia (OR 6, IC 1,83-19,67, p 0,004; neoplasia ( OR 17,25, IC 1,80-164,94, p 0,008) pneumonia associada a ventilação mecânica (PAV) de repetição ( OR 17,25, IC 1,80-167,94, p 0,008), choque séptico ( OR 10,16, IC 3,26- 31,65, p<0,001), uso de noradrenalina (OR 6.34, IC 2,01-19,98, p 0,002), uso de adrenalina ( OR 8,5, IC 1,43-50,53, p 0,021), infecção por CR (resistente a carbapenêmicos) (OR 14,57 IC 2,66-79,80, p 0,0012). Após a análise múltipla as variáveis cardiopatia (OR 12,48; IC 2,55-60,93; p 0,002), infecção por CR (OR 31,51; IC 4,01-247,25, p 0,001), neoplasia (OR 58,23; IC 4,54-746,27; p 0,002), uso de adrenalina (OR 13,14; IC 1,35-128,02, p 0,003) permaneceram associadas ao óbito. As bactérias Gram-negativas estiveram mais associadas à sepse secundária a PAV e à infecção do trato urinário relacionada a cateter vesical de longa permanência; e Staphylococcus coagulase negativa foi o agente mais frequente na infecção primária de corrente sanguínea. Conclusão: A sepse hospitalar secundária a PAV e associada a CR contribuiu para um elevado índice de letalidade na UTI pediátrica. As crianças portadoras de cardiopatia, neoplasia ou que necessitaram de adrenalina apresentaram piores desfechos.
Prevalência de reações adversas pós vacina Dengvaxia® em população jovem da cidade de Londrina, Paraná
(2022-02-09) Ferreira, Danielle Ruiz Miyazawa; Capobiango, Jaqueline Dario; Reiche, Edna Maria Vissoci; Lozovoy, Marcell Alysson Batisti
Objetivo: Demonstrar a frequência de eventos adversos pós vacina da dengue em uma população de adultos jovens, a partir de uma campanha de vacinação na Universidade Estadual de Londrina (UEL) e Hospital Universitário (HU), em Londrina, Paraná. Materiais e Métodos: Estudo de coorte prospectiva com utilização de questionário aplicado aos participante após cada dose da vacina, além da coleta de dados no Gerenciador de Ambiente Laboratorial do Paraná, Medview (Hospital Universitário), SaúdeWeb (Prefeitura Municipal de Londrina) e Aplicativo de Controle de Vacinação da Dengue do Governo do Paraná Versão 0.0.13. Os dados foram inseridos no programa estatístico Epi Info 3.5.4 e calculado suas frequências. As associações entre as variáveis e as reações vacinais foram calculadas por meio do teste exato de Fisher ou teste qui-quadrado e regressão logística binária no GraphPad Prism 8.0.1 e software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) 20; a medida de associação foi Odds ratio (OR), com intervalo de confiança de 95% (IC 95%) e nível de significância de 5% (p<0,05). Foi calculado um tamanho de amostra de 700 indivíduos, considerando uma população de 200.000 pessoas nessa faixa etária, com prevalência de 50% de dengue, IC 99% e p<0,05. Resultados: Dentre os 1815 participantes, 6,5% apresentaram algum tipo de reação vacinal. Reações mais prevalentes foram cefaleia (59,6%), mal-estar (32,1%), febre (26,6%), mialgia (22%) e dor local (14,6%) e a dor local foi a única reação que esteve presente nas três doses. A frequência de reações conforme as doses foram de 6,1%, 0,6% e 0,4% nas 1ª, 2ª e 3ª doses, respectivamente. A correlação entre as variáveis demonstrou que ser do sexo feminino [OR 1,701 (1,144-2,5416); IC 95%; p<0,009;] aumenta a chance de apresentar reação vacinal; entretanto, a presença de doença de base [OR 0,001(0,000-0,002); IC 95%; p=0,000] diminui essa chance. Variáveis sociodemográficas como cor, renda familiar, faixa etária e escolaridade ou ter tido dengue prévia referida não apresentaram associação com reação vacinal. Conclusão: O estudo demonstrou segurança e baixa prevalência de reação adversa com a vacina Dengvaxia® na população estudada.
Avaliação dos níveis séricos e avidez de anticorpos IgG anti-toxoplasma gondii para o diagnóstico de toxoplasmose congênita
(2022-02-25) Almeida, Vanessa Fraga de; Capobiango, Jaqueline Dario; Lozovoy, Marcell Alysson Batisti; Reiche, Edna Maria Vissoci
Introdução: A infecção congênita por Toxoplasma gondii (T. gondii) apresenta elevada incidência em várias regiões do Brasil. A maioria das crianças infectadas é assintomática no período neonatal e o diagnóstico é realizado com a detecção de anticorpos IgG anti-T. gondii após os 12 meses de idade, pois a IgM anti-T. gondii apresenta baixa sensibilidade e a reação em cadeia de polimerase ainda não está disponível em muitos serviços. Portanto, a comparação dos valores de IgG anti-T. gondii entre mãe e criança e outras metodologias, como a relação entre os níveis de IgG anti-T. gondii nas amostras da mãe e as criança e o teste de avidez de IgG, podem auxiliar na definição do diagnóstico de toxoplasmose congênita e início do tratamento mais precoce das crianças infectadas. Materiais e métodos: Em um estudo caso controle, foram analisados 20 pares mãe-criança, cujas mães apresentaram diagnóstico de toxoplasmose adquirida na gestação. A pesquisa de anticorpos IgG e IgM anti-T. gondii por quimioluminescência e o teste de avidez de IgG foram realizados nas amostras coletadas de forma simultânea das crianças e de suas mães, nos primeiros dois meses de vida. Os dados foram analisados no programa Graph Pad Prism 9 e as associações foram analisadas com o teste exato de Fisher. Resultados: Do total de pares, o teste de avidez de IgG foi realizado em cinco pares mãe-criança, cujas crianças eram sabidamente infectadas pelo T. gondii e em 15 pares, cujas crianças não eram infectadas (controles). Todos os pacientes com toxoplasmose congênita e 80% dos controles apresentaram IgG com avidez fraca. O teste apresentou sensibilidade de 29,41% ?Intervalo de Confiança (IC) 95% 13,28 - 53,13)?, especificidade de 100% (IC 95% 43,85 -100,00), valor preditivo positivo de 100% (IC 95% 56,55 - 100,00) e valor preditivo negativo de 20% (IC 95% 7,05 - 45,19). Os valores do índice de avidez das crianças infectadas foram próximos aos valores das suas respectivas mães, pois a relação menor do que 2,0 entre os índices de avidez da mãe e da criança foi 2,7 vezes mais frequente nas infectadas em comparação com as não infectadas ?p= 0,6126 (IC 95% 0,2545 - 37,40)?. Para a avaliação da relação dos valores de IgG anti-T. gondii foram analisados sete pares mãe-criança, cujas crianças eram sabidamente infectadas pelo T. gondii e 19 pares, cujas crianças não eram infectadas. Ao comparar os valores de IgG anti-T.gondii na mãe e na criança, observamos valores de IgG próximos entre as crianças infectadas com as suas mães, com uma relação menor que dois na dosagem de IgG apresentavam 16 vezes mais chance de terem toxoplasmose congênita do que as crianças não infectadas ?p=0,0208 (IC 95% 1,514 - 203,0)?. Conclusão: O teste de avidez não deve ser utilizado isoladamente para o diagnóstico da toxoplasmose congênita; porém, a comparação dos valores de avidez e os valores de IgG anti-T. gondii em amostras coletadas de forma simultânea na mãe e na criança podem auxiliar durante o acompanhamento destas crianças.
Associação entre os níveis plasmáticos das moléculas de adesão celular e os fatores de risco, subtipos, gravidade e mortalidade do acidente vascular cerebral isquêmico agudo
(2022-03-23) Araújo, Maria Caroline Martins de; Reiche, Edna Maria Vissoci; Alfieri, Daniela Frizon; Oliveira, Sayanara Rangel
Introdução: O acidente vascular cerebral isquêmico (AVCI) é a segunda causa de morte no mundo e uma das principais causas de morbidade e incapacidade funcional. O AVCI é responsável por mais de 80,0% do total de acidentes vasculares cerebrais. Dados clínicos, exames laboratoriais e de imagem foram avaliados como potenciais biomarcadores de prognóstico de curto-prazo e mortalidade nestes pacientes. Entretanto, a maioria dos estudos que analisou possíveis biomarcadores, os avaliaram de forma isolada e apresentaram resultados conflitantes. Objetivo: Avaliar a associação entre os níveis plasmáticos das moléculas de adesão celular (CAM) e os fatores de risco, subtipos, gravidade e mortalidade do AVCI agudo. Métodos: O estudo incluiu 132 pacientes com até 24 h da admissão no Hospital Universitário de Londrina com diagnóstico de AVCI. Foram avaliadas variáveis demográficas, antropométricas e clínicas e coletadas amostras de sangue periférico na admissão do paciente. A gravidade do AVCI foi avaliada com a National Institute of Health Stroke Scale (NIHSS) e categorizada em leve (NIHSS<5), moderada (NIHSS5-14) e grave (NIHSS = 15). Os subtipos de AVCI foram classificados de acordo com o sistema do Trial of Org in 10172 Acute Stroke Treatment (TOAST). A taxa de mortalidade foi avaliada três meses após o AVCI quando a escala de Rankin modificada (mRS) foi aplicada e os pacientes foram categorizados como sobreviventes (mRS<6) e não sobreviventes (mRS=6). Foram determinados os níveis plasmáticos das formas solúveis de CAM, incluindo molécula de adesão intracelular 1 solúvel (sICAM-1), molécula de adesão vascular solúvel (sVCAM-1), molécula de adesão celular endotelial plaquetária 1 solúvel (sPECAM-1), E-selectina solúvel e P-selectina solúvel, as citocinas inflamatórias como a interleucina (IL)-1ß, IL-2, IL-6, IL-17A, fator de necrose tumoral (TNF)-?, interferon (IFN)-? e as anti-inflamatórias como a IL-4, IL-10 e fator transformador do crescimento (TGF)-ß. Resultados: A média de idade dos 132 pacientes com AVCI foi 66,8 anos, 47,0% eram homens e 53,0% eram mulheres. Vinte e nove pacientes (21,9%) foram a óbito no acompanhamento de três meses. Os não sobreviventes eram mais velhos que os sobreviventes (p=0,001). Não houve diferenças significativas quanto ao sexo, etnia, índice de massa corporal, tabagismo, hipertensão arterial sistêmica, diabetes mellitus tipo 2, dislipidemia ou nos níveis plasmáticos das citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias entre os dois grupos de pacientes. A gravidade (NIHSS) e os níveis da sVCAM-1 foram maiores nos não-sobreviventes (p<0,001). Maiores níveis de sVCAM-1 foram associados com mortalidade (p=0,001) e foram observados no subtipo de aterosclerose de grandes artérias (LAAS) comparado ao subtipo lacunar (LAC) e ao de outras etiologias (ODE). O modelo combinando dos biomarcadores sVCAM-1 e NIHSS para predição de mortalidade após três meses mostrou melhor resultado que os modelos com sVCAM-1 e NIHSS isoladamente. NIHSS e sVCAM-1, juntos, apresentaram área sob a curva receiving operating characteristic (AUC/ROC) de 0,8841 [intervalo de confiança (IC) 95%: 0,795-0,941], enquanto NIHSS e sVCAM-1 apresentaram AUC/ROC de 0,723 (IC 95%: 0,581-0,821) e 0,844 (IC 95%: 0,732-0,9410), respectivamente. Juntos, NIHSS e sVCAM-1 classificaram corretamente 86,5% dos casos, com valor preditivo positivo de 68,0% e valor preditivo negativo de 91,3%. Conclusão: Os valores de sVCAM-1 juntamente com o escore elevado da gravidade do AVCI (NIHSS) obtidos dentro de 24 h de admissão hospitalar foram preditores de maior mortalidade após três meses do evento isquêmico nos pacientes com AVCI. Portanto, o uso de um modelo combinado desses biomarcadores pode prever precocemente o prognóstico dos pacientes com AVCI que poderão se beneficiar de medidas terapêuticas personalizadas que levem em consideração estes biomarcadores.
Envolvimento de Variantes dos genes IL17A e IL17RA na Retocolite Ulcerativa
(2022-06-15) Zanotti, Mariana Paula Sanchez; Simão, Andréa Name Colado; Reiche, Edna Maria Vissoci; Oliveira, Karen Brajão de
Introdução: A Retocolite Ulcerativa (RCU) é uma desordem inflamatória intestinal crônica que acomete exclusivamente o intestino grosso, de forma proximal e contínua. Os processos patológicos envolvidos na RCU são guiados por uma excessiva resposta imune contra antígenos da microbiota luminal em indivíduos geneticamente predispostos e como resultado da ação de diferentes fatores ambientais. As citocinas relacionadas a resposta Th17 estão aumentadas na mucosa intestinal dos pacientes com RCU, sugerindo que as células Th17 exerçam um papel importante na atividade da doença e no dano à mucosa. Estudos genéticos têm mostrado associação entre variantes do gene IL17 e suscetibilidade à RCU. Objetivo: avaliar o envolvimento das variantes genéticas do IL17A e do IL17RA nos níveis plasmáticos da IL-17A, na suscetibilidade e atividade endoscópica da RCU. Sujeitos e Métodos: Este é um estudo caso- controle que incluiu 104 pacientes com RCU, de ambos os sexos e com idade entre 18 e 70 anos. A atividade da inflamação intestinal determinada pelo escore de Mayo foi classificada em remissão (0), atividade leve (1), moderada (2) e grave (3). Baseado nos valores de Mayo, os pacientes foram divididos em dois grupos de atividade endoscópica: Mayo =1 (remissão / doença leve) e Mayo >1 (doença moderada a grave). As variantes do IL17A -444 A>G (rs3819024) e G>A (rs3819025) e do IL17RA (T>C rs2241043, A>G rs2241049 e G>A rs6518661) foram genotipadas por ensaio de discriminação alélica TaqMan pelo sistema de reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR). Os níveis plasmáticos de IL-17 foram determinados por imunofluorimetria. Resultados: Os principais achados foram que as variantes genéticas IL17A e do IL17RA avaliadas no estudo não foram associadas a suscetibilidade a RCU. Entretanto, pacientes com o genótipo AG rs3819024 apresentaram maiores níveis séricos de IL-17A que os demais genótipos, e essa associação não foi demonstrada no grupo controle. Em relação a atividade da doença, as variantes do IL17A (rs3819024 e rs3819025) e do IL17RA (rs2241043 e rs6518991) não foram associadas com a com a gravidade da RCU nos vários modelos genéticos avaliados. No entanto, a presença do alelo G da variante rs2241049 no modelo dominante foi associada a 2,944 vezes mais chance de desenvolvimento de doença moderada a grave. Conclusão: Os achados do presente estudo sugerem que o genótipo AG do IL17A rs3819024 está associada a maiores níveis de IL-17A apenas na presença da doença, sugerindo associação dessa interleucina com a presença de RCU. Os genótipos AG + GG do IL17RA rs2241049 foram associados com maior atividade endoscópica na RCU.
Influência do treinamento resistido associado à suplementação proteica e glicídica na melhora dos parâmetros metabólicos, inflamatórios e do estado redox em mulheres idosas
(2022-07-18) Santos, Dayse Kellen de Sousa; Venturini, Danielle; Amarante, Marla Karine; Oliveira, Sayonara Rangel
Introdução: Frente à feminização do envelhecimento, estratégias devem ser desenvolvidas para promover a saúde e melhora da qualidade de vida dessa população. Dentre as principais modificações corporais causadas pelo envelhecimento destacam-se a redução da massa muscular, alterações do perfil metabólico e aumento do estresse oxidativo. O treinamento resistido (TR), somado a intervenções nutricionais como a suplementação proteica e glicídica, parece favorecer a melhora do risco cardiovascular e estado redox de quem os utiliza. Objetivos: Investigar a influência do treinamento resistido associado à suplementação proteica e maltodextrina na melhora dos parâmetros metabólicos, inflamatórios e do estado redox em mulheres idosas. Metodologia: Este foi um ensaio clínico em que 45 mulheres idosas (> 60 anos) foram distribuídas randomicamente em dois grupos, grupo maltodextrina (GM), que ingeriu o maltodextrina (35g) antes e após o treino e o grupo whey (WG), que ingeriu maltodextrina (35g) no pré treino e 35g de whey protein após o treino. Ambos os grupos realizaram o mesmo treinamento resistido por 12 semanas. No início (M1) e no final de 12 semanas (M2) de intervenção realizou-se as análises antropométricas, a determinação dos biomarcadores metabólicos (glicose, colesterol, HDL, TRIG, VLDL, LDL, insulina, ácido úrico, creatinina, ureia e albumina), biomarcadores inflamatórios (TNF-a, IL-6 e PCR) e biomarcadores de estresse oxidativo (AOPP, FOX, NOx, TRAP, SOD e CAT). Resultados: Quando comparados M1 e M2, após 12 semanas de intervenção, o WG apresentou diminuição significativa intra grupo dos níveis plasmáticos de glicose (p=0.002), ácido úrico (p=0.001), PCR (p=0.049), TNF-a (p=0.001), creatinina (p=0.034), e aumento significativo dos níveis séricos de ureia (p=0.027), albumina (p=0.001) e HDL-C (p=0.001). Enquanto que o GM apresentou aumento significativo intra grupo dos níveis plasmáticos de ureia (p=0,001) e albumina (p= 0,003) e redução significativa de PCR (p=0.004). Quanto aos biomarcadores oxidantes e antioxidantes, o WG apresentou diminuição significativa intra grupo dos níveis plasmáticos de AOPP (p=0.001) e FOX (p=0.005), e aumento dos níveis séricos de TRAP (p=0,015), NOx (p=0.004) ), e tendência de aumento da SOD (p=0,059), quando comparados os dois momentos, M1 e M2, enquanto que no GM, houve uma diminuição significativa intra grupo dos níveis plasmáticos de AOPP (p=0.028) e FOX (p=0.001) e um aumento significativo intra grupo dos níveis plasmáticos de TRAP (p=0,038) e SOD (p=0,043). Conclusão: A combinação entre o TR e a suplementação proteica trouxe mais benefícios quando comparado ao TR associado à maltodextrina sobre parâmetros inflamatórios, metabólicos e no estado redox, diminuindo o risco cardiovascular.
Avaliação clínica, epidemiológica e laboratorial de crianças e adolescentes com Síndrome Respiratória Aguda Grave e Síndrome Gripal, durante a pandemia da Covid-19
(2022-12-09) Silva, Kennia Cristine de Souza; Capobiango, Jaqueline Dario; Lozovoy, Marcell Alysson Batisti; Perugini, Márcia Regina Eches
A principal manifestação clínica da COVID-19 é a Síndrome Respiratória Aguda Grave, uma complicação da Síndrome Gripal, na qual há o comprometimento da função pulmonar e que pode acometer todas as idades. Diante da elevada frequência de infecções respiratórias virais na infância e adolescência, somada à identificação de um novo vírus denominado SARS-CoV2, que causou a Pandemia da Covid-19, percebeu-se a necessidade de avaliar os fatores epidemiológicos preditores de mau prognóstico no rol das infecções respiratórias nessa faixa etária infanto-juvenil. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi de avaliar clínica, pidemiológica e laboratorialmente, crianças e adolescentes com Síndrome Respiratória Aguda (SRAG) e com Síndrome Gripal (SG), durante a pandemia da Covid-19. Considera-se que, esse estudo fornecerá subsídios necessários ao melhor manejo das infecções respiratórias nessa faixa etária. Portanto, analisamos os achados clínicos, laboratoriais e epidemiológicos de pacientes nessa faixa etária, com SRAG e com SG, atendidos no Hospital Universitário de Londrina, no Paraná, durante os anos de 2020 e 2021, no contexto da pandemia da COVID-19. Trata-se de um estudo transversal, no qual foram incluídos 977 pacientes, com idade de 1 dia até 18 anos e 11 meses. A análise estatística foi realizada com o software XLStat Versão 19.4 Constatou-se maior incidência de SARS-CoV2 nos meses de julho a setembro de 2020 e no período de maio a julho de 2021, houve um aumento expressivo de internações por SRAG no ano de 2021. A maioria das internações ocorreu em pacientes abaixo dos dois anos de idade e apesar da maioria das crianças com comorbidade ter manifestado SG observamos um aumento de pacientes com comorbidade e SRAG no ano de 2021. Em relação à Covid-19, em 2020 ocorreu predomínio na faixa etária de 15 anos ou mais, enquanto em 2021 os casos aumentaram em todas as faixas etárias, em especial após os 11 anos e em menores de 2 anos. Observou-se maior taxa de internação em crianças menores de 2 anos de idade no ano de 2021 em comparação ao ano de 2020. A tosse foi o sintoma mais frequente, seguido de dispneia, febre e queda de saturação. Em 2020, 46% dos pacientes necessitaram de suporte ventilatório ao passo que, no ano de 2021, o uso de suporte ventilatório representou 13,39% da amostra. Em contrapartida, em 2021, foi observado em crianças menores de dois anos maior frequência de dispneia, queda de saturação e obstrução nasal, já adolescentes de 15 anos ou mais, apresentaram maior frequência de dor de garganta, fadiga, mialgia, anosmia, ageusia e diarreia. A letalidade foi baixa nos dois anos estudados, todavia foram detectados quatro casos de Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica no período e um deles foi a óbito. Quanto aos exames laboratoriais, desidrogenase láctica foi um excelente marcador de gravidade, elevada em todos os pacientes com SRAG, exceto em dois adolescentes. No ano de 2020, os pacientes que tiveram SRAG, apresentaram maior frequência de anemia, elevação dos exames D-Dímero, creatinofosfoquinase fração MB e lactato. Em crianças de 2 a 5 anos houve maior frequência de elevação de proteína C reativa (PCR), fibrinogênio, transaminase oxalacética e transaminase pirúvica. Adolescentes a partir de 15 anos de idade apresentaram maior frequência de elevação de creatinina. Em 2021, houve maior elevação de PCR e da creatinina a partir de 15 anos de idade. Concluímos que a incidência de pacientes com SG e SRAG por Covid-19 foi mais elevada do que por outros vírus detectados: Vírus Sincicial Respiratório, Rinovírus e Adenovírus. A Covid-19 se manifestou com sintomas leves nessa população pediátrica, porém foi uma causa importante de internação em UTI. Detectamos diferenças nos sintomas e exames laboratoriais no decorrer do período analisado, portanto, as manifestações clínicas e laboratoriais pela Covid-19 podem mudar no decorrer dos anos e estudos epidemiológicos são fundamentais para continuar monitorando essas alterações.
Impacto da exposição aos agrotóxicos e da presença do polimorfismo rs7438135 no gene UGT2B7 na geração de estresse oxidativo e perfil clinicopatológico em mulheres com câncer de mama
(2023-07-25) Vacario, Beatriz Geovana Leite; Panis, Carolina; Amarante, Marla Karine; Guembarovski, Roberta Losi; Serpeloni, Juliana Mara
Em regiões com economia baseada na agricultura familiar e no agronegócio, as mulheres estão expostas ocupacionalmente aos agrotóxicos. Estas substâncias representam um fator de risco importante para o desenvolvimento de doenças a longo prazo, como o câncer de mama (CM). A detoxificação dos agrotóxicos inclui a família UDP-glucuronosiltransferase (UGTs), composta por um grupo de enzimas que participam das reações de fase II de eliminação. O polimorfismo rs7838135 (G>A) no gene UGT2B7 aumenta seu potencial de glicuronidação e atua como um sistema antioxidante devido à neutralização de metabólitos do estresse oxidativo. No presente estudo investigamos o impacto da exposição ocupacional a agrotóxicos na geração do estresse oxidativo sistêmico em 228 mulheres com de câncer de mama, agrupadas em expostas ocupacionalmente á agrotóxicos (134) e não expostas á agrotóxicos (94), portadoras ou não do polimorfismo no gene UGT2B7. O DNA foi extraído de sangue periférico heparinizado e a reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real investigou a presença do polimorfismo rs7838135. Marcadores de estresse oxidativo (níveis de peroxidação lipídica, capacidade antioxidante total – TRAP e metabólitos de óxido nítrico – NOx) foram mensuradas no plasma. Os dados clínico-patológicos como quimioresistência, recorrência, grau histopatológico, receptor de estrógeno, progesterona, fator de epidermal de crescimento (HER), alto índice de proliferação (Ki67), subtipo molecular, tamanho do tumor, agressividade do subtipo, êmbolos angliolinfáticos, idade ao diagnóstico, índice massa corporal, menopausa, estratificação de risco e a invasão de linfonodos, foram obtidos dos prontuários. A exposição aos agrotóxicos induziu aumento significativo da lipoperoxidação sistêmica na presença do polimorfismo rs7838135 para diversas condições clinicopatológicas, incluindo tumores com alto ki67 (p=0,0337) e com alta agressividade (subtipos triplo-negativo e Luminal B) (p=0,0130). Os níveis de NOx foram aumentados em pacientes portadoras de tumores com elevado ki67(p=0,0300), receptores de progesterona positivos (p=0,0360), tumores de baixo grau (p=0,0519), subtipos triplo-negativos/Luminal B (0,0268) e pacientes estratificadas com baixo risco de óbito e recidiva (p=0,0233). A TRAP foi depletada em pacientes jovens na menopausa (p=0,0431) e naquelas com tumores triplo-negativos/Luminal B (p=0,0246), bem como naquelas estratificados como de baixo risco de óbito e recorrência (p=0,0384). Esses achados mostraram que mesmo a presença do polimorfismo rs7838135 no gene UGT2B, que eleva a atividade enzimática e em tese levaria a uma eliminação ideal dos agrotóxicos, não foi capaz de proteger da geração de estresse oxidativo induzida por essa substância em pacientes com CM. Indicando um possível, porém não elucidado papel dos agrotóxicos na supressão da atividade das enzimas UGT2B7 que poderia potencialmente contribuir para a progressão do tumor, devido aos danos ocasionados pelo estresse oxidativo ao DNA.
Estudo de correlação entre variantes genômicas e marcadores anátomo-clínicos de biópsias de pacientes portadores de câncer de pulmão no estado do Paraná
(2023-09-29) Lopes, Gabriel Lima; Panis, Carolina; Amarante, Marla Karine; Castro Junior, Gilberto de
Introdução: O câncer de pulmão não-pequenas células (NSCLC) é a principal causa de morte oncológica no mundo. Novos mecanismos de carcinogênese e progressão tumoral vêm sendo estudados e, portanto, novas vias de transdução de sinal, metastatização e de escape imune surgem como futuros horizontes clínicos no NSCLC não-escamoso. O tratamento de 1ª linha se limitava à quimioterapia com platina, atingindo-se medianas de sobrevida de 9 meses, porém após a incorporação das terapias-alvo e da imunoterapia foi possível ultrapassar-se a fronteira dos 30 meses. O banco genômico em NSCLC cresce de forma exponencial, e é de grande interesse que subpopulações sejam reconhecidas nacional e regionalmente. Objetivos: O objetivo desse estudo é caracterizar o perfil genômico e clínico-patológico de pacientes com NSCLC das cidades de Londrina e Curitiba e compará-lo ao do The Cancer Genome Atlas (TCGA), além de: traçar o perfil clínico-patológico da amostra; realizar estudo de bioinformática dos processos celulares e interações com as mutações; determinar o perfil genômico e compará-lo ao TCGA, e investigar sua correlação com as variantes genômicas regionais; identificar uma assinatura mutacional regional. Metodologia: Este é um estudo longitudinal retrospectivo observacional com 133 pacientes. Para a análise funcional das informações anátomo-clínicas e genômicas foi realizado um estudo in sílico (software Funrich 3.1). Para a obtenção do perfil mutacional genômico mundial utilizou-se os dados do TCGA e para a comparação do perfil dos genes utilizou-se o Two-way ANOVA. A caracterização da amostra foi feita pelo teste Qui-Quadrado e, para a correlação dos genes nos estadios iniciais da doença, utilizou-se o teste de Correlação de Pearson e a análise de correspondência. Assumiu-se um nível de significância estatístico de 5%. Resultados: A maioria dos pacientes tem entre 60 e 79 anos, são mulheres, tabagistas leves e não-obesos. A carga mutacional entre as populações não é diferente, entretanto o perfil de expressão gênica é distinto. Observou-se aumento na frequência de EGFR, MYC, RAD21, PDL-1, MTAP, DNMT3A, CDK4, MDM2, NFKBIA, AURKA e CCND1 (pelo menos 2 vezes), com destaque para TP53, EGFR e PDL-1. Esses genes têm funções de comunicação celular e transdução de sinais (proliferação celular), com foco nas vias do IFN-?, MET, PDGFRa, IGF-1, ErbB e EWSR1. Houve interconexões entre os genes ERBB4, SMAD4, STK11, EGFR, BRAF, ALK, BRCA1, BRCA2 e MYC no Interactoma, com o TP53 evidenciado como elemento central, porém sem associação com a variante patogênica R337H. Houve grande número de amostras com status microssatélite e TMB indeterminados. Constatou-se 14% hiper-expressores, 33% hipo-expressores e 52% não-expressores de PDL-1, o que foi estatisticamente distinto quando comparado à literatura mundial e semelhante à maior evidência nacional. Conclusões: O perfil e a frequência da expressão gênica e as interconexões moleculares da amostra é diferente do observado em outros estudos populacionais. Identificou-se uma possível assinatura genômica regional, com enriquecimento de mutações em EGFR e TP53, menor prevalência das alterações em KRAS-NRAS, STK11-KEAP1 e MTAP-CDKN2A/B e maior imunoexpressão de PDL-1. Comprovamos, assim, a importância da individualização diagnóstica e da personalização terapêutica em NSCLC, considerável agora também no âmbito de estudos clínicos regionais.
Polimorfimos genéticos e níveis plasmáticos do fator transformador de crescimento Beta 1: associação com marcadores prognósticos na leucemia linfóide aguda
(2023-11-29) Rodrigues, Francieli de Fatima Ferreira; Amarante, Marla Karine; Pereira, Nathália de Sousa; Oliveira, Carlos Eduardo Coral de; Hirata, Bruna Karina Banin
A leucemia linfoide aguda (LLA) é uma neoplasia hematológica que apresenta maior incidência na população pediátrica, sendo caracterizada pela anormalidade das células precursoras das linhagens B, T e NK. Esta doença é considerada de causa desconhecida, porém acredita-se que este processo seja resultado de uma interação entre fatores ambientais e genéticos. Por este motivo, vários estudos de análise genética, como polimorfismos de base única são realizados para tentar encontrar marcadores associados à suscetibilidade à doença ou ao prognóstico. Sabe-se que citocinas estão envolvidas em diversas neoplasias, dentre elas o fator transformador de crescimento beta 1 (TGF-B1) que exerce funções biológicas diversas e pode contribuir para a invasão e a metástase, podendo alterar o microambiente tumoral. Dessa maneira neste estudo foram estudados dois polimorfismos no gene TGFB1 rs1800468 (G-800A) e rs1800469 (C-509T) em 39 amostras de medula óssea de pacientes infantojuvenis com LLA, bem como mensurado os níveis de TGF-B1 e suas correlações com os dados clinico patológicos. Estes pacientes foram atendidos no Hospital do Câncer de Londrina e a medula óssea foi coletada para extração do DNA genômico. A análise dos polimorfismos foi realizada por método de reação em cadeia da polimerase (PCR) seguida de restrição enzimática (PCR-RFLP), e os níveis plasmáticos de TGF-B1 foram quantificados por ensaio imunoenzimático ligado a enzima (ELISA). Foi observado que a maioria dos pacientes tinha mediana de idade de 7 anos, sendo 33 pacientes com LLA-B e apenas 6 pacientes com LLA-T. Na análise dos polimorfismos encontramos uma maior frequência do genótipo GG para o rs1800468 e genótipo CT para o rs1800469, porém na análise de expressão de proteína, os polimorfismos não estavam associados a mudanças na concentração plasmática de TGF-B1. No entanto, os pacientes com alto risco apresentaram significativamente maior concentração média de TGF-B1 quando comparados com os pacientes baixo risco (p=0,0111). Talvez isto se deva a uma desregularização da via do TGF-B1 que pode estar bloqueada pela própria célula leucêmica; o que pode ser de grande importância na fisiopatologia da leucemia e possível marcador molecular de prognóstico. Portanto, outros estudos devem ser realizados para investigar os níveis plasmáticos de TGF-B1 em pacientes com LLA-T.
Influência da síndrome metabólica sobre o estado inflamatório e redox de pacientes com doença de Crohn
(2024-03-07) Carvalho, Allexya Soares de; Venturini, Danielle; Matsumoto, Andressa Keiko; Lozovoy, Marcell Alysson Batisti
Introdução: Doença de Crohn (DC) apresenta inflamação contínua no trato gastrointestinal. A presença de gordura visceral, comum na DC, aponta para uma possível ligação entre a síndrome metabólica (SM) e a inflamação intestinal, podendo levar ao aumento da inflamação e do estresse oxidativo (EO) em pacientes nessas condições. Objetivos: Analisar e comparar os níveis de biomarcadores bioquímicos, inflamatórios e de EO e nitrosativo entre dois grupos de pacientes com DC portadores ou não de SM. Metodologia: Estudo transversal onde foram selecionados indivíduos com DC e divididos em dois grupos: 1-DC com SM (n=24), 2-DC sem SM (n=63). A atividade clínica da doença foi avaliada pelo Índice de Atividade da DC (CDAI). Foram realizadas análises bioquímicas e inflamatórias (creatinina (CRE), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), proteína c reativa (PCR), ferritina, ferro sérico, albumina (ALB), proteínas totais, insulina, glicemia em jejum (GLI), modelo de avaliação da homeostase da resistência à insulina (HOMA-IR), lipoproteína de baixa densidade (LDL), lipoproteína de alta densidade (HDL), colesterol total (CT), triglicerídeos (TRI), velocidade de hemossedimentação (VHS), leucócitos totais, plaquetas, hemoglobina) e de EO (determinação dos produtos avançados de oxidação proteica (AOPP), metabólitos do óxido nítrico (Nox), capacidade antioxidante total plasmática (TRAP), determinação da superóxido dismutase (SOD), determinação da catalase (CAT), determinação da glutationa peroxidase (Gpx), determinação da atividade da paraoxonase-1 (PON-1) total e grupamento Sulfidrila (SH)), além da avaliação dos dados clínicos. O diagnóstico de SM foi feito por meio da definição do NCEP-ATP III. Resultados: O grupo com DC/SM apresentou diferença significativa e maiores valores em relação à idade, índice de massa corporal (IMC), circunferência abdominal (CA), frequência de hipertensão arterial, DM e dislipidemia, quando comparado com o grupo sem SM. Houve maior uso de medicamentos anti-hipertensivos, hipoglicêmicos e hipolipemiantes no grupo com SM. Níveis de TRI, GLI, insulina e ALT, apresentaram-se aumentados no grupo com DC/SM. O marcador de EO, AOPP mostrou níveis mais elevados no grupo DC/SM. Correlações positivas foram encontradas entre AOPP com CT, TRI, GLI, AST e ALT; Nox com TRI, GLI, AST e ALT; GSH com GLI; SH com ALB; SOD com insulina; PON1 total com hemoglobina e leucócitos. Apresentaram correlações negativas os parâmetros TRAP com plaquetas; SH com leucócitos e VHS; CAT com hemoglobina, TRI, ALT. Conclusão: Foi observado que os pacientes com DC e SM apresentaram alterações em seus marcadores de EO, especialmente os AOPPs que se mostrou ser um marcador sensível quando comparado à influência da SM sobre o estado inflamatório e EO em pacientes com DC.
Análise dos polimorfismos genéticos nos genes CCR5 (rs333) e CXCL12 (rs1801157) : associação com neuroblastoma pediátrico
Vieira Filho, Daniel Rubens Marques; Watanabe, Maria Angelica Ehara [Orientador]; Venturini, Danielle; Amarante, Marla Karine; Guembarovski, Roberta Losi [Coorientadora]
Resumo: O câncer infantojuvenil corresponde à um grupo heterogêneo de doenças, apresentando características próprias tanto em relação à sua histologia quanto ao seu comportamento clínico Dentre estas doenças, estão os tumores embrionários como os retinoblastomas, neuroblastomas e nefroblastomas, os quais são responsáveis por cerca de 2% de todos os tumores que acometem crianças e adolescentes O neuroblastoma (NB) é uma neoplasia infantil heterogênea e particularmente maligna em seus estágios mais avançados, com propensão a formar metástase em órgãos selecionados e para os quais ainda não há tratamento eficaz disponível além da cirurgia Evidências recentes indicam que as quimiocinas e seus receptores apresentam envolvimento como mediadores de neuroinflamação e têm papel neurofisiológico Sabe-se que polimorfismos genéticos podem modificar funcionalmente ou quantitativamente um produto gênico, podendo estar associados ao desenvolvimento de diversos tumores malignos Portanto, os objetivos do presente trabalho foram avaliar a possível influência de polimorfismos nos genes CCR5 e CXCL12 no NB, como possíveis candidatos a marcadores de suscetibilidade e prognóstico para esta doença Foram selecionados 28 pacientes com diagnóstico de NB e 14 crianças livres de neoplasia e as amostras foram genotipadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) para o polimorfismo rs333 do gene CCR5 e por PCR seguida da análise do comprimento do fragmento de restrição para o polimorfismo do gene CXCL12 Em seguida, foi verificado se estas variantes alélicas estavam associadas ao NB Para os portadores do polimorfismo rs333 (delta32) verificou-se diferença significativa (p = ,4) e para CXCL12 houve diferença estatisticamente significante para o genótipo em homozigose 3'A/3'A (p = ,1) e portador do alelo (p = ,1) em relação à suscetibilidade nos pacientes com NB A influência das variantes polimórficas em relação aos parâmetros prognósticos do NB não mostrou resultados significativos para os dois genes: CCR5- comprometimento de linfonodos e / ou metástases (p = ,82), estadiamento tumoral (p = ,86) e óbito (p = ,66); CXCL12 comprometimento de linfonodos e/ou metástase (p = ,23) estadiamento tumoral (p = ,34) e óbito (p = ,14) No presente estudo foi verificado que os polimorfismos CCR5 (rs333) e CXCL12 (rs181157) estão associados à suscetibilidade ao NB e merecem atenção em investigações futuras envolvendo um maior número amostral
Expressão das proteínas Ki67 e p53 : marcadores de agressividade do câncer de mama em pacientes jovens
Bocchi, Mayara; Watanabe, Maria Angelica Ehara [Orientador]; Venturini, Danielle; Ariza, Carolina Batista; Amarante, Marla Karine [Coorientadora]
Resumo: A importância do câncer de mama em muheres jovens emergiu em todo o mundo como um fator prognóstico negativo independente Além disso, em comparação com pacientes com idade mais avançada, as pacientes jovens com câncer de mama apresentam um curso mais agressivo, prognóstico menos favorável e piores taxas de sobrevivência Sendo assim, o conhecimento sobre biomarcadores preditivos para o câncer de mama podem auxiliar no diagnóstico precoce dessas pacientes jovens Este trabalho teve como objetivo verificar o percentual de mulheres jovens acometidas pelo câncer de mama e avaliar a associação entre parâmetros clínicopatológicos e a idade Um total de 233 amostras de tumor primário de pacientes com câncer de mama, atendidas no Hospital de Câncer de Londrina, foram analisadas quanto as seguintes características clínicopatológicas: receptor de estrogênio (RE), receptor de progesterona (PR), receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2), tamanho do tumor, acometimento de linfonodos/metástases, grau histológico (GH), índice de proliferação celular (Ki67) e proteína p53 em relação a idade Foi verificado que 44 pacientes (18,9%) apresentaram idade inferior a 44 anos e foi encontrado associação entre a idade jovem e a positividade para o marcador p53 (p = ,17) A idade jovem (<44 anos) também foi relacionada com um índice de proliferação celular elevado (Ki67 > 3%) (p = ,14) como também com as características clínicopatológicas mais agressivas do tumor, como negatividade para RE e RP (p = ,1), positividade para superexpressão de HER2 (p = ,1), grau histológico mais elevado (p = ,1), tamanho do tumor > 3, cm (p = ,1) e positividade para p53 (p = ,1) Quanto aos subtipos de câncer de mama, foi encontrado que o Luminal A e o Triplo-negativo estavam associados com o Ki67 = 15% (baixo) e Ki67 > 3% (alto), respectivamente (p < ,1) A crescente incidência do câncer de mama e mortalidade de mulheres jovens latino-americanas merece atenção dos órgãos de Saúde Pública Portanto, torna-se cada vez mais necessário promover estratégias de detecção e diagnóstico precoce do câncer de mama O presente estudo demonstrou que as proteínas Ki67 e p53 podem ser utilizadas como marcadores de agressividade no câncer de mama em pacientes jovens
Estudo epidemiológico e molecular de Escherichia coli patogênica extraintestinal
Daga, Ana Paula; Vespero, Eliana Carolina [Orientador]; Perugini, Marcia Regina Eches; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama
Resumo: Escherichia coli é um habitante comensal comum do trato gastrointestinal e um dos patógenos mais importantes em humanos E coli patogênica extraintestinal (ExPEC) é um descritor para os isolados de E coli capazes de causar doença extraintestinal O objetivo deste estudo foi investigar e comparar os determinantes de virulência da ExPEC de diferentes materiais clínicos Este estudo incluiu 183 amostras de E coli, 48 isolados da corrente sanguínea, 42 de líquido e secreções, 44 isolados produtores de ß- Lactamase de Espectro Estendido (ESBL), de urina de pacientes internados com infecção do trato urinário (ITU) e 49 E coli sensíveis a todos os antimicrobianos, de urina de pacientes ambulatoriais com ITU Utilizando a reação da PCR, investigou-se a presença de fatores de virulência (VFs), ilhas de patogenicidade (PAIs), ESBL do tipo cefotaximase (CTX-M) e a classificação filogenética (A, B1, B2, C, D, E e F) A análise da variabilidade genética de E coli de sangue foi realizada pelo Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR) e os dados epidemiológicos e demográficos foram obtidos através da análise de prontuários e exames laboratoriais O gene fimH foi o mais prevalente em todos os materiais clínicosE coli isoladas de sangue e líquido/secreção apresentaram uma prevalência estatisticamente maior para fimH e papC, assim como, para os genes relacionados à resistência sérica (traT, iss e ompT) em comparação com amostras urinárias Ao contrário da cápsula K5, que foi mais prevalente em amostras urinárias Em geral, E coli de urina de pacientes ambulatoriais apresentaram maior prevalência de FVs quando comparados E coli de urina de pacientes internados A prevalência de PAIs nos diferentes materiais clínicos foi semelhante, com exceção do PAI IV536, que foi maior no sangue do que em E coli urinária de pacientes internados O filogrupo B2 foi o mais prevalente, seguido do filgrupo B1 para sangue e urina de pacientes internados, e E para líquidos secreção e urina de pacientes ambulatoriais O filogrupo A foi estatisticamente mais prevalente em amostras de E coli urinárias Os isolados B2 apresentaram a maior prevalência de FVs e PAIs Oito (16,7%) dos isolados de E coli de sangue foram caracterizados como produtores de ESBL do tipo CTX-M, sendo que, CTX-M-15 foi a mais prevalente A análise da variabilidade genética identificou duas linhagens clonais e vários isolados de sangue não relacionados Dos pacientes com infecção da corrente sanguínea por E coli, 5% foram secundárias à infecção do trato urinário e 12,5% foram secundárias a doenças abdominais, sendo que a mortalidade associada à bacteremia por E coli foi de 333% Em conclusão, ExPEC possui uma variedade de determinantes de virulência envolvidos no estabelecimento da infecção, e comumente apresenta resistência a múltiplos fármacos, implicando na gravidade da infecção O conhecimento de fatores determinantes, como a patogenicidade e os dados epidemiológicos do processo infeccioso, são informações importantes para o desenvolvimento de estratégias de prevenção e no manejo e tratamento de pacientes com infecção extraintestinal por E coli
Avaliação da resposta imune T helper (Th) 1, Th2, Th17 e T Regulatória (Treg) em pacientes com Psoríase
Alcantara, Camila Cataldi de; Simão, Andréa Name Colado [Orientador]; Reiche, Edna Maria Vissoci; Oliveira, Karen Brajão de
Resumo: INTRODUÇÃO: A psoríase é uma doença mediada pelo sistema imunológico, poligênica e caracterizada por uma reação inflamação crônica A pele é o principal órgão acometido; no entanto, unhas e articulações também podem ser afetadas por lesões avermelhadas, secas e escamosas A etiologia da psoríase é desconhecida e acredita-se que fatores genéticos, ambientais e psicológicos podem estar envolvidos no desenvolvimento e exacerbação da doença O diagnóstico da psoríase é clínico pelo reconhecimento das lesões e não há, atualmente, biomarcadores laboratoriais que possam auxiliar no diagnóstico da doença O sistema imune cutâneo é caracterizado pelo predomínio de citocinas anti-inflamatórias como a Interleucina (IL) 1 e Fator de Transformação do Crescimento - beta (TGF-ß) que ajudam a manter a homeostase do tecido cutâneo No entanto, pacientes com psoríase tem alteração da resposta imune com predomínio de macrófago do tipo 1 (M1), que apresentam fenótipo pró-inflamatório e citocinas da resposta imune T helper (Th) 1 e Th17 A adiponectina é uma adipocina com atividade anti-inflamatória que exerce importante função no sistema imunológico e no metabolismo celular e que tem sido pouco estudada em pacientes com psoríase OBJETIVO: O objetivo principal desse estudo foi avaliar os perfis de citocinas pró- e anti-inflamatório e determinar modelos preditores que auxiliem no diagnóstico de psoríase SUJEITOS E MÉTODOS: Este é um estudo caso-controle que incluiu 146 participantes de ambos os sexos, com idade entre 18 e 7 anos, sendo 7 pacientes com diagnóstico de psoríase atendidos no Ambulatório de Dermatologia do Ambulatório de Especialidade do Hospital Universitário de Londrina e 76 indivíduos saudáveis (grupo controle) selecionados entre doadores de sangue do Hemocentro Regional de Londrina As citocinas pró-inflamatórias (IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IFN-? e Fator de Necrose Tumoral – alfa (TNF-a)) e as citocinas anti-inflamatórias (IL-4, IL-1 e TGF-ß) foram quantificadas por imunofluorimetria utilizando a plataforma Luminex® A adiponectina foi quantificada utilizando a técnica de enzima imunoensaio (ELISA) As citocinas foram avaliadas individualmente e em perfis: pró-inflamatórios M1 (IL-1ß+IL-6+TNF-a), Th1 (IL-2+IL-12+IFN-?), Th17 (IL-6+IL-17) e Sistema de Resposta Imune-Inflamatória (IRS) que compreende M1+Th1+Th17 As citocinas anti-inflamatórias formaram os perfis Th2+T regulatória (Treg) (IL-4+IL-1+TGF-ß) e o sistema anti-inflamatório (IL-4+IL-1+TGF-ß+Adiponectina) Para verificar qual é o perfil predominante foram utilizados dois índices: a relação IRS/Th2+Treg e a relação IRS/Anti-inflamatório RESULTADOS: Participaram deste estudo 76 controles saudáveis, sendo 58 mulheres e 18 homens, com idade média de 46 anos e Índice de Massa Corporal (IMC) médio de 25,9 kg/m2 e 7 pacientes com psoríase, sendo 31 mulheres e 39 homens, com idade média de 53 anos e IMC médio de 29,7 kg/m2 O diagnóstico de psoríase foi fortemente associado à alteração dos níveis de citocinas sendo responsável por 82,9% de sua variância, com um impacto particularmente forte na variação nos níveis de IL-2 (46,3%), IL-12 (45,1%), IL-1 (53,2%) e adiponectina (4,1%) Os níveis plasmáticos de TGF-ß e de adiponectina foram significativamente menores, enquanto, todas as demais citocinas (exceto IFN-?), estavam elevadas em pacientes com psoríase quando comparadas aos controles saudáveis Com exceção da relação IRS/Th2+Treg e do Índice Anti-inflamatório, que não demonstraram resultados significativos, todos os demais perfis foram associados ao diagnóstico de psoríase Os resultados também demonstraram que a psoríase exerce forte efeito sobre Th1 (29,3%), IRS (23,8%) e Th2+Treg (23,3%) Além disso, M1, Th1, Th17, Th2+Treg e a relação IRS/Anti-inflamatório estavam significativamente mais elevados em pacientes comparados aos controles A combinação dos perfis IRS e Th2+Treg (associados positivamente) com a adiponectina (associada negativamente) pode predizer a psoríase com 97,1% de sensibilidade e 94,% de especificidade CONCLUSÃO: Desta forma, é possível concluir que a psoríase é caracterizada pelo aumento dos perfis M1, Th1, Th2 e Th17 e pela redução de TGF-ß e adiponectina Além disso, nosso estudo propôs um modelo baseado em níveis elevados de IRS e Th2+Treg juntamente com níveis reduzidos de adiponectina que pode ser utilizado para a validação do diagnóstico de psoríase Assim, observou-se que a adiponectina desempenha um importante papel na modulação da resposta inflamatória crônica na psoríase, podendo vir a ser um novo alvo para o tratamento de psoríase

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