02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecular
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Item Atividade anticâncer do flavonoide braquidina C em células tumorais de próstata DU145 cultivadas em modelo 2D e 3D(2021-11-26) Oliveira, Larissa Cristina Bastos de; Serpeloni, Juliana Mara; Antunes, Lusânia Maria Greggi; Favaron, Phelipe Oliveira; Cólus, Ilce Mara de SyllosO câncer é uma das principais causas de morte em todo o mundo e, juntamente com os desafios apresentados pela quimioresistência, tem despertado o interesse por fitoquímicos que apresentem propriedades quimioterápicas. Fridericia platyphylla (Cham.) L.G. Lohmann é uma espécie vegetal nativa do cerrado brasileiro cujo potencial anticâncer deve-se principalmente ao seu efeito antiproliferativo, anti-inflamatório e citotóxico, demonstrados em estudos anteriores. A braquidina C (BrC), flavonoide isolado a partir das raízes dessa espécie vegetal, foi avaliada nesse estudo quanto aos seus efeitos sobre a viabilidade, proliferação e migração de células de próstata DU145 cultivadas em modelos 2D e 3D in vitro. O efeito da BrC na viabilidade celular foi avaliado pelos ensaios de redução de resazurina e liberação de lactato desidrogenase (LDH) em cultura de células 2D (0,24-30,72 µM) e 3D (5-60 µM). Após 24 h de tratamento, a BrC reduziu a viabilidade das células DU145 em ambos os modelos com valores de IC50 iguais a 47,31 (2D) e 229,8 µM (3D). Em EMTs de próstata esse efeito mostrou-se tempo-dependente com valores de IC50 iguais a 229,8, 210,5, 116,1 e 65,02 µM após, respectivamente, 24, 48, 72 e 96 h de tratamento. Após 72 h de tratamento, observou-se a redução da viabilidade celular com a BrC nas concentrações de 30,72 µM (2D) e 60 µM (3D) no ensaio do LDH. No modelo bidimensional, a BrC não alterou a proliferação das células DU145. Na avaliação dos esferoides, após 11 dias de tratamento, a BrC (5 - 60 µM) interferiu no crescimento, morfologia, integridade e volume dos EMTs. A redução da viabilidade celular induzida pela BrC parece não estar relacionada à indução de espécies reativas, como demonstrado por meio da utilização da sonda CM-H2DCFDA. A BrC reduziu a migração e a invasão das células DU145 no modelo 2D (6,00 µM) e a migração celular no modelo 3D (5-60 µM). Os mecanismos pelos quais a BrC reduziu a viabilidade celular foram avaliados por meio da expressão de genes (RT-qPCR) e proteínas (western blotting). Na avaliação da expressão gênica após 48 h de tratamento, BrC (50 µM) regulou positivamente os genes CASP3 e TNF-a e negativamente o gene BIRC5, que codifica a proteína anti-apoptótica survivina. O gene Nkx3.1, um gene supressor tumoral relacionado com as vias de proliferação celular, foi regulado positivamente pela BrC (5 e 50 µM). Na avaliação da expressão proteica, BrC (60 µM) aumentou a expressão de CASP7 e BAX enquanto reduziu a expressão de TNF-a. A BrC (5-60 µM) interferiu nos processos migratórios das células DU145 em EMTs após 48 h de tratamento, diminuindo a área de migração em relação ao grupo controle. A redução na capacidade migratória parece estar relacionada com a modulação negativa dos genes MMP9, MMP11 e ITGAM e regulação positiva de CDH1. Os resultados obtidos no presente estudo demonstram que a BrC afeta a viabilidade, proliferação e migração de células DU145 em modelos 2D e 3D, contribuindo para a busca de alternativas terapêuticas contra o câncer de próstata metastático.Item Estrutura e diversidade genética de Hypostomus ancistroides (Siluriformes: Loricariidae) em ribeirões da bacia do alto rio ParanáSilva, Caroline Apolinário da; Sofia, Silvia Helena [Orientador]; Prioli, Alberto José; Ruas, PauloResumo: Drenagens de pequeno porte, tais como ribeirões, abrigam grande parte das espécies de peixes de água doce da região Neotropical, fornecendo condições particulares quando comparadas com drenagens de maior porte Ao mesmo tempo, características intrínsecas também fazem com que ribeirões sejam ambientalmente muito sensíveis Deste modo, a condução de estudos nestes ambientes tem sido algo essencial dentro do atual cenário de degradação de ecossistemas de água doce Enquanto vários estudos têm buscado compreender a composição ictiofaunística destas drenagens, ainda são poucos os estudos voltados à investigação da diversidade genética e estrutura das populações de espécies de peixes presentes em ribeirões Neotropicais, a despeito da extrema importância do conhecimento genético para a compreensão de aspectos evolutivos e para propostas de conservação Assim, o presente estudo investigou, com base em marcadores microssatélites e haplótipos mitocondriais (D-Loop), os níveis de variação genética e padrões de diferenciação populacional do peixe Hypostomus ancistroides, popularmente conhecido como cascudo, de seis ribeirões pertencentes à bacia do rio Laranjinha, no norte do Paraná Em cada ribeirão foram obtidas amostras em três seções (alto, médio e baixo) ao longo do ribeirão Dados genéticos de um outro estudo, que amostrou três pontos (alto, médio e baixo) da calha principal do rio Laranjinha também foram incluídas nas análises No total, 62 amostras de H ancistroides foram analisadas Os resultados revelaram uma estruturação genética significativa das amostras, tanto dentro, quanto entre os ribeirões Dos 23 haplótipos obtidos 11 foram encontrados somente em ribeirões, estando ausentes nas amostras coletadas no rio Laranjinha; de modo similar, 36 alelos microssatélites foram exclusivos para as amostras dos ribeirões Os níveis de diversidade genética foram similares a outros trabalhos para a mesma espécie (D-loop: ,652, microssatélites: ,644) De modo geral, os dados mostraram que a diversidade genética de H ancistroides é heterogeneamente distribuída ao longo da bacia do rio Laranjinha, existindo parcelas particulares da diversidade em cada um de seus pequenos afluentes e também indicam um padrão de estruturação genética em pequena escala para os ribeirões estudados Assim, além de contribuir para um melhor entendimento das influências da biologia de H ancistroides sobre seus aspectos evolutivos e distribuição na bacia, os resultados do presente estudo também apontam para o fato de que a preservação de ribeirões é essencial para a preservação de toda a diversidade genética de uma espécie amplamente distribuídaItem Caracterização molecular e fisiológica em genótipos de soja com a introgressão da construção 35S-AtAREB1Caranhato, André Luís Hartmann; Nepomuceno, Alexandre Lima [Orientador]; Mertz-Henning, Liliane Marcia; Foloni, José Salvador Simoneti; Melo, Carlos Lásaro Pereira de [Coorientador]Resumo: A soja (Glycine max (L) Merrill) é considerada uma importante commoditie em todo o mundo, sendo o Brasil, o segundo maior produtor mundial, com produção total estimada em 113 milhões de toneladas para a safra 217/18 A seca, é considerada o principal estresse abiótico que atinge as lavouras em todo o mundo A característica de tolerância à seca é controlada por diversos genes e os fatores de transcrição, são genes com a capacidade de controlar a expressão de diversos genes estresse-induzidos O fator de transcrição AREB1 (Aba Responsive Element Bingind- elemento de ligação de resposta ao ABA) está envolvido na via de sinalização ABA (ácido abscísico) e diversos trabalhos já relacionaram maior tolerância ao déficit hídrico em plantas geneticamente modificas (GM) com esta construção Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as respostas moleculares e fisiológicas em novos genótipos de soja com a introgressão da construção 35S-AtAREB1, submetidos ao déficit hídrico Os resultados indicaram que o genótipo 1Ea2939 e suas respectivas linhagens 16-T5 e 16-T1, apresentaram melhor performance nos experimentos e nas análises realizadas Ao final do período de cinco dia de déficit hídrico, as linhagens GM apresentaram maiores níveis de condutância estomática, transpiração e taxa fotossintética, além de uma porcentagem maior de água disponível no substrato Juntamente com análises moleculares, estes resultados sugerem que os genótipos GM possam ter ativado mecanismos para o evitamento da seca, a partir da manutenção das trocas gasosas, de forma a permitir que a planta perca uma quantidade menor de água para o ambiente ao longo do tempo e como consequência, que ocorra uma maior conservação da água disponível no substratoItem Análise proteômica diferencial de Rhizobium tropici CIAT899 em resposta ao aminoácido L-triptofanoYokoyama, Cátia Lie; Rodrigues, Elisete Pains [Orientador]; Oliveira, André Luiz Martinez de; Lopes, Fabrício MartinsResumo: Rhizobium tropici CIAT899 é uma bactéria simbiótica utilizada como inoculante comercial para o cultivo de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L) A simbiose entre rizóbios e plantas leguminosas resulta na formação de nódulos radiculares, órgãos especializados na troca de nutrientes entre as bactérias e a raiz aprimorando os benefícios da fixação biológica de nitrogênio (FBN) O estabelecimento da simbiose e formação dos nódulos é um processo complexo e regulado por ambos os parceiros, sendo o fitormônio auxina (ácido indol-3-acético; AIA), um dos fatores envolvidos na regulação do processo de biogênese do nódulo A ação do AIA já foi relatado atuação durante os estágios iniciais do processo de infecção, como o encurvamento do pêlo radicular, desenvolvimento do cordão de infecção, iniciação e diferenciação de nódulos Este fitormônio também é produzido por bactérias, inclusive por R tropici CIAT899, porém as vias de biossíntese e os fatores de regulação são ainda pouco estudadas Entre os fatores conhecidos que regulam a produção de AIA em bactérias está o precursor das vias de biossíntese, o aminoácido L-triptofano (TRP) Além do TRP, a produção de auxinas também é regulada pela disponibilidade de amônia (NH4+), um fator que interfere tanto na biossíntese de auxinas quanto no estabelecimento da simbiose e nodulação de leguminosas Devido à importância de AIA no estabelecimento de relações simbióticas entre rizóbios e leguminosas, o presente trabalho teve como objetivo analisar a produção de auxinas de CIAT899 na presença de TRP e amônia e comparar o proteoma de CIAT899 na presença e na ausência de TRP, visando identificar proteínas que sejam reguladas por este aminoácido Para os ensaios experimentais, CIAT899 foi cultivada em meio YM em quatro condições biológicas (sem TRP; com TRP; com NH4+; com TRP e NH4+), com três repetições A produção de auxinas foi avalizada por colorimetria com o reagente de Salkowski e o crescimento pela absorbância (DO6nm) Para análise protômica, as proteínas foram extraídas e digeridas com tripsina e os peptídeos obtidos foram analisados por cromatografia líquida em nano escala, acoplado à espectrometria de massa (nanoLC-MS/MS) As proteínas foram identificadas pela comparação do proteoma contra o genoma de CIAT899, sendo as proteínas diferencialmente expressas identificadas pela análise de T-fold no programa PatternLab As análises funcionais foram feitas com o auxílio das ferramentas Uniprot, KEGG Mapper e PATRIC Os dados obtidos revelaram que a produção de auxinas em CIAT899 é estimulada pelo L-triptofano, produzindo 28,56 µg/mL em 24 horas de cultivo enquanto a presença de amônia tem efeito negativo com reduções de até 61,2% A amônia é o principal produto da FBN e age como o principal regulador nas etapas finais de simbiose e nas reações envolvidas com a FBN, reforçando a importância da elucidação do papel do AIA nestes processos Na análise diferencial, entre YM versus YM+TRP, foram identificadas 617 proteínas totais, no qual 164 foram exclusivamente expressas na ausência de TRP, e 112 na presença de TRP Na análise utilizando KEGG permitiu mapear mais de 9 vias metabólicas, onde a via com maior número de identificações foi relacionado à biossíntese de metabólitos secundários Na análise utilizando o GO foram identificadas principalmente proteínas relacionadas à atividade catalítica, biossíntese de compostos celulares, e processos metabólicos e celulares A análise no TFold permitiu identificar 1 proteínas diferencialmente expressas que satisfazem ambos testes estatísticos (fold-change e p-value), 28 proteínas atenderam apenas o corte de Fold change e 8 proteínas que são consideradas diferencialmente expressas, mas apresentaram baixa abundância Entre as proteínas diferencialmente expressas, destacam-se a fosfatase ácida, lactato desidrogenase, proteína periplásmica de ligação oligopeptidica, transportador ABC, proteína do locus B associada com invasão, succinoglucana ExoF, proteína da via de dissimilação da Fucose e três proteínas ribossomais 5S Os principais processos que foram alterados em resposta ao aminoácido triptofano foram: metabolismo de sideróforo, biossíntese de polissacarídeos de superfície celular, atividade de quimiotaxia e motilidade e biossíntese e metabolismo de aminoácidos aromáticos por CIAT899 Estes resultados evidenciam que a biossíntese de AIA ocorre por vias metabólicas dependentes de TRP que são reguladas pela disponibilidade de amôniaItem Análise dialélica entre linhagens S6 de milho superdoce em diferentes ambientes no norte do ParanáSilva, Maikon Guerith Baptistella da; Ferreira, Josué Maldonado [Orientador]; Teixeira, Flavia França; Garbuglio, Deoclécio DomingosResumo: O milho superdoce, devido ao acúmulo de açúcar nos grãos, apresenta um sabor adocicado, além de possuir alto valor nutricional A sua produção é destinada principalmente para as indústrias de conservas, entretanto, também pode ser utilizada para o consumo in natura na forma de milho verde Em programas de melhoramento de milho superdoce, além de obter as linhagens com elevado desempenho individuais para produção de sementes, também é necessário identificar combinações destas que permitam a síntese de híbridos de alta produtividade Os objetivos foram: determinar o potencial de dez linhagens S6 de milho superdoce, cruzamentos em esquema dialélico completo, por meio das estimativas de capacidade geral (CGC) e capacidade especifica de combinação (CEC); identificar as combinações híbridas com melhor potencial para exploração agronômico; identificar os híbridos com resistência às principais doenças foliares e determinar o tipo de ação gênica predominante de diferentes características importantes para milho superdoce Durante a safra 215/216, as 45 combinações híbridas, juntamente com as testemunhas Tropical Plus, Balu 1 e Balu 34, foram avaliadas em quatro ambientes, utilizando delineamento em blocos ao acaso com três repetições As características avaliadas foram: produtividade de espigas com e sem palha; diâmetro e comprimento de espigas; florescimento; altura de plantas e de espigas e notas de severidade a Mancha Branca, Ferrugem Polissora, Mancha de Turcicum e Ferrugem Branca As combinações H34, H35, H57, H59, H51, H79 e H71 apresentaram os melhores desempenhos, para produtividade de espigas com palha e sem palha para os diferentes ambientes, sendo que a primeira combinação se destacou também para diâmetro de espigas e a última combinação para precocidade e resistência para Ferrugem Branca Dentre estes híbridos com melhores produtividades, todos apresentaram notas de severidade para Mancha Branca, Ferrugem Polissora e Mancha de Turcicum na faixa de resistente a moderadamente resistente, exceto os híbridos H59 e H35 para Mancha de Turcicum, sendo classificados como moderadamente suscetíveis As linhagens L5 e L7 apresentaram as melhores estimativas de CGC para produtividade de espigas com palha e sem palha Quanto à redução da severidade das doenças, as linhagens L8, L1, L7 e L3 apresentaram as melhores estimativas de CGC para Mancha Branca, Ferrugem Polissora, Mancha de Turcicum e Ferrugem Branca, respectivamente As combinações H11, H34, H59, H79, e H71 apresentaram as maiores estimativas de CEC para produtividade de espigas com palha em todos os ambientes Houve correlação negativa entre produtividade de espigas sem palha e notas de severidade à Ferrugem Polissora para a segunda época do experimento em Londrina, e correlações positivas entre produtividade de espigas com palha e diâmetro e comprimento de espigas, e entre altura de planta e notas de severidade a Mancha de Turcicum Os efeitos não aditivos foram predominantes para as produtividades e comprimento de espigas, enquanto os efeitos aditivos foram mais importantes para diâmetro, altura da espiga, dias para o florescimento e para à resistência Mancha Branca, Ferrugem Polissora, Mancha de Turcicum e Ferrugem BrancaItem Diversidade e estrutura genética de populações de Portulaca hatschbachii D. Legrand : uma espécie endêmica dos afloramentos rochosos de basalto do estado do ParanáFeliciano, Daniele Cassiano; Ruas, Claudete de Fátima [Orientador]; Ribeiro, José Eduardo Lahoz da Silva; Godoy, Sara Mataroli deResumo: O gênero Portulaca abrange um grupo de plantas popularmente conhecidas como “onze horas”, caracterizadas como ervas suculentas perenes ou anuais Algumas espécies possuem propriedades terapêuticas e relevante importância em áreas agrícolas e paisagismo Portulaca hatschbachii é uma espécie ameaçada de extinção, que não dispõe de dados genéticos descritos na literatura A espécie se distribui pelos Campos de Altitude associados à Mata Atlântica, tendo ocorrência restrita aos afloramentos rochosos de basalto do Paraná Esses ambientes foram erroneamente considerados como sendo detentores de pouca riqueza de espécies, o que colaborou para que esse habitat extremamente rico em biodiversidade fosse cruelmente negligenciado e desprotegido Desse modo, o presente estudo teve como objetivo acessar a diversidade genética de P hatschbachii por meio de marcadores AFLP, rps16 e ITS Informações importantes para estimativa de parâmetros de diversidade e estrutura genética das populações de P hatschbachii, puderam ser estimadas pelos marcadores AFLP Os resultados evidenciaram baixos níveis de variação intrapopulacional, fluxo gênico limitado e níveis elevados de estruturação genética A análise de agrupamento Bayesiano (BAPS) revelou a existência de oito clusters genéticos para P hatschbachii A Neighbor-Net construída também corroborou os mesmos clusters obtidos pelo BAPS A diversidade gênica das populações de P hatschbachii foi, de maneira geral, baixa, o que pode ter relação com a biologia reprodutiva da espécie e ao padrão de distribuição endêmica e restrita à afloramentos rochosos O Teste de Mantel, bem como as análises de agrupamento Bayesiano e Neighbor-Net, mostraram que as populações se encontram isoladas pela distância O escaneamento realizado pelo Bayescan, verificou a presença de locos sob seleção diversificadora, a qual pode ser uma importante força a moldar os padrões de distribuição da variação genética na espécieItem Análise genética e determinação dos haplótipos de Chelonia mydas (Linnaeus, 1758) (Testudines: Cheloniidae) resgatados no litoral do ParanáSavada, Camila Satie; Almeida, Fernanda Simões de [Orientador]; Miranda, Thaís Pires; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro; Domit, Camila [Coorientadora]Resumo: Atualmente, são descritas sete espécies de tartarugas marinhas com distribuição circumglobal, que migram grandes distâncias entre as regiões de alimentação e nidificação Chelonia mydas, também conhecida como tartaruga verde, é uma das cinco espécies que ocorrem no litoral do Brasil São animais herbívoros que possuem regiões de desova e alimentação no litoral, sendo altamente influenciados pela ação antrópica, como a perda de habitat, poluição e captura acidental em redes de pesca A região do litoral do estado do Paraná é identificada como uma das regiões de alimentação para essa espécie no Atlântico Sul Esse trabalho tem como objetivo identificar a diversidade genética de C mydas, definindo os haplótipos que ocorrem na região e comparando com outras regiões de alimentação descritas para o oceano Atlântico As amostras foram coletadas entre os anos de 27 a 214 Foram analisadas 285 amostras, com média de CCC (Comprimento Curvilíneo da Carapaça) de 3,65 cm Através da amplificação de um fragmento da região controle do DNAmt foram identificados doze haplótipos, sendo o haplótipo CM-A8 o mais frequente (195 indivíduos) Dez haplótipos ocorreram com frequência menor que 5%, incluindo os haplótipos CM-A23 e CM-A32 observados uma única vez Resultados da AMOVA (Análise de Variância Molecular) mostram maior diferença entre os dois grupos principais das populações (Atlântico Norte e Atlântico Sul) quando comparados com as distâncias entre as populações dentro dos grupos Além disso, considerando os valores de FST e FST o Paraná possui valores significativos para a maioria das comparações, incluindo todas as áreas da região do Atlântico Norte A frequência dos haplótipo e os valores de divergência genética destacam as peculiaridades do grupo de indivíduos que formam o estoque misto presente no litoral do Paraná e que sofrem a influência das correntes oceânicas e mudanças climáticas Com isso, informações obtidas referentes a utilização da área de alimentação do litoral do Paraná pelas tartarugas verdes, confirmam a importância da preservação desse local para manter a diversidade genética das populações e possibilitar a utilização dessas informações para a elaboração de futuros planos de manejoItem Contribuição aos estudos citogenéticos em peixes das famílias Heptapteridae e Pimelodidae (Siluriformes) do rio Solimões, bacia AmazônicaTerra, Mariana Costa; Dias, Ana Lúcia [Orientador]; Fenocchio, Alberto Sérgio; Rosa, Renata da; Baldissera, Joana Neres da Cruz [Coorientadora]Resumo: Dentre as famílias pertencentes à ordem Siluriformes, Heptapteridae e Pimelodidae estão entre as mais diversificadas, sendo amplamente distribuídas na região neotropical Ambas são famílias de grande representatividade considerando o número de espécies, porém, poucas espécies apresentam análises citogenéticas e filogenéticas na região Amazônica, região com grande biodiversidade a ser explorada Neste estudo foram analisadas citogeneticamente uma espécie de Heptapteridae, Pimelodella cristata, e três espécies de Pimelodidae, Calophysus macropterus, Propimelodus eigenmanni e Exallodontus aguanae, coletadas no rio Solimões, bacia Amazônica Pimelodella cristata apresentou 2n=46 e NF=88, com fórmula cariotípica 22m+18sm+2st+4a; C macropterus apresentou 2n=5 e NF=9, com 2m+2sm+1a As outras duas espécies possuem 2n=56, mas diferiram quanto à fórmula cariotípica, sendo que Propimelodus eigenmanni foi caracterizado por 28m+2sm+2st+6a e NF=16 e E aguanae por 36m+12sm+2st+6a e NF=16 As regiões organizadoras de nucléolos (RONs) se mostraram simples para todas as espécies analisadas, correspondentes ao fluorocromo CMA3 e ao sítio de DNAr 18S porém, variações relacionadas à localização deste marcador foram observadas As sequências de DNAr 5S foram encontradas em apenas um par cromossômico nas espécies Propimelodus eigenmanni e Exallosontus aguanae, enquanto Pimelodella cristata e Calophysus macropterus apresentaram quatro sítios deste gene Foi possível observar sintenia entre os genes ribossomais 18S e 5S em E aguanae e C macropterus A heterocromatina mostrou-se distribuída em diferentes regiões, também correspondente às constrições secundárias Os dados aqui apresentados são os primeiros para este grupo de peixes da bacia Amazônica, exceto para C macropterus As espécies analisadas apresentaram algumas características citogenéticas particulares, geralmente não encontradas na literatura Neste estudo foi também realizada uma análise integrada associando dados filogenéticos moleculares com dados cariotípicos, sendo inferidos prováveis caracteres ancestrais (2n e Ag-RON) dentro da família Pimelodidae e do gênero Pimelodella, assim como condições derivadas e seus possíveis processos de mudança ao longo da evolução cariotípica que poderão contribuir para um melhor entendimento da estrutura e da evolução cariotípica nestes grupos de peixes, bem como suas relações filogenéticasItem Caracterização da expressão do gene regulador do ciclo circadiano LHY/CCA1-like em soja sob condições de déficit hídricoBrito, Juliana Baberge Silva de; Nepomuceno, Alexandre Lima [Orientador]; Moraes, Larissa Alexandra Cardoso; Ruas, Eduardo Augusto; Henning, Liliane Marcia Mertz [Coorientadora]Resumo: Os ritmos produzidos pelo relógio circadiano endógeno desempenham um papel crítico ao permitir que as plantas respondam e se adaptem ao meio ambiente Embora exista uma ligação regulatória bem estabelecida entre o relógio circadiano e as respostas ao estresse abiótico em plantas modelo, ainda há muito a ser estudado sobre o sistema circadiano em espécies cultivadas como a soja Sabe-se que estresses abióticos como a seca, alteram o padrão de expressão gênica imposto pelo ciclo circadiano para a melhor adaptação fisiológica ao ambiente externo Em Arabidopsis, os genes reguladores do ciclo circadiano, CCA1 e LHY, sob condições de estresse abiótico apresentam splicing alternativo com retenção de introns Neste contexto, este estudo objetivou caracterizar a expressão do gene LHY/CCA1-like/LCL-4, regulador do oscilador central do relógio circadiano na soja, no genótipo de soja suscetível à seca, BR 16 sob condições de déficit hídrico Assim, a partir de um estudo RNASeq realizado com a cultivar BR 16 sob déficit hídrico, as isoformas expressas do gene LHY/CCA1-like/LCL-4 foram identificadas in sílico Posteriormente, a fim de detectar padrões de retenção de introns desse gene em soja, realizou-se uma PCR convencional a partir de amostras de cDNA e de DNA de quatro diferentes cultivares Adicionalmente esses primers foram também testados em amostras de cDNA de soja sob déficit hídrico, coletadas ao longo do dia Os produtos de amplificação foram sequenciados para confirmação dos resultados obtidos De acordo com os resultados obtidos, pode-se afirmar que diferentes padrões de retenção de intron são observados entre soja e Arabidopsis, tendo em vista que para o gene LHY/CCA1-like/LCL-4 não houve retenção de intron, em nenhuma das condições testadas e para nenhuma das cultivares Apenas um pequeno intron, de aproximadamente 8 pb, apareceu no sequenciamento de DNA de BR 16, o que difere da sequência anotada em banco de dados A expressão circadiana no gene LHY/CCA1-like/LCL-4 em condições de deficit hídrico mostrou picos nos horários inicias do dia, seguido de uma diminuição nos horários vespertinos e noturnos e novamente um pequeno aumento ao amanhecer Os níveis de expressão foram maiores na condição controle, o que sugere que o tratamento de seca pode ter sido mais severo Os dados corroboram a indução de mudanças na expressão do gene LHY/CCA1-like em resposta à seca e sua participação como oscilador central do relógio circadiano em Glycine maxItem Uso do DNA barcode na identificação de ovos de peixes nos tributários da UHE Capivara, bacia do rio ParanapanemaLima, Moema Cristina Costa de; Almeida, Fernanda Simões de [Orientador]; Swarça, Ana Cláudia; Dias, Ana LúciaResumo: A construção de barramentos e a estocagem de água são os principais fatores que promovem a perda da biodiversidade de peixes em ecossistemas aquáticos continentais Os barramentos influenciam a reprodução das espécies de peixes ali presentes, consequentemente interferindo na composição da ictiofauna Portanto, identificar quais espécies completam seu processo de recrutamento em ambientes alterados é imprescindível para traçar medidas de conservação eficazes A análise da composição e abundância de ovos e larvas de peixes traz informações sobre o sucesso de permanência das espécies por meio da reprodução em razão dos distúrbios causados por barramentos Contudo, a classificação de diferentes fases de desenvolvimento é complexa, uma vez que muitas das características que distinguem as espécies ainda não estão desenvolvidas nas fases iniciais dos organismos Desta forma, a ferramenta DNA barcode vem sendo utilizada para identificar e classificar espécies mesmo nas fases iniciais do desenvolvimento O rio Paranapanema possui ao longo de sua calha principal 11 Usinas hidrelétricas, a maior é a UHE Capivara, que possuí como maiores tributários os rios Tibagi e Cinzas Estudos de identificação de ictioplâncton no rio Paranapanema apontam uma grande diversidade para esses tributários Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo identificar, por meio da utilização da técnica de DNA barcode, ovos capturados nos tributários, rio das Cinzas e Tibagi Das 928 sequências analisadas, 99,78% foram indentificadas a nível específico quando confrontadas com o banco de dados Boldsystems® Resultando em 25 espécies, 11 famílias e 2 ordens Das 25 espécies encontradas, mais da metade (6%) possuem hábito de deslocamento reprodutivo, indicando que os afluentes desse reservatório estão sendo utilizados como rota migratória por estas espécies Além disso, foram encontrados ovos de espécies raras para o médio Paranapanema tais como, Pseudoplatystoma corruscans e Piaractus mesopotamicus e ovos da espécie ameaçada de extinção Pseudopimelodus mangurus, indicando estes tributários como área de desova para estas espécies Os resultados deste estudo demonstraram, a importância da identificação de ovos de peixes em ambientes influenciados por reservatórios para reconhecer as áreas de reprodução de espécies nativas e ameaçadas, bem como a importância dos rios Tibagi e Cinzas para a manutenção de espécies nativas do rio ParanapanemaItem Clonagem e caracterização dos genes cry de Bacillus thuringiensis BR58 entomopatogênica para larvas de Hypothenemus hampei, Broca-do-caféAltrão, Carla Suzuki; Vilas-Bôas, Gislayne Fernandes Lemes Trindade [Orientador]; Fazion, Fernanda; Rodrigues, Elisete Pains; Ricietto, Ana Paula Scaramla [Coorientadora]Resumo: A broca-do-café, Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleóptera: Curculinoide: Scolytinae), é considerada uma das pragas de maior risco fitossanitário de importância econômica para a cultura do café A utilização de agentes sintéticos tem sido questionada por apresentarem componentes que podem causar problemas como a contaminação ambiental e humana além de incrementar os custos de produção Uma saída para a diminuição da sua utilização é a substituição por agentes de controle biológico Recentemente, foi demonstrado que o isolado Bacillus thuringiensis BR58, contém os genes cry4A, cry4B, cry1A, cry11A, cry6A e cry6B, apresenta atividade inseticida para H hampei No presente trabalho objetivou-se caracterizar e clonar os genes cry encontrados na linhagem B thuringiensis BR58 Para tanto, as sequências foram submetidas ao alinhamento pela ferramenta BLAST e avaliadas para a confirmação das regiões promotoras e das ORFs pelas ferramentas online BPROM e ORFfinder Em seguida, foram construídos iniciadores específicos contendo os sítios de enzimas de restrição BamHI, HindIII e SalI, dependendo da estratégia de clonagem adotada para cada gene Dos seis genes cry preditos, cinco foram clonados individualmente no vetor pHT315-PxylA e transformados na linhagem acristalífera de B thuringiensis 471 Até o momento, as proteínas cry6A e cry6B foram expressas e tiveram o perfil proteico avaliado em SDS-PAGE Novas etapas de transformação nas linhagens de Escherichia coli e B thuringiensis estão previstas para os demais genes como perspectivas de continuidade deste projetoItem Alterações celulares induzidas por tratamento com selenito de sódio em linhagem HaCaT (não-tumoral)Bonfim, Natanael Endrew Souto Maior Torres; Mantovani, Mário Sérgio [Orientador]Resumo: Diversos estudos indicam o selenito de sódio (uma forma inorgânica do micronutriente selênio) como um composto com potencial para o tratamento do câncer Análises em linhagens de células tumorais têm demonstrado a ação apoptótica, anti-carcinogênica e quimiopreventiva deste composto No entanto, o seu mecanismo de ação em linhagens de células não-tumorais ainda é pouco compreendido, sendo este, um importante requisito para o desenvolvimento de novas drogas As células de linhagem não-tumoral de queratinócitos –HaCat, têm se mostrado um excelente modelo para estudos toxicológicos Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o potencial citotóxico (ensaio do MTT), a genotoxicidade (ensaio do cometa) e o mecanismo de ação (expressão gênica por qRT-PCR) do selenito de sódio em células HaCat, e analisar os seus efeitos na membrana celular, interferência no ciclo celular e indução de apoptose por citometria de fluxo Os resultados demonstram que o tratamento com selenito de sódio por 24h de exposição apresentou citotóxicidade a partir da concentração de 1µM, apresentando alterações no padrão morfológico das células com o aparecimento de grânulos citoplasmáticos, porém não apresentou efeito genotóxico Os dados obtidos por meio da citometria de fluxo revelaram que o selenito de sódio foi indutor de danos na membrana celular, de apoptose, e interfere no ciclo celular Em 12h de tratamento com 1 µM do selenito de sódio, notou-se redução significativa na expressão dos genes mTOR e ATR e um aumento na expressão do gene PUMA em relação ao controle Entretanto, não foi encontrado alteração significativa na expressão das caspases (CASP 3, CASP 7, CASP 8 e CASP 9) bem como dos genes PARP 1, BIRC 5, BECN 1 e c-MYC, o que indica que o selenito de sódio induz a apoptose por mecanismo independente de caspases em células HaCat Além disso, os genes analisados relacionados ao estresse oxidativo (CATB, GPX 1 e SOD 1), e os demais envolvidos no dano e reparo do DNA (ATM, GADD 45A, H2AX e MDM 2) e no ciclo celular (CCNA 1, CCNB 1, CCNB 2, CCND 1, CHK 1, CHK 2, p53 e p21) não apresentaram alteração significativa quando comparados com o controle Através da análise de cinética celular em tempo real notou-se que o selenito de sódio interfere na proliferação de queratinócitos por, pelo menos, 72h após o tratamento Com base nos efeitos relatados, pode-se inferir que o selenito de sódio apresenta um efeito tóxico para as células não-tumorais em concentrações que são semelhantes a testes em linhagens células tumorais, alterando o padrão morfológico e a curva de proliferação celular, modulando o padrão de expressão gênica induzindo a célula à apoptose mediado pelo PUMAItem Estudo citogenético comparativo em quatro espécies de percevejos (Heteroptera : Pentatomidae)Dionisio, Jaqueline Fernanda; Rosa, Renata da [Orientador]; Itoyama, Mary Massumi; Dias, Ana LúciaResumo: Pentatomidae é a quarta maior família da subordem Heteroptera, e as espécies a ela pertencentes são exclusivamente terrestres e geralmente fitófagas, estando agrupados nessa família os principais insetos considerados pragas agrícolas Diante da importância e diversidade desse grupo de insetos é necessária a realização de trabalhos que colaborem para um melhor entendimento da estrutura e comportamento cromossômicos nessa família, contribuindo assim para elucidar os eventos envolvidos na evolução desse grupo de inseto Visando ampliar os conhecimentos citogenéticos nessa família, o presente trabalho realizou um estudo comparativo entre quatro espécies de Pentatomidae (Dichelops melacanthus, Euschistus heros, Loxa viridis e Edessa collaris) identificando o comportamento meiótico, e a localização e características da heterocromatina Com a coloração convencional foi possível identificar que todas as espécies estudadas apresentaram cromossomos holocêntricos e meiose invertida para os cromossomos sexuais, característico da subordem Heteroptera E heros, L viridis e E collaris apresentaram 2n = 14 (12A+XY) e D melacanthus 2n = 12 (1A+XY), sendo que a última espécie apresentou um cromossomo autossomo de tamanho maior em relação aos demais A técnica de banda-C corada com Giemsa revelou em todas as espécies um cromossomo sexual totalmente heterocromático, possivelmente o cromossomo Y, além de diferentes marcações intersticiais e/ou terminais nos autossomos A coloração base-específica com DAPI/CMA3 evidenciou em D melacanthus e L viridis o cromossomo sexual Y DAPI+ e marcações DAPI+ também em autossomos, além de uma marcação terminal CMA3+ em L viridis Já em E heros e E collaris os cromossomos sexuais apresentaram-se associados e DAPI+/CMA3+ em fases meióticas iniciais Tanto E heros quanto E collaris, apresentaram dots CMA3+, além de diversas marcações DAPI+ intersticiais e terminais em E collaris Os nossos dados somados aos existentes na literatura permitem um melhor entendimento do comportamento meiótico nessa família, além de reforçar a importância da heterocromatina para a evolução desse grupo de insetosItem Caracterização morfológica e molecular de acessos de Capsicum baccatum LCardoso, Rafaella; Ruas, Claudete de Fátima [Orientador]; Nunes, Maria Paula Barion Alves; Ruas, Eduardo Augusto; Gonçalves, Leandro Simões Azeredo [Coorientador]Resumo: Capsicum baccatum L, tendo o seu centro de origem na Bolívia e no sul do Peru, é considerada uma das principais pimentas da América do Sul No Brasil, essa espécie é amplamente produzida por agricultores familiares, sendo os tipos cambuci e dedo-de-moça os mais cultivados Essa espécie de pimenta é geralmente consumida in natura ou processadas na forma de pós ou extratos O presente trabalho teve como objetivo a caracterização de 79 acessos de C baccatum, provenientes de diferentes regiões do Brasil, por meio de descritores morfoagronômicos do fruto e de marcadores moleculares de AFLP (Amplified Fragment Length Polimorphisms) O uso de quinze descritores, sendo onze qualitativos e quatro quantitativos, empregados para a caracterização morfológica, identificou uma ampla variabilidade fenotípica entre os acessos de C baccatum avaliados A análise dos dados, usando o método de Ward-MLM, resultou na formação de dois grupos, sendo o formato e o comprimento do fruto, essenciais para esta separação Para a análise molecular, o DNA dos acessos foi amplificado usando seis combinações de primers seletivos de AFLP marcados com fluorescência A análise dos produtos amplificados por AFLP identificou um total de 12 bandas, das quais 1122 (93,5%) foram polimórficas O dendrograma gerado por do coeficiente de distância genética de Jaccard, a partir do método de agrupamento UPGMA, identificou a formação de dois grupos, sendo possível a separação da variedade silvestre C baccatum var praetermissum das demais Estes resultados corroboram com a análise de coordenada principal (PCoA) e com a análise Bayesiana de agrupamentos Não houve relação entre distância genética e origem geográfica dos acessos, provavelmente, devido à intensa troca de frutos e sementes entre agricultores Os descritores morfoagronômicos, usados concomitantemente com os marcadores AFLP, se mostraram eficientes para detectar altos níveis de variabilidade genética entre acessos mantidos na coleção de germoplasma analisada Esses resultados podem ser utilizados como uma fonte adicional de informações para auxiliar na condução de programas de melhoramento genético de C baccatumItem Aplicação de diferentes marcadores citogenéticos e moleculares no estudo de duas pragas da soja : Anticarsia gemmatalis e Chrysodeixis includensMagalhães, Brenda Rafaella da Silva; Rosa, Renata da [Orientador]; Caetano, Lucia Giuliano; Carvalho, Luciana Andreia Borin deResumo: Anticarsia gemmatalis (Hübner, 1818) e Chrysodeixis includens (Walker, 1858) são espécies de lepidópteros, causadores de grandes danos nas lavouras de soja no Brasil Estima-se que de 37% da safra perdida,apro ximadamente 13% seja devido ao ataque desses insetos Apesar dessa importância, os estudos sobre a organização cromossômica dessas espécies são inexistentes recentemente, A gemmatalis, que pertencia a família Noctuidae juntamente com C includens, foi alocada na família Erebidae Diante disso, o objetivo deste trabalho foi analisar por meio de marcadores genéticos convencionais e moleculares, exemplares de ambas espécies Adicionalmente, foi realizada uma análise do gene citocromo oxidase subunidade I (COI) de A gemmatalis, afim de avaliar a sua nova classificação taxonômica Foi observado um 2n = 62, com sistema sexual ZZ/ZW e cromossomos holocinéticos para as duas espécies Houve uma homogeneidade no número de sítios do DNAr 18S para ambas Entretanto, variações na distribuição da heterocromatina foram observadas A heterocromatina é constituída de sequências repetitivas, comumente formada por elementos transponíveis Além de proteger o genoma de eventos mutagênicos, a heterocromatina também é portadora de sequências altamente importantes na organização de estruturas cromossômicas como os centrômeros e os telômeros A análise de um único marcador molecular, o COI de A gemmatalis, permitiu concluir que não há diferenças consistentes entre as populações analisadas referentes somente ao gene mitocondrial As análises citogenéticas permitiram separar as espécies em relação a heterocromatina, identificadas tanto no bandamento-C quanto nos fluorocromos base-específicos, corroborando o posicionamento de A gemmatalis, da família Noctuidae para Erebidae, sugerindo novas características, não mais somente morfológicas ou relacionada à genes mitocondriais e nucleares mas também citogenéticas referente a espécies classificadas como Erebidae e NoctuidaeItem "Novo complexo Bis (((Z)-4-((4-clorofenil)amino)- 4-oxobut-2-enoil)oxi) cobre : citotoxicidade em células 4T1 e potencial toxicogenético em camundongos Swiss"Oliveira, Edwin José Torres de; Oliveira, Rodrigo Juliano [Orientador]; Lepri, Sandra Regina; Almeida, Fernanda Simões deResumo: Complexos de cobre (II) são promissores candidatos para o desenvolvimento de novos tratamentos para diversos tipos de câncer, incluindo o câncer de mama O presente trabalho avaliou a atividade antitumoral in vitro e os efeitos toxicogenéticos in vivo de um novo complexo de cobre (II) O composto Bis(((Z)-4-((4-chlorophenil)amino)-4- oxobut-2-enoil)oxi)cobre (RC1) foi sintetizado e posteriormente utilizado nos ensaios biológicos Um total de 2,5x14 células 4T1 foram plaqueadas e submetidas à tratamento com as concentrações de 3,125; 6,25; 12,5; 25; 5; 1; 25; 5 e 1 µg/mL do composto RC1, durante 24, 48 e 72 horas A partir dos resultados de citotoxicidade a IC5 do composto RC1 foi calculada e utilizada nos demais ensaios in vitro Para análise da genotoxicidade utilizou-se o ensaio do cometa e para análise do tipo de morte celular a análise morfológica com coloração diferencial de brometo de etídio e acridina, e a marcação em citometro de fluxo com kit de detecção de apoptose PE Anexina V Ainda por citometria foi analisada a integridade da membrana das células 4T1, bem como o ciclo celular, após 24 horas de tratamento com o composto RC1 O ensaio de expressão gênica foi realizado por qPCR e genes relacionados à danos, reparo do DNA e apoptose foram estudados In vivo o potencial toxicogenético foi avaliado em camundongos Swiss com as concentrações de 3, 6 e 12mg/kg do composto RC1 por meio dos ensaios de cometa, micronúcleo e fagocitose Os resultados demonstraram que o composto RC1 induziu citotoxicidade nas células 4T1, possivelmente, via danos no DNA que levara ao aumento da expressão de ATM e p21, induzindo parada de ciclo celular em G1 O mecanismo de morte celular do RC1 em células 4T1 foi a apoptose desencadeado pelo aumento na expressão de BAX e CASP- 7, sem alterar a integridade de membrana das células 4T1 In vivo, o composto foi genotóxico em camundongos e causou aumento da frequência de danos genômicos (cometa), mas não cromossômicos (micronúcleo), no DNA e quando comparado ao quimioterápico de referência, cisplatina, foi menos genotóxico O RC1 também foi capaz de aumentar a frequência de fagocitose esplênica Esses resultados indicam que o novo complexo de cobre (II), descrito pioneiramente neste trabalho, apresenta potencial terapêutico no tratamento do câncer de mamaItem Relações citogenômicas entre espécies do gênero Capsicum L. (Solanaceae)Assis, Rafael de; Vanzela, André Luis Laforga [Orientador]; Dias, Ana Lúcia; Souza, Luiz Gustavo RodriguesResumo: Os genomas vegetais são compostos principalmente por sequências repetitivas Elementos transponíveis (ETs), que formam a parte móvel dos genomas, são divididos nas Classes I e II, de acordo com seu mecanismo de transposição Elementos pertencentes a Classe I, ou retrotransposons, são sintetizados e transpostos usando um RNA intermediário e podem se acumular diferencialmente dependendo do grupo vegetal A fração repetitiva não codificante, representada pelas sequências satélite tende a se acumular em blocos ao longo dos cromossomos As pimentas, pertencentes à família Solanaceae, possuem grande valor comercial, sendo comercializadas in natura, sob a forma de especiarias e são utilizadas também como ornamentação e de forma medicinal Mesmo já possuindo seu sequenciamento publicado, trabalhos que focam na diversidade e distribuição de elementos repetitivos nos genomas das espécies de Capsicum ainda são superficiais Diante disso, os objetivos deste trabalho foram compreender a organização, a distribuição e as relações genômicas e cariotípicas da fração repetitiva nos genomas de Capsicum annuum, C chinense e C baccatum Para isso, foram utilizadas ferramentas de bioinformática para quantificar essa fração e métodos de citogenética molecular para a localização física dessas sequências Sequenciamentos genômicos de alta cobertura foram contrastados com banco de dados de sequências conservadas de elementos transponíveis, elementos virais e DNA ribossômico Os dados mostraram similaridades entre as sequências repetitivas nos genomas de C annuum e C chinense, em relação à C baccatum Os elementos da superfamília Gypsy foram mais abundantes que os Copia, especialmente os elementos Del, que foram mais representativos em C annuum e C chinense, enquanto que em C baccatum houve maior acúmulo de elementos Athila O bandeamento C-CMA/DAPI revelou diversidade de bandas entre as três espécies, contudo sempre com ocorrência de bandas terminais mais intensas CMA+, DAPI+ ou CMA+/DAPI+ colocalizadas O resultado da FISH mostrou uma distribuição predominantemente dispersa dos retrotransposons, com exceção do elemento CRM que predominou na região pericentromérica, colocalizado com bandas de heterocromatina Nossos resultados confirmaram a relação mais próxima entre Capsicum annuum e C chinense, em relação à C baccatum, concordando com a filogenia do gêneroItem Determinação da rota metabólica de produção de ácido indolacético e identificação de genes de biossíntese em Rhizobium tropici CIAT 899 e Rhizobium freirei PRF81Imada, Eddie Luidy; Rodrigues, Elisete Pains [Orientador]; Oliveira, André Luiz Martinez de; Batista, Jesiane Stefânia da SilvaResumo: Rhizobium tropici e Rhizobium freirei são espécies diazotróficas, conhecidas por promoverem o crescimento do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L) Uma das características mais marcantes da da interação entre rizóbios e legumionsas é a formação de estruturas diferenciadas nas raízes das plantas hospedeiras, os nódulos, que são órgãos especializados na troca de nutrientes entre as bactérias e a raiz maximizando os benefícios da fixação biológica de nitrogênio (FBN) A formação de nódulos é uma relação simbiótica que envolve uma troca de sinais moleculares entre a planta e bactéria, entre os quais encontram-se flavonoides e hormônios vegetais O ácido-3-indolacético (AIA) é um hormônio vegetal que desempenha um papel crucial no processo de biogênese destas estruturas Embora o mecanismo de ação e regulação de alguns sinais moleculares, como os flavonoides, tenham sido amplamente revisados e estudados, o mecanismo de ação e regulação de AIA ainda é pouco compreendido Devido à importância deste fitohormônio no estabelecimento de relações simbióticas entre rizóbios e leguminosas, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a produção de auxinas e identificar as vias de biossíntese e os prováveis genes envolvidos na produção deste fitohormonio em R tropici CIAT 899 e R freirei PRF 81 Para isto, foram utilizados métodos colorimétricos (Salkowski) e análise por cromatografia líquida de ultra performance tandem espectrometria de massa (UPLC-MS) Ainda, genes de biossíntese de AIA foram identificados por meio de análises in silico dos genomas destas estirpes e a expressão destes genes foi avaliada por RT-qPCR na estirpe CIAT 899 Os resultados destas análises revelaram diferenças marcantes entre as estirpes CIAT 899 e PRF 81 quanto capacidade de produção de auxinas CIAT 899 foi mais eficiente e produziu aproximadamente 6% mais auxinas que PRF 81 A produção em ambas as estirpes foi regulada negativamente na presença de N assimilável, sendo o efeito mais pronunciado na presença de amônia que reduziu a produção em até 12x na estirpe CIAT 899 A amônia é principal produto da FBN e age como o principal regulador nas etapas finais de simbiose e nas reações envolvidas com a FBN, reforçando a importância da elucidação do papel do AIA nestes processos Além disso, foi determinado que o ácido-3-indol pirúvico (IPyA) é o principal intermediário da biossíntese de AIA nestas bactérias, visto que no perfil metabólico obtido por UPLC/MS foi detectado AIA, IPyA e indol-3-lactato (produto da redução do IPyA) Análises in silico identificaram genes com alta similaridade e conservação estrutural com genes já validados experimentalmente pertencentes a via do IPyA tanto no genoma da estirpe CIAT 899 quanto na PRF 81 Contudo, não foram observadas grandes diferenças que pudessem explicar os fenótipos contrastantes destas estirpes com relação a capacidade de biossíntese de AIA As análises de expressão por RT-qPCR mostraram que estes genes foram induzidos por triptofano na estirpe CIAT 899, sugerindo uma possível função no metabolismo de triptofano e síntese de AIA via IPyAItem Aspectos citogenéticos e moleculares em três espécies de Hypostomini (Siluriformes, Loricariidae)Wolf, Poliana Alves Sidol; Caetano, Lucia Giuliano [Orientador]; Rosa, Renata da; Zawadzki, Cláudio Henrique; Jerep, Fernando Camargo [Coorientador]Resumo: Loricariidae é considerada uma das famílias de peixes mais diversas na região Neotropical As variações exibidas por seus representantes, popularmente conhecidos como “cascudos”, estendem-se do nível intraespecífico ao populacional, o que dificulta o estabelecimento de filogenias, e estimativas da real diversidade dentro deste grupo Recentemente, uma nova hipótese filogenética foi proposta, na qual, houve uma reorganização ao nível de subfamílias e tribos Hypostomini, abordada no presente estudo, deixou o status de monogenérica e passou a ser representada por Hypostomus e Pterygoplichthys Desta forma, a fim de ampliar os dados citogenéticos existentes para estes dois gêneros, foram realizadas análises cromossômicas em espécimes de Hypostomus boulengeri, Hypostomus ancistroides, e Pterygoplichthys ambrosettii Todos os espécimes de H ancistroides, e H boulengeri, apresentaram o 2n=68, Ag-RONs múltiplas confirmadas pelo mapeamento físico com DNAr 18S, e sítios de DNAr 18S e 5S localizados em pares de cromossomos distintos Porém, existiram características que possibilitaram a separação destas espécies, feito as fórmulas cariotípicas (FCs), o número dos sítios de Ag-RON e DNAr 18S, o tipo de cromossomo portador do sítio de DNAr 5S, e a maior quantidade de regiões heterocromáticas em H boulengeri Os exemplares de P ambrosettii apresentaram o 2n=52, Ag-RONs simples com heteromorfismo de tamanho confirmadas pelo mapeamento físico com DNAr 18S, sítios de DNAr 18 e 5S em um mesmo par cromossômico, e regiões heterocromáticas localizadas principalmente na região terminal dos cromossomos Diferenças nas FCs podem indicar a ocorrência de rearranjos cromossômicos do tipo inversão pericêntrica, que alteram a o tipo cromossômico sem modificar o número diploide, enquanto que polimorfismos em sítios de DNAs ribossômicos podem refletir a ocorrência de crossing over desigual, amplificações e/ou transposições De fato, o isolamento do DNAr 5S de H boulengeri possibilitou a identificação de elementos dentro da região espaçadora, que poderiam explicar as diferenças observadas em posição e tamanho destas repetições em um genoma Dentre eles, sequências repetitivas que podem ter sido originadas por duplicações; regiões que podem formar estruturas secundárias e favorecer a ocorrência de rearranjos genômicos, e elementos transponíveis Além disso, a caracterização desta sequência possibilita a utilização dos clones para mapeamento físico em estudos futurosItem Identificação molecular e variação temporal de ovos e larvas de peixes (Teleostei: Osteichthyes) em zonas de influência de reservatórios no rio ParanapanemaLima, Same Costa; Almeida, Fernanda Simões de [Orientador]; Birindelli, José Luís Olivan; Pereira, Luiz Henrique GarciaResumo: A intensa construção de barragens e formação de reservatórios constitui o principal fator de impacto nas bacias hidrográficas brasileiras levando a uma série de distúrbios físico-químicos o que acaba por influenciar sobre a reprodução das espécies de peixes ali presentes e interferir diretamente na composição da ictiofauna Informações sobre uma comunidade se tornam mais completas quando incluídas informações sobre a história de vida das espécies, inclusive nos estágios iniciais Assim, a análise da composição e abundância de ovos e larvas de peixes é fundamental no sentido de trazer informações sobre o sucesso de permanência das espécies através da reprodução em razão dos distúrbios causados por barramentos Este trabalho objetivou por meio da técnica DNA barcoding realizar a identificação de ovos e larvas de peixes coletados em zonas de influência de barragens inseridas ao longo do rio Paranapanema, para avaliar a composição e abundância do ictioplâncton em diferentes períodos e com diferentes características ambientais Para tanto, foram realizadas coletas entre setembro 213 a março de 214 e setembro de 214 a março de 215 Das 961 sequências do gene (COI) obtidas a partir das amostras, 85 (88,5%) puderam ser identificadas precisamente a nível específico, totalizando 43 espécies Considerando o total de amostras analisadas (961), resultaram em 6 ordens, 2 famílias, 38 gêneros e 52 unidades taxonômicas distintas As ordens mais abundantes foram Siluriformes (52,1%) e Characiformes (4,8%) seguidas dos Perciformes (6%), Cyprinodontiformes (,5%), Gymnotiformes (,3%) e Pleuronectiformes (,1%) Uma maior riqueza de espécies pode ser observada em trechos lóticos de tributários, em especial para o rio das Cinzas e Tibagi, contrastando com a presença marcante de espécies invasoras como Serrasalmus marginatus e Plagioscion squamosissimus em trechos lênticos A identificação a nível específico pode revelar entre amostras analisadas cerca de 3% das espécies registradas para a bacia do rio Paranapanema, bem como casos de espécies crípticas, trazendo informações valiosas acerca do recrutamento de peixes ao longo de uma bacia fragmentada por sucessivas barragens, contribuindo para a criação de planos de manejo efetivos