02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecular

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Estudo citogenético de quatro espécies de peixes da família Loricariidae, coletadas em diferentes localidades da bacia do Paranapanema
(2022-03-17) Santos, Kátia Fabiana dos; Giuliano-Caetano, Lucia; Dias, Ana Lúcia; Fenocchio, Alberto Sergio
Siluriformes compreendem a ordem de peixes de água doce mais abundantes na região neotropical. Dentre os Siluriformes, Loricariidae é a família que mais se destaca em número de espécies e subdividida em seis subfamílias, nas quais duas merecem maior destaque: Hypostominae e Loricariinae. A primeira compreende os peixes conhecidos como cascudos, sendo endêmicos da América do Sul. Os dados da literatura mostram que esta subfamília é uma das mais complexas dentro dos Loricariidae, onde o gênero mais estudado é o Hypostomus que apresenta uma variação no número diploide de 2n=52 para H. emarginatus a 2n=84 para Hypostomus perdido, além de também apresentar uma grande variação quanto a fórmula cariotípica, padrão de heterocromatina e na quantidade e posição das NORs. As populações mais estudadas deste gênero pertencem às bacias do rio Paraná, rio Paraguai e rio São Francisco. A outra subfamília de destaque é Loricariinae, cujo representantes são conhecidos como cascudos-chinelos, de tamanho pequeno a médio e ocorrem com frequência na região da Costa Rica, Panamá e em toda a América do Sul. Ela também apresenta uma grande variabilidade citogenética quanto ao número diploide (2n=36 a 2n=74), fórmula cariotípica e cístrons ribossômicos. As populações mais estudadas desta subfamília foram coletadas principalmente na bacia do rio Paraná e rio Paraguai. No presente estudo foram analisadas citogeneticamente 4 espécies de peixes de Loricariidae, todas provenientes de diferentes localidades da Bacia do Alto Rio Paraná, por meio da coloração por Giemsa e fluorocromos CMA/DAPI, impregnação por nitrato de prata, bandeamento C e Hibridação in situ fluorescente com sondas de DNA ribossomal 18S e 5S. Os resultados encontram-se divididos em dois capítulos. No capítulo 1 foram analisadas três espécies de peixes da subfamília Hypostominae, sendo: Hypostomus ancistroides, H. hermanni e H. strigaticeps. Duas populações de H. ancistroides, uma do Ribeirão Cambé e outra do Ribeirão Três Bocas exibiram o mesmo número diploide de 2n=68 e fórmula cariotípica de 14m+16sm+8st+30a. Já H. hermanni proveniente do Ribeirão Três Bocas e H. strigaticeps do Rio Laranjinha apresentaram 2n=72 com estrutura cariotípica distinta, sendo 10m+20sm+18st+24a e 10m+14sm+20st+28a, respectivamente. A coloração com fluorocromos revelou a presença de sinais positivos em GC para todas as espécies, e regiões ricas em AT apenas para H. strigaticeps. Nas três espécies analisadas, as Ag-RONs foram coincidentes com os locais de DNAr 18S. Nas duas populações de H. ancistroides, a FISH com DNAr 18S evidenciou três marcações, enquanto que o DNAr 5S foi detectado no par 4 metacêntrico de ambas, podendo este ser considerado um par marcador para a espécie. O DNAr 18S em H. hermanni hibridou em apenas um homólogo de um cromossomo acrocêntrico, já em H. strigaticeps esta sonda apresentou múltiplos sinais. O DNAr 5S para estas duas espécies esteve localizado em vários pares de cromossomos, condição esta comum quando comparado com outras populações destas mesmas espécies. A heterocromatina esteve presente em diversos pares de cromossomos, todavia, em H. ancistroides pode ser observado um heteromorfismo de tamanho no par 16 de ambas as populações. No capítulo 2 foi analisada uma espécie de peixe pertencente a subfamília Loricariinae, Loricariichthys platymetopon, que apresentou similaridade de número diploide com as demais populações já cariotipadas de 2n=54, com diferenças apenas na estrutura cariotípica de 8m+18sm+4st+24a. A banda C revelou heterocromatina na região pericentromérica de apenas um par de cromossomo, enquanto que a impregnação com nitato de prata mostrou um sinal de NOR ativa coincidente com a constrição secundária do par 14, observada pela Giemsa. A coloração com fluorocromos base-específicos exibiram sinais de DAPI positivo na região pericentromérica e terminal de quase todos os cromossomos e sinal de CMA positivo em apenas um par. O par marcador da NOR foi confirmado pela FISH com a sonda DNAr 18S; e a sonda de DNAr 5S marcou em dois pares de cromossomos, com sintenia entre as sondas no par subtelocêntrico 14. Em todas as populações de L. platymetopon já estudadas, o par 14 subtelocêntrico também apresentou marcações em todas as técnicas, indicando que este seja um par marcador espécie-específico. O presente trabalho reforça que os marcadores citotaxonômicos são eficientes para os estudos e caracterização de populações e corrobora com os dados da literatura de que os rearranjos cromossômicos, particularmente as inversões pericêntricas, estão atuando na diversificação cariotípica de Loricariidae.
A família gênica da glutamina sintetase em Coffea arabica: aspectos moleculares
(2015-03-27) Soares, João Danillo Moura; Domingues, Douglas Silva; Rossi, Maria Magdalena; Vilas Boas, Laurival Antonio
O nitrogênio (N) é o nutriente mineral requerido em grandes quantidades pelas plantas. É um elemento fundamental para o desenvolvimento e crescimento vegetal, e necessário para a síntese de diversas biomoléculas, como proteínas, ácidos nucleicos, clorofila, bases nitrogenadas, entre outras. O metabolismo de N pode ser dividido em três fases principais: 1) absorção; 2) assimilação e 3) remobilização e reutilização, as quais envolvem a participação de diversas enzimas. A glutamina sintetase (GS) é considerada uma enzima chave no metabolismo de compostos nitrogenados, pois é responsável pela assimilação de amônio inorgânico em aminoácidos, que serão doadores de fontes nitrogenadas para os diversos processos celulares. Esta enzima é codificada por uma pequena família gênica, com isoformas citosólicas e plastidiais. No entanto, existem poucos estudos sobre os aspectos moleculares e genômicos de GS em espécies lenhosas, mais especialmente no cafeeiro e sobre seu papel no desenvolvimento de frutos. Dessa forma, o objetivo desse trabalho é identificar e caracterizar os membros constituintes da família gênica de GS em dicotiledôneas lenhosas, e em Coffea arabica avaliar o perfil transcricional desses genes em resposta a estresses abióticos. Foram utilizadas plantas das cultivares IAPAR 59 e Catuaí Vermelho cultivadas sob altas temperaturas e altas concentrações de NaCl ou supressão de N, bem como frutos dessas cultivares em 3 fases de desenvolvimento. Avaliou-se os níveis transcricionais por meio de qPCR bem como foram realizadas quantificações de atividade enzimática de GS, níveis de clorofila, perda de eletrólitos e concentração de proteínas totais. A atividade transcricional da família gênica GS foi influenciada por estresses abióticos e ao longo do desenvolvimento de frutos e os genótipos analisados não respondem igualmente a tais condições. A atividade enzimática de GS sofreu variações menos pronunciadas que padrão transcricional e picos no perfil transcricional não estão diretamente associados com maior atividade enzimática. Esses fatos sugerem a ocorrência de outros mecanismos de regulação de GS, além do transcricional. A participação dessa família gênica no processo de enchimento de grãos pode ser notada tanto nos níveis de expressão quanto na atividade enzimática, com aumento em função do estádio de desenvolvimento, principalmente em endosperma. Esse trabalho fornece um painel detalhado para o entendimento do mecanismo de assimilação de N em diversas condições e em diferentes órgãos de C. arabica.
Ocorrência e diversidade de fatores de virulência em isolados brasileiros de Bacillus cereus provenientes de alimentos e do solo
(2009-03-02) Santos, Clelton Aparecido dos; Arantes, Olivia Marcia Nagy; Sena, Janete Apparecida Desidério; Sofia, Silvia Helena
Linhagens de B. cereus são isoladas de uma variedade de ambientes, incluindo alimentos e solo, e muitas linhagens causam dois tipos de intoxicação alimentar: vômito e diarreia. Diversos fatores de virulência, incluindo atividade hemolítica, produção de enterotoxina e lecitinase e motilidade, foram pesquisados em isolados brasileiros de B. cereus provenientes de amostras de alimentos contaminados, alimentos e solo. Em acréscimo, foi avaliada também a ocorrência e a diversidade genética dos genes ces, plcR-papR, nheA, bceT, gyrB, cytK-2 e plcA por RE-PCR (Restriction Endonuclease–PCR). Os fatores de virulência apresentaram distribuição variável nos três grupos de isolados e os genes plcR-papR apresentaram a maior diversidade genética entre os três grupos. A análise de variância molecular (AMOVA) considerando todos os locos analisados evidenciou que a porcentagem de variação genética dentro de cada grupo de isolados foi significativamente maior (92,22%), que entre os grupos (7,78%). Os resultados obtidos demonstram que o conjunto gênico de B. cereus é a principal característica que permite a distribuição cosmopolita desta bactéria. Por outro lado, a expressão dos genes codificantes para os fatores de virulência é um fator determinante mais do comportamento que da presença desta bactéria no ambiente.
Estudos citogenéticos em diferentes populações de Hoplias malabaricus (Characiformes, Erythrinidae)
(2006-02-22) Rosa, Renata da; Caetano, Lucia Giuliano; Bertollo, Luiz Antônio Carlos; Dias, Ana Lucia
As traíras, Hoplias malabaricus, apresentam uma grande distribuição pela América do Sul, sendo a espécie tipo da região de Suriname. Dentre os representantes da família Erythrinidae, são os que possuem maior número de estudos citogenéticos, revelando uma grande variação cariotípica, com sete citótipos descritos até o momento, e diferentes tipos de sistemas sexuais. Essas variações ocorrem entre animais de bacias hidrográficas diferentes e também em simpatria. No presente trabalho foram analisados citogeneticamente e morfometricamente seis população de H. malabaricus pertencentes à região média do rio Paranapanema: a) bacia do rio Claro , UNOPAR – Tamarana/PR; b) EPUEL – Estação de piscicultura da UEL – Londrina/PR; c) rio Vermelho – Bela Vista do Paraíso/PR; d) Rancho Alegre/PR; e) Ribeirão Três Bocas – Londrina/PR; f) rio Paranapanema – Iepê/SP. Na população da UNOPAR foram contrados dois citótipos em simpatria, com 2n = 40 cromossomos e 2n = 42 cromossomos. Dois indivíduos não apresentaram definição quanto ao número diplóide, sendo observado 38,24% das células com 41 cromossomos, e 41,12% das células com 42 cromossomos, caracterizando um mosaico cromossômico. A população da EPUEL apresentou 2n = 42 cromossomos M/SM para machos e fêmeas com sistema sexual simples do tipo XX/XY. As populações do sítio rio Vermelho, Rancho Alegre, ribeirão Três Bocas e rio Paranapanema, apresentaram 2n = 39 cromossomos para os machos e 2n = 40 cromossomos para fêmeas, demonstrando um sistema sexual múltiplo do tipo X1X1X2X2/X1X2Y. A impregnação por nitrato de prata evidenciou RONs múltiplas, variando de 3 até 9 cromossomos marcados. Todas as populações apresentaram uma distribuição semelhante da heterocromatina, principalmente na região centromérica da maioria dos cromossomos e telomérica em alguns. No sexto par cromossômico, um bloco corado que se inicia na região pericentromérica foi observado. Nas populações que apresentaram cromossomos sexuais múltiplos, esse cromossomo corresponde ao X1. Nos machos do rio Vermelho, Rancho Alegre, ribeirão Três Bocas e Paranapanema, o cromossomo Y apresentou diferenças na quantidade e localização dos blocos heterocromáticos. A coloração das bandas-C com fluorocromo GC-específico evidenciou dois cromossomos com marcação próxima ao centrômero, em todas as populações, provavelmente o sexto par. As bandas centroméricas foram evidenciadas com fluorocromo AT-específico. A coloração com fluorocromo GC-específico evidenciou diferentes marcações entre as populações. A análise das variáveis canônicas dos dados morfométricos evidenciou a formação de grupos distintos. Os valores apresentaram 79, 38% de proximidade ao eixo canônico 1, separando três grupos: (1) Ribeirão Três Bocas de (2) Rancho Alegre + Sítio Água da Mina + UNOPAR; e (3) EPUEL + rio Paranapanema. As medidas mais contrastantes foram o comprimento do osso maxilar (COM) e a distância prédorsal (DPD). Através das proporções corporais pode-se observar que os exemplares estudados diferem do exemplar da localidade tipo. Provavelmente, a morfologia deve ser influenciada pelo ambiente, como a presença ou não de corredeiras, forma do substrato, entre outros fatores, desta forma o padrão genético não será o único fator a influenciar na forma desta espécie. Os resultados obtidos tanto citogenéticos quanto morfológicos nos levam a sugerir a existência de espécies distintas no grupo Hoplias malabaricus do médio Paranapanema.
Citotoxicidade, cinética de proliferação, indução de apoptose e genotoxicidade do nicorandil e da N-(beta-hidroxietil) nicotinamida em cultura de células renais (786-O)
(2011-02-25) Paula, Natália Aparecida de; Mantovani, Mário Sérgio; Luiz, Rodrigo Cabral; Maistro, Edson Luis
O nicorandil, um doador de óxido nítrico (NO) e ativador de canal de potássio ATP sensível (KATP), utilizado no tratamento da angina, tem como molécula precursora a N-(beta-hidroxietil) nicotinamida, não liberadora de NO. O nicorandil influencia a proliferação celular excessiva na disfunção renal, e a apoptose no tecido cardíaco pós isquemia. Moléculas que apresentam caráter regulatório em processos de crescimento e morte celular são importantes na terapia de doenças com alteração nesses processos. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a citotoxicidade do nicorandil e avaliar sua influência no crescimento celular, na apoptose e na indução de danos no DNA de células de carcinoma renal (786-O). Para verificar a influência do NO liberado foi também avaliada a N-(beta-hidroxietil) nicotinamida, cuja estrutura é diferenciada apenas pela ausência do radical NO2. No ensaio de citotoxicidade MTT, as moléculas apresentaram citotoxicidade a partir de 24h em concentrações diferentes, o nicorandil em 2000 µg/mL e a N-(beta-hidroxietil) nicotinamida em 3000 µg/mL. Nos demais ensaios nicorandil e a N-(beta-hidroxietil) nicotinamida foram testados nas concentrações de 20, 100 e 500 µg/mL e não apresentaram resultados diferentes entre si. Não foram genotóxicas no ensaio do cometa e não alteraram o crescimento celular. Na avaliação morfológica da apoptose não houve alteração, e a expressão dos genes da via apoptótica testados não foi alterada. Concluímos que o nicorandil é citotóxico apenas em altas concentrações, e não altera os outros processos testados nas células renais e a N-(beta-hidroxietil) nicotinamida concorda em todos os resultados com o nicorandil, exceto pela sua citotoxicidade ser menor, provavelmente pela ausência de NO.
Busca e caracterização in silico de RNAs não codificadores em isolados de Bacillus anthracis, Bacillus cereus e Bacillus thuringIensis (Bacillus cereus sensu lato)
(2015-03-26) Nadal, André Luciano; Vilas-Boas, Laurival Antônio; Domingues, Douglas Silva; Lopes, Fabrício Martins; Paschoal, Alexandre Rossi
O grupo do Bacillus cereus reúne microorganismos de grande importância econômica, médica e também em questões de biodefesa, o que se reflete no fato dele conter um grande número de genomas sequenciados intimamente relacionados, como Bacillus anthracis, B. cereus e B. thuringiensis. As ferramentas atuais de bioinformática aplicadas a tal conjunto de informações nos proporcionam grande oportunidade para análises genômicas comparativas completas. Os membros deste grupo tem muito de sua especificidade atribuída aos seus plasmídeos, os quais variam em tamanho e número. Seus cromossomos apresentam um alto nível de sintenia com diferenças limitadas no conteúdo genético, tornando questionáveis as interpretações sobre a especiação dos membros deste grupo. Este trabalho visa contribuir ao esclarecimento sobre a proximidade genética entre estes três constituintes do grupo do Bacillus cereus sensu lato anteriormente citados mediante identificação e caracterização de RNAs não codificadores, auxiliando na compreensão taxonômica, no entendimento dos fatores de virulência, na interação patógeno hospedeiro e em interações ecológicas como o comportamento de B. thuringiensis no controle de pragas da agricultura e vetores de doenças. Para a identificação dos ncRNAs, foi produzido um conjunto de dados composto por 35 genomas completos dos organismos de interesse, sendo 9 B. anthracis, 13 B. cereus, 12 B. thuringiensis e também 1 B. weihenstephanensis, obtidos à partir dos bancos de dados GOLD e NCBI. Tais genomas foram classificados considerando-se a metodologia de montagem após os sequenciamentos, tipo de anotação, manual ou automática e impacto das publicações resultando em 26 escolhidos. Em seguida o material foi processado no software Artemis V.16.0.0 para extração das regiões intergênicas, então submetidas a três métodos diferentes de inferência computacional para identificação de RNAs não codificadores. O primeiro método foi o processamento via Infernal V.1.1 / banco de dados Rfam V.11.0, o segundo foi o processamento via sRNAscanner V.1.9, e finalmente uma análise comparativa com o banco de dados da UTFPR que reúne ncRNAs da literatura, com base no Non-coding RNA Databases Resource (NRDR). Os dados foram então carregados para um banco de dados PostgreSQL V.9.1. Para a caracterização das sequências obtidas, foram criadas tabelas relacionais contendo os dados das 2208 famílias Rfam, agrupando os dados públicos dos sites FTP Rfam e instituto SANGER. Ainda como auxílio à busca e caracterização, os genomas completos foram carregados em banco de dados. Os resultados dos três métodos de descoberta foram pesquisados via consultas diretas no banco de dados (linguagem SQL) mediante agrupamento de regiões contíguas sobrepostas. Foram identificados 181 ncRNA candidatos, distribuidos em 12 famílias exclusivas para um ou outro grupo: B. anthracis (2), B. cereus (5) e B. thuringiensis (5). Posteriormente os candidatos foram caracterizados por espécie e cepa nas 23 famílias identificadas
Investigação da citotoxicidade, indução de apoptose, efeitos genotóxicos e protetores do flavonóide rutina em células hepáticas HTC
(2009-02-17) Marcarini, Juliana Cristina; Mantovani, Mário Sérgio; Maistro, Edson Luis; Dias, Ana Lúcia
A rutina é um flavonóide que apresenta grande importância terapêutica, pois possui algumas atividades biológicas como: antioxidante, vasodilatadora e estimulante do sistema imunológico. Considerando que há poucos e controversos relatos na literatura sobre a toxicidade da rutina e o seu efeito protetor, o presente trabalho investigou os efeitos citotóxicos, genotóxicos e protetores da rutina em células hepáticas (HTC – hepatoma de Rattus novervigus). No ensaio de citotoxicidade - MTT nenhuma concentração da rutina (10µM a 810µM) apresentou efeito citotóxico após 24 e 48h de tratamento, porém com 72h de tratamento houve citotoxicidade da maior concentração. Os ensaios de Viabilidade Celular e de Cinética de Proliferação também demonstraram que somente a maior concentração (810µM) diminuiu a viabilidade ou interferiu na curva de crescimento após 72h de tratamento. Na avaliação da indução de apoptose insitu, nenhuma concentração de rutina após 24 horas de tratamento induziu a apoptose. Os resultados obtidos no Ensaio do Cometa (SCGE) mostraram que somente a maior concentração de rutina (810µM) após 24 horas de tratamento induziu danos no DNA,contudo, no Ensaio do Micronúcleo com Bloqueio de Citocinese (MNCtB) não foi observado efeito genotóxico. Na avaliação do efeito protetor, sobre o agente pró carcinogênicobenzo[a]pireno em MNCtB, as três maiores concentrações (90, 270 e810µM) reduziram danos significativamente (redução de danos de 36,7%, 51,4% e54,4%, respectivamente). Apesar do efeito genotóxico evidenciado no Ensaio do Cometa para a rutina, esse dano não foi fixado como observado no Ensaio MNCtB, sugerindo que o sistema de reparo atua eficientemente nos danos produzidos pela alta concentração de rutina (810µM). Além disso, os dados de efeito protetor da rutina, frente a um pró-carcinógeno bastante comum, sugerem uma atividade biológica importante que pode contribuir para a saúde humana.
Diversidade e potencial biotecnológico de bactérias isoladas de Baccharis trimera (Carqueja)
(2017-10-31) Jardim, Ana Camila Munis; Rodrigues, Elisete Pains; Vilas Boas, Gislayne F. L. Trindade; Oliveira, André Luiz Martinez de
As plantas podem abrigar uma grande diversidade de microrganismos desconhecidos e que apresentam grande potencial para produção de compostos bioativos, incluindo antimicrobianos. Neste sentido, este trabalho investigou a composição da comunidade bacteriana e o potencial antimicrobiano dos isolados de Baccharis trimera (Less DC Ateraceae). Para isto, amostras das raízes foram coletadas em Ponta Grossa-PR e Ortigueira-PR. Inicialmente, foi realizada a contagem para estimar a densidade populacional da rizosfera e endorrizosfera nos meios de cultivo R2A e Ágar Batata. O posicionamento filogenético dos isolados foi realizada através do sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. Posteriormente os isolados foram avaliados quanto a produção de compostos antimicrobianos através de testes de antagonismo e pela produção de sideróforos e biossurfactantes. A contagem populacional da rizosfera foi maior que a contagem da endorrizosfera independentemente da localidade de coleta ou do meio de cultivo utilizado. Foram obtidos 182 isolados a partir do plaqueamento da rizosfera e endorrizosfera. Foi realizado um agrupamento dos isolados através da técnica de ARDRA e a partir deste foram selecionados 129 isolados para sequenciamento. Foram identificados 38 gêneros bacterianos alocados nas seguintes classes: Bacilli (30%), Actinobacteria (24%), a-Proteobacteria (22%), ß-Proteobacteria (12%) e ?-Proteobacteria (12%). Os principais gêneros encontrados nas duas localidades foram Streptomyces, Pseudomonas, Methylobacterium, Staphylococcus, Paenibacillus, Variovax, Burkholderia, Luteibacter, Arthrobacter, Bacillus e Bradyrhizobium. Dos 182 isolados, 112 apresentaram produções em diferentes níveis de antimicrobianos, sideróforos e biossurfactantes. Os resultados deste trabalho demonstram que a comunidade bacteriana da rizosfera e endorrizosfera associada à planta medicinal B. trimera é diversa e com alto potencial antimicrobiano.
Citogenética em espécies de cestrum (Solanaceae): mapeamento físico e proteínas cromossômicas
(2007-02-28) Fernandes, Thiago; Vanzela, André Luis Laforga; Morales, Maria Ap. Marin; Giuliano-Caetano, Lúcia
Os representantes do gênero Cestrum são, em sua maioria, arbustos e pequenas árvores distribuídos nas regiões tropical e subtropical das Américas. Nesse trabalho, estudamos três espécies coletadas no Brasil (C. capsulare, C. corymbosum e C. megalophylum) e uma na Argentina (C. laevigatum) utilizando as seguintes ferramentas citogenéticas: i) coloração convencional, ii) bandamento C-CMA3/DAPI e iii) hibridação in situ com as sondas de DNAr 45S e 5S. As quatro espécies apresentaram cariótipos com 2n = 2x = 16 e uma predominância de cromossomos metacêntricos e submetacêntricos, exceto pelo menor par sempre acrocêntrico. Nossos resultados reforçam a idéia desse perfil cariotípico ser uma característica preservada dentro do gênero. O bandamento cromossômico e a hibridação in situ fluorescente (FISH) mostraram que a maioria dos segmentos de DNAs repetitivos parece seguir um modelo de dispersão eqüilocal/eqüidistante. Isso foi evidenciado principalmente para os blocos C-CMA3 + e para os cistrons de DNAr 45S que apareceram preferencialmente nas regiões terminais dos cromossomos, os blocos C-DAPI0/CMA3 0 e dots C-DAPI+ em regiões intercalares/subterminais e sítios para DNAr 5S sempre na região pericentromérica dos cromossomos. As diferenças encontradas no padrão de bandas entre as espécies aqui estudadas e as outras nove reportadas na literatura sugerem que os segmentos heterocromáticos encontrados em Cestrum apresentam uma dispersão por amplificação/contaminação eqüilocal entre heterólogos ou têm origem a partir de sítios iniciais de amplificação, ou seja, por amplificação não eqüilocal. Alem do mais, o mapeamento físico dos diferentes segmentos heterocromáticos, aliado a outros mapas físicos realizados para Cestrum, sugere que as diferenças cariotípicas dentro do gênero ocorreram por mudanças nos diferentes classes de DNAs repetitivos, sem alterações significativas na composição geral dos cariótipos (tamanho e forma). Além do mapeamento físico, outro ponto estudado nesse trabalho foi o comportamento meiótico dos cromossomos Bs encontrados em alguns indivíduos de Cestrum strigilatum por coloração convencional e imunodetecção com anticorpos anti-H3 fosforilada. Esses cromossomos parecem ser eliminados durante a microsporogênese dessa espécie, principalmente durante a transição da meiose I para meiose II, ou, durante a formação da tétrade. O motivo de tal comportamento não pôde ser explicado totalmente através do padrão de fosforilação das histonas H3, contudo, evidenciou que tanto os Bs quanto os cromossomos do complemento A possuem um comportamento diferencial dos citados na literatura. Nossos dados reforçam as suposições sobre um possível papel secundário dessas proteínas nas divisões celulares, atuando provavelmente como sinalizadores para a cinética dos cromossomos. Em um estudo complementar, nós verificamos que a presença dos Bs não interfere na viabilidade dos grãos de pólen quando comparados indivíduos portadores e não portadores de Bs.
Efeito da clorofilina na expressão de genes envolvidos na apoptose e ciclo celular em células de mama não tumorais (HB4a)
(2012-02-29) D’Epiro, Gláucia Fernanda Rocha; Mantovani, Mário Sérgio; Oliveira, Rodrigo Juliano; Boas, Gislayne Vilas
A molécula de clorofilina é muito estudada pela comunidade científica por apresentar, entre outras, propriedades quimiopreventiva, antimutagênica e anticarcinogênica. No entanto, os mecanismos moleculares de ação desse composto ainda não estão esclarecidos. Dessa maneira, o estudo de genes envolvidos na apoptose e no ciclo celular em células não tumorais tratadas com clorofilina pode fornecer informações importantes sobre os mecanismos que protegem ou desencadeiam toxicidade ás células, auxiliando na compreensão e no desenvolvimento de terapias. Neste contexto, nós avaliamos o potencial citotóxico da clorofilina e o seu efeito na expressão de genes envolvidos na apoptose (anti e pró-apoptóticos: BCL-2, BCL-XL, BAX E BAK; da família das Caspases: CASP3, CASP7, CASP 8 e CASP9) e de ciclo celular (BIRC5, TP53, APC, CiclinaA2 e ß-catenina) em cultura de células de mama não tumorais (HB4a). No ensaio de citotoxicidade a clorofilina apresentou potencial citotóxico em 48 e 72 h em todas as concentrações utilizadas (100, 200 e 400 µg/mL) quando comparadas ao controle. O estudo da expressão gênica foi realizado por meio do ensaio de qRT-PCR em tempo real. As células HB4a foram expostas à 100 e 200 ?g/mL de clorofilina nos tempos de 24, 48 e 72 h. A redução dos níveis de BIRC5, relacionado aos processos de apoptose e ciclo celular foi dose dependente, o gene foi menos expresso no tratamento com 200 µg/mL de clorofilina em 24, 48 e 72 h. O gene CCNA2 foi menos expresso com 24, 48 e 72 h de exposição à 200 µg/mL de clorofilina, e com 72 h de exposição à 100 µg/mL. Em relação aos genes pró-apoptóticos, foi observado aumento significativo na expressão de BAX em 24, 48 e 72 h de exposição à 200 µg/mL de clorofilina, e em 72 h de exposição à 100 µg/mL. Não houve alteração significativa de BAK quando comparado ao controle. Também foi observado aumento de expressão dos anti-apoptóticos BCL-2 e BCL-XL. O gene BCL-XL apresentou aumento de expressão nos três tempos testados com 200 µg/mL de clorofilina, e a exposição à 100 µg/mL levou ao aumento de expressão somente em 24 h. Já o gene BCL-2 obteve aumento de expressão apenas em 72 h com 200 µg/mL de clorofilina. Os demais genes analisados não apresentaram alteração significativa. A inibição da expressão dos genes envolvidos no ciclo celular sugere um efeito decorrente da citotoxicidade da clorofilina, bem como o aumento da expressão dos genes pró-apoptóticos, enquanto que o aumento da expressão dos genes anti-apoptóticos sugere inibição da apoptose como proteção da morte celular induzida pela clorofilina.
Estudos citogenéticos de Loricariidae (Siluriforme) do planalto da Bodoquena - Mato Grosso do sul
(2006-08-09) Cereali, Sandra dos Santos; Giuliano-Caetano, Lucia; Dias, Ana Lucia; Santos, Isabel Cristina Martins
O gênero Hypostomus Lacépède, 1803, é composto por peixes de pequeno a grande porte conhecidos popularmente como cascudos. Possui aproximadamente 110 espécies e é considerado como um dos grupos de peixes neotropicais mais diversificados. Foram analisados exemplares de Hypostomus cochliodon e Hypostomus sp. 3-corrego Salobrinha NUP 4247, coletados no rio Salobra e no córrego Salobrinha e de Hypostomus sp. 2-rio Perdido UP 4249, coletados no rio Perdido, Planalto da Bodoquena – MS, Brasil. Existem registros de pelo menos 13 espécies de Loricariidae no Planalto da Bodoquena. Embora a ictiofauna seja peculiar, com muitas espécies endêmicas, não há registros de dados citogenéticos para peixes da região. Em Hypostomus cochliodon o cariótipo de todas as fêmeas apresentou número diplóide de 64 cromossomos, 16m+19sm+29st-a, com Número Fundamental (NF) igual a 99, entretanto, o único macho analisado, apresentou 2n=64, 16m+20sm+28st-a, com NF=100. Um par de acrocêntricos possui heteromorfismo de tamanho no macho, mas não nas fêmeas, o que sugere um possível sistema de cromossomos sexuais simples do tipo XX/XY. Todas as fêmeas possuíam um único cromossomo na posição 15 e também um cromossomo acrocêntrico a mais, na posição 22. O padrão de distribuição de heterocromatina detectado por banda C é diferente entre macho e fêmeas. Os acrocêntricos envolvidos no heteromorfismo de tamanho apresentam um bloco bem evidente de heterocromatina na região terminal do braço longo, em ambos os sexos. Nas fêmeas, o acrocêntrico 22 também apresenta um bloco de heterocromatina. A coloração com CMA3 apresentou o padrão de distribuição coincidente com o da banda C, sendo a heterocromatina constituída de regiões GC-ricas. A análise de mais exemplares machos pode confirmar essa hipótese ou mesmo apontar para um polimorfismo de heterocromatina. Hypostomus sp. 3- córrego Salobrinha apresentou dois números modais distintos 2n = 82, 6m + 14sm + 62st-a, NF = 102; 2n = 84, 6m + 14sm + 64st-a, NF = 104. Esse polimorfismo deve-se a presença de dois cromossomos extras não heterocromáticos. Não foi possível definir o número diplóide em quatro exemplares, sendo as linhagens celulares compostas de 2n=83 e 2n=84 cromossomos em um indivíduo, e 2n=82, 2n=83 e 2n=84 cromossomos nos outros. Estes resultados caracterizam a existência de um mosaico genético devido à ocorrência de um a dois cromossomos extras em Hypostomus sp. 3-córrego Salobrinha NUP 4247. Hypostomus sp. 2- rio Perdido NUP 4249 apresentou número diplóide 2n=84, com cariótipo formado por 6m+16sm+62st-a e NF=106. Tanto em Hypostomus sp. 3-córrego Salobrinha NUP 4247 quanto em Hypostomus sp. 2-rio Perdido o bandamento C evidencia um padrão de distribuição da heterocromatina caracterizado pela presença de poucas bandas na região pericentromérica, além da presença de um bloco bem evidente em posição terminal de braços longos de alguns cromossomos acrocêntricos pequenos. As marcações com CMA3 coincidem com o bandamento C nas duas espécies acima citadas. O maior número diplóide descrito, até agora, para o gênero era 2n = 80 cromossomos em Hypostomus sp. E, porém Hypostomus sp. 3- córrego Salobrinha NUP 4247 apresentou 2n = 82 e Hypostomus sp. 2-rio Perdido NUP 4249 2n = 84 cromossomos aumentando a amplitude de variação para este gênero. H. cochliodon e Hypostomus sp. 3-córrego Salobrinha apresentaram vários cromossomos marcados com AgNO3, porém apenas um par de cromossomos exibiram sítios marcados após a hibridação fluorescente in situ (FISH) com sonda de DNAr 18s. Hypostomus sp. 2-rio Perdido NUP 4249 apresentou apenas um par de cromossomos marcados por AgNO3, evidenciando um heteromorfismo de tamanho de RON. A hibridação com a mesma sonda, também revelou apenas um par portador de sítios de rDNA. Nas três espécies as bandas fluorescentes após a coloração com CMA3 apresentam padrão semelhante ao FISH. Os dados citogenéticos caracterizam bem cada espécie estudada, tanto quanto a macroestrutura quanto na microestrutura cariotípica.
Análise in silico de genes rap-phr em Bacillus cereus lato sensu
(2015-02-12) Cardoso, Priscilla de Freitas; Vilas-Bôas, Gislayne Trindade; Arantes, Olívia Marcia Nagy; Silva, Carlos Roberto Maximiano da
Espécies do gênero Bacillus produzem proteínas Rap (regulador de resposta aspartato fosfatase) que regulam vias essenciais para a bactéria, como esporulação, competência e formação do biofilme. Rap é inibida pelo peptídeo Phr, que é secretado, processado e internalizado para cumprir sua função, atuando assim como sensor de quorum. Essas proteínas têm sido investigadas em B. subtilis e com poucos estudos em Bacillus cereus lato sensu. Um grupo bacteriano ao qual pertencem B. cereus stricto sensu, B. thuringiensis e B. anthracis, bactérias fenotipicamente diferentes, mas geneticamente muito similares. Atualmente não há consenso se estas bactérias devem ser consideradas espécies distintas ou variantes especializadas de uma única espécie, inclusive porque suas principais características fenotípicas são codificadas em plasmídeos. O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar os sistemas rap-phr nos genomas destas espécies. Foram identificados 189 genes rap e 147 genes phr a partir do genoma de 34 linhagens do grupo com sequências genômicas completas. Dos genes obtidos, 23% são plasmidiais, uma frequência alta considerando um gene essencial para o metabolismo da célula. As proteínas Rap e Phr foram comparadas com proteínas ortólogas de B. subtilis e entre si. Foi possível notar uma grande variabilidade das sequências e em sua distribuição e na sintenia entre os genes de B. anthracis, enquanto que os genes de B. cereus e B. thuringiensis estão mais distribuídos e intercalados. Não foi possível identificar marcadores quanto a espécie nem em relação a sua localização no genoma. Entretanto, a grande quantidade dos genes plasmidiais nas linhagens de B. thuringiensis, em conjunto com a maior plasticidade dos genomas dessa espécie, pode permitir responder melhor às modificações ambientais.
Parâmetros genéticos em variedades de milho crioulo e sua utilização na seleção
(2007-01-26) Barros, Luciane Bertoletti; Ferreira, Josué Maldonado; Miranda Filho, José Branco de; Fonseca Junior, Nelson da Silva
As variedades crioulas foram produzidas, mantidas, desenvolvidas ou adaptadas por agricultores familiares ou indígenas, sendo principalmente utilizadas por estes agricultores ao longo das gerações. Trabalhos envolvendo ensaios de competição apresentam o potencial produtivo de variedades de milho crioulo com ou sem utilização de insumos externos, citando-as como fontes de adaptação, tolerância e resistência aos fatores bióticos e abióticos. Apesar destas afirmações, existem reduzidos estudos genéticos quantitativos para confirmar este potencial e obter estimativas de parâmetros para nortear o melhoramento destas variedades. Desta forma, os objetivos foram estimar parâmetros genéticos em progênies de meios irmãos em diferentes ciclos de seleção recorrente, em condições de sistema de agricultura familiar; verificar as previsões de ganhos de seleção no Programa de Melhoramento Genético Participativo; estimar os coeficientes de correlações genéticas em milho crioulo; comparar as estimativas genéticas obtidas, em condições de agricultura familiar, com as encontradas por outros autores em diferentes tipos de milho cultivados sob outros sistemas de produção. Foram avaliadas progênies de meios irmãos de seis variedades crioulas (Caiano, Carioca, Cinquentinha, Macaco, Maizena e Palha Roxa), em dois a três ciclos seleção recorrente, d O número de progênies de meio-irmãos variaram de 400 a 294 e foram avaliadas em látice triplos 10x10 e 7x7, respectivamente, com parcelas simples de 4 m de comprimento no espaçamento 0,20 m x 1,00 m. Foram realizadas análises agrupadas de variância e de correlações para estimar os parâmetros genéticos dos caracteres produtividade e outros de importância agronômica. Os resultados obtidos permitem inferir que as variedades crioulas apresentam potencial e suficiente variabilidade genética para os caracteres estudados, permitindo ganhos com a seleção recorrente de meio-irmãos, em propriedades de agricultura familiar, com o Programa de Melhoramento Genético Participativo. A seleção em milho crioulo visando aumentar a produtividade está relacionada à seleção de plantas mais prolíficas, menor porcentagem de espigas danificadas, maior relação peso de grãos por espiga e maior precocidade. Existe uma associação positiva entre plantas mais altas e mais tardias, mas com magnitude que possibilitam a seleção para plantas mais produtivas com menor altura de plantas e maior precocidade. Com exceção do caractere florescimento médio, as correlações observadas para milho crioulo, em sistemas de agricultura familiar, são compatíveis com a da literatura.
Diagnóstico molecular e ocorrência de Streptococcus iniae em tilápia do Nilo (Oreochomis niloticus) de criação intensiva
(2015-03-24) Barbosa, André Rocha; Vilas-Boas, Laurival Antônio; Silva, Carlos Roberto Maximiano da; Carvalho Filho, Celso Duarte; Pretto-Giordano, Lucienne Garcia
O consumo de proteína animal aumentou expressivamente nos últimos 50 anos. O aumento populacional e a melhoria das condições de vida em países emergentes estão entre os fatores responsáveis pela crescente demanda de proteína animal. O Brasil é um país que possui condições de suprir essa demanda, sobretudo por meio da aquicultura. No entanto, o crescimento da produção de peixes no Brasil sem uma política de desenvolvimento aumentou a ocorrência de doenças bacterianas, principalmente as causadas por estreptococos. Streptococcus iniae e Streptococcus agalactiae são as principais espécies responsáveis por mortalidade e morbidade de peixes na criação intensiva de todo o mundo, entretanto S. iniae foi identificado apenas uma vez no Brasil. O presente estudo investigou a ocorrência de S. iniae em tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) coletadas durante um ano, em propriedades de criação intensiva. Foram coletados 10 peixes por propriedade a cada estação do ano, e amostras de encéfalo, rim e fígado foram utilizadas para a pesquisa por PCR. Dentre os 185 peixes analisados, 13 (7,06%) foram positivos para a PCR S. iniae-específica. Entre os peixes positivos, 76,92% (10/13) não apresentaram sinais clínicos de estreptococose e 69,23% (9/13) apresentaram infecção por S. agalactiae e S. iniae. Esses resultados evidenciaram a necessidade da utilização de técnicas sensíveis no monitoramento de doenças bacterianas em peixes. A ocorrência de S. iniae ao longo de todo o ano sugere que essa bactéria possa estar estabelecida nas propriedades pesquisadas. Esse é o primeiro estudo de ocorrência de S. iniae em peixes de criação do Brasil e primeiro relato de coinfecção de S. iniae e S. agalactiae em peixes.
Análise genômica e estudo de patogenicidade de duas cepas de Streptococcus agalactiae sorotipo III isoladas de tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus)
(2022-04-19) Takahama, Juliana Delgado Monteiro; Vilas-Boas, Laurival Antônio; Rodrigues, Elisete Pains; Barcellos, Fernando Gomes; Pretto-Giordano, Lucienne Garcia
A piscicultura é um segmento da aquicultura em expansão mundial e a tilápia é o peixe mais cultivado no mundo. Devido as características do manejo, a tilápia pode ser acometida pelo Streptococcus agalactiae - uma bactéria que induz sérios danos aos peixes, pode ser transmitida aos seres humanos e levar à septicemia e morte. Este trabalho tem como objetivo descrever a caracterização genética e a patogenicidade de duas cepas de S. agalactiae sorotipo III isoladas de tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus) cultivadas no Brasil através de sequenciamento, montagem e comparação do genoma, identificando e relacionando a patogenicidade das duas cepas apresentando a DL50. A recuperação das bactérias foi realizada através da inoculação das cepas de S.agalactiae sorotipo Ib, S.agalactiae sorotipo III cepas Maranhão e Recife em juvenis de tilápia-do-Nilo. Após sua recuperação, foi realizada a inoculação dessas cepas em juvenis de tilápias-do-Nilo em diferentes concentrações com repetições em triplicata para observação dos sinais clínicos de estreptococose e avaliação do índice de mortalidade para determinar a dose letal 50. A inoculação nos peixes com as cepas recuperadas de S. agalactiae sorotipo Ib causou 83,4% de morte com a terceira concentração bacteriana inoculada em quatorze dias de observação. A concentração da DL50 para esse estudo foi de 1,1x106 UFC/mL. A cepa de S.agalactiae sorotipo III Maranhão recuperada causou 56,7% de morte com a menor concentração bacteriana inoculada em quatorze dias de observação. A concentração da DL50 para esse estudo foi de 1,5x105 UFC/mL. A cepa de S.agalactiae sorotipo III Recife recuperada causou 90% de morte no aquário com maior concentração bacteriana inoculada. A concentração da DL50 para esse estudo foi de 1,1x 106 UFC/mL. Os principais sinais de estreptococose encontrados foram: escurecimento corporal, distensão abdominal, exoftalmia uni e bilateral, opacidade córnea e natação errática. O isolamento e detecção do S. agalactiae foi realizado através da técnica microbiológica de swabs do encéfalo e rim, semeado em ágar sangue e incubado a 30º C por 48h para observação da morfologia das colônias e as características hemolíticas. A análise genômica das duas cepas de S. agalactiae sototipo III revelou um perfil semelhante entre ambas. A busca dos genes de virulência revelou a cobertura de 100% em dez genes presentes nas cepas de S. agalactiae Recife e Maranhão e em treze genes da cepa de S. agalactiae Ib. Diferentemente, em comparação com os genes alvo, o gene rib apontou 16% de cobertura e 74% de similaridade na cepa Maranhão, 15% de cobertura e 74% de similaridade na cepa Recife. O gene bac apresentou 51% de cobertura e 98% de similaridade nas cepas Maranhão e Recife. A cepa Ib apresentou 19% de cobertura e 74% de similaridade com o gene alvo do gene rib. Portanto, por ser uma cepa recentemente encontrada em tilapiculturas no Brasil, sugerimos aprofundar os estudos do S. agalactiae sorotipo III para diminuir as perdas econômicas e aumentar a segurança sanitária.
Efeitos antiproliferativos do zerumbone em cultura 3D e avaliação na migração celular em células HT-29
(2022-03-16) Silva, Nayane de Oliveira; Mantovani, Mário Sérgio; Vicentini, Veronica Elisa Pimenta; Serpeloni, Juliana Mara
Zerumbone é um fitoquímico isolado de plantas da família Zingiberaceae, encontrado principalmente nos rizomas de Zingiber zerumbet (L.) Sm. Inúmeros estudos demonstraram que entre suas diversas propriedade farmacológicas está sua potente ação como agente antitumoral. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos antiproliferativos e antimigratórios do zerumbone em cultura de células da linhagem HT-29, avaliando seu modo de ação mediante a análise de morte, ciclo celular e volume, correlacionando os dados obtidos com a análise de expressão gênica (mRNA) no modelo de cultura de esferoides multicelulares tumorais. Os resultados obtidos evidenciaram que o tratamento com zerumbone foi citotóxico nas concentrações de 30, 40, 50, 60 e 80μM, com um IC50 calculado de 83,54μM que inibiu a migração celular. Zerumbone ocasionou aumento no volume médio dos esferoides no tempo de 72h em relação ao controle, levando a desagregação das células e desconfiguração das zonas características deles. A análise de morte celular demonstrou que em 24h e 72h houve um aumento significativo na porcentagem de células apoptóticas nos esferoides tratados com zerumbone em comparação com o controle, além do aumento da porcentagem relativa de células na fase G1 do ciclo celular em 24h e 72h de tratamento. Por fim, zerumbone alterou a expressão de mRNAs de genes relacionados a vias moleculares de morte celular (BBC3), estresse de retículo (ERN1), danos no DNA (GADD45A), regulação do ciclo celular (CDKN1A, NFKB1, MYC e TP53) e autofagia (BECN1 e SQSTM1). Esses resultados tomados em conjunto indicam que zerumbone é um potencial candidato para o desenvolvimento de novas drogas anticâncer por alterar múltiplas vias de sinalização celular, sendo que estudos como esse que utilizam o sistema de cultura 3D são ferramentas importantes para auxiliar nessa investigação.
Caracterização citogenética e genômica de Adenium obesum e A. arabicum (Apocynaceae)
(2022-05-12) Rosa, Talita Angélica de Oliveira; Vanzela, André Luis Laforga; Gaeta, Marcos Letaif; Souza, Thaíssa Boldieri de; Caetano, Lúcia Giuliano
A família Apocynaceae compreende cerca de 550 gêneros e 5.100 espécies, com hábito variável e distribuição cosmopolita. O gênero Adenium é de origem africana e asiática, e suas espécies são conhecidas como “rosa do deserto”. Nove espécies de Adenium (A. oleifolium, A. swazicum, A. boehmianum, A. multiflorum, A. obesum, A. somalense, A. crispum, A. socotranum e A. arabicum) são usadas para fins ornamentais e farmacológicos, mas, apesar da exploração comercial ser recente, o crescimento no mercado floricultor é grande. Além de ser uma planta exuberante com caules distintos e esculturais, apresentam flores com uma ampla diversidade de cores e formas. Apesar do crescente investimento na cadeia produtiva das rosas do deserto, informações básicas sobre a genética do grupo são escassas. Dados de número e morfologia cromossômica, organização dos cariótipos, padrões de distribuição de bandas heterocromáticas, sítios de DNA ribossômicos e estimativas do conteúdo de DNA nuclear são importantes para entender a evolução de grupos vegetais e a organização sistemática das plantas. Assim, a carência no emprego dessas ferramentas em gêneros botânicos como Adenium, tem limitado nossa compreensão sobre a evolução desses genomas. Nesse sentido, o presente trabalho agrega conhecimento citogenômico ao comparar duas espécies que diferem quanto ao nível de ploidia. A análise citogenética mostrou cariótipos com predominância de cromossomos meta e submetacêntricos, 2n=2x=22 (11 m + 11 sm) em A. obesum e 2n=2 x=44 (40 m + 4 sm) em A. arabicum, com genomas variando de 2C=2,06 pg em A. obesum a 2C=2,91 em A. arabicum. Há uma predominância de bandas DAPI+ (ricas em AT) na região proximal dos cromossomos, e bandas CMA+ (ricas em GC) nas regiões terminais. Em intérfase os cromocentros concentraram bandas ricas em AT (DAPI+), sempre com bandas ricas em GC (CMA+) posicionadas na periferia dos cromocentros. A espécie diploide A. obesum apresenta quatro sítios de DNAr, enquanto a poliploide A. arabicum apresenta oito sítios, localizados na fração terminal dos cromossomos. Os sítios de DNAr estão co-localizados em blocos ricos em GC (CMA+). As análises sugerem que, apesar da poliploidia, houve redução no conteúdo de DNA de A. arabicum, considerando o conteúdo de DNA no complemento monoploide, apesar de que o perfil de bandas CMA/DAPI em A. obesum e A. arabicum tenham sido relativamente similares.
Efeitos antiproliferativos da alfa tomatina em cultura 3D e avaliação na migração celular em células HT 29
(2022-03-18) Aguiar, Amanda Passuello de; Mantovani, Mário Sérgio; Maistro, Edson Luis; Oliveira, Rodrigo Juliano
A α-tomatina é um metabólito secundário extraído do tomate (Solanum lycopersicum) que possui propriedade antitumoral, anti-inflamatória, fungicida, imunoreguladora e bactericida. No presente trabalho foram realizados testes in vitro, com o intuito de avaliar a atividade antiproliferativa da α-tomatina, principalmente em esferoides de células da linhagem HT-29. Em monocamada avaliamos a citotoxicidade da αtomatina e sua capacidade de inibir migração celular. Já nos ensaios em esferoides (3D), avaliamos a capacidade antiproliferativa (alterações no volume de esferoides, formação de colônias, alterações no ciclo celular e indução de morte celular por apoptose) e genotóxica da α-tomatina. Para compreender esses efeitos, analisamos a expressão de mRNA de genes envolvidos nos processos de morte celular, estresse oxidativo e de reticulo, danos no DNA, autofagia e regulação do ciclo celular. A αtomatina foi citotóxica para as células HT-29, apresentando um IC50 calculado em 17,19μM. O composto foi capaz de inibir a migração celular e a formação de novas colônias, além de atrasar o crescimento dos esferoides em 24 horas. No entanto, não foram observadas alterações no ciclo celular, tampouco na indução de danos no DNA e morte celular apoptótica. A α-tomatina foi capaz de alterar a expressão de mRNA dos genes CDKN1A (7,81x), C-MYC (4,36x), BBC3 (4,5x), CASP8 (6,53x), TP53 (2,28x), BIRC5 (4,14x), PARP1 (7,69x), BECN1 (9,43x) e H2AFX (83,33x). Assim, nossos achados revelam que a utilização do sistema de cultura 3D como metodologia é uma ferramenta importante no desenvolvimento de novas drogas e que a α-tomatina atua em vias moleculares importantes, podendo ser considerada uma candidata no desenvolvimento de novos quimioterápicos.
Diversidade de Aspergillus seção Circumdati isolados no Brasil
(2022-06-01) Moreira, Jeferson Henrique; Fungaro, Maria Helena Pelegrinelli; Ferreira, Dhiego Gomes; Villas Boas, Laurival Antônio
Neste trabalho, a diversidade de espécies de uma coleção de isolados brasileiros de Aspergillus seção Circumdati obtidos de grãos de café (Coffea arábica e Coffea canephora), erva-mate (Ilex paraguariensis St. Hil.) e pimenta-preta (Piper nigrum L.), foi investigada por meio da análise de sequencias parciais de uma parte do gene que codifica para calmodulina (CaM) e para beta-tubulina (BenA), isoladamente e concatenadas. Quatro espécies de Aspergillus seção Circumdati foram identificadas, sendo A. pallidofulvus a espécie mais frequente e também a única presente em todos os substratos. A. westerdijkiae foi a segunda espécie mais prevalente e com maior incidência em grãos de café. A. ochraceus e A. steynii foram raros, com a primeira ocorrendo apenas em pimenta-preta e a segunda restrita ao café. Dentre os quatros isolados encontrados, apenas Aspergillus pallidofulvus não foi reconhecido na literatura como produtor de ocratoxina A, que é uma substância tóxica capaz de causar patologias mediante a ingestão oral. Os isolados também foram submetidos à amplificação parcial do gene que codifica a segunda maior subunidade da RNA polimerase II (RPB2), visando ampliar a disponibilidade de sequências desse gene em banco de dados e analisar seu potencial para o estabelecimento de relações filogenéticas de Aspergillus seção Circumdati. Dentre as sequencias de RPB2 dos isolados de A. pallidofulvus foi possível identificar a formação de dois grupos suportados por alto valor de bootstrap, entretanto o mesmo não foi suportado pelos outros genes analisados. A análise de caracteres morfológicos entre os representes dos dois grupos não revelou diferenças significativas para caracteriza-los como espécies distintas.
Estudo da associação de polimorfismos em genes de vias de morte, sobrevida e proliferação celular com recidiva bioquímica do câncer de próstata
(2022-02-23) Furini, Hector Hugo; Cólus, Ilce Mara de Syllos; Vitiello, Glauco Akelinghton Freire; Serpeloni, Juliana Mara; Guembarovski, Roberta Losi
O câncer de próstata (CaP) é a segunda neoplasia que mais acomete homens no Brasil. Indivíduos são submetidos a triagem para essa doença, como a dosagem do antígeno prostático específico (PSA) e o toque retal. Nos últimos anos tem se intensificado a pesquisa por novos biomarcadores com maior potencial prognóstico para o CaP. O objetivo deste estudo foi avaliar variantes genéticas e um painel genético combinado dessas variantes com a presença de recidiva bioquímica em pacientes submetidos a prostatectomia com, em média, 7 anos de seguimento. Este foi um estudo de coorte, no qual participaram 197 pacientes diagnosticados com CaP. Foram analisadas 13 variantes: rs2279115 (BCL-2), rs26677604 (CASP3), rs1052571 (CASP9), rs11781886 (NKX3-1), rs2735343 (PTEN), rs2494750 (AKT1), rs2699887 (PI3KCA), rs3195676 (AMACR), rs17302090 (AR), rs2536 (mTOR), rs1695 (GSTP1), rs2308321 (MGMT) e rs1544410 (VDR). As variantes foram combinadas em painéis pela sua função, sendo que quatro vias principais foram definidas: morte celular, sobrevida celular, receptores de crescimento e metabolismo. A genotipagem dos pacientes foi realizada pela reação em cadeia da polimerase (qPCR). Como resultados, o alelo raro (G) do rs2308321 (gene MGMT) foi associado ao maior risco de recidiva (p = 0,036) quando comparado ao alelo A no modelo alélico. Essa variante ocorre em um éxon do gene, e tem potencial para afetar a funcionalidade da proteína no reparo do DNA. Dos painéis de variantes analisadas, contudo, não observamos associação com a recidiva. No presente estudo observamos que a variante do gene MGMT pode afetar a recidiva bioquímica de pacientes com CaP.

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