02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecular
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Item Ação quimioprotetora do micronutriente Selênio em células HepG2 : avaliação da expressão de genes de estresse celular induzido por H2O2Zanelatto, Leonardo Campos; Mantovani, Mário Sérgio [Orientador]; Almeida, Fernanda Simões de; Oliveira, Rodrigo JulianoResumo: Dentre diferentes agentes analisados quanto ao potencial quimioprotetor para o câncer, os componentes da dieta são os mais bem avaliados Tais estudos apresentam evidências de que os alimentos fornecem substâncias bioativas que podem alterar a expressão gênica A atividade antioxidante do selênio parece ser responsável pela sua eficácia no tratamento de doenças que se correlacionam ao estresse celular Devido a tais aspectos, têm crescido o interesse pela investigação dos papéis de diferentes compostos de selênio como agente terapêutico em diversas doenças crônicas degenerativas, tais como os cânceres O presente estudo avaliou a ação moduladora/quimioprotetora da L-(+)-Selenometionina (SeMet) em células HepG2 frente ao estresse celular induzido pelo H2O2 por meio do ensaio MTT, do ensaio do cometa e da expressão gênica por RT-qPCR de genes relacionado ao estresse oxidativo (GPX1, SOD, CATALASE) de retículo endoplasmático (GADD153, ERN1, TRAF2) e de apoptose (CASP9) No ensaio MTT, a SeMet a 5, 1, 25 e 5 ng/mL apresentaram uma ação citoprotetora contra os danos causados por H2O2, enquanto que as concentrações mais elevadas (1 e 2 ng/mL) aumentaram o efeito citotóxico causado pelo H2O2 No ensaio do cometa, foi verificado que a concentração de 5 ng/mL no tratamento associado foi capaz de diminuir o efeito genotóxico provocado pelo peróxido de hidrogênio, porém o mesmo não ocorreu na concentração de 5 ng/mL No RT-qPCR, de forma semelhante aos resultados encontrados no cometa, observou-se que a SeMet a 5 ng/mL modulou os genes testados, mostrando um efeito antioxidante e antiapoptótico Em contrapartida, na concentração de 5 ng/mL a SeMet foi incapaz de modular os genes para a quimioproteção, por vezes perfazendo um efeito tóxico às células Esses resultados sugerem que a SeMet é capaz de modular positivamente os genes de estresse oxidativo e de retículo endoplasmático, provocando um efeito quimioprotetor e antioxidante frente ao estresse causado pelo H2O2 e pode ser uma alternativa na medicina preventivaItem Alterações celulares induzidas por tratamento com selenito de sódio em linhagem HaCaT (não-tumoral)Bonfim, Natanael Endrew Souto Maior Torres; Mantovani, Mário Sérgio [Orientador]Resumo: Diversos estudos indicam o selenito de sódio (uma forma inorgânica do micronutriente selênio) como um composto com potencial para o tratamento do câncer Análises em linhagens de células tumorais têm demonstrado a ação apoptótica, anti-carcinogênica e quimiopreventiva deste composto No entanto, o seu mecanismo de ação em linhagens de células não-tumorais ainda é pouco compreendido, sendo este, um importante requisito para o desenvolvimento de novas drogas As células de linhagem não-tumoral de queratinócitos –HaCat, têm se mostrado um excelente modelo para estudos toxicológicos Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o potencial citotóxico (ensaio do MTT), a genotoxicidade (ensaio do cometa) e o mecanismo de ação (expressão gênica por qRT-PCR) do selenito de sódio em células HaCat, e analisar os seus efeitos na membrana celular, interferência no ciclo celular e indução de apoptose por citometria de fluxo Os resultados demonstram que o tratamento com selenito de sódio por 24h de exposição apresentou citotóxicidade a partir da concentração de 1µM, apresentando alterações no padrão morfológico das células com o aparecimento de grânulos citoplasmáticos, porém não apresentou efeito genotóxico Os dados obtidos por meio da citometria de fluxo revelaram que o selenito de sódio foi indutor de danos na membrana celular, de apoptose, e interfere no ciclo celular Em 12h de tratamento com 1 µM do selenito de sódio, notou-se redução significativa na expressão dos genes mTOR e ATR e um aumento na expressão do gene PUMA em relação ao controle Entretanto, não foi encontrado alteração significativa na expressão das caspases (CASP 3, CASP 7, CASP 8 e CASP 9) bem como dos genes PARP 1, BIRC 5, BECN 1 e c-MYC, o que indica que o selenito de sódio induz a apoptose por mecanismo independente de caspases em células HaCat Além disso, os genes analisados relacionados ao estresse oxidativo (CATB, GPX 1 e SOD 1), e os demais envolvidos no dano e reparo do DNA (ATM, GADD 45A, H2AX e MDM 2) e no ciclo celular (CCNA 1, CCNB 1, CCNB 2, CCND 1, CHK 1, CHK 2, p53 e p21) não apresentaram alteração significativa quando comparados com o controle Através da análise de cinética celular em tempo real notou-se que o selenito de sódio interfere na proliferação de queratinócitos por, pelo menos, 72h após o tratamento Com base nos efeitos relatados, pode-se inferir que o selenito de sódio apresenta um efeito tóxico para as células não-tumorais em concentrações que são semelhantes a testes em linhagens células tumorais, alterando o padrão morfológico e a curva de proliferação celular, modulando o padrão de expressão gênica induzindo a célula à apoptose mediado pelo PUMAItem Análise cariotípica em espécies dos gêneros Solanum, Lycianthes e VassobiaRego, Letícia do Nascimento Andrade de Almeida; Vanzela, André Luis Laforga [Orientador]; Dias, Ana Lúcia; Ferreira, Maria Angélica Maciel MartinhoResumo: O gênero Solanum possui cerca de 14 espécies arbóreo-arbustivas e trepadeiras, encontradas preferencialmente nas regiões tropicais, algumas com interesse econômico, como a batata Em relação às características citogenéticas, este grupo é interessante devido ao fato dos cariótipos serem bastante conservados em número e forma dos cromossomos, com diversidade nos DNAs repetitivos O objetivo deste estudo foi caracterizar espécies de Solanum e duas espécies de gêneros próximos, Lycianthes australe e Vassobia breviflora, utilizando parâmetros citogenéticos (coloração convencional, bandamento C-CMA3/DAPI e FISH com sondas DNAr 45S e 5S) Foi observado que todas as espécies apresentaram 2n = 24, confirmando a contagem para a maioria das espécies estudadas aqui Para Solanum scuticum, S gemellum, S amygdalifolium e Lycianthes australe a contagem foi inédita Todas as espécies apresentaram núcleos arreticulados com condensação profásica proximal e pouca variação na simetria cariotípica, sendo que S corymbiflorum mostrou cromossomos aproximadamente três vezes maiores em relação às outras espécies Regiões de heterocromatina ricas em GC (banda C-CMA3 +) foram encontradas na região terminal de todos os cromossomos de algumas espécies de Solanum Na maioria das espécies, incluindo as dos gêneros próximos, apenas um par foi marcado, enquanto em S corymbiflorum 2 pares foram marcados Regiões de heterocromatina ricas em AT (banda C-DAPI+) foram evidenciadas nas regiões centroméricas de todos os cromossomos em L australe e região centromérica dos dois maiores pares em S amygdalifolium Sítios de DNAr 45S coincidentes com banda C-CMA3 + (satélites) foram vistos em apenas um par, havendo variação no par portador No entanto, S corymbiflorum apresentou dois pares cromossômicos com DNAr 45S A FISH com DNAr 5S mostrou sinais na região pericentromérica de um par cromossômico, geralmente nos braços curtos dos menores cromossomos de cada complemento, com exceção de S trachytrichium que apresentou dois pares marcados Os resultados indicam que os mecanismos de diferenciação cariotípica envolvem mudanças nos pares portadores dos sítios de DNAr, posição e número de bandas ricas em GC e AT, bem como alterações na forma e no tamanho dos cromossomos e cariótipos Os resultados em S corymbiflorum, que já fora considerada Cyphomandra corymbiflora, podem sugerir que os gêneros Cyphomandra e Solanum representam dois grupos distintos, ao contrário do que sugerem alguns taxonomistas, quando consideram estes um único grupo taxonômicoItem Análise citogenética comparativa de diferentes populações de Rhamdia quelen (Siluriformes, Heptapteridae)Moraes, Vivian Patrícia Oliveira de; Dias, Ana Lúcia [Orientador]; Giuliano-Caetano, Lúcia; Fenocchio, Alberto SérgioResumo: O presente trabalho apresenta dados citogenéticos obtidos em 29 exemplares de Rhamdia quelen de cinco diferentes localidades: Rio Água dos Patos, Iepê/SP, Rio Água das Pedras, Londrina/PR, Rio Taquari, Jataizinho/PR, Planalto da Bodoquena/MS e uma Piscicultura localizada em Timbó/SC Todos os indivíduos apresentaram 2n = 58, fórmula cariotípica de 36 m +16 sm + 6 st e NF = 116 Em 26 exemplares foi observada a presença de 1 a 2 cromossomos B de tamanho médio, com variação tanto inter quanto intraindividual A banda C revelou estes cromossomos, totalmente heterocromáticos em exemplares dos rios Água dos Patos, Água das Pedras e Taquari, parcialmente heterocromáticos nos exemplares da Piscicultura e eucromáticos nos indivíduos do Planalto da Bodoquena A NOR foi detectada na região terminal do braço curto do par 28 (st) em exemplares de Água dos Patos, Água das Pedras e Piscicultura, sendo coincidentes com a constrição secundária; nos indivíduos do Rio Taquari a NOR localizou-se no par 23 (sm), apresentando heteromorfismo entre os cromossomos homólogos, e nos exemplares da Bodoquena, no par 2 (sm) A banda C revelou a NOR heterocromática em todos os exemplares, sendo que para os cromossomos do complemento normal em Água dos Patos, Água das Pedras, rio Taquari e Piscicultura foram visualizadas heterocromatina nas regiões terminais de um ou ambos os braços cromossômicos; na população do Planalto da Bodoquena, além destas marcações, observou-se o par 2(m) com três marcações heterocromáticas, sendo duas terminais e uma pericentromérica, sendo muito mais evidente em um dos cromossomos homólogos A hibridação in situ com sonda de DNAr 18S foi realizada nos exemplares da piscicultura, sendo confirmado um par de cromossomos (par 28) portador de cístrons ribossômicos O tratamento com o fluorocromo CMA3 revelou apenas a NOR rica em pares GC e o DAPI não apresentou nenhuma marcação, em todas as populações de R quelen A associação de BC+CMA3 apresentou resultado igual ao do tratamento simples com CMA3 BC+DAPI foi realizado satisfatoriamente em 3 populações, Água das Pedras, Água dos Patos e Bodoquena sendo observados alguns cromossomos com marcações fluorescentes, no entanto nesta última localidade, ficou evidenciado um cromossomo muito mais fluorescente que os demais, provavelmente o cromossomo 2(m), indicando que nestas populações a heterocromatina apresenta algumas regiões ricas em AT Os dados apresentados mostram uma evolução cariotípica mais conservativa no gênero Rhamdia, revelando algumas características próprias na população do Planalto da Bodoquena/MSItem Análise citogenética de espécies do gênero Hypostomus (Loricariidae; Hypostominae) das bacias do rio Contas e Recôncavo Sul/BahiaBitencourt, Jamille de Araújo; Dias, Ana Lúcia [Orientador]; Bertollo, Luiz Antônio Carlos; Vanzela, André Luís Laforga; Affonso, Paulo Roberto Antunes de Mello [Coorientador]Resumo: A fim de ampliar os dados citogenéticos da ictiofauna das bacias do Atlântico leste, análises cromossômicas foram realizadas em populações de Hypostomus aff unae e Hypostomus cf wuchereri (Loricariidae, Hypostominae) de bacias costeiras da Bahia, Nordeste do Brasil Todos os exemplares compartilharam o número modal de 2n=76 e uma RON simples localizada no segundo par metacêntrico Contudo, foram detectadas fórmulas cariotípicas exclusivas de H aff unae para cada localidade amostrada ao longo da bacia do rio de Contas (rios de Contas, Preto do Costa, Preto do Criciúma e Oricó) Adicionalmente, as populações de ambas as espécies também foram diferenciadas pela microestrutura cariotípica após bandamento C, coloração com fluorocromos e digestão com as enzimas de restrição Alu I, Bam HI, Hae III e Dde I As populações de H aff unae dos rios de Contas e Preto do Costa apresentaram blocos heterocromáticos terminais e intersticiais ricos em pares de bases AT na maioria dos cromossomos acrocêntricos, diferenciando-se quanto a posição e pares envolvidos Já os espécimes da população do rio Preto do Criciúma apresentaram marcações DAPI positivas (mais evidentes), nas regiões intersticiais, enquanto que na população do rio Oricó, os blocos heterocromáticos intersticiais e terminais foram observados corados igualmente por CMA3 e DAPI Apenas esta última população não apresentou heterocromatina associada à região organizadora de nucléolo, porém, todas elas apresentaram as RONs ricas em bases GC Em relação às duas populações de H cf wuchereri, diferenças na microestrutura também foram igualmente assinaladas A população do rio Una (bacia do Recôncavo Sul) apresentou grandes blocos heterocromáticos terminais, compostos por sítios intercalados ricos em AT e GC, enquanto que a população do rio Mutum (bacia do rio de Contas) apresentou regiões de heterocromatina intersticiais e terminais menos evidentes, ricas em AT Em ambas, as RONs apresentaram-se CMA3 positivas, porém, não foi evidenciada heterocromatina associada à essa região Os resultados obtidos com a digestão enzimática revelaram grande heterogeneidade entre as populações das duas espécies analisadas e permitiram a caracterização de diferentes famílias de DNA repetitivo, além de padrões específicos gerados nas regiões eucromáticas Os dados do presente trabalho demonstram que H aff unae e H cf wuchereri apresentam uma evolução cariotípica divergente entre as populações analisadas, caracterizando distintas unidades evolutivasItem Análise citogenética em cinco espécies de Ctenidae (Araneae)Rincão, Matheus Pires; Dias, Ana Lúcia [Orientador]; Rosa, Renata da; Araujo, Douglas deResumo: As aranhas da família Ctenidae são predadoras de artrópodes, anfíbios, peixes e outras espécies de aranhas São abundantes nos ambientes florestais do Brasil e possuem algumas espécies de importância médica, como as aranhas do gênero Phoneutria, que são consideradas algumas das aranhas mais perigosas do mundo A principal característica que distingue Ctenidae, das demais famílias de aranhas, é o padrão de disposição dos olhos, do tipo 2-4-2 A ordem Araneae possui mais de 45 mil espécies, contudo, a família Ctenidae possui apenas 53 espécies descritas, divididas em 5 subfamílias (Acantheinae, Acanthocteninae, Calocteninae, Cteninnae e Viridasiinae) e 41 gêneros Das quais oito espécies, incluindo três das cinco famílias, foram cariotipadas até o momento A filogenia da família Ctenidae é controversa para diversos gêneros, principalmente Ctenus, considerado por diversos autores como sendo polifilético A melhor maneira de se conhecer as relações evolutivas entre as espécies é uma análise integrada entre diferentes linhas de conhecimento, e a citogenética é uma forte ferramenta para investigar o caminho carioevolutivo percorrido pelas espécies No presente estudo foram analisadas cinco espécies (Ctenus ornatus, Ctenus medius, Phoneutria nigriventer, Viracucha andicola e Enoploctenus cyclothorax), coletadas em quatro diferentes localidades, nos estados do Paraná e São Paulo, Brasil Foram feitas análises mitóticas, para se estabelecer o número diplóide das espécies, e análises meióticas, a fim de conhecer o comportamento dos cromossomos durante a formação dos gametas Foi observado um 2n=28 (26+X1X2) para os machos de todas as espécies, exceto V andicola que apresentou um 2n=29 (26+X1X2X3), nos machos As análises meióticas permitiram observar que os cromossomos sexuais se mantiveram heteropicnóticos positivos, em relação aos autossomos, durante o início da primeira divisão meiótica, e mostraram um comportamento de associação em paralelo, provavelmente auxiliando na correta segregação desses cromossomos durante a divisão celular, em machos O bandamento-C corado com fluorocromos base-específicos CMA3 e DAPI revelou heterocromatina pericentromérica GC rica (CMA3+) em todas as espécies, porém C ornatus apresentou também bandas intersticiais, e na população de Ubatuba-SP houve um acúmulo de heterocromatina GC rica em um dos bivalentes A FISH permitiu identificar que esse bivalente correspondia ao par cromossômico portador dos sítios de DNAr 18S Todas as espécies analisadas apresentaram um bivalente portador de sítios de DNAr 18S, exceto P nigriventer, que apresentou três bivalentes portadores, embora em um desses bivalentes apenas um dos homólogos se mostrou portador do sítio Viracucha andicola deste estudo mostrou diferenças no número de RONs, em relação aos dados descritos na literatura, que apresentou um padrão múltiplo de AgRONs, indicando que pode estar ocorrendo uma divergência interpopulacional, que se justifica levando em conta o bioma extremamente fragmentado em que a espécie se encontra, associado com o isolamento geográfico entre as populações O presente estudo trouxe também pela primeira vez a descrição cariotípica para duas espécies, Ctenus medius e Enoploctenus cyclothorax, sendo esta última o primeiro registro para a subfamília, Acantheinae, fornecendo importantes contribuições para o conhecimento cariotípico da CtenidaeItem Análise da expressão de fatores de transcrição relacionados com tolerância à seca em raízes de sojaPereira, Selma dos Santos; Nepomuceno, Alexandre Lima [Orientador]; Vieira, Luiz Gonzaga Esteves; Marcelino, Francismar Corrêa; Marcelino, Francismar Corrêa [Coorientadora]Resumo: Eventos de seca têm aumentado nas últimas décadas, provavelmente associados às mudanças climáticas decorrentes do aquecimento do planeta Atualmente as perdas provocadas pelo déficit hídrico constituem um problema grave na produção de grãos Centenas de genes estão envolvidos na resposta a estresses abióticos e a análise da expressão destes genes demonstra a existência de diversos sistemas regulatórios estresses-responsivos Os fatores de transcrição interagindo nas complexas rotas metabólicas de resposta aos estresses ambientais induzem alterações nos níveis de expressão de alguns genes, que, em muitos casos, proporcionam o aumento da tolerância a esses estresses Em trabalho anterior utilizando a técnica de microarranjos de cDNA, foram encontrados 145 genes diferencialmente expressos em condição de seca, os quais foram identificados e categorizados de acordo com suas funções biológicas Dentre as categorias, os fatores de transcrição, normalmente envolvidos na regulação das respostas gênicas, foram escolhidos para terem seus níveis de expressão quantificados pela técnica de PCR em Tempo Real Foram selecionados os fatores de transcrição bZIP5, C2H2, MYBJ7 e NAC2, que quando tem suas seqüências de aminoácidos alinhadas com as de outros vegetais, utilizando o programa Clustalx, apresentaram os domínios e/ou regiões conservadas que os caracterizam como pertencentes às famílias bZIP, C2H2, MYB e NAC respectivamente Assim, o objetivo deste trabalho foi quantificar a expressão gênica dos fatores de transcrição, bZIP5, C2H2, MYBJ7 e NAC2, identificados como diferencialmente expressos no estudo com microarranjos de cDNA, através da técnica de PCR em tempo real Deste modo, um experimento foi realizado em hidroponia com as cultivares de soja MG/BR46 (cultivar Conquista) - tolerante a períodos de seca, e BR16 - padrão de sensibilidade à seca Quando atingiram o estagio V3 de desenvolvimento, as plantas foram submetidas a estresses de déficit hídrico, sendo aplicados os tratamentos: tempo (controle), 25 mim, 5 mim, 75 mim e 1 min Para a extração de RNA total e síntese de cDNA foram coletadas raízes de cada tratamento Os resultados da quantificação relativa mostraram que todos os fatores de transcrição avaliados tiveram sua expressão aumentada quando amostras de plantas submetidas ao estresse hídrico foram comparadas com plantas utilizadas como controle Estes dados confirmam que tais fatores de transcrição participam de rotas metabólicas importantes de resposta à seca, como já relatado em trabalhos anteriores e na literatura Deste modo, passos futuros para este estudo serão a construção de cassetes de superexpressão ou silenciamento visando a obtenção de cultives de soja mais tolerantes à secaItem Análise da expressão de genes que codificam enzimas antioxidantes em citrumeleiro 'Swingle' com alto acúmulo de prolina submetido ao déficit hídricoCarvalho, Kenia de; Vieira, Luiz Gonzaga Esteves [Orientador]; Nepomuceno, Alexandre Lima; Pereira, Luiz Filipe ProtasioResumo: Condições de estresse abiótico levam ao acúmulo de espécies reativas de oxigênio com o concomitante aumento da atividade de enzimas antioxidantes em plantas Estudos anteriores mostraram que aplicações exógenas de prolina amenizam os efeitos deletérios causados pelo estresse oxidativo devido à sua habilidade de aumentar a atividade de enzimas antioxidantes Entretanto, não existem relatos dos efeitos da acumulação endógena de prolina na expressão de genes que codificam enzimas antioxidantes em condições normais de suprimento de água e em resposta ao déficit hídrico O objetivo deste trabalho foi analisar a expressão relativa de transcritos de genes de quatro enzimas antioxidantes (Ascorbato peroxidase - APX, Catalase - CAT, Superóxido dismutase - SOD e Glutationa redutase - GR) em plantas transgênicas de citrumeleiro Swingle com alto acúmulo de prolina submetido ao déficit hídrico Primeiramente, para a identificação dos genes apropriados para utilizar como controle interno em tratamentos experimentais em condições de estresse hídrico por PCR em Tempo Real foi analisada a expressão de sete genes housekeeping funcionalmente distintos (ciclofilina - CYP, catepsina - CtP, actina - ACT, glucose-6-fosfato dehidrogenase - GAPDH, fator de alongamento 1a - EF1a, ß-tubulina - ß-TUB e ADP- fator de ribosilação – ADP) A estabilidade de expressão destes genes foi calculada através do software geNorm, a partir do qual foi verificado que o gene EF1a é o mais adequado A partir do banco de dados HarvEST Citrus foram obtidas sequencias de isoformas altamente expressas dos genes APX (ascorbato peroxidases APX1 e APX2 citosólicas e APXCL de cloroplasto), CAT (catalases CAT1 e CAT2), GR (glutationa redutases citosólica e GRCL de cloroplasto) e SOD (superóxido dismutases Cu/ZnSOD1 e Cu/ZnSOD2 citosólicas, Cu/ZnSODCL de cloroplasto, MnSOD mitocondrial e FeSOD cloroplasto) Plantas controle não transformadas e transgênicas com o gene mutante P5CSF129A foram submetidas à deficiência hídrica até atingirem a condição de estresse severo, e posteriormente recuperadas A coleta de folhas foi baseada em valores semelhantes de potencial total de água: condições normais de suprimento de água (?t = -1,3 MPa), estresse moderado (?t= -2,3 a -2,5 MPa), estresse severo (?t= -3,8 a -3,9 MPa) e recuperado (24h após irrigação; ?t= -1,3 a -1,9 MPa) A alta quantidade de prolina presente em plantas de citrumeleiro Swingle expressando o gene P5CSF129A induziu maior atividade transcricional da maioria da isoformas analisadas em condições normais de suprimento de água Nesta condição, as isoformas cujo aumento de expressão foi mais significativo foram as APX1, APXCL, CuZnSOD2 e CAT2 Durante o período de déficit hídrico a prolina apresentou maior influência sobre a expressão das isoformas APX1, APX2, APXCL, MnSOD e GRCL, com a elevação nos níveis de transcritos Já durante a recuperação do estresse, as isoformas cuja expressão foi aumentada em plantas transgênicas foram APX1, CAT1, CuZnSODCL e GRCL Estes dados demonstram que o alto acúmulo de prolina em plantas transgênicas de citrumeleiro Swingle alterou a transcrição de genes de enzimas antioxidantes tanto em condições normais de suprimento de água como sob déficit hídrico Os efeitos da prolina na atividade de enzimas antioxidantes, como APX, CAT e SOD já foram objeto de vários estudos, porém são escassos os trabalhos que mostram a influência da alta concentração intracelular deste aminoácido na expressão dos genes que codificam estas enzimas Os resultados aqui relatados também fornecem informações inéditas para o entendimento da regulação de processos biológicos em resposta a estresses abióticos, mostrando que a prolina pode atuar como uma molécula regulatória/sinalizadora capaz de alterar a expressão de genes envolvidos nas respostas das plantas a condições de déficit hídricoItem Análise da metilação dos genes GSTP1 e MGMT e de polimorfismos dos genes GSTP1, GSTT1, GSTM1, CYP1A1 e MGMT como marcadores moleculares do câncer de bexigaLengert, André van Helvoort; Cólus, Ilce Mara de Syllos [Orientador]; Reis, Patrícia Pintor dos; Losi-Guembarovski, RobertaResumo: O câncer de bexiga é o segundo tipo de tumor mais frequente encontrado no sistema urinário No Brasil, segundo os dados mais recentes do Instituto Nacional de Câncer (INCA), a estimativa para o ano de 212 é de 89 novos casos O diagnóstico precoce, a estimativa de risco e de progressão deste tumor possuem um impacto significativo no prognóstico da doença Embora existam alguns marcadores moleculares para este tumor, a acurácia obtida ainda não é a ideal Estudos que correlacionam diferentes polimorfismos, metilação do DNA e níveis de expressão gênica para o câncer de bexiga são escassos na literatura e há necessidade de expandir tais estudos na busca de marcadores moleculares mais eficientes, tanto de risco como de progressão para esta doença No presente trabalho, foram investigados genes que podem ter função relevante na carcinogênese da bexiga Para isto, foram realizadas análises de variantes alélicas polimórficas através de diferentes técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) em 129 pacientes com carcinoma urotelial de bexiga e 129 indivíduos controle pareados Os polimorfismos investigados foram: CYP1A1(rs148943; Ile462Val), MGMT(rs238321; Ile143Val e rs238327; Lys178Arg), GSTP1(rs1695; Ile15Val) e as deleções dos genes GSTM1 e GSTT1 Além disso, foi realizada a análise do perfil de metilação da região promotora dos genes GSTP1 e MGMT no DNA genômico de 39 amostras de tecido tumoral de bexiga e 4 amostras de tecido normal O DNA foi extraído, modificado pelo bissulfito de sódio e a técnica de Curva de Melting de Alta Resolução (MS-HRM) foi utilizada Inicialmente observou-se um desequilíbrio perfeito de ligação entre os polimorfismos rs238321 e rs238327 do gene MGMT, sendo que o primeiro possui potencial como tagSNP na população brasileira Além disso, o genótipo nulo do gene GSTT1 demonstrou associação com um aumento na suscetibilidade ao câncer de bexiga entre fumantes (OR=3,78; IC 95%=1,64-8,7) e entre indivíduos ocupacionalmente expostos a agroquímicos (OR=3,8; IC 95%=1,23-7,7) O polimorfismo rs148943 do gene CYP1A1 também apresentou associação com o câncer de bexiga entre indivíduos ocupacionalmente expostos a agroquímicos (OR=6,34; IC 95%=1,33-3,33) O genótipo raro do polimorfismo rs1695 do gene GSTP1 apresentou um efeito protetor ao câncer de bexiga entre fumantes (OR=,15; IC 95%=,3-,76) Os polimorfismos do gene MGMT e GSTM1 não apresentaram associação significativa com o câncer de bexiga em nenhuma das análises e nenhum dos polimorfismos apresentou associação com a progressão da doença Os níveis de metilação do gene GSTP1 ficaram em torno de % para todas as amostras analisadas, não sendo observada diferença significativa entre amostras tumorais e normais Já para o gene MGMT todas as amostras demonstraram um perfil de melting diferenciado em relação à curva padrão, indicando a presença de metilação heterogênea, entretanto, sem diferença significativa entre amostras tumorais e normais Os resultados da análise de metilação carecem de investigações adicionais para quantificar a metilação no gene MGMT e verificar seu potencial como biomarcador A associação do genótipo nulo do gene GSTT1 com o câncer de bexiga observada no presente estudo demonstra o potencial desta deleção como marcador de suscetibilidade para esta doençaItem Análise das respostas fisiológicas e da expressão diferencial de genes em soja submetida a déficit hídricoAmaral, Leidy Cristiane; Nepomuceno, Alexandre Lima [Orientador]; Abdelnoor, Ricardo Vilela; Marcelino, Francismar Corrêa; Rodrigues, Fabiana Aparecida [Coorientadora]Resumo: A soja (Glycine max (L) Merrill) é uma das culturas mais importantes do mundo, devido à crescente demanda mundial por alimentos e às novas aplicações na indústria de biocombustíveis e bioprodutos Nesse cenário o Brasil situa-se como o segundo maior produtor mundial com uma produção de 69,582 milhões de toneladas (safra 29/21) Entre os fatores que reduzem a produtividade das lavouras, a seca é um dos principais responsáveis por perdas na produção brasileira de soja Em situações de déficit hídrico, vários mecanismos são acionados pela planta para aumentar a tolerância à seca Conhecer esses mecanismos e como ocorre a regulação dos genes expressos em resposta à seca, é essencial na identificação de rotas metabólicas envolvidas nos processos de defesa, e, consequentemente, no desenvolvimento de estratégias moleculares para obtenção de plantas mais tolerantes Para prospectar genes expressos em condições de déficit hídrico, as cultivares de soja Embrapa 48 e BR 16 foram cultivadas em sistema hidropônico e utilizadas para construir bibliotecas de cDNA com base na técnica de Hibridização Subtrativa Supressiva Após a indução do déficit hídrico, as plantas foram avaliadas para verificar o efeito do estresse As análises de fotossíntese, condutância estomática, taxa de transpiração, concentração interna de CO2, eficiência do uso da água, entre outros parâmetros, mostraram que, apesar da cultivar Embrapa 48 apresentar um desempenho superior a BR 16, as alterações fisiológicas que ocorreram nas plantas durante a aplicação do déficit hídrico foram semelhantes para as duas cultivares, e que após 1 minutos de déficit hídrico a condição fisiológica avaliada foi significativamente modificada A partir das bibliotecas subtrativas sintetizadas usando o tecido foliar da cultivar BR 16 foram identificados o total de 5286 transcritos Após a classificação funcional, a busca por genes relacionados à resposta ao déficit hídrico revelou genes envolvidos na percepção e sinalização, transporte de água e solutos, proteção celular, fatores de transcrição, entre outros de grande importância no processo de tolerância ao déficit hídrico Esses resultados visam a descoberta de genes chaves envolvidos nas respostas das plantas à seca, auxiliando no desenvolvimento de cultivares mais tolerantes via melhoramento clássico e engenharia genéticaItem Análise das variantes polimórficas CYP1A1*2B, CYP1B1*2, CYP3A4*1B, GSTM1*0 e GSTT1*0 em pacientes portadores de carcinoma de próstataRodrigues, Iara Sant'ana; Cólus, Ilce Mara de Syllos [Orientador]; Poli-Frederico, Regina Célia; Vieira, Luiz Gonzaga EstevesResumo: O perfil de morbimortalidade por câncer de próstata tem se alterado nas ultimas décadas, configurando-se como um serio problema de saúde publica mundial Esta neoplasia e uma doença associada com a idade, com pico de incidência por volta da sétima década de vida e se constitui na segunda causa de morte por câncer em homens São múltiplos os fatores que contribuem para o seu desenvolvimento: dieta, suscetibilidade hereditária e alterações genéticas adquiridas Um dos fenômenos relevantes na suscetibilidade herdada e a presença de variantes polimórficas em genes envolvidos no metabolismo de drogas, que pode aumentar, reduzir ou inativar as enzimas por eles codificadas, interferindo no metabolismo de carcinogenos e hormônios andrógenos Para definir possiveis associações com o câncer de próstata, cinco variantes polimórficas (CYP1A1*2B, CYP1B1*2, CYP3A4*1B, GSTM1* e GSTT1*) foram estudadas em 17 pacientes que passaram por prostatectomia radical com confirmação histopatológica da doença Foram avaliados também 17 controles com níveis de PSA normais (<2ng/mL), pareados aos pacientes quanto a idade e hábitos tabagista e etilista O DNA do sangue periférico foi analisado através de PCR-alelo especifica para os genes CYP1A1 e CYP1B1, PCR-RFLP para o gene CYP3A4 e PCR Multiplex para os genes GSTT1 e GSTM1 O calculo da OR (Odds ratio) e do intervalo de confiança (IC=95%) foi utilizado no estudo de associação e os testes do Qui-Quadrado, Fisher e Mann-Whitney na avaliação dos parâmetros histopatológicos O estudo de associação caso-controle indicou ausência de associação positiva ou negativa para as seguintes variantes genéticas estudadas: CYP1A1*2B – OR=1,3, IC 95%= ,64-1,66; GSTM1* – OR= ,64, IC 95%=,42-,98; GSTT1* – OR= 1,3, IC 95%=,64-1,66 A analise estatistica apontou para uma associação positiva significativa das variantes CYP1B1*2 (OR=1,55, IC 95%=,98-2,47) e CYP3A4*1B (OR=1,51, IC 95%=,97-2,37) para o câncer de próstata, estando os resultados no limite da significância A análise combinada dos genótipos mostrou associação positiva significativa para as combinações das variantes CYP1A1*2B, CYP1B1*2 e CYP3A4*1B (OR=2,55, IC 95%=1,8-5,99) A analise dos parâmetros histopatológicos com os genótipos de suscetibilidade não detectou diferenças estatisticamente significativas, exceto em relação a variante CYP1A1*2B para invasão perineural (p=,382), a variante GSTT1*O isoladamente (p=,295) e em combinação com a variante GSTM1*O (p=,251) e a combinação dessas duas variantes de fase II com a variante CYP3A4*1B (p=,291), mostraram estatisticamente significativas para grau histológico Nossos resultados indicaram que algumas variantes polimórficas analisadas isoladamente ou em combinação podem influenciar no desenvolvimento e na progressão do câncer de próstataItem Análise de polimorfismo de nucleotídeo único nos genes CASP3, CASP9, BCL-2 e NKX3-1 em um estudo do tipo caso-controle na busca por marcadores de suscetibilidade e prognóstico para câncer de próstataSouza, Milene Roldão de; Cólus, Ilce Mara de Syllos [Orientador]; Antunes, Lusânia Maria Greggi; Losi-Guembarovski, RobertaResumo: Em decorrência da gravidade do câncer de próstata (CaP) e da falta de métodos diagnósticos precisos, a busca por novos marcadores moleculares que possam ser utilizados para suscetibilidade e prognóstico desta doença tem se intensificado, visando a implementação destes marcadores na prática clínica Polimorfismos em genes envolvidos no processo de apoptose BCL-2, CASP3 e CASP9, e o gene supressor tumoral NKX3-1 têm sido associados com o risco ou com proteção ao CaP O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo caso-controle, avaliando a possível associação das variantes alélicas dos polimorfismos rs2279115 (BCL-2), rs464763 (CASP3), rs152571 (CASP9) e rs11781886 (NKX3-1) com a suscetibilidade, prognóstico e progressão do CaP Amostras de sangue periférico foram obtidas de 283 pacientes que apresentaram confirmação histopatológica do CaP e seus controles pareados (PSA inferiores a 4 ng/mL) As genotipagens foram realizadas por PCR em tempo real usando sonda TaqMan® A associação entre a ocorrência de CaP com as variantes polimórficas foi calculada por Odds Ratio (OR) com intervalo de confiança de 95%, obtida por regressão logística multivariada dos dados Mostraram associação com a doença os genótipos CASP3 (CT+TT), CASP9 (GA+AA) e NKX3-1 (CC), bem como os genótipos combinados em pares BCL-2+NKX3-1 (CC+CC) e CASP3+NKX3-1 (CT+CC) A análise univariada dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) com os dados histopatológicos do tumor, indicou associação das variantes alélicas de BCL-2 (CA e/ou AA e/ou CA+AA) com extensão extracapsular, invasão de vesícula seminal, invasão perineural, bilateralidade e pior estadiamento do tumor, além de níveis elevados de PSA As variantes alélicas de NKX3-1 (CC e TC+CC) também apresentaram associação com bilateralidade, enquanto que genótipos de CASP3 (TT+TC) demonstraram associação com estadiamento tumoral Análise dos polimorfismos combinados em pares indicou associação entre os genótipos de BCL-2+CASP3 com extensão extracapsular (CA+CC, CA+CT e AA+CT), bilateralidade (CA+CC), estadiamento T3 e T4 (CA+CC, CA+CT e AA+CT) e níveis elevados de PSA (CA+CT e AA+CC), enquanto que genótipos de BCL-2+NKX3-1 mostraram associação com extensão extracapsular (CA+TC), bilateralidade (CA+TC e CC+CC) e estadiamento T3 e T4 (CA+CC) Os dados obtidos permitem inferir que o polimorfismo rs152571 do gene CASP9 parece conferir suscetibilidade ao CaP, enquanto que o rs2279115 do gene BCL-2, pior prognóstico aos pacientes Os polimorfismos avaliados dos genes CASP3 e NKX3-1 parecem conferir tanto suscetibilidade, quanto pior prognóstico, não apenas de forma isolada, mas também quando combinadosItem Análise de variantes alélicas de genes de reparo e expressão de genes relacionados com resistência à cisplatina em carcinoma bucalReis, Mariana Bisarro dos; Cólus, Ilce Mara de Syllos [Orientador]; Sofia, Silvia Helena; Poli-Frederico, Regina CéliaResumo: Este trabalho objetivou investigar a associação entre a presença de variantes alélicas nos genes XRCC1 e XRCC3 e a suscetibilidade ao câncer de boca e correlacionar os resultados dos testes genéticos com parâmetros histopatológicos Adicionalmente, implementar técnicas de análise de expressão gênica no laboratório de Mutagênese e Oncogenética da UEL pela realização de experimentos com uma linhagem celular de carcinoma bucal tratada com cisplatina, avaliando genes de reparo do DNA (ERCC1 e XPA) e de apoptose (BAX) A genotipagem das variantes genéticas foi realizada por PCR-RFLP em 15 pacientes com carcinoma bucal e 15 controles Os SNPs investigados foram Arg194Trp e Arg399Gln no gene XRCC1 e Thr241Met no gene XRCC3 Para a análise de expressão foi utilizada a linhagem SCC25 tratada com cisplatina na concentração de ,1 µM O RNA total foi extraído e a quantificação relativa foi realizada por PCR em Tempo Real A presença das variantes polimórficas de XRCC1 códon 194 (OR ,82, 95% IC ,44-1,51), códon 399 (OR ,94, 95% IC ,59-1,5) e XRCC3 (OR ,72; 95% IC ,45-1,16) não foram significativamente associadas com aumento de risco de câncer bucal isoladamente ou em combinações genotípicas Os genótipos variantes também não se mostraram associados a parâmetros histopatológicos: diferenciação tumoral, invasão de linfonodos e tamanho do tumor Na análise de expressão gênica, apenas o gene XPA mostrou expressão aumentada, indicando que pode conferir uma diminuição da sensibilidade à cisplatina da linhagem celular utilizada neste estudo Entretanto, os dados de expressão são preliminares e serão confirmados com análises adicionais, que também incluirão novos genes Nossos resultados sugerem ainda que variantes polimórficas nos genes XRCC1 e XRCC3 não constituem bons marcadores de suscetibilidade para carcinomas orais e também não estão associadas a estágios mais avançados do processo tumoralItem Análise dialélica e divergência genética entre populações de milho superdoceOliveira, Renato Gonçálves de; Ferreira, Josué Maldonado [Orientador]; Gonçalves, Leandro Simões Azeredo; Garbuglio, Deoclécio DomingosResumo: A identificação do potencial de populações base para o melhoramento individual e em cruzamentos é uma das fases mais importantes e determinantes para o sucesso de um programa de melhoramento genético Os objetivos foram determinar a capacidade combinatória de 1 populações de milho superdoce em um dialelo completo, identificar a existência de associação entre características de produtividade, estimar a divergência genética entre essas 1 populações utilizando marcadores SNP´s, identificar a existência de associação entre capacidade específica de combinação para características de produtividade e os índices de divergência genética Os 45 híbridos interpopulacionais e quatro testemunhas foram avaliados em blocos ao acaso com três repetições em três ambientes As características avaliadas foram produtividade de espigas com palha, produtividade de espigas sem palha, produtividade de grãos, número de fileira de grãos, diâmetro e comprimento de espigas, número de dias para o florescimento, altura de plantas e altura de espigas Houve efeito significativo de capacidade geral de combinação para todas as características avaliadas, não sendo observado efeito significativo para a capacidade específica de combinação apenas para altura de espiga Houve interação de capacidade geral de combinação e ambiente para as características de produtividade, número de fileiras, diâmetro e comprimento de espigas, não sendo observado efeito de interação capacidade de combinação específica e ambiente Também não houve efeito significativo do contraste entre a média geral das combinações híbridas e das testemunhas para as características de produtividade, evidenciando alto desempenho dos híbridos do dialelo As combinações mais promissoras são SD34xSD35 e SD36XSD37 para a obtenção de linhagens e formação de híbridos As populações SD34, SD35 e SD36 apresentam as melhores estimativas de capacidade geral de combinação e estão presentes nas combinações híbridas com melhor desempenho para as características de produtividade e de capacidade específica de combinação nos diferentes ambientes A produtividade de grãos está mais fortemente associada a produtividade de espiga sem palha, que a produtividade de espigas com palha Os melhores híbridos interpopulacionais foram obtidos pelo cruzamento entre diferentes agrupamentos pela correlação genômica de VanRaden Os grupamentos segundo a correlação genômica de VanRaden são eficientes para indicar as combinações híbridas superiores para produtividade com alta taxa de assertividade Existe maior associação entre as estimativas da capacidade específica de combinação e a correlação genômica de VanRaden do que entre a distância genética de Nei e capacidade específica de combinaçãoItem Análise dialélica entre linhagens S6 de milho superdoce em diferentes ambientes no norte do ParanáSilva, Maikon Guerith Baptistella da; Ferreira, Josué Maldonado [Orientador]; Teixeira, Flavia França; Garbuglio, Deoclécio DomingosResumo: O milho superdoce, devido ao acúmulo de açúcar nos grãos, apresenta um sabor adocicado, além de possuir alto valor nutricional A sua produção é destinada principalmente para as indústrias de conservas, entretanto, também pode ser utilizada para o consumo in natura na forma de milho verde Em programas de melhoramento de milho superdoce, além de obter as linhagens com elevado desempenho individuais para produção de sementes, também é necessário identificar combinações destas que permitam a síntese de híbridos de alta produtividade Os objetivos foram: determinar o potencial de dez linhagens S6 de milho superdoce, cruzamentos em esquema dialélico completo, por meio das estimativas de capacidade geral (CGC) e capacidade especifica de combinação (CEC); identificar as combinações híbridas com melhor potencial para exploração agronômico; identificar os híbridos com resistência às principais doenças foliares e determinar o tipo de ação gênica predominante de diferentes características importantes para milho superdoce Durante a safra 215/216, as 45 combinações híbridas, juntamente com as testemunhas Tropical Plus, Balu 1 e Balu 34, foram avaliadas em quatro ambientes, utilizando delineamento em blocos ao acaso com três repetições As características avaliadas foram: produtividade de espigas com e sem palha; diâmetro e comprimento de espigas; florescimento; altura de plantas e de espigas e notas de severidade a Mancha Branca, Ferrugem Polissora, Mancha de Turcicum e Ferrugem Branca As combinações H34, H35, H57, H59, H51, H79 e H71 apresentaram os melhores desempenhos, para produtividade de espigas com palha e sem palha para os diferentes ambientes, sendo que a primeira combinação se destacou também para diâmetro de espigas e a última combinação para precocidade e resistência para Ferrugem Branca Dentre estes híbridos com melhores produtividades, todos apresentaram notas de severidade para Mancha Branca, Ferrugem Polissora e Mancha de Turcicum na faixa de resistente a moderadamente resistente, exceto os híbridos H59 e H35 para Mancha de Turcicum, sendo classificados como moderadamente suscetíveis As linhagens L5 e L7 apresentaram as melhores estimativas de CGC para produtividade de espigas com palha e sem palha Quanto à redução da severidade das doenças, as linhagens L8, L1, L7 e L3 apresentaram as melhores estimativas de CGC para Mancha Branca, Ferrugem Polissora, Mancha de Turcicum e Ferrugem Branca, respectivamente As combinações H11, H34, H59, H79, e H71 apresentaram as maiores estimativas de CEC para produtividade de espigas com palha em todos os ambientes Houve correlação negativa entre produtividade de espigas sem palha e notas de severidade à Ferrugem Polissora para a segunda época do experimento em Londrina, e correlações positivas entre produtividade de espigas com palha e diâmetro e comprimento de espigas, e entre altura de planta e notas de severidade a Mancha de Turcicum Os efeitos não aditivos foram predominantes para as produtividades e comprimento de espigas, enquanto os efeitos aditivos foram mais importantes para diâmetro, altura da espiga, dias para o florescimento e para à resistência Mancha Branca, Ferrugem Polissora, Mancha de Turcicum e Ferrugem BrancaItem Análise do perfil transcricional de genes responsivos ao encharcamento do solo em raízes de soja submetidas à hipoxiaNakayama, Thiago Jonas; Nepomuceno, Alexandre Lima [Orientador]; Vieira, Luiz Gonzaga Esteves; Amarante, Luciano do; Neumaier, Norman [Coorientador]Resumo: Em raízes de duas cultivares de soja contrastantes quanto a tolerância ao encharcamento do solo, foram avaliados, via qPCR, os efeitos da hipoxia sobre o perfil transcricional (,5h, 4h e 28h) de genes envolvidos no catabolismo da sacarose, fermentação alcoólica, respiração alternativa, detoxicação de ROS e sinalização Raízes das plântulas em estádio de desenvolvimento V1 foram mantidas sob tratamentos de normoxia e hipoxia em solução hidropônica Todos os dez genes avaliados apresentaram expressão diferencial estatisticamente significativa em pelo menos um dos tempos analisados Entretanto, nitrato redutase, invertase, catalase e prolina-4-hidroxilase foram pouco responsivas à hipoxia; diferente da álcool desidrogenase, hemoglobina não-simbionte, sacarose sintase, oxidase alternativa, ascorbato peroxidase e trealose-6-fosfato sintase A hipoxia resultou na superexpressão dos genes ADH e AOX, e em maior intensidade na cultivar sensível (BR 4) De um modo geral, quando comparado a outras espécies vegetais, o perfil transcricional dos genes aqui estudados em soja mostra-se mais parecido ao observado em espécies sensíveis ao encharcamento do solo do que em espécies tolerantes Supõe-se uma intricada relação de causa e efeito entre os genes das diferentes rotas metabólicas, sugerindo o envolvimento de metabólitos, tais como piruvato, ROS e RNS na modulação da expressão dos genes aqui estudadosItem Análise dos níveis de metilação e de polimorfismos genéticos dos genes GSTP1, MGMT, VDR e AR em pacientes com câncer de próstataSouza, Marilesia Ferreira de; Cólus, Ilce Mara de Syllos [Orientador]; Carvalho, Robson Francisco; Losi-Guembarovski, RobertaResumo: O câncer de próstata é o segundo tipo de neoplasia mais incidente no mundo A eficácia do exame de PSA (Antigeno Prostático Específico), atualmente empregado para triagem da doença, está em discussão devido à suas limitações quanto à sensibilidade e especificidade Portanto, a busca de novos marcadores mais sensíveis e eficazes para essa neoplasia é de extrema importância para reduzir o impacto clínico da mesma A fim de contribuir para a solução deste problema, o presente estudo visou a busca de marcadores genéticos e epigenéticos de diagnóstico e prognóstico para o câncer de próstata A pesquisa consistiu de amostras de DNA genômico extraídos de sangue periférico de 223 indivíduos com câncer de próstata e 223 indivíduos livres de neoplasia A técnica de PCR em tempo real foi empregada para a realização da genotipagem de um polimorfismo para cada um dos genes previamente selecionados: GSTP1, MGMT, VDR e AR A análise genotípica não mostrou associação entre câncer de próstata e os polimorfismos estudados individualmente Entretanto, a associação dos genótipos GG (GSTP1) e GA (VDR) conferiu um aumento de risco para o câncer de próstata (OR=2,34; IC95%=1,1-4,97, p=,4) Por outro lado, um efeito protetor para comprometimento de vesícula seminal foi conferido pelo genótipo AG do gene GSTP1 (OR=,22; IC95%=,7-,69, p=,1), e quando este foi associado com o gene AR (G), apresentou efeito protetor para o câncer de próstata (OR=,61; IC95%=,39-,96, p=,4) Para a realização das análises de metilação de DNA foram selecionados 76 pacientes dos quais foram obtidas amostras de DNA de tecido tumoral e adjacente normal de próstata A mensuração dos níveis de metilação dos genes GSTP1 e MGMT foi realizada pela técnica MS-HRM (Methylation-sensitive high resolution melting) e mostrou baixos níveis de metilação de DNA no gene MGMT em ambos tecidos estudados Em contrapartida, altos níveis de metilação para o gene GSTP1 foram encontrados no tecido tumoral em relação ao tecido adjacente normal (p<,1), níveis estes que apresentaram-se associados com a agressividade da doença Além disso, foi observada associação positiva entre níveis de metilação do promotor do gene GSTP1 e o polimorfismo rs1695 do mesmo gene Portanto, podemos sugerir com este estudo que combinações de genótipos de genes de diferentes vias podem estar relacionados com risco ou proteção do câncer de próstata; que a metilação do promotor do gene GSTP1 é um bom marcador de prognóstico e diagnóstico, relacionado inclusive com agressividade tumoral; e que polimorfismos neste gene podem estar relacionados com os níveis de metilação do promotor do mesmoItem Análise em larga escala de pequenos RNAs derivados de elementos transponíveis em genomas vegetaisLorenzetti, Alan Péricles Rodrigues; Domingues, Douglas Silva [Orientador]; Paschoal, Alexandre Rossi [Coorientador]Resumo: Os elementos transponíveis (TEs) constituem uma grande parte dos genomas eucariotos e desempenham grande importância em sua evolução Esse componente do genoma pode atuar de diversas maneiras, seja inativando genes, alterando a expressão deles, aumentando seu número de cópias, ou até mesmo criando novas sequências nucleotídicas capazes de influenciar no funcionamento do organismo Nesse último caso, sabe-se que os TEs podem originar loci responsáveis pela transcrição de RNAs não codificantes funcionais (ncRNAs), como microRNAs (miRNAs), os quais podem atuar na regulação pós-transcricional de genes Com base nessas informações, os objetivos da primeira parte do trabalho foram a anotação de TEs de 15 genomas vegetais utilizando métodos de busca baseados em similaridade, e a procura por interseções posicionais com precursores de miRNAs anotados Os resultados obtidos permitiram a criação do Plant Transposable Element-related microRNAs Database (PlanTE-MIR DB, disponível em ), que agrega 152 TE-MIRs para 1 espécies vegetais e facilita o acesso às anotações por meio de uma interface amigável, disponibilizando múltiplos formatos de arquivo Boa parte desses loci produtores de pequenos ncRNAs estão relacionados a um tipo específico de TEs: os elementos transponíveis de repetição invertida em miniatura (MITEs, do inglês Miniature Inverted-Repeat Transposable Elements) Visando explorar em maior profundidade essa relação, o objetivo da segunda parte do trabalho foi realizar a busca por pequenos RNAs relacionados aos MITEs no genoma de Coffea canephora A análise revelou que aproximadamente 1,5% do genoma da espécie é composto por MITEs e que a maior parte das inserções está localizada em regiões ricas em genes Além disso, foram encontradas e classificadas 44 famílias relacionadas a pequenos RNAs, sendo pelo menos uma delas representada em ESTs A maior parte dos pequenos RNAs associados a essas famílias são de 24 nt, sugerindo a participação desses elementos na biogênese de siRNAs Esses dados trazem importantes contribuições para a compreensão da evolução genômica em plantas, fornecendo informações sobre a inter-relação entre os seus diversos componentesItem Análise genética da espécie neotropical Geophagus brasiliensis (Osteichthyes: Cichlidae)Ferreira, Dhiego Gomes; Sofia, Silvia Helena [Orientador]; Zawadzki, Cláudio Henrique; Ruas, Paulo MaurícioResumo: O uso de marcadores moleculares em estudos genéticos de populações tem possibilitado importantes contribuições para o conhecimento genético de espécies da ictiofauna Neotropical Contudo, a maior parte deste conhecimento está limitada a espécies migradoras e/ou de grande porte, de modo que pouco se sabe ainda sobre a organização genética de populações de peixes de pequeno porte e sedentários Geophagus brasiliensis (Quoy & Gaimard, 1824), popularmente conhecido como acará, é um peixe Neotropical da família Cichlidae que apresenta as características de sedentarismo e cuidado parental, representando um bom modelo para o estudo genético de espécies de peixes neotropicais não migradoras Dentre os principais marcadores empregados em estudos de peixes atuamente, destacam-se os microssatélites, os AFLPs e as análises de regiões do genoma mitocondrial Particularmente no caso de G brasiliensis a falta de primers de microssatélites constituía um fator limitador ao uso destes marcadores para estudos populacionais desta espécie Com base no exposto, os objetivos deste trabalho foram: 1) desenvolver primers de microssatélites específicos para G brasiliensis e 2) empregar marcadores microssatélites, AFLPs e análise da sequência mitocondrial D- loop no estudo da estrutura e diversidade genética de G brasiliensis, amostrados em seis trechos da bacia de um rio Neotropical, sendo cinco destes na calha principal e um em um ribeirão tributário Um total de quatorze locos polimórficos foi obtido para a espécie, com uma média de 4,2 alelos por loco, com a maioria dos locos apresentando um bom conteúdo de informação polimórfica Os resultados das análises populacionais revelaram uma baixa diversidade genética para a espécie em relação a outros peixes da ictiofauna Neotropical Além disto, a amostra proveniente do ribeirão apresentou maior diversidade genética que todas as amostras da calha principal, destacando uma possível importância que estes tributários podem representar como reservatórios de diversidade genética Um padrão similar de diferenciação foi observado a partir dos três marcadores, revelando estruturação genética significativa entre as amostras Em relação ao hábito sedentário da espécie, os resultados demonstram que o fluxo gênico pode ser mantido ao longo da calha principal, possivelmente a partir do modelo de dispersão Stepping Stone No entanto, caraterísticas geológicas e fatores demográficos levaram algumas amostras a não se apresentarem em concordância com este modelo Os resultados demonstram que a variabilidade genética de G brasiliensis se encontra distribuída de maneira heterogênea ao longo da bacia, o que deve ser considerado em futuras ações de manejo e conservaçãoItem Análise genética de Euglossa fimbriata (Hymenoptera: Apidae) de reservas florestais no norte do Paraná / Karen Mayumi SuzukiSuzuki, Karen Mayumi; Sofia, Silvia Helena [Orientador]; Ruvolo-Takasusuki, Maria Claudia Colla; Ruas, Paulo MaurícioResumo: Diversos estudos conservacionistas têm utilizado marcadores moleculares na avaliação da diversidade e estrutura genética de populações de vários organismos Entretanto, em relação às abelhas da subtribo Euglossina, importantes polinizadores neotropicais, ainda são poucos os estudos empregando tais marcadores para um maior conhecimento da diversidade genética de populações destas abelhas O presente trabalho investigou a diversidade genética de Euglossa fimbriata de seis fragmentos florestais do norte do estado do Paraná, por meio de marcadores moleculares RAPD e marcadores PCR-RFLP, estes para a análise da região 16S do mtDNA, desta espécie euglossina Foram utilizados 123 machos de E fimbriata pertencentes a seis fragmentos florestais constituindo remanescentes de Mata Atlântica, no norte do Paraná, sul do Brasil As estimativas de proporção de locos polimórficos das seis amostras de E fimbriata estudadas variaram de 34,44% a 47,78%, enquanto que os valores de heterozigosidade média encontrados variaram de ,936 a ,1527 Com base na análise da AMOVA envolvendo o conjunto de abelhas dos seis fragmentos florestais, detectou-se que a quantidade de variação genética foi maior dentro dos grupos (95,41%) do que entre os grupos de abelhas amostrados (4,59%) Foram utilizadas duas enzimas de restrição (AseI e DraI) para o corte da região 16S do mtDNA Foram encontrados 4 haplótipos gerados pela enzima AseI e 2 haplótipos pela enzima DraI Combinados estes haplótipos constituíram 5 haplótipos-compostos presentes de forma variada entre os grupos de abelhas dos diferentes fragmentos de mata estudados Um dos haplótiposcompostos encontrados mostrou-se presente entre as amostras de abelhas de todos os fragmentos florestais estudados, ocorrendo em freqüências entre 63,64 a 95,65% A ampla distribuição e elevada freqüência de tal haplótipo sugere sua origem ancestral em comparação aos demais haplótipos-compostos encontrados Os resultados obtidos com ambos os tipos de marcadores moleculares (RAPD e PCR-RFLP) indicam a existência de subpopulações constituindo uma metapopulação de E fimbriata na região estudada, bem como a importância de se preservar o conjunto de fragmentos florestais (independente do tamanho e grau de interferência antrópica destes) para a manutenção da diversidade genética desta espécie de Euglossina no norte do Paraná