Efeito da clorofilina na expressão de genes envolvidos na apoptose e ciclo celular em células de mama não tumorais (HB4a)
Data
2012-02-29
Autores
D’Epiro, Gláucia Fernanda Rocha
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Resumo
A molécula de clorofilina é muito estudada pela comunidade científica por apresentar, entre outras, propriedades quimiopreventiva, antimutagênica e anticarcinogênica. No entanto, os mecanismos moleculares de ação desse composto ainda não estão esclarecidos. Dessa maneira, o estudo de genes envolvidos na apoptose e no ciclo celular em células não tumorais tratadas com clorofilina pode fornecer informações importantes sobre os mecanismos que protegem ou desencadeiam toxicidade ás células, auxiliando na compreensão e no desenvolvimento de terapias. Neste contexto, nós avaliamos o potencial citotóxico da clorofilina e o seu efeito na expressão de genes envolvidos na apoptose (anti e pró-apoptóticos: BCL-2, BCL-XL, BAX E BAK; da família das Caspases: CASP3, CASP7, CASP 8 e CASP9) e de ciclo celular (BIRC5, TP53, APC, CiclinaA2 e ß-catenina) em cultura de células de mama não tumorais (HB4a). No ensaio de citotoxicidade a clorofilina apresentou potencial citotóxico em 48 e 72 h em todas as concentrações utilizadas (100, 200 e 400 µg/mL) quando comparadas ao controle. O estudo da expressão gênica foi realizado por meio do ensaio de qRT-PCR em tempo real. As células HB4a foram expostas à 100 e 200 ?g/mL de clorofilina nos tempos de 24, 48 e 72 h. A redução dos níveis de BIRC5, relacionado aos processos de apoptose e ciclo celular foi dose dependente, o gene foi menos expresso no tratamento com 200 µg/mL de clorofilina em 24, 48 e 72 h. O gene CCNA2 foi menos expresso com 24, 48 e 72 h de exposição à 200 µg/mL de clorofilina, e com 72 h de exposição à 100 µg/mL. Em relação aos genes pró-apoptóticos, foi observado aumento significativo na expressão de BAX em 24, 48 e 72 h de exposição à 200 µg/mL de clorofilina, e em 72 h de exposição à 100 µg/mL. Não houve alteração significativa de BAK quando comparado ao controle. Também foi observado aumento de expressão dos anti-apoptóticos BCL-2 e BCL-XL. O gene BCL-XL apresentou aumento de expressão nos três tempos testados com 200 µg/mL de clorofilina, e a exposição à 100 µg/mL levou ao aumento de expressão somente em 24 h. Já o gene BCL-2 obteve aumento de expressão apenas em 72 h com 200 µg/mL de clorofilina. Os demais genes analisados não apresentaram alteração significativa. A inibição da expressão dos genes envolvidos no ciclo celular sugere um efeito decorrente da citotoxicidade da clorofilina, bem como o aumento da expressão dos genes pró-apoptóticos, enquanto que o aumento da expressão dos genes anti-apoptóticos sugere inibição da apoptose como proteção da morte celular induzida pela clorofilina.
Descrição
Palavras-chave
Clorofilina, Ciclo celular, Apoptose, Expressão gênica