01 - Doutorado - Ciências Fisiológicas

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Avaliação da produção hepática de glicose em modelo de resistência à insulina sem obesidade : ratos diabéticos Goto-Kakizaki
(2023-03-15) Uemura, Isabele Gonçalves Frasson; Bertolini, Gisele Lopes; Uchôa, Ernane Torres; Graciano, Maria Fernanda Rodrigues; Gorjão, Renata; Bazotte, Roberto Barbosa
Embora o diabetes mellitus tipo 2 (DM2) esteja geralmente associado à obesidade, alguns indivíduos com DM2 têm um índice de massa corporal baixo ou normal. O rato Goto-Kakizaki (GK) é uma linhagem isogênica de DM2 que apresenta resistência à insulina sem obesidade. Como estudos indicam que a hiperglicemia em ratos GK é devida, pelo menos em parte, ao aumento da produção hepática de glicose, torna-se relevante avaliar, em ratos diabéticos GK, a contribuição da glicogenólise e da neoglicogênese na gênese da hiperglicemia, assim como a responsividade hepática à insulina, ao glucagon e aos agonistas adrenérgicos, e sua possível contribuição para a gênese da resistência à insulina. Para tanto, parâmetros como ganho de massa corporal e tecidual, ingestão alimentar, tolerância à glicose e à insulina, glicemia, lactatemia, conteúdo hepático de glicogênio e produção hepática de glicose estimulada por agentes glicogenolíticos e a partir de precursores neoglicogênicos, por meio da técnica de perfusão de fígado in situ, foram avaliados em ratos GK e controle (ratos Wistar). Ratos GK apresentaram hiperglicemia, tolerância à glicose reduzida, menor resposta periférica à insulina, menor ganho de massa corporal, de tecido adiposo epididimal, dos músculos sóleo, extensor digital longo e gastrocnêmio e do fígado e semelhante índice de Lee e ingestão alimentar quando comparados aos ratos controle, confirmando, assim, o modelo experimental. O conteúdo de glicogênio hepático foi maior em ratos GK do que em ratos controle, enquanto a lactatemia, a glicogenólise hepática estimulada por glucagon 1 nM, fenilefrina 2 µM, isoproterenol 20 µM ou AMPc 7 µM e a produção hepática de glicose a partir de L-lactato 2 mM, piruvato 5 mM ou L-alanina 2,5 mM não diferiram entre os grupos. Entretanto, a produção hepática de glicose a partir de glicerol 2 mM foi maior no grupo GK no terço final do tempo de infusão deste precursor neoglicogênico do que no grupo controle. Além disso, o efeito supressor da insulina (50µUI/mL) sobre a produção hepática de glicose e a glicogenólise estimulada por AMPc 7µM foi abolido em ratos GK, demonstrando que esses animais apresentam resistência hepática à insulina. Esta menor resposta do fígado à insulina pode ter contribuído para a resistência insulínica observada em ratos diabéticos GK.
Envolvimento do óxido nítrico e do sistema renina-angiotensina nas disfunções cardiovasculares decorrentes do parkinsonismo por 6-hidroxidopamina em ratos
(2022-08-30) Jager, Lorena de; Martins-Pinge, Marli Cardoso; Zanesco, Angeliza; Silva, Cristina Antoniali; Uchoa, Ernane Torres; Dias, Fernando Augusto Lavezzo; Pinge Filho, Phileno
A doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa mais comum. Atualmente tem-se dado ênfase aos sintomas não-motores, mais especificamente no sistema cardiovascular: hipotensão postural, hipotensão pós-prandial, labilidade da pressão arterial, e, possivelmente, fadiga e intolerância ao exercício; devido ao seu comprometimento na qualidade de vida dos pacientes. Vários estudos têm mostrado o envolvimento do óxido nítrico (NO) nos processos que levam à neurodegeneração na DP, e o uso de inibidores da isoforma induzível da NO-sintase (iNOS) promove neuroproteção e atenua a queda de dopamina (DA) em modelos experimentais de parkinsonismo. Além disso, o NO também parece estar envolvido nas alterações cardiovasculares no parkinsonismo induzido por 6-hidroxidopamina (6-OHDA). Do mesmo modo, estudos mostram que o aumento de angiotensina II (Ang II) pode levar ao aumento do estresse oxidativo, exacerbando o processo neurodegenerativo da DP e que o uso de inibidores da Ang II ou enzima conversora de angiontensina (ECA) se mostrou efetivo na proteção contra a redução dopaminérgica. Sendo assim, o objetivo foi avaliar os efeitos da inibição da iNOS e da Ang II na função cardiovascular e autonômica em animais submetidos ao parkinsonismo por 6-OHDA na substância negra pars compacta (SNpc), assim como esclarecer os mecanismos envolvidos na hiporreatividade à fenilefrina em anéis com endotélio nesses animais. Para isso, o estudo foi dividido em duas partes. No estudo 1: os animais foram submetidos à cirurgia estereotáxica para microinfusão bilateral da neurotoxina 6-OHDA (6 mg/mL em 0,2% de ácido ascórbico em solução salina estéril) ou solução veículo para o grupo Sham. Do dia da estereotaxia até o dia da cateterização da artéria femoral, os animais receberam tratamento com inibidor da iNOS – S-methylisothiourea (SMT - 10 mg/kg – ip) ou solução salina (0,9% - ip). Os animais foram divididos em 4 grupos: Sham + veículo; Sham + tratamento; 6-OHDA + veículo e 6-OHDA + tratamento. Após 6 dias, foram submetidos a cateterização da artéria femoral e, 24h depois, o registro dos parâmetros basais cardiovasculares foi realizado. Em outro grupo de animais, o efeito da injeção endovenosa para o inibidor da iNOS – S-methylisothiourea - SMT (3 mg/kg – ip) durante os parâmetros dos registros cardiovasculares foi realizado após 7 dias da lesão bilateral por 6-OHDA. E, para investigar os mecanismos relacionados à hiporreatividade à fenilefrina, foi realizado o protocolo (grupo 6-OHDA e grupo Sham) da reatividade vascular da aorta após 7 dias da infusão bilateral de 6-OHDA ou veículo, no qual foram feitas curvas concentração-efeito cumulativas (CCEC) para fenilefrina (Fenil) na presença dos bloqueadores Nw-nitro-arginine-methyl-ester (L-NAME) (10-5 M), SMT (10-6 M) e indometacina (10-5 M). No estudo 2: os animais foram submetidos à cirurgia estereotáxica para microinfusão bilateral de 6-OHDA. No dia da estereotaxia até o dia da cateterização da artéria femoral, os animais receberam um dos seguintes tratamentos: inibidor do recepetor da Ang II – Losartan (10mg/kg) ou água (gavagem); inibidor da ECA - Enalapril (10mg/kg) ou água (gavagem). Os animais foram divididos em 4 grupos: Sham+veículo; Sham+Tratamento; 6-OHDA+veículo e 6-OHDA+tratamento. Após 6 dias, foram submetidos a cateterização da artéria femoral e, 24h depois, o registro dos parâmetros basais cardiovasculares foi realizado. Em outro grupo de animais, o efeito da injeção endovenosa (inibidor da Ang II – Losartan (10mg/kg); inibidor da ECA - Enalapril (10mg/kg)) durante o registro dos parâmetros basais foi realizado após 7 dias de lesão bilateral por 6-OHDA. Os resultados do Estudo 1 confirmam a eficácia da lesão por 6-OHDA pela redução de DA nos animais 6-OHDA. No entanto, o tratamento com o SMT não foi capaz de reverter essa perda de DA. Em relação aos parâmetros basais, os valores de PAS e PAM são menores nos animais 6-OHDA em relação ao seu controle Sham, sem efeito do tratamento com SMT. Na análise da variabilidade da PAS, foi observado diminuição na variância, no componente VLFabs e no componente LFabs nos grupos 6-OHDA quando comparados aos seus controles, independente do tratamento com SMT. Também, foi observado que, após injeção endovenosa de SMT, houve aumento da PA e queda na FC, no entanto a resposta não foi diferente entre os grupos Sham e 6-OHDA. Na função vascular, ao investigarmos os mecanismos da hiporreatividade a fenilefrina, foi visto que a Rmáx à Fenil aumentou com à incubação com SMT, mostrando que possivelmente a via envolvida na hiporreatividade vascular dos animais com parkinsonismo é a iNOS. No estudo 2, nosso modelo de parkinsonismo foi comprovado pela diminuição dos níveis de DA no estriado dos animais lesados pela infusão de 6-OHDA após 7 dias. No entanto, tanto o tratamento com Losartan como o tratamento com Enalapril subsequente à lesão pela neurotoxina não mostraram proteção significativa contra a perda de DA na região do estriado. No protocolo de Losartan e Enalapril, há presença de alterações na análise do barorreflexo. E também redução na PAM e PAS após tratamento com Losartan e redução da PAS com o Enalapril. Também, em relação ao estresse oxidativo, foi observado aumento dos componentes pró-oxidantes no coração e aumento do ânion superóxido no grupo 6-OHDA. Na aorta torácica, foi observado diminuição do ânion superóxido no grupo 6-OHDA. Dessa forma, o conjunto dos resultados apresentados neste estudo sugerem que parte da disfunção cardiovascular em animais submetidos ao parkinsonismo por 6-OHDA possa ser periférica e ter a participação da iNOS endotelial e que a participação do SRA nas alterações cardiovasculares no parkinsonismo bilateral por 6-OHDA em ratos machos seja pequena e restrita à pressão arterial.
Exposição aguda do teleósteo Prochilodus lineatus ao cádmio: bioacumulação, efeitos genotóxicos, bioquímicos, fisiológicos e comportamentais
(2013-09-02) Silva, Alexandre Oliveira Fernandes da; Martinez, Cláudia Bueno dos Reis; Souza, Helenir Medri de; Fernandes, Marisa Narciso; Souza, Marta Marques de; Moreira, Renata Guimarães
O cádmio (Cd) é um metal traço não essencial aos animais e muito tóxico aos peixes, é um contaminante frequentemente encontrado nas águas interiores devido a atividades antropogênicas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a bioacumulação e os efeitos do Cd para o peixe neotropical Prochilodus lineatus. Para tanto, peixes jovens foram expostos, durante 24 e 96 h, a duas concentrações de Cd, 1 e 10 µg.L-1, que correspondem às concentrações máximas de Cd permitidas pela legislação brasileira (CONAMA, Resolução 357/2005). Os efeitos do Cd foram avaliados por meio da análise dos íons e osmolalidade plasmática, da atividade de enzimas relacionadas à osmorregulação, das defesas antioxidantes, da ocorrência de estresse oxidativo e danos genotóxicos, do conteúdo de proteínas semelhantes a metalotioneínas (PSMT), da atividade da acetilcolinesterase (AChE) e de alterações comportamentais. Os peixes expostos ao Cd apresentaram diminuição na atividade da Na+/K+-ATPase e anidrase carbônica em brânquia e rim. A atividade da Ca2+-ATPase branquial também apresentou diminuição, enquanto houve elevação da atividade da H+-ATPase no mesmo órgão. A concentração de Ca2+ plasmático apresentou redução significativa, porém nos íons Na+, K+, Cl- e na osmolalidade não ocorreram alterações significativas. As atividades das enzimas glutationa S-transferase e glutationa peroxidase em brânquia e fígado não sofreram efeitos da exposição ao Cd, entretanto, a atividade da catalase diminuiu no fígado e aumentou na brânquia, Embora não tenha sofrido alterações no fígado, o conteúdo de glutationa reduzida (GSH) aumentou nas brânquias após 24 h de exposição. A ocorrência de danos no DNA aumentou nos eritrócitos dos peixes expostos a maior concentração de Cd testada. Após 24 h de exposição a 10 µg.L-1 de Cd a brânquia e o rim apresentaram acumulação de Cd semelhantes (0,2 µg Cd.g de tecido úmido-1), no entanto, após 96 h o acúmulo foi de 0,5, 0,45 e 0,1 (µg Cd.g de tecido úmido-1) na brânquia, rim e fígado respectivamente. O conteúdo de PSMT no fígado de peixes expostos a 10 µg.L-1 de Cd aumentou em 35 % (24 h) e 40 % (96 h), e no músculo o aumento foi de 76 % após 96 h. A atividade da AChE nos animais expostos a 10 µg.L-1 de Cd apresentou redução no músculo e aumento no cérebro, nas mesmas condições a atividade natatória dos animais ficou estimulada, resultando em uma maior distância percorrida com uma velocidade média maior. Este conjunto de resultados demonstra que as concentrações de Cd testadas afetam o funcionamento de diversos órgãos vitais de P. lineatus. A exposição aguda ao Cd causou inibição das enzimas envolvidas com a manutenção das concentrações osmoiônicas e com a regulação ácido-básica, o que resultou em hipocalcemia. Os efeitos do Cd não foram caracterizados pelo estresse oxidativo, mas pelos danos genotóxicos, neurotóxicos e no padrão de natação dos peixes. O Cd dissolvido na água acumulou-se na brânquia > rim > fígado, mas não no músculo, onde foi capaz de induzir aumento nas PSMT. Portanto, as concentrações de Cd aceitas pelo CONAMA para águas doce brasileiras são prejudiciais à espécie P. lineatus
Tratamento com topiramato na infância: efeitos adversos a curto e longo prazo em parâmetros cardiovasculares e metabólicos de ratos e ratas Wistar
(2022-07-22) Vidigal, Camila Borecki; Ceravolo, Graziela Scalianti; Akamine, Eliana Himori; Santos, Roger Lyrio dos; Costa, Tiago Januário da; Uchoa, Ernane Torres
O topiramato (TPM) é um fármaco da nova geração de antiepilépticos (AEDs) amplamente usado na população pediátrica. Recentemente, o uso de TPM em crianças e adolescentes foi associado ao aumento de marcadores de risco vascular. É bem estabelecido o papel do endotélio na modulação do tônus e homeostase do sistema vascular. De fato, a disfunção endotelial é um evento precoce no desenvolvimento das doenças cardiovasculares. Entretanto, até o momento, não existem estudos avaliando os efeitos do uso de TPM sobre a função endotelial. Atualmente, é reconhecido que a exposição a fármacos em fases críticas do desenvolvimento do organismo, como a infância, pode favorecer o estabelecimento de doenças na vida adulta. Diante do exposto, o objetivo do estudo foi avaliar a função cardiovascular de ratos e ratas adultos tratados com TPM durante a infância. Além disso, os efeitos adversos a curto (24h após o término do tratamento) e longo prazo (vida adulta) do tratamento com TPM sobre parâmetros metabólicos foram investigados. Para tanto, ratos e ratas Wistar foram tratados com TPM (41mg/kg) ou água (grupo CTR) por gavagem do dia pós-natal (DPN)16 ao 28. Na vida adulta (ratos no DPN 120; ratas a partir do DPN 85, no estro fisiológico), a reatividade da aorta torácica foi avaliada in vitro ao vasoconstritor fenilefrina (Fenil) e aos vasodilatadores acetilcolina e nitroprussiato de sódio. A comparação entre os grupos CTR e TPM foi feita utilizando a resposta máxima para os fármacos (Rmáx) e pD2 (-log da concentração do fármaco que causa 50% da Rmáx). Também foi investigado o papel dos fatores contráteis derivados do endotélio na disfunção vascular induzida pelo TPM, a espessura da aorta torácica, e a expressão das cicloxigenases (COX-1 e COX-2), NOX-2 e p47phox na aorta. Ainda, parâmetros cardiovasculares de pressão arterial e frequência cardíaca foram avaliados por método direto. No que se refere aos parâmetros metabólicos, foram analisados o perfil lipídico, consumo de ração, peso corporal, Índice de Lee, peso de tecido adiposo branco (TAB, retroperitoneal e perigonadal) e marrom (TAM) dos animais. Como resultado, foi evidenciado hiper-reatividade para Fenil em ratos e ratas TPM quando comparadas com as respostas no grupo CTR. Nos ratos TPM, a Rmáx para Fenil foi restaurada pela inibição da NADPH oxidase e da COX-2, enquanto que nas ratas TPM, a Rmáx foi restaurada apenas pela inibição da COX-2. Além disso, ratos TPM apresentaram hipertrofia da aorta, e expressão aumentada de NOX-2 e p47phox, enquanto ratas TPM apresentaram expressão aumentada de COX-2 em comparação aos seus respetivos CTR. Por outro lado, ratos e ratas TPM não apresentaram alterações na vasodilatação e nos demais parâmetros cardiovasculares avaliados. No que se refere aos parâmetros metabólicos, o tratamento com TPM não interferiu no consumo de ração, peso corporal e perfil lipídico, sendo estes semelhantes aos observados no grupo CTR. Entretanto, foi demonstrado que o tratamento com TPM reduziu os depósitos de TAB em machos a curto e longo prazo, e reduziu os depósitos de TAM em fêmeas a longo prazo quando esses parâmetros foram comparados com os dos CTR. Em conjunto, o presente estudo fornece evidências, pela primeira vez, que o tratamento com TPM durante a infância causa disfunção vascular sexo-específica na vida adulta. Ademais, o efeito do TPM sobre o tecido adiposo diferiu entre machos e fêmeas. Assim, o TPM é capaz de afetar o padrão saúde-doença de maneira sexo-específica
Papel do óxido nítrico na modulação do barorreflexo pelo núcleo paraventricular do hipotálamo : efeitos do treinamento físico ou suplementação com L-arginina em ratos normotensos
Raquel, Hiviny de Ataides; Pinge, Marli Cardoso Martins [Orientador]; Crestani, Carlos Cesar; Uchôa, Ernane Torres; Polito, Marcos Doederlein; Deminice, Rafael; Michelini, Lisete Compagno [Coorientador]
Resumo: O óxido nítrico (NO) no núcleo paraventricular do hipotálamo (PVN) é importante neuromodulador de respostas autonômicas e o treinamento físico assim como a suplementação de L-arginina pode induzir diferentes adaptações ao sistema cardiovascular O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da enzima nNOS do PVN na neuromodulação cardiovascular de ratos treinados ou suplementados com L-arginina Após aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Estadual de Londrina (protocolo: 518521479), ratos Wistar (22-25g) foram submetidos a sedentarismo ou treinamento de natação, corrida ou suplementação oral com L-arginina (dose: 62,5mg/1ml/rato/dia) Posteriormente foi realizada estereotaxia para implante de cânulas-guia direcionadas ao PVN e cateterismo de artéria e veia femoral para registros cardiovasculares Outros animais foram destinados à coleta de tecidos para análises de composição corporal, nitrito, expressão gênica e imunohistoquímica A natação e a corrida proporcionaram menor ganho de peso corporal, diminuição de tecido adiposo perigonadal e retroperitoneal e aumento do peso cardíaco Apenas animais treinados em esteira apresentaram maior peso de músculos gastrocnêmio e sóleo Ambos os protocolos de treinamento provocaram: bradicardia em repouso, sem alterações na pressão arterial média (PAM); melhoraram a sensibilidade do barorreflexo espontâneo e modulação da variabilidade da frequência cardiaca (FC), através do aumento do componente parasimpático e diminuição do simpático A microinjeção bilateral de inibidor seletivo da nNOS (N-Propyl-L-Arginina, 4nmol/1nl) no PVN provocou maior resposta pressórica e taquicárdica em ratos treinados e um déficit no controle autonômico cardiovascular Ratos treinados apresentaram maior prevalência de neurônios imunoreativos para nNOS no PVN, maior expressão gênica de nNOS e níveis de nitrito no PVN A suplementação com L-arginina proporcionou efeitos similares ao exercício Animais suplementados apresentaram bradicardia de repouso sem alterações na PAM e maior resposta pressora e taquicárdica ao N-propyl no PVN A análise espectral basal de ratos suplementados com L-arginina evidenciou menor modulação simpática para pressão arterial sistólica e FC e melhores índices de barorreflexo espontâneo A suplementação com L-arginina favoreceu maior ganho máximo de sensibilidade barorreflexa, o qual foi abolido após a inibição da nNOS no PVN Além disso, a microinjeção bilateral de L-arginina (,17g/ml/1nL) no PVN de ratos controle melhorou o ganho máximo de sensibilidade barorreflexa Animais suplementados apresentaram menor peso de tecido adiposo perigonadal e retroperitoneal, maior peso de músculo gastrocnêmio e rins e maiores concentrações de nitrito no PVN, rins e aorta torácica Em conclusão, o treinamento físico e a suplementação oral de L-arginina modificam o controle autonômico do PVN via nNOS e ambos favorecem a biodisponibilidade de NO que, central e perifericamente pode ser relevante para adaptações cardiovasculares
Participação do óxido nítrico no Núcleo Paraventricular do Hipotálamo (PVN) durante os ajustes cardiovasculares em modelos de estresse ortostático em ratos acordados
Andrade, Ozahyr de; Pinge, Marli Cardoso Martins [Orientador]; Fazan Junior, Rubens; Souza, Hugo Celso Dutra de; Fernandes, Karen Barros Parron; Ceravolo, Graziela Scalianti
Resumo: A manutenção da pressão arterial em níveis adequados é de extrema importancia para a sobrevivência humana Para isso o organismo lança mão de mecanismos reflexos que realizam esse controle o momento a momento, mandando informações periféricas para regiões do sistema nervoso central Áreas como o núcleo do trato solitário, área rostral ventrolateral do bulbo, área caudal ventrolateral do bulbo e núcleo ambíguos, são bem conhecidas dentro da literatura como reguladoras do tonus da pressão arterial Atualmente, diversas evidências tem demonstrado que o núcleo paraventricular (PVN) do hipotálamo está envolvido nas respostas reflexas cardiovasculares relacionados com o volume sanguíneo e que o óxido nítrico (NO) é um importante neuromodulador da função cardiovascular e autonômica no PVN Assim, o principal objetivo deste trabalho foi avaliar a modulação cardiovascular e autonômica exercida pelo NO no PVN durante as situações agudas e crônicas ocasionadas pelos modelos de estresse ortostático No primeiro estudo foram utilizados ratos Wistar adultos, com cânulas-guia direcionadas para o PVN e com cateteres na arteria e veia femoralOs animais foram submetidos ao registro da pressão arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) em estado consciente Depois de parâmetros basais serem registrados, foi realizada a microinjecção bilateral no PVN de solução salina ou de DEA-NONOato, ou Nw-propyl-L-arginina ou 14W antes da mudança postural ou o head-up tilt (HUT) Nesse estudo os dados encontrados sugerem um envolvimento do óxido nítrico no PVN durante os ajustes cardiovasculares solicitados na mudança postural, principalmente durante a inibição da iNOS que atenuou as variações da pressão arterial e a frequencia cardíaca, assim como uma diminuição do componente simpático durante a mudança postural Em um segundo estudo, ratos Sprague-Dawley adultos foram suspensos pela cauda durante 14 dias (hindlimb unloaded), cânulas-guia direcionadas para o PVN e com cateteres na arteria e veia femoral além de um eletrodo no nervo renal Os animais foram submetidos ao registro da pressão arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) e do registro da atividade simpática do nervo renal em estado consciente Durante a retomada das patas traseiras na caixa, foi realizada a microinjeção bilateral de L-NMMA no PVN Nesse estudo, pudemos evidenciar um aumento do efeito tonico pelo óxido nítrico no PVN na regulação cardiovascular e autonomica Em um terceiro estudo, utilizou-se ratos Wistar adultos, com artéria e veia femurais cateterizadas e com cânulas-guia direcionadas ao PVN para a microinjeção de Nw-Propyl-L-Arginina ou 14W bilateralmente em ratos conscientes para em seguida realizar o head-down tilt (HDT) Os dados encontrados nesse estudo sugerem a participação da via neuronal do óxido nítrico no PVN envolvido nas alterações de pressão arterial e autonômicas durante a manobra anti ortostática Dessa maneira nossos dados sugerem uma participação diferenciada das isoformas da via nitrérgica no PVN durante as situações de mudança postural agudas e crônicas
Acúmulo tecidual, resposta de estresse e perfil osmorregulatório de Prochilodus lineatus nas primeiras 24 horas de exposição ao chumbo
Ribeiro, Andréa Martini; Martinez, Cláudia Bueno dos Reis [Orientador]; Zaia, Cássia Thaïs Bussamara Vieira; Fernandes, Marisa Narciso; Souza, Marta Marques de; Moreira, Renata Guimarães
Resumo: O chumbo (Pb) é um metal não-essencial e tóxico para os animais, e devido ao seu uso difundido em produtos industrializados, concentrações deste metal acima das concentrações permitidas pela legislação brasileira são encontradas em cursos de água Este trabalho teve como objetivo determinar o perfil de bioacumulação de Pb e suas consequências para o peixe dulcícola Prochilodus lineatus Para isso, juvenis desta espécie foram expostos a 3, ± ,3 mg Pb dissolvidoL-1 ou apenas à água por até 24 horas O perfil de retenção de chumbo foi determinada nas brânquias, no rim posterior, no fígado, no músculo e nas células sanguíneas O conteúdo de proteínas semelhantes à metalotioneínas (PSMT) foi mensurado nos tecidos branquial, renal e hepático A atividade da acetilcolinesterase (AChE) foi avaliada no cérebro e no músculo O sangue total foi utilizado para a dosagem de hematócrito, hemoglobina e número de eritrócitos, e a partir do plasma foram medidas as concentrações de glicose, cortisol, lactato, íons (Na+, K+, Cl-, Ca2+ e Mg2+) e a osmolalidade No rim e nas brânquias também foram determinadas a atividade das enzimas Na+/K+-ATPase (NKA), H+-ATPase e anidrase carbônica (AC) E no tecido branquial determinou-se o índice de alterações histológicas, a densidade de células ricas em mitocôndrias e alterações morfológicas ultraestruturais Foi registrado acúmulo de Pb nos tecidos branquial e renal, desde as primeiras horas de exposição, enquanto nos tecidos, hepático, sanguíneo e muscular, o acúmulo iniciou-se a partir de 12 h de exposição Desta forma, o perfil de acúmulo de Pb após as primeiras 24 h de exposição seguiu a seguinte ordem decrescente: brânquias = rim > sangue = fígado > músculo A presença de Pb no sangue não foi capaz de promover alteração dos parâmetros hematológicos O Pb inibiu a secreção de cortisol em 3 e 6 h, mas promoveu um aumento da glicose e do lactato plasmáticos a partir de 6 h Estes resultados coincidem com a inibição da AChE nos tecidos muscular e cerebral nos mesmos tempos de exposição As PSMT aumentaram nos tecidos branquial e hepático, após 3 e 12 h de exposição, respectivamente, mas não houve alteração do conteúdo de PSMT no tecido renal Houve redução da atividade da NKA e AC entre 6 e 24 h em ambos os tecidos E, enquanto a H+-ATPase aumentou no rim nos mesmos períodos, não houve alteração nas brânquias As alterações nas atividades das enzimas osmorregulatórias provocaram redução da osmolalidade, do Na+ e do Ca2+, e aumento do Mg2+ e do K+, nos tempos finais de amostragem, sem interferência sobre a concentração de Cl- Além disso, o Pb promoveu alterações histológicas leves no tecido branquial, e na distribuição de células ricas em mitocôndrias (CRM) após 1 h de exposição, e o padrão de microcristas das células pavimentosa (CPV) alterou-se após 12 h Os resultados obtidos a partir da exposição de P lineatus ao Pb por 24 h sugerem que os efeitos neurotóxicos provocados pelo Pb estejam desencadeando alterações sobre os parâmetros metabólicos do animal, ao mesmo tempo em que há uma sugestão de disrupção endócrina Ademais, a elevada concentração de Pb encontrada nas brânquias e no rim foi capaz de inibir as enzimas envolvidas com a manutenção das concentrações osmoiônicas e com a regulação ácido-base, resultando em hipocalcemia e hiponatremia Em uma tentativa de compensar essas perdas iônicas houve um aumento do número de CRM nas lamelas e da superfície absortiva das CPV Portanto, concentrações de Pb encontradas em corpos de água doce são capazes de promover alterações em P lineatus nas primeiras 24 h de exposição
Avaliação da toxicidade reprodutiva do Triclosan em duas gerações de ratos Wistar
Montagnini, Bruno Garcia; Gerardin, Daniela Cristina Ceccatto [Orientador]; Martinez, Cláudia Bueno dos Reis; Fernandes, Glaura Scantamburlo Alves; Leite, Cristiane Mota; Kiss, Ana Carolina Inhasz
Resumo: O Triclosan (TCS) é um derivado fenólico com atividade antibacteriana amplamente utilizado em cosméticos e outros produtos de higiene pessoal, como xampus, pastas de dente, sabonetes, loções, dentre outros segmentos da indústria, já sendo detectado em amostras de urina em mulheres grávidas, plasma e leite materno Este estudo investigou os efeitos do TCS sobre a função reprodutiva através de estudos que avaliam a exposição aguda (teste uterotrófico) e crônica (estudo de duas gerações) A atividade (anti)estrogênica do TCS foi avaliada em ratas imaturas pelo teste uterotrófico após três dias de tratamento (,8, 2,4 e 8, mg/kg/dia, gavagem), e em um segundo protocolo, a toxicidade reprodutiva através de um estudo de duas gerações de ratos No estudo de duas gerações, os animais foram tratados com TCS (via gavagem), nas doses de ,8, 2,4 e 8, mg/kg/dia, durante 1 semanas (geração P) e durante 14 semanas (geração F1), sendo continuado durante o acasalamento, gestação e lactação até o desmame das gerações F1 e F2, respectivamente No teste uterotrofico o TCS não apresentou atividade (anti)estrogênica nas doses testadas No entanto, no estudo de duas gerações o tratamento com TCS na dose de 2,4 mg/kg diminuiu a viabilidade e motilidade espermática de ratos adultos da geração F1 Nas fêmeas, a exposição ao TCS na dose de 2,4 mg/kg comprometeu o comportamento sexual de ambas as gerações P e F1, e na geração P, diminuiu o consumo de ração, e durante o comportamento materno, aumentou o comportamento de limpeza dos filhotes e diminuiu o tempo fora do ninho Foram também observadas alterações na morfometria de útero das ratas P tratadas com TCS na dose de 8, mg/kg e redução da quantificação folicular nos ovários das ratas F1 expostas ao antibacteriano na dose intermediária (2,4 mg/kg) Esses resultados reforçam que a exposição ao TCS, mesmo dentro dos limites de exposição permitidos pelas agências regulatórias, pode representar um risco potencial para a função reprodutiva em ratos
Terapia antioxidante e suplementação com L-arginina no combate à hipertensão em animais obesos : avaliação de mecanismos periféricos e centrais
Lopes, Fernanda Novi Cortegoso; Pinge, Marli Cardoso Martins [Orientador]; Uchôa, Ernane Torres; Wutzow, Kesia Gemima Palma Rigo; Lucchetti, Bruno Fernando; Bellinati, Natalia Veronez da Cunha
Resumo: A obesidade é uma condição fisiopatológica e um dos principais fatores de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares (DCV) Estudos mostram sua relação com a redução da produção de óxido nítrico (NO) e aumento de espécies reativas de oxigênio (ERO) que podem contribuir para o aumento do tônus simpático levando à hipertensão Dessa forma, este trabalho teve como objetivo avaliar os parâmetros cardiovasculares e autonômicos e perfil oxidativo em ratos controle (CTR) e com obesidade (MSG) suplementados com L-arg e vitamina C Ratos Wistar foram submetidos a indução da obesidade com injeções subcutâneas de glutamato monossódico (MSG) Este trabalho foi dividido em 2 estudos: Estudo 1) os ratos CTR e MSG foram suplementados com L-arginina ou veículo durante 3 dias e foram cateterizados para registros cardiovasculares e autonômicos e retirado tecidos para dosagens de NO Como resultado ratos com obesidade aos 9 dias de vida apresentaram aumento do tecido adiposo retroperitoneal e perigonadal comparado ao CTR e após suplementação com L-arg houve uma redução de ambos tecidos adiposos comparado ao grupo CTR L-arg Ratos MSG água apresentaram hipertensão em relação ao CTR água no entanto após L-arg houve redução da PAM somente no grupo CTR L-arg em comparação ao CTR água Ratos MSG apresentaram aumento no componente LF e redução no componente HF em relação ao CTR e após a L-arg mostrou redução do LF e aumento do HF No barorreflexo espontâneo o grupo MSG L-arg apresentou maior ganho up em relação ao CTR L-arg Ratos MSG L-arg apresentaram aumento de nitrito no coração em relação ao CTR L-arg; no fígado o grupo MSG água apresentou aumento de nitrito em relação ao CTR água e após L-arg houve aumento do CTR L-arg em relação ao CTR água No plasma, o grupo MSG após a suplementação com L-arg apresentou maior aumento de nitrito em relação ao MSG água Estudo 2: ratos CTR e MSG receberam microinjeção de salina, L-glutamato ou vit C na RVLM Outros grupos CTR e MSG foram tratados com vit C por via oral durante 21 dias para avaliar o perfil oxidativo na RVLM e dosagem de NO em tecidos Os resultados obtidos foram que ratos neonatos tratados com glutamato monossódico apresentaram obesidade e hipertensão aos 9 dias de vida, além de aumento da FC em comparação com o grupo CTR Ratos MSG apresentaram maior resposta pressórica à microinjeção de L-glu e menor resposta à vit C na RVLM em comparação ao grupo CTR L-glu e vit C respectivamente Ratos MSG apresentaram aumento do NBT e T-BARS na RVLM e adrenal e no rim aumento do NBT e redução do ABTS em comparação ao grupo CTR Os grupos tratados com vit C houve aumento do ABTS na RVLM de ratos MSG vit C em relação ao CTR vit C, aumento de NBT em ratos MSG água comparado ao CTR água e, após o tratamento ocorreu redução do grupo MSG vit C em relação ao MSG água; houve redução do T-bars em ratos MSG vit C quando comparados ao MSG água O tratamento com vit C promoveu aumento de nitrito no coração dos ratos do grupo MSG vit C comparado ao MSG água Dessa forma, a conclusão do estudo 1 mostrou que a L-arg foi eficaz em reduzir tecido adiposo podendo ter influenciado na melhora dos parâmetros autonômicos Assim, o presente estudo sugere que através do uso da L-arginina ou tratamento com vit C em animais obesos é possível obter benefícios no tratamento da hipertensão e na própria condição de obesidade
Peptídeo intestinal vasoativo e polipeptídeo hipofisário ativador de adenilciclase na homeostase energética: papel dos estrógenos
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-02-23) Martins, Andressa Busetti; Zaia, Cássia Thaïs Bussamra Vieira; Rorato, Rodrigo César; Kiss, Ana Carolina Inhasz; Cassola, Priscila; Gomes, Gislaine Garcia Pelosi
Resumo: O peptídeo intestinal vasoativo (VIP) e peptídeo ativador de adenilato ciclase (PACAP) são peptídeos anorexígenos que atuam no hipotálamo participando do controle neural de ingestão alimentar e do metabolismo energético. Os estrógenos também participam do controle da homeostase energética e têm papel inibitório sobre a ingestão alimentar em fêmeas. O presente trabalho, visou elucidar a ação do VIP e do PACAP e entender o papel dos estrógenos nas ações destes peptídeos. Para isso, todos os ratos (Wistar machos ou fêmeas adultos) foram submetidos à estereotaxia para implantação de cânula guia intracerebroventricular (ICV, ventrículo lateral) ou no núcleo arqueado do hipotálamo (ARC). As fêmeas, imediatamente após a estereotaxia, foram também ovariectomizadas bilateralmente e durante sete dias, receberam reposição hormonal (cipionato de estradiol; 10 μg/0,2 mL/rata, sc) ou o veículo de diluição (óleo de milho; 0,2 mL, sc). Após microinjeção de VIP ou PACAP, avaliou-se a ingestão alimentar, fez-se eutanasia para coleta de sangue para as análises bioquímicas e do cérebro para PCR em tempo real ou fez-se perfusão para análises de imuno-histoquímica. Nos machos, tanto VIP quanto PACAP microinjetados no ARC ou ICV promoveram menor ingestão de alimentos, aumento das concentrações plasmáticas de glicose e ácidos graxos livres e diminuição plasmática de triglicerídeos, lipídeos totais e colesterol. Assim, o ARC pode ser apontado como um importante local de ação de VIP e PACAP para induzir hipofagia e alterações metabólicas plasmáticas. Nas fêmeas, os dados mostraram a participação dos estrógenos em promover hiperglicemia e redução da ingestão alimentar, entretanto os estrógenos parecem ter participação mais ativa nas ações do PACAP, sendo ressaltadas pelo aumento da expressão PAC1 e dos neurônios imunorreativos especialmente no ARC. Assim, sugere-se que os estrógenos atuam juntamente com PACAP no ARC e de forma indireta sobre as ações do VIP. Abstract: Vasoactive intestinal peptide (VIP) and adenylate cyclase activating peptide (PACAP) are anorectic peptides that act on the hypothalamus participating in the neural control of food intake and energy metabolism. Estrogens also participate in the control of energy homeostasis and have an inhibitory role on food intake in females. The present work aimed to elucidate the action of VIP and PACAP and to understand the role of estrogens in the actions of these peptides. For this, all rats (adult male or female Wistar) were submitted to stereotaxis for implantation of an intracerebroventricular guide cannula (ICV, lateral ventricle) or in the arcuate nucleus of the hypothalamus (ARC). The females, immediately after stereotaxis, were also bilaterally ovariectomized and, for seven days, received hormone replacement (estradiol cypionate; 10 μg/0.2 mL/rats, sc) or the dilution vehicle (corn oil; 0.2 mL, sc). After microinjection of VIP or PACAP, food intake was evaluated, blood was euthanized for biochemical and brain analysis for real-time PCR, or perfusion was performed for immunohistochemical analysis. In males, both VIP and PACAP microinjected into the ARC or ICV promoted lower food intake, increased plasma concentrations of glucose and free fatty acids, and decreased plasma triglycerides, total lipids and cholesterol. Thus, the ARC can be pointed out as an important site of action of VIP and PACAP to induce hypophagia and plasma metabolic alterations. In females, the data showed the participation of estrogens in promoting hyperglycemia and reduced food intake, however estrogens seem to have a more active participation in the actions of PACAP, being highlighted by the increase of PAC1 expression and of immunoreactive neurons especially in the ARC. Thus, it is suggested that estrogens act together with PACAP in the ARC and indirectly on the actions of the VIP.
Efeitos da interleucina 6 sobre a neoglicogênese, ação supressiva da insulina na glicogenólise e sensibilidade periférica à insulina
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-04-29) Biazi, Giuliana Regina; Souza, Helenir Medri de; Uchôa, Ernane Torres; Graciano, Maria Fernanda Rodrigues; Kurauti, Mirian Ayumi; Bazotte, Roberto Barbosa
Resumo: A interleucina 6 (IL6) é uma citocina que, além da sua função imunomoduladora, está envolvida com diversas respostas biológicas em vários tecidos, desempenhando importantes funções homeostáticas. Esta citocina exerce uma variedade de efeitos metabólicos, desempenhando importante função na regulação do metabolismo de lipídeos, proteínas e carboidratos, especialmente na homeostase da glicose. No entanto, o aumento crônico de IL6, como ocorre em doenças inflamatórias (diabetes tipo 2 e câncer), tem sido associado a vários distúrbios metabólicos, incluindo anormalidades no metabolismo da glicose. Embora alguns efeitos metabólicos da IL6 estão bem estabelecidos, seu efeito na neoglicogênese é controverso e sobre a ação da insulina no catabolismo do glicogênio estimulado pela adenosina monofosfato cíclica (AMPc) é desconhecido. Os objetivos principais deste estudo foram investigar os efeitos da IL6 sobre a neoglicogênese hepática a partir de vários precursores de glicose (alanina, piruvato e glutamina) e sobre a ação supressiva da insulina na glicogenólise hepática estimulada pelo AMPc em ratos. Os efeitos da IL6 na sensibilidade periférica à insulina também foram avaliados. Para estes propósitos, a IL6 foi administrada endovenosamente nos ratos. Uma (1) hora depois foram avaliadas a neoglicogênese e a glicogenólise, em perfusão de fígado in situ, e a sensibilidade periférica à insulina, por meio do teste de tolerância à insulina (ITT). A injeção endovenosa de IL6 aumentou a produção hepática de glicose a partir da alanina, sem alterar a produção de piruvato, lactato e ureia. A injeção de IL6 também aumentou a produção hepática de glicose a partir do piruvato e da glutamina. Além disso, a IL6 diminuiu o efeito inibitório da insulina na produção hepática de glicose e glicogenólise estimuladas pelo AMPc. Adicionalmente, a IL6 reduziu a constante de desaparecimento da glicose (kITT) no plasma, durante o ITT. Em conclusão, a IL6 agudamente (1 hora) aumentou a neoglicogênese a partir de vários precursores de glicose (alanina, piruvato e glutamina) e diminuiu o efeito supressivo da insulina na glicogenólise estimulada pelo AMPc e a sensibilidade periférica à insulina. Os resultados sugerem um papel importante da IL6 na patogênese da resistência hepática e periférica à insulina e no aumento da liberação hepática de glicose (neoglicogênese e glicogenólise) em doenças inflamatórias, tais como o diabetes tipo 2 e câncer. Abstract: Interleukin 6 (IL6) is a cytokine that, in addition to its immunomodulatory function, is involved in several biological responses in various tissues, performing important homeostatic functions. This cytokine exerts a variety of metabolic effects, playing an important role in the regulation of lipid, protein and carbohydrate metabolism, especially in glucose homeostasis. However, the chronic increase of IL6, as occurs in inflammatory diseases (type 2 diabetes and cancer), has been associated with several metabolic disorders, including abnormalities in glucose metabolism. Although some metabolic effects of IL6 are well established, its effect on gluconeogenesis is controversial and on the action of insulin on glycogen catabolism stimulated by cyclic adenosine monophosphate (cAMP) is unknown. The main objectives of this study were to investigate the IL6 effects on hepatic gluconeogenesis from various glucose precursors (alanine, pyruvate and glutamine) and on insulin suppressive action in the cAMP-stimulated hepatic glycogenolysis in rats. The IL6 effects on peripheral insulin sensitivity were also evaluated. For these purposes, IL6 was administered intravenously to the rats. One (1) hour later, gluconeogenesis and glycogenolysis were evaluated in in situ liver perfusion, and peripheral insulin sensitivity using the insulin tolerance test (ITT). Intravenous injection of IL6 increased hepatic glucose production from alanine, without changing pyruvate, lactate and urea production. IL6 injection also increased hepatic glucose production from pyruvate and glutamine. Furthermore, IL6 decreased the insulin inhibitory effect on hepatic glucose production and glycogenolysis stimulated by cAMP. Additionally, IL6 reduced the plasma glucose disappearance constant (kITT) during ITT. In conclusion, IL6 acutely (1 hour) increased gluconeogenesis from several glucose precursors (alanine, pyruvate, and glutamine) and decreased the insulin suppressive effect on cAMP-stimulated glycogenolysis and peripheral insulin sensitivity. The results suggest an important role for IL6 in the pathogenesis of hepatic and peripheral insulin resistance and in the enhancement of hepatic glucose release (gluconeogenesis and glycogenolysis) in inflammatory diseases such as type 2 diabetes and cancer.
Estudo da função cardiovascular e autonômica e envolvimento do óxido nítrico e estresse oxidativo em animais com síndrome metabólica: modulação pelo treinamento físico e suplementação com L-arginina
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-10-06) Reginato, Gabriela de Souza; Pinge, Marli Cardoso Martins; Bertolini, Gisele Lopes; Marcondes, Fernanda Klein; Guarnier, Flávia Alessandra; Raquel, Hiviny de Ataides
Resumo: A síndrome metabólica (SM) é uma condição caracterizada pela presença de alterações endócrino-metabólicos, cardíacas e oxidativas, que aumentam o risco de doenças cardiovasculares, dislipidemia, hipertensão e diabetes mellitus tipo 2. Estudos mostram sua relação com a redução da produção de óxido nítrico (NO) e aumento de espécies reativas de oxigênio. Portanto, faz-se relevante investigar os efeitos da suplementação com L-arginina (l-arg), que é considerada um substrato fundamental para a síntese de NO. O NO desempenha um papel importante na função cardiovascular e autonômica, em processos que regulam o tanto o balanço energético (fome e saciedade), como inflamatório (antioxidante e pró-oxidante). Alem disso, a prática regular de exercícios aeróbicos pode promover diversos efeitos benéficos ao organismo, principalmente sobre o sistema cardiovascular, modulando a biodisponibilidade do NO e na defesa antioxidante. Dessa forma, esse trabalho teve como objetivo avaliar parâmetros cardiovasculares, autonômicos, oxidativos e concentração de nitrito tecidual de ratos controle e com SM treinados e sedentários e suplementados ou não com l-arg. A SM foi induzida pela administração subcutânea de glutamato monossódico (dose 4mg/g/dia) do 1º ao 5º dia de vida e ratos controles receberam solução de salina equimolar. O treinamento físico (TF) em esteira e a suplementação com l-arg ocorreram de forma concomitante, durante oito semanas a partir do 60º dia de vida. Após esse período, os animais foram submetidos à cirurgia de cateterização da artéria femoral para registro dos parâmetros cardiovasculares e ánalise de variabilidade da pressão arterial, intervalo de pulso e sensibilidade barorreflexa. Após os protocolos de registro cardiovascular, os animais foram submetidos a eutanasia e os órgãos retirados para análises oxidativas, metabólicas e dosagens de NO. Outros grupos de animais passaram por jejum para realização do teste de tolerância à insulina. Como resultados, ratos que receberam injeção de glutamato monossódico desenvolveram a SM na vida adulta e após o TF, ou associação do TF com a suplementação com l-arg houve redução dos tecidos adiposos (perigonadal e retroperitoneal) e do Índice de Lee em ratos com SM. Somado a isso, animais com SM apresentaram aumento de ácidos graxos livres plasmáticos e esteatose hepática, parâmetros esses que foram reduzidos pelo TF e suplementação com l-arg. Nos parâmetros cardiovasculares, animais SM sedentário água apresentaram aumento da pressão arterial e da frêquencia cardíaca em relação ao grupo CTR e, a suplementação com l-arg e o TF foram capazes de reduzir esses parâmetros nos animais SM, além disso, animais SM treinados apresentaram bradicardia em relação aos SM sedentário. Ratos SM sedentários tratados com água apresentaram diminuição nas concentrações de NO nos tecidos periféricos e a suplementação associada ao TF foram capazes de aumentar essas concentrações. Na avaliação oxidativa em tecidos periféricos e no plasma, foi observado aumento do estresse oxidativo dos animais do grupo SM sedentário tratado com água, sendo que o TF associado ou não a suplementação com l-arg promoveu a redução dos marcadores pró-oxidantes analisados. Dessa forma, nossos resultados nos permitem concluir que a suplementação com l-arg associada ao TF ou não e, o TF isolado foram capazes de reverter as alterações metabólicas, oxidativas e cardiovasculares em ratos com SM. Abstract: Metabolic Syndrome (MS) is a condition characterized by the presence of alterations in endocrine-metabolic aspects, cardiac and oxidation that increase the risk of cardiovascular disease, dyslipidemia, hypertension and Type 2 diabetes mellitus. Studies show their relationship to the reduction of nitric oxide (NO) production and an increase in reactive oxygen species. Therefore it makes it relevant to investigate the effects of supplementation with l-arginine (l-arg) which is considered an essential substrate for NO synthesis. NO plays an important role in cardiovascular and autonomic function, in processes that regulate energy balance such as hunger and satiety, and also in the inflammatory process, both as an antioxidant and as a pro-oxidant. In addition, the regular practice of aerobic exercise can promote several beneficial effects to the body, especially on the cardiovascular system, modulating the bioavailability of NO and antioxidant defense. Thus, this study aimed to evaluate cardiovascular, autonomic, oxidative parameters and tissue nitrite concentration in control rats and rats trained or not, and supplemented or not with l-arg. MS was induced by subcutaneous administration of monosodium glutamate from the 1st to the 5th day of life and control rats received an equimolar saline solution. The physical training (PT) on the treadmill and supplementation with l-arg occurred concomitantly for eight weeks after the 60th day of life. After this period, the animals underwent femoral artery catheterization surgery to record cardiovascular parameters and calculate the variability of blood pressure, pulse interval and baroreflex sensitivity. After the cardiovascular registration protocols, the animals were euthanized and the organs were removed for oxidative and metabolic analysis and NO dosages. Other groups of animals were fasted to perform the insulin tolerance test. As a result, rats that received injection of monosodium glutamate developed MS in adulthood and after PT and the association of PT with supplementation with l-arg, there was a reduction in the amount of both adipose tissues in rats with MS, and a reduction in the lee index of these animals with MS after supplementation with l-arg associated with PT. Animals with MS showed increased plasma FFAS and hepatic steatosis, and these parameters were reduced by PT and by supplementation with l-arg associated or not with PT. In cardiovascular parameters, sedentary water MS animals showed increased blood pressure and heart rate in relation to the CTR group, and supplementation with l-arg and PT were able to reduce these parameters in MS animals, moreover, trained sm animals showed bradycardia in relation to sedentary MS. Sedentary MS rats treated with water showed a decrease in NO concentrations in peripheral tissues and supplementation associated with PT was able to increase these concentrations. In the measurement of oxidative balance in peripheral tissues and plasma, an increase in oxidative stress was observed in animals in the sedentary MS group treated with water and PT associated or not with supplementation with l-arg promoted a reduction in the analyzed pro-oxidant markers. Thus, our results allow us to conclude that supplementation with l-arg associated with PT or not, and isolated PT were able to reverse metabolic, oxidative and cardiovascular alterations in rats with MS.
Efeitos da insulina, isolada ou associada à pioglitazona, na caquexia e parâmetros metabólicos relacionados em ratos portadores de tumor Walker-256
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-06-25) Miksza, Daniele Romani; Souza, Helenir Medri de; Bazotte, Roberto Barbosa; Mazzuco, Tânia Longo; Zaia, Cássia Thaïs Bussamra Vieira; Graciano, Maria Fernanda Rodrigues
Resumo: A caquexia do câncer é uma síndrome caracterizada por intensa perda de massa adiposa, muscular e corpórea, que afeta negativamente a qualidade de vida dos pacientes, diminui a tolerância e a resposta aos tratamentos convencionais e é responsável por grande parte das mortes. Até o momento não há tratamento eficaz para o combate desta síndrome. Poucos estudos têm avaliado os efeitos da insulina (INS) e de agentes sensibilizadores da INS, como a pioglitazona (PIO), na caquexia do câncer, permanecendo desconhecidos as doses eficazes e os efeitos destes fármacos, particularmente quando associados. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos dos tratamentos com INS, isolada ou associada à PIO, ambas em várias doses, sobre a síndrome caquética e parâmetros relacionados em ratos portadores de tumor Walker-256. Os tratamentos isolados com INS 9, 18 ou 27 U/kg (sc) ou com a associação INS 18 U/Kg (sc) + PIO 5, 10, 20 ou 40 mg/kg (oral) foram feitos uma vez ao dia, por 6 ou 12 dias, a partir do dia da inoculação das células tumorais nos ratos. Os tratamentos isolados com INS 9, 18 ou 27 U/kg por 6 dias não promoveram melhora significativa na perda de massa corpórea e adiposa (retroperitoneal e epididimal) dos ratos portadores de tumor. No entanto, os tratamentos por 12 dias com INS 18 ou 27 U/Kg, mas não 9 U/kg, reduziram similarmente a perda de massa corpórea e adiposa (retroperitoneal e epididimal). Os tratamentos associados com INS 18 U/kg + PIO 5, 10, 20 ou 40 mg/kg, por 6 ou 12 dias, preveniram similarmente a perda de massa corpórea dos ratos portadores de tumor. Os efeitos benéficos destas associações foram acompanhados de prevenção da perda de massa adiposa nos ratos tratados por 6 (epididimal e mesentérica) e 12 (retroperitoneal, epididimal, mesentérica e subcutânea inguinal) dias. Ratos tratados por 12 dias com a associação INS 18 U/kg + PIO 5 mg/kg apresentaram ganho de massa adiposa (retroperitoneal e epididimal) comparados aos ratos tratados só com INS 18 U/kg. Em acordo, o ganho de massa corporal dos ratos tratados por 12 dias com esta associação foi maior (73,7%) que dos ratos tratados só com INS 18 U/kg (14,7%). O ganho de massa corpórea promovido pela INS 18 U/kg + PIO 5 mg/kg foi associado à melhora da sensibilidade periférica à INS, à redução de fatores circulantes indutores de resistência à INS (triacilgliceróis e ácidos graxos livres) e ao aumento da expressão de proteínas da via de sinalização da INS (p-Akt) no tecido adiposo (epididimal e subcutâneo inguinal). Nenhum dos tratamentos (isolados ou associados) alterou o crescimento tumoral, a perda de massa muscular e a anorexia dos ratos portadores de tumor, exceto a INS 27 U/kg (12 dias) que aumentou a ingestão alimentar. Em conclusão, os tratamentos com associações INS 18 U / kg + PIO 5, 10, 20 ou 40 mg/kg foram similarmente mais eficazes do que o tratamento isolados com INS 18 U/kg. A associação INS 18 U/kg + PIO 5 mg/kg preveniu o aumento de fatores circulantes indutores de resistência à INS (triacilgliceróis e ácidos graxos livres), preveniu a resistência periférica à INS, ativou a Akt, preservou completamente o tecido adiposo e promoveu redução importante da perda de peso dos ratos portadores de tumor, mostrando-se promissora no combate de alterações metabólicas e da perda de massa adiposa, um preditor de sobrevida, associada à caquexia do câncer. Abstract: Cancer cachexia is a syndrome characterized by marked loss of fat, muscle and body mass, which negatively affects the quality of life of patients, reduces tolerance and response to conventional treatments, and is responsible for a large proportion of deaths. So far, there is no effective treatment to combat this syndrome. Few studies have evaluated the effects of insulin (INS) and INS sensitizing agents, such as pioglitazone (PIO), on cancer cachexia, and the effective doses and effects of these drugs, particularly when associated, remain unknown. The aim of this study was to investigate the effects of INS treatments, alone or associated with PIO, both at various doses, on cachectic syndrome and related parameters in Walker-256 tumorbearing rats. The isolated treatments with INS 9, 18 or 27 U/kg (sc) or with the association INS 18 U/kg (sc) + PIO 5, 10, 20 or 40 mg/kg (oral) were performed once a day, for 6 or 12 days, starting from the day of inoculation of the tumor cells in the rats. Isolated treatments with INS 9, 18 or 27 U/kg for 6 days did not significantly improve the loss of body mass and fat (retroperitoneal and epididymal) of tumorbearing rats. However, 12-day treatments with INS 18 or 27 U/kg, but not 9 U/kg, similarly reduced loss of body mass and fat (retroperitoneal and epididymal). Treatments associated with INS 18 U/kg + PIO 5, 10, 20 or 40 mg/kg, for 6 or 12 days, similarly prevented the body mass loss of tumor-bearing rats. The beneficial effects of these associations were accompanied by prevention of fat loss in rats treated for 6 (epididymal and mesenteric) and 12 (retroperitoneal, epididymal, mesenteric and inguinal subcutaneous) days. Rats treated for 12 days with the association INS 18 U/kg + PIO 5 mg/kg showed a gain in adipose mass (retroperitoneal and epididymal) compared to rats treated only with INS 18 U/kg. In agreement, the body mass gain of rats treated for 12 days with this association was greater (73.7%) than rats treated only with INS 18 U/kg (14.7%). The gain in body mass promoted by INS 18 U/kg + PIO 5 mg/kg was associated with improved INS peripheral sensitivity, reduced INS resistance-inducing circulating factors (triacylglycerols and free fatty acids) and increased expression of INS signaling pathway proteins (p-Akt) in adipose tissue (epididymal and inguinal subcutaneous). None of the treatments (alone or associated) changed tumor growth, muscle wasting and anorexia of tumor-bearing rats, except for INS 27 U/kg (12 days) which increased food intake. In conclusion, treatments with the associations INS 18 U/kg + PIO 5, 10, 20 or 40 mg/kg were similarly more effective than treatment alone with INS 18 U/kg. The association INS 18 U/kg + PIO 5 mg/kg prevented the increase of INS resistance-inducing circulating factors (triacylglycerols and free fatty acids), prevented INS peripheral resistance, activated Akt, completely preserved adipose tissue and promoted important reduction in weight loss of tumor-bearing rats, showing promise in combating metabolic changes and fat loss, a predictor of survival, associated with cancer cachexia.

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