02 - Mestrado - Ciência Animal

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Ocorrência do vírus da febre catarral maligna em bovinos do estado do Paraná, sul do Brasil: um estudo imuno-histoquímico retrospectivo
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-02-19) Xavier, Ana Aparecida Correa; Headley, Selwyn Arlington; Okano, Werner; Lisboa, Julio Augusto Naylor
Resumo: A febre catarral maligna (FCM) é uma doença infecciosa viral causada por diversos agentes do grupo do complexo de vírus da febre catarral maligna (VFCM). No Brasil, gammaherpesvirus ovino tipo 2 (OvHV-2), até o momento, é o único agente desse complexo associado ao desenvolvimento de FCM em ruminantes. O objetivo desse estudo foi determinar a prevalência do VFCM nos bovinos do estado do Paraná entre 2010 a 2019, demonstrar a distribuição geográfica da ocorrência do VFCM, caracterizar os achados histopatológicos nos rins dos bovinos infectados pelo VFCM, além de associar as lesões histológicas encontradas com a presença intralesional do vírus identificado por ensaios imuno-histoquímicos. O diagnóstico da infecção foi determinado pela imunorreatividade positiva para os antígenos intralesionais nos tecidos renais de bovinos através de ensaios imuno-histoquímicos utilizando um anticorpo monoclonal que detecta todos os membros do grupo de VFCM. Os antígenos intracitoplasmáticos de VFCM foram identificados em 39,6% (n=44) dos 111 rins de bovinos avaliados durante o período de 10 anos. As taxas de morbidade, mortalidade e letalidade foram 5,2%, 3,6% e 86,5%, respectivamente, com a predominância de casos na mesorregião Norte Central. Não foram identificados predominância sexual, racial e sazonalidade significativas, porém, bovinos com idade igual ou menor de 12 meses foram mais frequentemente acometidos. Nefrite intersticial linfocítica (93,2%; 41/44), degeneração vascular renal (84,1%; 37/44) e degeneração balonosa dos túbulos renais (81,8%; 36/44) foram os achados histopatológicos mais frequentemente observados em associação à infecção imunorreatividade positiva pelo VFCM. Os resultados sugerem que os bovinos foram infectados pelo VFCM, provavelmente OvHV-2, sendo endêmico no estado do Paraná. A utilização de um diagnóstico in situ resultou numa quantidade maior de casos de infecção do que foi anteriormente descrito e o rim deve ser coletado quando houver suspeita de infecção por OvHV-2 em bovinos. Adicionalmente, alterações degenerativas renais devem ser consideradas no diagnóstico histológico da infecção pelo VFCM em bovinos. Abstract: Malignant Catarrhal Fever (FCM) is a viral infectious disease caused by several agents of the Malignant Catarrhal Fever Virus (MCFV) complex group. In Brazil, gammaherpesvirus ovine-2 (OvHV-2), is the only agent of this complex associated with the development of MCF in ruminants. The objectives of this study were to determine the prevalence of MCFV in cattle in the state of Paraná between 2010 and 2019, to demonstrate the geographic distribution of the occurrence of MCFV, to characterize the histopathological findings in the kidneys of bovines infected with MCFV, and to associating the histological lesions found with the intralesional identification of MCFV antigens by immunohistochemistry. The diagnosis of the infection was determined by positive immunoreactivity for intralesional antigens in renal tissues of cattle using an immunohistochemical assay with a monoclonal antibody that detects all members of the MCFV. Intracytoplasmic MCFV antigens were identified on 39.6% (n = 44) of the 111 bovine kidneys evaluated athwart the 10-year period. The morbidity, mortality and lethality rates were 5.2%, 3.6% and 86.5%, respectively, with the predominance of cases in the North Central Paranaense mesoregion. Significant differences in sexual, cattle breeds, and seasonal predominance were not identified; however, calves with 12 months of age or younger were more frequently affected. Lymphocytic interstitial nephritis (93.2%; 41/44), renal vascular degeneration (84.1%; 37/44) and ballooning degeneration of the renal tubules (81.8%; 36/44) were principal histopathological findings in association with positive immunoreactivity to MCFV. The results suggest that the cattle were infected with a MCFV, probably OvHV-2, and MCFV is endemic in state of Paraná. The usage of in situ diagnosis has resulted in a greater number of cases of MCF than previously described and the kidney should be collected in cases of suspected infection with OvHV-2 in cattle. Additionally, renal degenerative changes should be considered in the histological diagnosis of MCFV-induced infections in cattle.
Transmissão interespécies de Edwardsiella ictaluri em três espécies de peixes (Oreochromis niloticus, Pseudoplatystoma corruscans e Clarias gariepinus)
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-02-26) Costa, Arthur Roberto da; Pereira, Ulisses de Pádua; Lorenzetti, Elis; Laterça, Maurício Martins
Resumo: A piscicultura Brasileira alcança novos patamares a cada ano, com a tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) como espécie mais produzida, seguida pelos peixes nativos, como o tambaqui (Colossoma macropomum), o pintado (Pseudoplatystoma corruscans) e o pirarucu (Arapaima gigas). A intensificação da produção, a importação e fuga de espécies exóticas, podem contribuir para o estabelecimento de doenças alóctones no país, como os casos recentes de franciselose e Vírus da necrose infecciosa de baço e rim (ISKNV). Edwardsiella ictaluri é a bactéria responsável por ocasionar a septicemia entérica do bagre do canal (ESC), doença que causa prejuízos de milhões de dólares na indústria do bagre do canal (Ictalurus punctatus) nos Estados Unidos e, recentemente, se tornou um risco para a indústria do panga (Pangasianodon hypophthalmus) na Ásia e para a fauna nativa da Austrália, contudo, pouco se sabe sobre este patógeno na piscicultura nacional. No mês de abril de 2020, uma cepa de Edwardsiella sp. foi isolada causando doença em pintados, em uma piscicultura no noroeste do estado do Paraná. Os animais apresentavam ascite e sinais neurológicos, além de taxa de mortalidade maior que 50%. O objetivo deste trabalho foi confirmar se a bactéria se tratava de uma E. ictaluri e verificar se foi a responsável pela mortalidade dos animais; além de, avaliar se espécies exóticas introduzidas na região podem ter atuado como vetores para a disseminação deste patógeno nas pisciculturas locais. Foi conduzido um experimento de infecção por imersão e inoculação intraperitoneal, com pintados, tilápias do Nilo e bagres Africanos. Quarenta e oito animais de cada espécie foram divididos em seis aquários por espécie, contendo oito animais cada. Em paralelo, um experimento de infecção por coabitação com peixes de outras espécies previamente infectados foi realizado em três aquários contendo quatro peixes de cada espécie. Após o sequenciamento do gene 16S, a bactéria foi classificada como E. ictaluri. Todos os pintados desafiados por via intraperitoneal e imersão vieram a óbito em um período de onze e quinze dias, respectivamente. Houve mortalidade também nas coabitações entre todas as espécies. Os sinais clínicos observados foram compatíveis com os relatados na piscicultura e descritos na literatura como ESC. Nas análises histopatológicas foi possível notar a presença de infiltrado inflamatório, principalmente eosinófilos no cérebro de todas as espécies e no olho de tilápias; o fígado, principalmente dos pintados, apresentou alta depleção de glicogênio, congestão e necrose. A bactéria foi reisolada com sucesso de todas as espécies presentes no experimento, mostrando que mesmo os animais que não vieram a óbito se tornaram carreadores do patógeno. Com isto, comprovamos a suscetibilidade do pintado a E. ictaluri, adicionando-o a lista de espécies que podem ser acometidas por esta bactéria. Mais, demonstramos a capacidade de espécies exóticas invasivas, de atuarem como vetores desta bactéria. Abstract: Brazilian aquaculture keeps growing year after year, with Nile tilapia (Oreochromis niloticus) as the most produced species, followed by the native fishes, such as tambaqui (Colossoma macropomum), pintado (Pseudoplatystoma corruscans) and pirarucu (Arapaima gigas). The intensification of production and introduction of exotic species can contribute to the establishment of alien diseases, as seen in the recente cases of francisellosis and Infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV). Edwardsiella ictaluri is the bacterial pathogen for the enteric septicemia of channel catfish (ESC), a disease responsible for losses of millions of dollars in the channel catfish (Ictalurus punctatus) industry in the United States and, recently became a risk for the panga (Pangasianodon hypophthalmus) production in Asia and for the Australia’s native fauna, however, little is known about this pathogen in the national pisciculture. In April 2020, a strain of Edwardsiella sp. was isolated causing disease in pintados, in a fish farm in the northwest of the Parana state. The diseased animals showed ascites and neurological signs, with q mortality rate greater than 50%. The objective of this work was to confirm if the bacterium was an E. ictaluri and to verify if it was the responsible for the fish mortality; in addition, to evaluate whether the exotic species introduced in the region could have acted as vectors for the spread of this pathogen in local fish farms. For this, an experimental infection by immersion and intraperitoneal inoculation was carried with pintado, Nile tilapia and African walking catfish. Forty-eight 48 animals of each specie were divided into six aquariums per species with eight individuals each. In parallel, a cohabitation infection experiment was carried in three aquariums with four fish from each species. After sequencing the 16S gene, the bacterium was identified as E. ictaluri. All pintados challenged by the intraperitoneal and immersion routes died after eleven and fifteen days, respectively. Also, mortality was verified in the cohabitation among all species. Observed clinical signs were compatible with those reported in the farm, and the ones described in the literature as ESC. Histopathology showed the presence of inflammatory infiltrate, mainly eosinophils, in the brain of all species and in the tilapia eye; the liver, especially the for pintado, showed high glycogen depletion, congestion and necrosis. The bacterium has been successfully reisolated from all the fish species, showing that even surviving animals can become carriers of the pathogen. With this, we proved the susceptibility of pintado to E. ictaluri, adding it to species that can be affected by this bacterium. Furthermore, we demonstrate the ability of invasive alien species to act as vectors for this bacterium.
Dosagem de Dimetilarginina Simétrica (SDMA) e a ultrassonografia Doppler de artéria renal e uterina em cadelas com complexo hiperplasia endometrial cística-piometra
(Universidade Estadual de Londrina, 2021-06-07) Correia, Letícia Amanda dos Santos; Martins, Maria Isabel Mello; Gava, Fábio Nelson; Lopes, Maria Denise
Resumo: O Complexo Hiperplasia Endometrial Cística (HEC)– piometra é uma afecção frequente de trato reprodutivo feminino de cadelas de caráter urgente e a lesão renal aguda é de comum ocorrência. Este estudo teve como objetivo a realização de exames hematológicos, bioquímicos, mensuração da SDMA, avaliação Dopplervelocimétrica de artérias uterinas e renais de paciente com complexo Hiperplasia Endometrial Cística-piometra no momento do diagnóstico e a média 6 meses para avaliação renal. Foram avaliadas cadelas em dois momentos: M1 (dia do diagnóstico de HEC-piometra) com n=36 e M2 (retorno médio após 6 meses após tratamento) com n=16. Para o grupo controle foram selecionadas seis cadelas sem alterações em exames hematológicos e bioquímicos, sem histórico de doenças anteriores, nas quais foram realizadas avaliação ultrassonográfica Doppler de artéria uterina e artérias renais. Em M1 foi realizado hemograma, creatinina, ureia, e SDMA sérico (n=15), relação proteína-creatinina urinária (UPC), aferição de pressão arterial sistólica, ultrassom Doppler de artéria uterina e das artérias renais, cultura de secreção uterina. Em M1 as pacientes foram classificadas em azotêmicas (AZO) e não azotêmicas (NAZO). No M2 foi realizado hemograma, creatinina, ureia, e SDMA sérico (n=16), UPC, aferição de pressão arterial sistólica e ultrassom Doppler de artérias renais (n=13). A comparação entre o M1 e M2 foi realizada entre os animais que estiveram presente nos dois momentos. Para avaliação de significância estatística foi considerado p<0,05. No M1 não houve diferença entre pacientes AZO e NAZO para leucócitos (p= 0,092), SDMA (p=0,059), porém as médias de SDMA estavam acima do limite de referência nos dois grupos. Em cadelas com complexo HEC -piometra o SDMA sérico obteve diferença (p=0,009) com valores superiores quando cérvix fechada comparadas a aberta. Em M2 os valores médios de creatinina, ureia e SDMA séricos foram de 0,92 mg/dL, 33,8 mg/dL, e 11,8μg/dL, respectivamente, e não houve azotemia em nenhum dos casos avaliados, porém houve aumento dos limites de referência do SDMA em duas cadelas (15 μg/dL) totalizando 12,5% dos animais. A comparação entre M1 e M2 foi significativa para SDMA e ureia (p=0,008 e p=0,037) e não significativa entre creatinina (p= 0,058). A UPC média dos animais de M1 foi de 0,82±0,35, com 71,5% considerado proteinúrico e 28,5% proteinúricos limítrofes, e em M2 a média foi de 0,25±0,17 com apenas uma paciente considerada proteinúrica. A média da pressão arterial sistólica em M1 e M2 foi de 123,86±28,77 e 144,58±11,37 respectivamente, onde a maioria das cadelas (66,6%) obtiveram pressão arterial em M2 classificada em pré-hipertensas e hipertensas com diferença estatística (p=0,021). Para avaliação ultrassonográfica houve diferença estatística entre animais controle e animais com HEC-piometra nos parâmetros velocidade de pico sistólico (PSV) artéria uterina (p=0,001), velocidade final diastólica (EDV) de artéria uterina (p<0,001), índice de pulsatilidade (PI) de artéria uterina (p=0,003), índice de resistividade (RI) de artéria uterina (p=0,001). Houve diferença significativa entre o grupo AZO E NAZO em PI de artéria renal esquerda e direita e RI de artéria renal direita (p=0,008), porém na comparação entre os momentos M1 e M2 não houve diferença, demonstrando persistência das alterações Dopplervelocimétricas renais a longo prazo. A presença de correlações em M1 foi observada entre SDMA e Creatinina (r= 0,721), SDMA e ureia (r= 0,808), SDMA e EDV ART UTER (r= 0,722), SDMA e PI RD (r=0,789), SDMA e PSV RIM ESQ (r=0,840) e SDMA e EDV RIM ESQ (r= 0,660), sendo correlações positivas fortes e moderadas. Este trabalho permite afirmar que o SDMA se encontra aumentado em pacientes com complexo HEC-piometra não azotêmicos e que a pressão arterial na maioria dos animais pode estar aumentada a longo prazo. Além das mensurações Dopplervelocimétricas de artéria uterina se encontram aumentadas em cadelas com HEC-Piometra e possuir altas correções com aumento de EDV de artéria uterina com SDMA e há aumento do fluxo sanguíneo de artérias renais no momento do diagnóstico e a média 6 meses. Abstract: The Cystic Endometrial Hyperplasia Complex (CEC) – pyometra is a frequent affection of the female reproductive tract of urgent female dogs and acute kidney injury is a common occurrence. This study aimed to carry out hematological and biochemical tests, measurement of SDMA, Dopplervelocimetric assessment of uterine and renal arteries of a patient with Cystic Endometrial Hyperplasia-pyometra complex at the time of diagnosis and an average of 6 months for renal assessment. Bitches were evaluated in two moments: M1 (day of diagnosis of HEC-pyometra) with n=36 and M2 (mean return after 6 months after treatment) with n=16. For the control group, six bitches without alterations in hematological and biochemical exams, with no history of previous diseases, were selected, in which Doppler ultrasound evaluation of the uterine artery and renal arteries was performed. In M1, blood count, creatinine, urea, and serum SDMA (n=15), urinary protein-creatinine ratio (UPC), systolic blood pressure measurement, Doppler ultrasound of the uterine artery and renal arteries, and culture of uterine secretion were performed. In M1 the patients were classified as azotemic (AZO) and non-azotemic (NAZO). In M2, blood count, creatinine, urea, and serum SDMA (n=16), UPC, systolic blood pressure measurement and Doppler ultrasound of renal arteries (n=13) were performed. The comparison between M1 and M2 was performed between the animals that were present at both times. For the evaluation of statistical significance, p<0.05 was considered. At M1 there was no difference between AZO and NAZO patients for leukocytes (p=0.092), SDMA (p=0.059), but the SDMA means were above the reference limit in both groups. In bitches with HEC-pyometra complex, serum SDMA had a difference (p=0.009) with higher values when cervix closed compared to open. In M2, the mean values of serum creatinine, urea and SDMA were 0.92 mg/dL, 33.8 mg/dL, and 11.8 μg/dL, respectively, and there was no azotemia in any of the cases evaluated, but there was an increase of the SDMA reference limits in two bitches (15 μg/dL) totaling 12.5% of the animals. The comparison between M1 and M2 was significant for SDMA and urea (p=0.008 and p=0.037) and not significant for creatinine (p= 0.058). The mean UPC of the animals in M1 was 0.82±0.35, with 71.5% considered proteinuric and 28.5% borderline proteinuric, and in M2 the mean was 0.25±0.17 with only one patient considered proteinuric. The mean systolic blood pressure in M1 and M2 was 123.86±28.77 and 144.58±11.37 respectively, where most bitches (66.6%) had blood pressure in M2 classified as pre-hypertensive and hypertensive with statistical difference (p=0.021). For ultrasonographic evaluation, there was statistical difference between control animals and animals with HEC-pyometra in the parameters of peak systolic velocity (PSV) uterine artery (p=0.001), end diastolic velocity (EDV) of uterine artery (p<0.001), pulsatility index (PI) of uterine artery (p=0.003), resistivity index (RI) of uterine artery (p=0.001). There was a significant difference between the AZO and NAZO group in PI of the left and right renal artery and RI of the right renal artery (p=0.008), but when comparing moments M1 and M2 there was no difference, demonstrating the persistence of long-term renal Doppler velocimetric alterations deadline. The presence of correlations in M1 was observed between SDMA and Creatinine (r= 0.721), SDMA and urea (r= 0.808), SDMA and EDV ART UTER (r= 0.722), SDMA and PI RD (r=0.789), SDMA and PSV RIM ESQ (r=0.840) and SDMA and EDV RIM ESQ (r= 0.660), with Strong and moderate positive correlations. This work allows us to affirm that SDMA is increased in patients with non-azotemic HEC-pyometra complex and that blood pressure in most animals may be increased in the long term. In addition to Doppler velocimetric measurements of the uterine artery, they are increased in bitches with HEC-Piometra and have high corrections with an increase in uterine artery EDV with SDMA and there is increased blood flow to renal arteries at the time of diagnosis and an average of 6 months.
Mycoplasma ovis e patógenos transmitidos por carrapatos em cavalos e carrapatos de um assentamento rural do sul do Brasil
(Universidade Estadual de Londrina, 2022-02-21) Kakimori, Monica Tiemi Aline; Vieira, Rafael Felipe da Costa; Garcia, João Luís; Otomura, Flávio Haragushiku; Barros, Luiz Daniel de
Resumo: Patógenos transmitidos por carrapatos (PTC) são um importante grupo de organismos que podem afetar animais e seres humanos na América do Sul. Hemoplasmose em cavalos pode ser considerada uma infecção acidental ou incomum. Portanto, este estudo teve como objetivo determinar a ocorrência dos agentes como Theileria equi, Babesia caballi e Ehrlichia sp., e hemoplasmas em equinos de um assentamento rural, localizado no Sul do Brasil, identificar as espécies de carrapatos e determinar os fatores associados à exposição/infecção. Amostras de sangue de 22 cavalos foram triadas para anti-T. equi e anti-Ehrlichia spp. anticorpos por ensaios de anticorpos fluorescentes indiretos (IFA). As amostras também foram testadas por ensaios de PCR visando o gene 18S rRNA de T. equi e B. caballi, e o gene 16S rRNA de hemoplasmas. Além disso, ensaios de PCR direcionados ao gene 16S rRNA, proteína formadora de ligação dissulfeto (dsb) de Ehrlichia spp. também foram realizados. Carrapatos foram coletados dos animais (inspeção) e do ambiente (arrasto de flanela e armadilhas de gelo seco), estes foram identificados por meio de chave de identificação. Adicionalmente 28 carrapatos adultos provenientes dos animais e 4 ninfas provenientes do ambiente, tiveram as glandulas salivares extraídas e triadas para Ehrlichia spp. (dsb gene) e Mycoplasma spp. (16S gene). Anticorpos para T. equi e Ehrlichia spp. foram detectados em 22/09 (40,91%; IC 95%: 23,26-61,27%) e 22/07 (31,81%; IC 95%: 16,36-52,68%) cavalos, respectivamente. DNA de T. equi, B. caballi e Mycoplasma spp. foram encontrados em 13/22 (59,09%), 1/22 (4,55%) e 11/22 (50%) cavalos, respectivamente, e todos foram negativos para Ehrlichia spp. Todas as sequências apresentaram ≥99% de identidade com múltiplas sequências de T. equi (18S rRNA), B. caballi (rap-1) e Mycoplasma ovis (16S rRNA) depositadas no GenBank. Todos os carrapatos adultos foram identificados como Dermacentor nitens 44/47 (93,62%) e Rhipicephalus microplus 3/47 (6,38%). Todas as glândulas salivares foram negativas para o gene dsb de Erhlichia spp. Dois de 28 (7,14%) glândulas provenientes de adultos dos animais foram positivos por PCR convencional, 11/28 (39,29%) e duas de 4 ninfas (50%) provenientes do ambiente foram positivos por PCR real time para o gene 16S rRNA para Mycoplasma spp. Este é o primeiro relato de infecção por M. ovis em equinos no Brasil, utilizando técnicas moleculares. Mycoplasma spp. foi detectada em glândulas salivares de D. nitens e R. microplus, sendo necessários mais estudos para esclarecer a ação vetorial dessas espécies. Foi possível observar uma baixa ocorrência de Ehrlichia spp. e ausência de PCR positivo em região onde não foram encontrados carrapatos Amblyomma sculptum. Abstract: Tick-borne pathogens (TBP) are an important group of organisms that can affect animals and humans in South America. Hemoplasma in horses can be considered an accidental or unusual infection. Therefore, this study aimed to determine the occurrence of agents such as Theileria equi, Babesia caballi and Ehrlichia sp., and hemoplasmas in horses from a rural settlement located in southern Brazil, identify the tick species and determine the factors associated with exposure/infection. Blood samples from 22 horses were screened for anti-T. equi and anti-Ehrlichia spp. antibodies by indirect fluorescent antibody (IFA) assays. The samples were also tested by PCR assays targeting the 18S rRNA gene from T. equi and B. caballi, and the 16S rRNA gene from hemoplasmas. In addition, PCR assays targeting the 16S rRNA gene, a disulfide bond forming protein (dsb) from Ehrlichia spp. were also carried out. Ticks were collected from the animals (inspection) and from the environment (flannel trawling and dry ice traps), and they were identified by means of an identification key. Additionally, 28 adult ticks from the animals and 4 nymphs from the environment had their salivary glands extracted and screened for Ehrlichia spp. (dsb gene) and Mycoplasma spp. (16S gene). Antibodies to T. equi and Ehrlichia spp. were detected in 09/22 (40.91%; 95% CI: 23.26-61.27%) and 07/22 (31.81%; 95% CI: 16.36-52.68%) horses, respectively. DNA from T. equi, B. caballi and Mycoplasma spp. were found in 13/22 (59.09%), 1/22 (4.55%) and 11/22 (50%) horses, respectively, and all were negative for Ehrlichia spp. All sequences showed ≥99% identity with multiple T. equi (18S rRNA), B. caballi (rap-1) and Mycoplasma ovis (16S rRNA) sequences deposited in GenBank. All adult ticks were identified as Dermacentor nitens 44/47 (93.62%) and Rhipicephalus microplus 3/47 (6.38%). All salivary glands were negative for Erhlichia spp. by dsb gene. Two of 28 (7.14%) glands from adult animals were positive by conventional PCR, 11/28 (39.29%) and two of 4 nymphs (50%) from the environment were positive by real time PCR for the gene 16S rRNA for Mycoplasma spp. This is the first report of M. ovis infection in horses in Brazil, using molecular techniques. Mycoplasma spp. was detected in salivary glands of D. nitens and R. microplus, and further studies are needed to clarify the vectorial action of these species. It was possible to observe a low occurrence of Ehrlichia spp. and absence of positive PCR in region where Amblyomma sculptum ticks were not found.
Identificação de cepas de bal com atividade anti- listeira: caracterização e aplicação da cepa bacteriocinogênica no controle de listeria monocytogenes em queijo
(Universidade Estadual de Londrina, 2023-02-23) Lira, Fernanda Montanholi de; Beloti, Vanerli; Giordano, Lucienne Garcia Pretto; Tamanini, Ronaldo; Pereira, Ulisses de Pádua
Resumo: As bactérias ácido láticas (BAL), são encontradas naturalmente em diversos alimentos, inclusive leite e derivados e podem contribuir como culturas iniciadoras ou adjuvantes para a produção de características desejáveis aos produtos alimentícios, além de produzirem substâncias com atividade antimicrobiana frente a patógenos alimentares como as bacteriocinas. Devido à crescente demanda dos consumidores por produtos sem aditivos químicos, as bacteriocinas podem ser consideradas uma alternativa bastante adequada para a conservação microbiológica de alimentos e proteção contra patógenos. Bacteriocinas têm sido usadas com o objetivo de inibir patógenos, como a Listeria monocytogenes em alimentos, através da adição de culturas microbianas produtoras de bacteriocinas ou da adição deste peptídeo antimicrobiano purificado ou semi-purificado. Os queijos, sobretudo os frescos ou de curta maturação, são especialmente vulneráveis à contaminação por patógenos, e em especial pela Listeria monocytogenes, que é um microrganismo ambiental frequente no leite e nas plantas de laticínios, e que pode re-contaminar o queijo em qualquer momento do processamento após a pasteurização do leite. O objetivo do estudo foi: identificar BALs produtoras de bacteriocina e caracterizar as cepas com atividade anti-listeria; caracterizar a bacteriocina e avaliar in vitro sua eficiência como conservante natural; avaliar o efeito antilisteria da cepa de Lactiplantibacillus plantarum bacteriocinogênica em queijos e produzir um filme comestível com efeito antilisterial. De 355 cepas de BAL testadas, duas (QS494 e QS530) foram capazes de produzir bacteriocina contra Listeria monocytogenes ATCC 7644 pelo método spot-on-lawn e foram identificadas como Lactiplantibacillus plantarum e Lactobacillus pentosus. Observou-se efeito bactericida do sobrenadante livre de células (CFS) da cepa QS494 (Lactiplantibacillus plantarum) já nas primeiras 8 horas, com redução de 1,7 log nas contagens de células viáveis de Listeria, enumeradas também em 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 24 horas a 36 °C. Ambas as cepas apresentaram boas características tecnológicas (atividade proteolítica e lipolítica, produção de diacetil) e ausência de produção de fatores de virulência (hemólise e gelatinase). Mudanças no pH do CFS obtido de Lactiplantibacillus plantarum não afetou sua atividade antimicrobiana. Além disso sua atividade antimicrobiana permaneceu estável após 10 min a 55, 80 e 100 °C. Nenhuma diminuição na atividade foi relatada após o tratamento por 15 min a 121° C e mesmo após submetido a congelamento (-20 °C) sua atividade inibitória foi observada após descongelamento por 12 semanas. Na avaliação do efeito anti-listeria em queijos, observou-se uma redução de 3 log na contagem de Listeria monocytogenes em 120 horas, nos queijos produzidos com a BAL bacteriocinogênica, enquanto nos queijos produzidos com cultura não bacteriocinogênica, observou-se um aumento de 2 log nas contagens. Filmes comestíveis produzidos com adição de bacteriocina precipitada nas concentrações de 50 e 25 mg/ml apresentaram efeito antimicrobiano contra Listeria monocytogenes ATCC 7644, com halos de 19 mm e 14 mm, respectivamente. Assim, as duas cepas estudadas possuem potencial tecnológico e de biossegurança, a bacteriocina por elas produzida apresentou bons resultados quando avaliada quanto à sua resistência às variações de pH e temperatura, e a cepa de Lactiplantibacillus plantarum apresentou excelente resultados no controle de Listeria monocytogenes em queijos, além disso a película comestível produzida com a bacteriocina também apresentou efeito anti-listeria in vitro. O que indica que as cepas apresentam potencial para serem utilizadas na indústria de alimentos para a elaboração de produtos lácteos, principalmente na produção de queijos. Abstract: Lactic acid bacteria (LAB) are found naturally in several foods, including milk and dairy products, and can contribute as starter cultures or adjuvants for the production of desirable characteristics in food products, in addition to producing substances with antimicrobial activity against food pathogens such as bacteriocins. Due to the growing consumer demand for products without chemical additives, bacteriocins can be considered a very suitable alternative for the microbiological conservation of food and protection against pathogens. Bacteriocins have been used to inhibit pathogens such as Listeria monocytogenes in foods by adding bacteriocinproducing microbial cultures or by adding this purified or semi-purified antimicrobial peptide. Cheeses, especially fresh or short-ripened cheeses, are especially vulnerable to contamination by pathogens, in particular by Listeria monocytogenes, which is an environmental microorganism common in milk and dairy plants, and which can re-contaminate cheese anywhere. processing time after pasteurization of milk. The study was carried out in 4 stages: to identify bacteriocin-producing BALs and to characterize the strains with anti-listeria activity; characterize bacteriocin and evaluate in vitro its efficiency as a natural preservative; to evaluate the anti-listeria effect of the bacteriocinogenic strain of Lactiplantibacillus plantarum in cheeses and to produce an edible film with anti-listerial effect. Of 355 LAB strains tested, two (QS494 and QS530) were able to produce bacteriocin against Listeria monocytogenes ATCC 7644 by the spot-on-lawn method and were identified as Lactiplantibacillus plantarum and Lactobacillus pentosus. A bactericidal effect of the cell-free supernatant (CFS) of strain QS494 (Lactiplantibacillus plantarum) was observed in the first 8 hours, with a 1.7 log reduction in the viable Listeria cell counts, also numbered in 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 and 24 hours at 36°C. Both strains showed good technological characteristics (proteolytic and lipolytic activity, production of diacetyl) and absence of production of virulence factors (hemolysis and gelatinase). Changes in the pH of CFS obtained from Lactiplantibacillus plantarum did not affect its antimicrobial activity. Furthermore, its antimicrobial activity remained stable after 10 min at 55, 80 and 100 °C. No decrease in activity was reported after treatment for 15 min at 121°C. And even after freezing (-20°C) its inhibitory activity was observed after thawing for 12 weeks. In the evaluation of the anti-listeria effect in cheeses, a reduction of 3 log in the Count of Listeria monocytogenes in 120 hours was observed, in cheeses produced with bacteriocinogenic BAL, while in cheeses produced with non-bacteriocinogenic culture, an increase of 2 logs was observed. in the counts. Edible films produced with the addition of precipitated bacteriocin at concentrations of 50 and 25 mg/ml showed an antimicrobial effect against Listeria monocytogenes ATCC 7644, with halos of 19 mm and 14 mm, respectively. Thus, the two strains studied have technological and biosafety potential, the bacteriocin produced by them showed good results When evaluated regarding its resistance to pH and temperature variations, and the Lactiplantibacillus plantarum strain showed excellent results in the control of Listeria monocytogenes in cheeses, in addition, the edible film produced with the bacteriocin also showed an anti-listeria effect in vitro. This indicates that the strains have the potential to be used in the food industry for the elaboration of dairy products, mainly in the production of cheeses.
Identificação molecular de deteriorantes mesófilos em leite cru refrigerado
Mareze, Juliana; Beloti, Vanerli [Orientador]; Santana, Elsa Helena Walter de; Tamanini, Ronaldo
Resumo: A baixa qualidade do leite cru e reduzida vida útil do leite pasteurizado no Brasil causados pela deterioração dos constituintes do leite por parte dos microrganismos deteriorantes reflete diretamente seu potencial tecnológico para indústria Conhecer os microrganismos deteriorantes que constituem a microbiota do leite cru refrigerado possibilita identificar a origem destes contaminantes, desta forma permite-se estabelecer ações de controle para evitar sua presença no leite O objetivo deste estudo foi identificar geneticamente a microbiota mesofílica deteriorante do leite cru refrigerado da região de Castro-PR por meio de ferramentas moleculares afim de caracterizar a microbiota com atividade proteolítica e lipolítica Foram coletadas 18 amostras de leite cru refrigerado direto dos tanques de expansão de propriedades da região centro-oriental do Paraná As propriedades eram dotadas de ordenhadeira mecânica de circuito fechado com sistema de pré-resfriamento em placas e refrigeração por tanque de expansão A contagem de microrganismos mesófilos foi realizada em Petrifilm ACTM e para a verificação da atividade proteolítica e/ou lipolítica utilizou-se ágar leite suplementado (9:1) com solução leite em pó desnatado reconstituído (1%) e ágar tributirina suplementado (99:1) com tributirina, respectivamente Para extração de DNA das cepas de mesófilos foi utilizada a técnica da fervura e para amplificação parcial do gene 16S rRNA utilizou-se a técnica de PCR, utilizando os primers 27F e 1492R Utilizou-se a análise de RFLP para definir os grupos genéticos entre as cepas isoladas e facilitar a escolha dos exemplares para sequenciamento A média da contagem de microrganismos mesófilos foi de 3,58 log UFC/mL A microbiota mesofílica com atividade proteolítica e /ou lipolítica foi identificada através da amplificação e sequenciamento do gene 16S rRNA Todas as cepas foram identificadas com percentual de identidade de 1% a partir da comparação com dados dos GenBank Diante disso, selecionou-se 172 cepas, as quais apresentaram capacidade proteolítica e/ou lipolítica, onde 66 (38%) cepas apresentaram atividade proteolítica, 57 (33%) ambas atividades e (49) 29% apenas atividade lipolítica Bactérias Gram-positivas corresponderam 83,72% do total de cepas e 16,28% foram Gram-negativas A identificação genética das cepas mesofílicas com capacidade deteriorante mostrou predominância dos gêneros Lactococcus e Enterococcus (4,11%), seguida por Staphylococcus sp (13,94%); Streptococcus sp (13,36%), Acinetobacter sp (11,62%), Kurthia sp e Bacillus sp (5,23%), Rothia sp (4,6%) e Stenotrophomonas (1,16%) Em relação a atividade deteriorante os gêneros Lactococcus e Enterococcus apresentaram entre os isolados, maior atividade proteolítica enquanto que o Streptococcus dysgalactae apresentou maior atividade lipolítica Os gêneros Rothia sp e Kurthia sp foram isoladas pela primeira vez como deteriorantes do leite cru
Associação entre a presença de Helicobacter spp., lesões hepáticas, proliferação celular e expressão de E-caderina no fígado de cães
Marcasso, Rogério Anderson; Bracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro [Orientador]; Di Santis, Giovana Wingeter; Freire, Roberta Lemos
Resumo: Em seres humanos a infecção por bactérias do gênero Helicobacter é uma importante causa de gastropatias, neoplasias gástricas e hepáticas Cães são frequentemente infectados por diversas espécies de helicobactérias, no entanto a associação entre a infecção e a ocorrência de lesões hepáticas e biliares é controversa Ainda hoje a maioria das hepatopatias em cães é classificada como idiopática Os objetivos deste estudo foram i avaliar a associação entre a ocorrência de alterações histológicas no fígado de cães e alterações na proliferação de hepatócitos e expressão de E-caderina; ii avaliar a ocorrência de Helicobacter spp no fígado de cães e sua associação com alterações hepáticas, na proliferação celular e na expressão de E-caderina Foram selecionados 39 cães, entre outubro de 28 a outubro de 21, pacientes do Hospital Veterinário da UEL, cuja necropsia pode ser realizada até 3 minutos após o óbito Fragmentos de fígado foram submetidos à análise histopatológica, à determinação do gênero Helicobacter pela PCR, à avaliação da proliferação celular pelo método histoquímico AgNOR e imunoistoquímico anti-Ki-67 e ainda, avaliação da expressão de E-caderina Constataram-se alterações histológicas em 33 (84,6%) animais que foram classificadas como discretas (1/39), moderadas (1/39) e graves (13/39) Seis amostras não apresentaram lesões Aumento significativo na proliferação de hepatócitos foi observado nos animais com lesão hepática, no entanto a expressão de E-caderina não diferiu entre os grupos com e sem lesão Amostras de sete animais (7/39) foram positivas à PCR para o gênero Helicobacter As principais alterações histológicas nestes animais foram congestão moderada (4/7), desorganização trabecular (6/7), degeneração vacuolar de hepatócitos (4/7), infiltrado inflamatório mononuclear periportal (6/7) e necrose (2/7) Verificou-se aumento significativo na proliferação de hepatócitos nos animais infectados quando avaliados pelo método AgNOR A expressão de E-caderina não diferiu entre os animais infectados e não infectados Assim, concluiu-se que as alterações histológicas hepáticas são frequentes em cães sem sinais clínicos de hepatopatia, sendo os principais achados congestão, desorganização trabecular de hepatócitos e infiltrado inflamatório crônico, havendo associação entre aumento da proliferação celular e a ocorrência de lesões Os resultados sugerem que a presença do Helicobacter spp no fígado de cães propicia um meio inflamatório que pode contribuir com o aumento da proliferação celular e assim modular a carcinogênese hepática
Valores hematológicos, bioquímicos e urinálise em fêmeas nelore de diferentes faixas etárias provenientes de propriedades com e sem a presença de samambaia (Pteridium aquilinum, L. Kuhn)
Fortes, Maira Salomão; Marçal, Wilmar Sachetin [Orientador]; Balarin, Mara Regina Stipp; Lopes, Raimundo de Souza
Resumo: A Pteridium aquilinum, popularmente conhecida por samambaia, é um dos vegetais tóxicos mais preocupantes em vários países, incluindo o Brasil Pesquisas caracterizaram, experimentalmente, três formas clínicas das doenças causadas pela samambaia aos bovinos: diátese hemorrágica, hematúria enzoótica dos bovinos e carcinomas epidermóides nas vias digestivas superiores Todas as partes da samambaia contém os princípios tóxicos em forma ativa Pesquisadores descrevem que a modificação mais importante observada é a anemia, e que a urina desses animais apresentam a variação no pH de 7,5 a 9,, não havendo diferença significativa dos animais sem hematúria No presente trabalho estudou-se os valores hematológicos, bioquímicos e urinálise de três diferentes fases do desenvolvimento animal 56 bezerras, 58 novilhas e 56 vacas provindas de propriedades com características zootécnicas semelhantes e com a presença e não de samambaia Ocorreu uma queda significativa nos valores do hematócrito, hemoglobina e hemácias nas bezerras provenientes da propriedade com presença de samambaia, porém, para o grupo de vacas e novilhas houve uma queda somente no número de hemácias comparadas ao grupo de animais provenientes de propriedades sem a presença de samambaia O número de plaquetas foi significativamente maior em todas as faixas etárias nos animais provenientes de propriedades com samambaia Não houve alterações significativas no leucograma indicando que não havia em nenhuma das três categorias resposta inflamatória sistêmica
Detecção e caracterização molecular de sapovírus em suínos assintomáticos
Souza, Cecília de; Alfieri, Amauri Alcindo [Orientador]; Freire, Roberta Lemos; Vilas-Bôas, Laurival Antônio
Resumo: A infecção pelo sapovírus suíno (PoSaVs) é frequentemente observada em rebanhos suinícolas das Américas, Europa e Ásia A infecção pode se manifestar da forma sintomática, com sinais clínicos de diarreia Contudo, infecções assintomáticas são descritas com relativa frequência Existe grande diversidade genética do PoSaV; já foram estabelecidos cinco genogrupos e 16 genotipos e propostos cinco novos genogrupos em estirpes virais de campo O objetivo deste estudo foi verificar características epidemiológicas e moleculares da infecção pelo PoSaV em suínos assintomáticos 169 amostras fecais foram coletadas, randomicamente, de 14 rebanhos suinícolas comerciais, sendo cinco unidades produtoras de leitão (UPL) e nove unidades de terminação (UT) na região oeste do estado do Paraná, Brasil Foram coletadas amostras de fezes de animais de maternidade (n=2), creche (n=37), terminação (n=71) e reprodução (n=41) A presença de PoSaV nas amostras fecais foi avaliada pela técnica de RT-PCR com primers desenhados para amplificar o produto com 331 pb do gene da polimerase viral PoSaV foi detectado em 1 (71,4%) dos rebanhos incluídos neste estudo Todas as cinco UPL e cinco (55%) das UT continham animais eliminando o PoSaV pelas fezes A RT-PCR resultou positiva em 4 (23,7%) das 169 amostras fecais avaliadas A taxa de positividade por faixa etária animal variou entre 17,1 a 4,5% A infecção esteve associada à categoria animal, sendo mais frequente em animais de creche (P<,5) A análise filogenética realizada com três estirpes de PoSaV permitiu classificar uma estirpe como genogrupo III genotipo 3 e outras duas como genogrupo IX, recentemente identificado e ainda não descrito no continente americano Esses resultados demonstram que a infecção pelo PoSaV pode estar amplamente disseminada no rebanho suinícola brasileiro, inclusive em animais saudáveis, e que a infecção é mais frequente em animais de creche As estirpes de campo brasileiras de PoSaV apresentam diversidade genética
Reinventando o free stall : preferência e utilização de baias planas por vacas leiteiras
Abade, Cristiane Caroline; Fregonesi, José Antônio [Orientador]; Vieira, Andreia de Paula; Ludovico, Agostinho
Resumo: Existem, atualmente, diversos sistemas de confinamento disponíveis para os produtores de leite, sendo que o free stall é o mais representativo em vários países, inclusive no Brasil Contudo, a configuração deste sistema pode influenciar o comportamento e o bem-estar de vacas leiteiras confinadas, o que justifica a criação de alternativas para garantir maior conforto aos animais O objetivo desse trabalho foi testar a preferência e utilização de vacas Holandesas por um sistema de confinamento mais simples e menos restritivo que o sistema free stall, denominado baia plana Para tal estudou-se comportamentos relacionados à utilização da baia free stall e das baias planas durante duas fases experimentais Na primeira fase, não-escolha, as vacas permaneceram restritas a cada um dos sistemas, free stall e baia plana Na segunda fase (livre escolha) ambos os sistemas foram disponibilizados simultaneamente para testar a preferência dos animais Previamente ao início do estudo todos os animais foram mantidos em free stall Escores de limpeza (úbere e superfície da baia) e tempo gasto para limpar as baias destes dois sistemas de confinamento também foram monitorados durante a fase experimental de não-escolha Durante a fase de livre escolha as vacas passaram mais tempo deitadas no free stall convencional do que no sistema de baia plana Entretanto, quando as vacas foram manejadas restritas ao free stall ou a baia plana não houve diferença no tempo que os animais despenderam deitadas nas baias de ambos os sistemas O tempo em pé com duas patas na cama durante a fase de livre escolha foi maior no sistema free stall para os animais estabulados, contudo na fase de não-escolha não houve diferença para esse comportamento A superfície da cama das baias no sistema baia plana apresentou maior acúmulo de fezes do que a superfície do free stall e as vacas manejadas nas baias planas apresentaram úberes mais sujos do que aquelas manejadas no free stall Não houve, porém, diferença no tempo despendido para limpeza das baias de ambos os tratamentos Em síntese o sistema de baia plana não pareceu ser aversivo aos animais, uma vez que não houve efeito dos tratamentos no tempo despendido deitados durante a fase restrita Contudo, como os animais eram mantidos no free stall previamente ao estudo, a experiência prévia dos mesmos pode ter influenciados suas respostas
Caracterização epidemiológica da raiva dos herbívoros no estado do Paraná entre 1977 e 2012
Dognani, Romerson; Lisbôa, Júlio Augusto Naylor [Orientador]; Lemos, Roberta Freire; Barros Filho, Ivan Roque de
Resumo: Realizou-se estudo descritivo retrospectivo da ocorrência da raiva dos herbívoros no estado do Paraná entre os anos de 1977 e 212, com o intuito de caracterização epidemiológica da enfermidade no estado Utilizando dados de notificação, os casos confirmados de raiva e o total de amostras de encéfalo encaminhadas para o diagnóstico laboratorial foram distribuídos por espécie, por ano, por meses do ano, por mesorregião geográfica e por municípios, aplicando-se o teste de Qui-quadrado para verificar se a doença estava associada a algum desses fatores Comprovou-se que a raiva é uma doença endêmica no PR, com ocorrência variável entre os anos e frequência mediana de 67 casos por ano Ocorre em todos os meses do ano, com maior número de casos nos meses de inverno (junho a setembro), acometendo, sobretudo, bovinos (86,9% dos casos) e equídeos (11,3% dos casos) Verificou-se grande difusão da raiva no estado, sendo registrada em 47,6% dos municípios, e a maior expansão geográfica de ocorrências aconteceu na última década As áreas de risco maior foram as mesorregiões Centro Oriental e de Curitiba, seguidas por Norte Pioneiro e Oeste Nas mesorregiões Noroeste, Centro Ocidental, Centro Sul e Sudeste ocorreu número menor de casos O número de casos de raiva por município se correlacionou com o número de abrigos de Desmodus rotundus conhecidos e monitorados (r=,469; p<,1) Sugere-se que a imunização anual de bovinos e equídeos passe a ser adotada com regularidade nas áreas de maior risco (mesorregiões Centro Oriental e de Curitiba) e encorajada nas áreas de risco intermediário (mesorregiões Norte Pioneiro e Oeste)
Produção in vitro de embriões na espécie ovina : efeito do benzoato de estradiol na aspiração folicular e transporte de gametas e embriões em longas distâncias
Max, Marilu Constantino; Seneda, Marcelo Marcondes [Orientador]; Bicudo, Sony Dimas; Barreiros, Thales Ricardo Rigo
Resumo: O objetivo do presente trabalho foi comparar o número de folículos, oócitos e a taxa de recuperação em ovelhas submetidas ao protocolo One Shot com e sem o uso do Benzoato de Estradiol; e com base nos resultados do primeiro experimento, utilizou-se o melhor protocolo hormonal para obtenção de oócitos e assim relatar a viabilidade do transporte de gametas femininos e embriões ovinos produzidos in vitro por longas distâncias No primeiro experimento utilizou-se 33 ovelhas pluríparas, mestiças (1/2 sangue Texel), lanadas, não lactantes, idade média 5 anos e com ECC 3,±,3 que foram divididas em 3 grupos O grupo One Shot (n=1) recebeu 1,5 mg de norgestomet (Crestar®, Intervet, Holanda) no D e este foi mantido por 1 dias No D8 foi administrado ,4mg de D-cloprostenol sódico (Preloban®, Intervet, Holanda), 2 UI FSH (Pluset®, Hertape Calier, Espanha) e 3 UI de eCG (Folligon®, Intervet, Holanda) No grupo Benzoato (n=11), a única diferença em relação ao grupo One Shot foi a administração de ,6 mg de benzoato de estradiol (Estrogin®, Famavet, Brasil) em D No Grupo Sem Tratamento (n =12) os animais não receberam nenhum estímulo hormonal A coleta dos oócitos foi realizada através de laparotomia 36 horas (D1) após a administração das gonadotrofinas Foi observado aumento (P<,5) na média de folículos aspirados no grupo One Shot em relação ao grupo sem estímulo hormonal e o Benzoato (16,3±5,6; 9,5±2,4 e 12,1±4,1) As médias de oócitos recuperados e a taxa de recuperação foram superiores (P<,5) no grupo One Shot e no Benzoato em relação ao grupo Sem Tratamento, resultando em 14,2±9,/87,1% (142/163); 11,±6,2 /91,4% (122/134) e 6,8±3,5 /71,9% (82/114), respectivamente No segundo experimento, foram utilizadas 5 ovelhas pluríparas da raça Santa Inês com ECC médio de 3, que foram submetidas a tratamento hormonal One Shot A aspiração folicular (OPU) foi via laparotomia Os oócitos selecionados foram envasados em TCM 199 (Nutricell, Brasil), gaseificados com CO2 e armazenados em incubadora de transporte (WTA, Sorocaba, São Paulo) com ambiente controlado em 38,5 °C e 5% de CO2 O transporte dos oócitos por 583 km foi realizado por meio rodoviário durante 14 horas até o laboratório de produção in vitro de embriões (PIVE), onde os oócitos completaram o período de maturação, foram fecundados com a mesma partida de sêmen e tiveram o cultivo iniciado em meio de cultivo SOF ovine Após 4 dias, os embriões foram submetidos ao trajeto de retorno e enviados nas mesmas condições de transporte Obtevê-se uma média de 9,8 ± 3 (49 / 5) embriões por doadora e 25 mórulas da Grau I foram transferidas em 7 receptoras, sendo 3 a 4 embriões no estágio de mórula, no ápice do corno uterino ipslateral ao corpo lúteo O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia transretal 3 dias após a transferência Uma prenhez (14,3% - 1/7) foi confirmada de uma receptora que apresentava 4 CLs Um cordeiro saudável nasceu de parto eutócico após período gestacional normal Os resultados demonstram que o One Shot foi o melhor protocolo para obtenção de oócitos e é possível obter-se prenhez a partir da PIVE, com transportes de oócitos e embriões por até 14 horas
Fitogênicos, ácidos orgânicos e probióticos na alimentação de tilápias do Nilo e seus efeitos na imunidade, produtividade, resistência a doenças e microbiota intestinal
Suphoronski, Suelen Aparecida; Pereira, Ulisses de Pádua [Orientador]; Baptista, Ana Angelita Sampaio; Costa, Mateus Matiuzzi da
Resumo: O Brasil é o quarto país maior produtor de tilápias, porém com a intensificação da produção, a exigência de manejos e monitoramento aumenta, e se estes não forem realizados adequadamente podem ocorrer o aparecimentos de doenças As bacterioses, como estreptococcose e francicelosse, estão entre as principiais causas de perdas dos produtores A principal forma utilizada atualmente para prevenir e tratar essas doenças é a antibioticoterapia Contudo, sabe-se que o uso indiscriminado de antimicrobianos pode causar seleção de micro-organismos resistentes e comprometer, inclusive a saúde humana A utilização de vacinas nem sempre é viável ou ainda não existem vacinas para certos patógenos causadores de doenças para os peixes Por isso métodos alternativos estão sendo desenvolvidos e utilizados na piscicultura, como a utilização de probióticos, ácidos orgânicos e fitogênicos na alimentação de animais, auxiliando na melhora do sistema imunológico O objetivo desse trabalho, foi avaliar a utilização de aditivos alimentares quanto a performace, parâmentros hematológicos, imunológicos, resistência a doenças, histologia e microbiota intestinal de tilápias do Nilo, para isso foram realizados dois experimentos No primeiro experimento, foi avaliado os efeitos da suplementação com A-Live (fitogênico), individualmente e/ou em combinação com Aquaform (diformato de potássio) no desempenho do crescimento de tilapias do Nilo (Oreochromis niloticus), parâmetros imunes inatos, microbiota intestinal e resistência à Francisella noatunensis subsp orientalis Cada grupo continha 14 individuos e foram três tratamentos com diferentes concentrações dos produtos Após o desafio verificou-se que a mortalidade foi significativamente menor nos grupos tratados, além desses grupos apresentarem melhor desempenho de crescimento e também nos parâmetros de imunidade Mostrando assim que ocorre um efeito benéfico com o uso desses produtos em tilápias do Nilo No segundo experimento, foi avaliado a administração na ração e/ou água do probiótico Enterococcus faecium, isolado de tilápias do Nilo Com a bactéria probiótica foram realizados testes de inibição e também o sequenciamento do seu genoma completo antes dos testes in vivo Tilápias do Nilo (45 por grupo com duas repetições) receberam durante 38 dias o probiótico Após esse período encontramos diferença significativa no ganho de peso médio final no grupo G1, e nos trombócitos dos grupos que receberam probiótico na ração (G1 e G3) Cetobacterium foi o gênero mais abundante da microbiota intestinal em todos os grupos, incluindo CN Os grupos foram reordenados e desafiados com F noatunensis subsp orientalis e Streptococcus agalactiae Após o desafio verificou-se diferença estatística na mortalidade de peixes infectados com S agalactiae do grupo CN em comparação com os grupos tratados Enterococcus faeicum mostrou-se eficaz para melhorar a imunidade dos peixes Dessa forma estudos utilizando produtos alternativos ao uso de antimicrobianos como ácidos orgânicos, fitogênicos e probióticos autoctones, são de suma importância para prevenir o aparecimento de bactérias resistentes, já que estes estimulam o sistema imune, melhoram a performace e ainda não interferem na micro-comunidade aquática local
Padronização de metodologia para caracterização molecular por RAPD ? Random Amplified Polymorphic DNA, de bactérias ácido láticas isoladas de leite cru
Monteiro, Alexandre Amorim; Beloti, Vanerli [Orientador]; Nero, Luís Augusto; Oliveira, André Luiz Martinez de
Resumo: No Brasil, de modo geral, o leite é obtido sob condições higiênico-sanitárias deficientes e, em conseqüência, apresenta baixa qualidade microbiológica, constituindo um risco à saúde da população quando consumido sem tratamento térmico Desta forma, vários grupos de microrganismos indesejáveis podem ser detectados no leite cru, gerando alterações nas mais variadas condições Em resposta a esta situação, diferentes estratégias estão em estudo para melhoraria da qualidade Uma dessas estratégias é a bioconservação, que vem sendo cada vez mais estudada, devido seu enorme potencial de aplicação nos mais variados tipos de alimentos As Bactérias Ácido Láticas (BAL) são microrganismos adequados para o uso como bioconservadores devido a sua reconhecida importância como microrganismos com capacidade antagonista a diversos patógenos presentes no leite Contudo, no Brasil, os dados sobre a presença de BAL no leite cru são limitados, sendo assim necessário o estudo de metodologias que facilitem a identificação e caracterização destes microrganismos Entretanto, entre as diferentes espécies de bactérias lácticas ocorre uma grande similaridade em relação às necessidades nutricionais e condições de crescimento, que dificulta o uso de métodos microbiológicos clássicos para identificação de gêneros e espécies Pesquisas têm focado a aplicação de técnicas de biologia molecular para a rápida detecção e diferenciação deste grupo de bactérias As BAL têm sua classificação baseada em propriedades fenotípicas, incluindo parâmetros fisiológicos e padrões de fermentação de açúcares Contudo, a correta classificação e identificação das BAL são deficientes sem o suporte das técnicas genéticas O objetivo deste trabalho foi a avaliação de um protocolo alternativo para caracterização molecular de BAL com marcadores de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), utilizando-se 265 cepas de Bactérias Ácido Láticas, com capacidade antagonista a patógenos, isoladas de 27 amostras de leite cru, de propriedades dos municípios de São Bento do Una e Saloá, do Agreste Pernambucano A técnica foi padronizada com sucesso e apresentou reprodutibilidade, entretanto os resultados obtidos com os dois primers utilizados não foram suficientes para uma boa caracterização molecular, sendo necessária a realização de novos RAPDs com diferentes marcadores, para melhor caracterização dos isolados
Ocorrência de anticorpos IgG Anti-Leishmania spp em cães de locais de reciclagem e nas adjacências de uma mata urbana de Londrina-PR
Costa, Leticia da; Freire, Roberta Lemos [Orientador]; Navarro, Italmar Teodorico; Mitsuka-Breganó, Regina; Freire, Roberta Lemos [Coorientadora]
Resumo: A leishmaniose tegumentar americana (LTA) constitui um problema de saúde pública em 88 países, distribuídos em quatro continentes (Américas, Europa, África e Ásia), com registro anual de 1 a 1,5 milhões de casos em humanos É considerada pela Organização Mundial da Saúde (OMS), como uma das seis mais importantes doenças infecciosas no mundo A Leishmania (Viannia) braziliensis é a espécie mais difundida no Paraná e de 199 a 26, foram notificados 1578 casos de LTA humana, representando 96,4% do total de casos da região Sul do país Na espécie canina, a presença de infecções por Leishmania (V) braziliensis também são freqüentes em áreas endêmicas de nosso país, incluindo o Norte do estado do Paraná As ações antrópicas no ambiente, a urbanização crescente e desordenada aliada às pressões sócio-econômicas, tem expandido as áreas endêmicas e o aparecimento de focos de LTA em zonas urbanas Este trabalho teve como objetivo conhecer a epidemiologia da LTA em cães residentes de locais de reciclagem de resíduos sólidos (Grupo 1) e em cães de um bairro próximo a mata urbana (Grupo 2), no município de Londrina – Pr Foram coletadas amostras de sangue de 135 cães sendo 61 do Grupo 1 , e 74 do Grupo 2 A análise sorológica foi realizada pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) sendo consideradas reagentes as amostras que apresentaram título ?4 na RIFI A pesquisa de anticorpos anti-Leishmania spp revelou 13 animais (9,6%) reagentes, sendo nove (14,75%) do Grupo 1 e quatro (5,4%) do Grupo 2 Este estudo concluiu que há o anticorpo circulante em cães de locais de reciclagem de resíduos sólidos das cinco regiões (norte, sul, leste, oeste e central) e nas adjacências de uma mata urbana de Londrina
Desempenho produtivo e características de carcaça de bovinos Nelore em regime de engorda a pasto recebendo diferentes teores de zinco na suplementação mineral
Pompei, Julliano Percinoto; Mizubuti, Ivone Yurika [Orientador]; Prado, Odimári Priscila Pires do; Bumbieris Junior, Valter Harry
Resumo: Objetivou-se estudar o efeito do Zinco (ZnSO4) em diferentes concentrações na suplementação mineral de bovinos da raça Nelore em pastagem de Brachiaria brizantha cultivar (cv) MG-4, sobre o desempenho produtivo e características de carcaça Foram utilizados 28 bovinos, machos, castrados, da raça Nelore No início do experimento os animais pesavam em média, 355 kg de peso vivo, com 3 meses de vida, devidamente identificados, vacinados contra febre aftosa e submetidos ao controle de endo e ectoparasitas Foram divididos ao acaso em quatro grupos e alojados em piquetes de 6,25 hectares cada, com Brachiaria brizantha cv MG–4, equipados com comedouro coberto e bebedouros, sendo pastejados alternadamente a cada pesagem (28 dias) O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com 4 teores de zinco (Zn) no suplemento mineral e 7 repetições Os diferentes teores de zinco avaliados foram: Zn–, sem adição de Zinco; Zn–2, com 2 mg de Zn/kg; Zn–4, com 4 mg de Zn/kg e Zn–6, com 6 mg de Zn/kg, sob forma inorgânica (Sulfato de Zinco) Os suplementos minerais foram pesados e fornecidos “ad libitum”, em cochos cobertos, com controle das sobras para determinação do consumo O período de adaptação dos animais foi de 3 dias, sendo que todos os animais foram pesados a cada 28 dias para avaliação do desempenho produtivo e abatidos após 37 dias de experimento, com peso vivo médio de 56 kg e 42 meses de vida De cada animal abatido pesaram-se órgãos, vísceras, carcaça e componentes não carcaça para avaliação das influências dos diferentes teores de Zn sobre os pesos absolutos e relativos Após resfriamento em câmara fria por 24 horas, avaliou-se a carcaça esquerda Avaliou-se a área de olho de lombo (AOL) e espessura da gordura subcutânea (EGSC) na seção transversal do músculo longissimus dorsi, bem como a cor, pH e oxidação lipídica A crescente inclusão dos teores de zinco na dieta dos bovinos, não alterou (P>,5) o peso vivo final (PVF) e ganho de peso médio diário (GPMD) Observou-se diferença (P<,5) no consumo de Zn (CZn) (Y = - 2,9386 + 146,9616x; R2=,99), peso de carcaça quente (Y= 299,92662 + 3,33362x, R2= ,24), oxidação lipídica da carne (Y = ,1517 + ,2539x; R2=,31) e cor da carne, avaliados pelos valores de L (luminosidade) (Y = 32,2339 + ,41445x; R2= ,14), a (intensidade de vermelho-verde) (Y = 18,16225 + ,88592x; R2= ,25) e b (intensidade de amarelo-azul) (Y = 9,35295 + ,453x; R2=,2), porém mantiveram-se dentro dos valores normais para carne bovina Pode-se assim concluir que bovinos mantidos em pastagem de Brachiaria brizantha cv MG-4 e suplementados ad libitum, com diferentes teores de zinco no suplemento mineral, não apresentam alterações no ganho de peso, rendimento de carcaça e composição física das carcaças, assim como nos componentes não carcaças, mas os teores de zinco exercem influencia linear positiva sobre o peso de carcaça quente, sem causar alterações nos pesos relativos e absolutos de órgão e vísceras
Transferência de imunidade passiva e comportamento de cordeiros de corte recém- nascidos
Turquino, Carolina Faria; Lisbôa, Júlio Augusto Naylor [Orientador]; Feitosa, Franscisco Leydson Formiga; Cunha Filho, Luiz Fernando Coelho da
Resumo: Aspectos relacionados à transferência de imunidade passiva (TIP) foram estudados em 29 cordeiros recém-nascidos, mestiços Texel, manejados extensivamente em contato permanente com as suas mães, e criados em região de clima tropical Amostras de sangue foram colhidas dos cordeiros uma única vez entre 24 e 36 horas de vida para obtenção do soro sanguíneo Foram determinadas a atividade da gama glutamiltransferase e as concentrações de proteínas totais por refratometria e colorimetria, de albumina, alfa, beta e gamaglobulinas por eletroforese e de IgG estimada pela turvação pelo sulfato de zinco Os cordeiros foram agrupados de acordo com o sexo, o número de partos das ovelhas, o escore de condição corporal (ECC) da ovelha, o número de cordeiros nascidos, o peso e a vitalidade ao nascimento Os fatores de risco para a ocorrência de falha na transferência de imunidade passiva (FTIP) foram identificados e a sua associação com a mortalidade de cordeiros foi testada Foram estabelecidas correlações entre as variáveis estudadas As atitudes exibidas por 36 cordeiros nascidos com bom vigor de ovelhas que apresentavam boa habilidade materna foram avaliadas durante a sua primeira hora de vida A TIP não foi influenciada pelo sexo, pelo número de partos ou pelo ECC das ovelhas Houve diferenças entre os cordeiros únicos e gêmeos e entre os que nasceram com peso ? 3 kg e < 3 kg A FTIP foi pouco frequente (12,4%), mais provável em gêmeos (p=,26) e em cordeiros leves (p<,1) e esteve fortemente associada com a mortalidade dos cordeiros até os 6 dias de vida (p<,1) A taxa de mortalidade geral foi de 11,3%; e 3,5% dos cordeiros com FTIP morreram, quase todos no primeiro mês de vida A concentração de proteína total determinada por refratometria se correlacionou (p<,1) com as concentrações de gamaglobulinas (r = ,816) e de IgG (r = ,81) e o valor crítico = 5, g/dL para a proteína total pode ser admitido como indicador de FTIP Os cordeiros nascidos com boa vitalidade demoraram 1,9 minutos para adotar decúbito esternal, 5,7 minutos para tentar se levantar, 11,4 minutos para se manter em estação e caminhar, 13,2 minutos para tentar mamar e 21,1 minutos para mamar o colostro pela primeira vez Realizaram de 8 a 13 mamadas de colostro na primeira hora de vida, com duração de 14 a 23 segundos cada Sob condições de clima tropical a FTIP pode ser considerada pouco frequente em cordeiros mestiços de corte, entretanto, a vigilância e os cuidados devem ser intensificados no caso do nascimento de cordeiros gêmeos com peso reduzido
Estatística multivariada na investigação do fenótipo de cardiomiopatia hipertrófica subclínica em felinos domésticos
Maingué, Ana Paula; Gava, Fábio Nelson [Orientador]; Camacho, Aparecido Antônio; Pereira, Patrícia Mendes; Gomes, Lucas Alécio [Coorientador]
Resumo: A cardiomiopatia fenótipo hipertrófica é a doença cardíaca mais frequente em gatos, podendo ser assintomática ou causar insuficiência cardíaca congestiva e tromboembolismo arterial sistêmico Objetivou-se realizar um estudo de rastreamento da cardiomiopatia fenótipo hipertrófica (fCMH) em felinos domésticos assintomáticos de Londrina e região O presente estudo também teve como objetivo utilizar recursos da estatística multivariada na interpretação dos resultados de mensurações ecocardiográficas diastólicas de septo interventricular e parede livre, tanto pelo modo M, quanto pelo modo-B, uma vez que ambos os métodos vêm sendo utilizados e podem gerar resultados diferentes Cem felinos foram recrutados para o estudo, porém 92 permitiram realização de ecocardiografia Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística uni e multivariada Posteriormente, foram submetidos à eletrocardiografia, aferição de pressão arterial, dosagem de T4 total e mensuração de tempo de protrombina (TP) e tromboplastina parcial ativada (TTPa) Observou-se uma frequência de 3,44% do fenótipo CMH no presente estudo Dos gatos pertencentes ao grupo fCMH, 53,57% apresentaram relação AE/Ao maior que 1,5 cm, condizendo com aumento atrial esquerdo A análise discriminante e de Cluster demonstraram que avaliação da espessura de parede do ventrículo esquerdo (VE) por meio do modo-B foi melhor para identificação dos animais portadores do fCMH No grupo controle, os gatos apresentaram maior frequência de função diastólica normal e de ondas E e A fusionadas; já os gatos com a fCMH apresentaram maior frequência de disfunção diastólica Hipertensão arterial e hipertireoidismo não foram fatores causadores do fCMH e as análises do TP e TTPA não apresentaram diferença significativa entre os grupos Conclui-se que a frequência do fCMH encontrada foi alta e que a análise estatística multivariada demonstrou que as mensurações ecocardiográficas pelo modo–B constituem o melhor método para identificação desses pacientes
Soroepidemiologia da leptospirose em mulheres gestantes do município de Londrina, PR
Alves, Lucimara Aparecida; Freitas, Julio Cesar de [Orientador]; Navarro, Italmar Teodorico; Megid, Jane
Resumo: A leptospirose é uma das zoonose mais difundidas no mundo, entretanto as taxas de incidência da doença no homem são subestimadas devido à falta de diagnóstico clínico e laboratorial adequados Em áreas urbanas a leptospirose está associada entre outros fatores com enchentes, com a densidade populacional elevada que ocasiona um maior acúmulo de lixo, e aglomeração de cães e ratos Fatores sociais e econômicos como grau de instrução fundamental ou incompleta, baixo poder aquisitivo, atividades ocupacionais que exijam baixa qualificação, ocupação de áreas irregulares nos grandes centros e a falta de consciência da população sobre a importância do saneamento básico contribuem significativamente para o aumento na incidência de leptospirose urbana O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo soroepidemiológico para leptospirose em mulheres gestantes do município de Londrina-PR Neste estudo foram utilizados soro sanguíneo de 893 mulheres gestantes que se apresentavam clinicamente sadias por ocasião do exame pré-natal realizado nas 52 Unidades Básicas de Saúde do município de Londrina-PR, entre maio de 26 e julho de 27 Os soros foram testados pela da prova de soroaglutinação microscópica (SAM) utilizando 23 sorovares de Leptospira spp Para a detecção de fatores associados à leptospirose, cada gestante respondeu a um questionário no ato da consulta, que continha informações sobre os hábitos da gestante e variáveis sociais, econômicas e ambientais Dezoito (2,1%) amostras de soro foram reagentes na SAM Em 15/18 amostras foram detectados anticorpos contra um sorovar (Sentot, Icterohaemorrhagiae, Shermani, Pyrogenes, Canicola, Andamana e Australis), e em 3/18 amostras houve co-aglutinação (Bataviae e Sentot; Icterohaemorrhagiae e Autumnalis e Canicola e Butembo) Nove fatores foram associados à leptospirose: o grau de instrução fundamental, a residência atual e anterior em área rural, a água de poço para uso doméstico, o depósito do lixo no quintal da residência, o esgoto eliminado em fossa doméstica, a presença de área alagada, a presença de ratos e camundongos na residência e o hábito do cão sair à rua Os resultados mostraram que condições sociais e ambientais deficientes em áreas urbanas são importantes fatores de exposição à leptospirose
Pathogenesis of senecavirus A : role of the blood brain barrier in newborn piglets with the epidemic transient neonatal losses syndrome
Oliveira, Thalita Evani Silva de; Headley, Selwyn Arlington [Orientador]; Alfieri, Alice Fernandes; Santos, Renato de Lima; Alfieri, Amauri Alcindo [Coorientador]
Resumo: Senecavirus A (SVA), família Picornaviridae, é o agente etiológico de uma doença vesicular clinicamente indistinguível das outras doenças vesiculares dos suínos, destacando-se a febre aftosa, doença animal de maior importância epidemiológica mundial O SVA é o agente etiológico de duas síndromes, acometendo suínos de diferentes idades: Doença Vesicular Idiopática Suína (PIVD) e Perdas Neonatais Epidêmicas Transientes (ETNL) O objetivo desse estudo foi descrever os achados macroscópicos, histopatológicos, imuno-histoquímicos (IHQ) e ultra-estruturais associados a infecção natural por SVA e determinar o possível tropismo do vírus em diferentes tecidos de leitões neonatos do Sul e Suldeste do Brasil Foram realizadas autopsias de 54 leitões com sinais clínicos associados a ETNL Destes, (8%; 43/54) leitões foram positivos na IHQ e confirmados na transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para SVA A maioria (81%; 35/43) dos leitões que morreram por ETNL tinham entre 2-6 dias de idade As lesões macroscópicas mais frequentes durante as autopsias foram fezes líquidas (91%; 39/43), hemorragias petequiais renais (79%; 34/43), pneumonia intersticial (77%; 33/43), lesão ulcerativa na banda coronária (35%; 15/43), edema de mesocólon (32%; 14/43), vesículas no focinho (3%; 13/43) e linfadenopatia (28%; 12/43) Na histopatologia foi observado degeneração balonosa do urotélio da bexiga (1%; 43/43), pelve urinária (95%; 41/43), enterite atrófica (93%; 4/43), meningoencefalite não supurativa e plexo coroidite (7%; 3/43) A imunomarcação positiva ao SVA foi observada no endotélio e células epiteliais do plexo coroide (CP) e nos tecidos epiteliais de todos os órgãos avaliados, exceto, nos tecidos pulmonar e linfoide A microscopia eletrônica de transmissão revelou degeneração hidrópica dos enterócitos apicais do intestino delgado, degeneração hidrópica, apoptose e necrose do endotélio dos capilares fenestrados e ependimócitos do CP associados a partículas virais intralesionais compatível com SVA Este estudo demonstrou que o SVA é um vírus epiteliotrópico, apresentando imunomarcação positiva para o epitélio de transição da pelve renal, ureter e vesícula urinária, endotélio dos capilares do CP cerebral, no epitélio da língua e nos enterócitos apicais do intestino delgado Esses resultados demonstram que a degeneração balonosa observada em diferentes tecidos/órgãos foram causadas pelo SVA e sugerem que os sinais neurológicos observados em alguns leitões foram decorrentes da meningoencefalite não supurativa induzida pelo SVA Além disso, os resultados iniciais sugerem que o SVA pode atuar como um enterovírus, produzindo uma doença entérica inicial com posterior disseminação neurológica

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