02 - Mestrado - Microbiologia
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Item Atividade antibacteriana e anti-biofilme in vitro de enterocina isolada e combinada com vancomicina contra Enterococcus vancomicina resistente (VRE)Santana, Giovanna Caroline; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Coelho, Alexandre Rodrigo; Rocha, Sérgio Paulo Dejato daResumo: Enterococcus sp são patógenos oportunistas reconhecidos por causar graves infecções hospitalares A resistência aos antibióticos glicopeptídios, como vancomicina e teicoplanina, é a preocupação atual da resistência dos Enterococcus e coincidiu com o aumento da resistência à penicilina e aos aminoglicosídeos, configurando assim um desafio Combinações entre peptídeos antimicrobianos e fármacos antibacterianos tradicionais, podem amenizar o problema da resistência bacteriana, pois o possível efeito sinérgico se torna estratégico, possibilitando o uso de doses menores dos fármacos no tratamento de doenças infecciosas, reduzindo os custos e diminuindo a toxicidade Neste trabalho, a ação de enterocinas não concentradas e não purificadas produzidas por Enterococcus sp obtidos de leite e queijo foi avaliada quanto ao seu potencial antibacteriano sobre isolados de Enterococcus sp resistentes à vancomicina, bem como a ação sinérgica in vitro entre enterocina, produzida pelo isolado de Enterococcus sp L3, e o antimicrobiano vancomicina (concentrações 16, 32 µg/mL) contra células planctonicas e biofilme de Enterococcus sp resistentes à vancomicina (VRE) Os isolados foram selecionados a partir de ensaio de PCR, onde foram avaliados os perfis de expressão de genes relacionados a produção de enterocina e genes relacionados à resistência à vancomicina Foi realizado o teste de ação antagônica por spot on lawn, seguido da obtenção do sobrenadante livre de células (CFS), o qual foi submetido a testes enzimáticos e de termoestabilidade O CFS obtido foi exposto aos isolados VRE utilizando a técnica de poço difusão A visualização de halos de inibição ao redor dos cultivos de Enterococcus VRE demonstrou a potencial ação antibacteriana dessas enterocinas sobre os isolados resistentes à vancomicina A análise da interação entre enterocina e vancomicina foi realizada pela metodologia de checkerboard Os resultados foram mensurados pela contagem celular e análise de densidade optica para compor o Indice de Concentração Inibitória Fracionada A viabilidade celular também foi mensurada a partir da visualização da coloração de Iodeto de propídeo em microscopia de fluorescência Foi demonstrado ação sinérgica contra 8% dos isolados VRE, sendo que para um isolado foi verificada interação parcial, os resultados obtidos trazem uma nova abordagem e perspectiva ao tratamento de infecções por VREItem Efeito da adubação e microrganismos promotores de crescimento no desenvolvimento de Schizolobium parahybaFreitas, Vanessa Fogaça de; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Leal, Alex Carneiro; Zangaro Filho, WaldemarResumo: A espécie Schizolobium parahyba da família Leguminoseae contém duas variedades, Schizolobium parahyba var parahyba, popularmente conhecida como guapuruvu, endêmica da Mata Atlântica e Schizolobium parahyba var amazonicum, mais conhecida como paricá, endêmica da Amazônia Por apresentarem um rápido crescimento, entre outras características, estas variedades tornam-se aptas para a produção de madeira e para o reflorestamento de áreas degradadas Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adubação e de microrganismos promotores de crescimento, Rhizobium sp e Rhizophagus clarus, no desenvolvimento do paricá e do guapuruvu Os experimentos foram conduzidos em campo em duas áreas da estação experimental do IAPAR do município de Xambrê, Paraná, Brasil O delineamento experimental para ambas as áreas foi de blocos completos casualizados com cinco repetições e oito tratamentos: Controle; Rhizobium; R clarus; Adubo; Rhizobium + Adubo; Rhizobium + R clarus; R clarus + Adubo; Rhizobium + R clarus + Adubo Na área de estudo do guapuruvu foram amostradas 6 árvores por parcela e no experimento com o paricá 1 árvores por parcela Para a produção dos tratamentos foram utilizados 1 gramas de inóculo bruto do fungo micorrízico arbuscular R clarus, 1 mL de suspensão de células (3,3 x17 UFC/mL) da bactéria Rhizobium sp e 13 g de adubo químico NPK 2-5-2 por cova A altura total das plantas foi avaliada 37, 11, 25 e 36 dias após o plantio e o diâmetro do colo em 25 e 36 dias, a sobrevivência e análise foliar aos 36 dias As médias dos tratamentos foram analisadas pela ANOVA e comparadas pelo teste de Duncan (p<,5) Em todos os períodos avaliados ambas as variedades de S parahyba apresentaram um efeito positivo em altura, diâmetro e sobrevivência para os tratamentos adubados Com relação à analise foliar não houve diferença significativa na quantidade de nitrogênio e fósforo entre os tratamentos Para o guapuruvu os tratamentos com fungo MA e fungo MA + Rhizobium sp proporcionaram uma porcentagem de sobrevivência inferior ao controle, sugerindo que essa diminuição na sobrevivência pode ter ocorrido por haver crescimento de gramínea nas áreas experimentais, uma vez que, a competição com gramínea pode influenciar na interação entre os fungos MA e as espécies arbóreas iniciais causando depressão na espécie arbórea, o que intensifica os efeitos negativos da competição no solo Estes resultados demonstram que o adubo favoreceu o desenvolvimento das duas variedades de S parahyba e que a inoculação com microrganismos promotores de crescimentos mostra-se pouco eficiente quando cultivada em área com gramíneaItem Caracterização fenotípica e molecular de determinantes de resistência adquirida aos antimicrobianos e da produção de biofilme em Acinetobacter baumannii isolados de corrente sanguíneaRomanin, Priscila; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi [Orientador]; Petroli, Suelen Balero de Paula; Tognim, Maria Cristina Bronharo; Carrara-Marroni, Floristher Elaine [Coorientador]Resumo: A baumannii multirresistentes constituem um dos maiores desafios mundiais no tratamento de infecções hospitalares A facilidade em adquirir determinantes de resistência somada a capacidade de formação de biofilme representam importantes fatores associados ao sucesso da disseminação e à permanência deste microrganismo nos hospitais Este estudo teve como objetivo caracterizar os principais mecanismos de resistência adquirida aos antimicrobianos e investigar a capacidade de formação de biofilme em isolados multirresistentes de A baumannii isolados de corrente sanguínea de pacientes internados no Hospital Universitário de Londrina (HU) no período de novembro de 26 a dezembro de 216 Um total de 13 isolados foram analisados, sendo todos identificados como A baumannii por meio da amplificação dos genes blaOXA-51-like e rpoB A análise dos aspectos clínicos revelou que os isolados de A baumannii foram recuperados predominantemente de pacientes do sexo masculino, com idade média de 6 anos, internados nas unidades de terapia intensiva, com uma média de permanência hospitalar de 28 dias O desfecho clínico que resultou em mortalidade foi observado na maioria (816%) dos pacientes Altas taxas de resistência (1%-17%) foram obtidas para os antimicrobianos avaliados incluindo colistina, polimixina B e tigeciclina e, na sua maioria, os isolados foram classificados como extensivamente resistentes (786%) A produção de carbapenemases foi observada em em 922% dos isolados Todos os isolados resistentes aos carbapenêmicos apresentaram um dos genes codificadores das carbapenem hydrolyzing class-D ß-lactamase (CHDL) adquiridas blaOXA-23-like (979%) ou blaOXA-143-like (21%) Nenhum dos isolados apresentou os genes blaOXA-24-like, blaOXA-58-like, blaOXA-48, blaKPC, blaNDM, blaSPM-1, blaSIM-1, blaVIM, blaIMP, blaGIM, blaGES, mcr-1, qnrA, qnrB, qnrC, qnrS, and qnrVc Como contexto genético do gene blaOXA-23-like predominou o Tn26 e em menor frequência o Tn28 Os isolados carreadores do gene blaOXA-143-like apresentaram a variante blaOXA-253-like O gene bap foi detectado em 835% dos isolados, e todos os isolados recuperados após o ano de 211 apresentaram este gene A maioria dos isolados apresentaram capacidade de formação de biofilme (98%), e 864% dos isolados foram fortes formadores de biofilme Um perfil policlonal foi observado dentre os isolados de A baumannii, sendo detectada a presença dos complexos clonais epidêmicos internacionais CC113/79, CC19/1, CC11/25, e CC13/15, com prevalência do CC113/79 Os dados obtidos mostram que a produção de CHDL e, principalmente, a permanência do gene blaOXA-23 constituiu um importante mecanismo de resistência aos carbapenêmicos em A baumannii no HU As altas taxas de resistência ao antimicrobianos obtidas e o número elevado de isolados extensivamente resistentes demonstram a dificuldade no tratamento das infecções causadas por A baumannii no HU e alertam para a emergência de infecções intratáveis O perfil policlonal, a prevalência de clones epidêmicos mundiais, e a capacidade de formação de biofilme reforçam a importância de medidas de controle de infecção e da necessidade continua do desenvolvimento de programas de stewardship para evitar a disseminação de novos determinantes de resistência e potenciais surtos por este patógenoItem Taxonomia polifásica de bactérias do gênero Agrobacterium isoladas de nódulos radiculares de Phaseolus vulgaris e Glycine maxScherer, Anderson José; Hungria, Mariangela [Orientador]; Delamuta, Jakeline Renata Marçon; Ribeiro, Renan AugustoResumo: Os membros do gênero Agrobacterium são Gram-negativos, alfaproteobacterias associadas a solo e plantas, e conhecidos por sua patogenicidade e pelo uso como ferramenta biotecnológica A ciência taxonômica faz uso de uma série de dados para a validação dos táxons O presente estudo utilizou isolados de nódulos de soja (Glycine max) e feijoeiro (Phaseolus vulgaris) pertencentes à “Coleção de Bactérias Diazotróficas e Promotoras de Crescimento Vegetal da Embrapa Soja” e que, em estudos prévios, apresentaram propriedades transitórias entre Rhizobium e Agrobacterium Foram avaliadas propriedades morfofisiológicas (morfologia de colônias, crescimento sob diferentes condições, perfil de ácidos graxos), genéticas (perfil de BOX-PCR, conteúdo G+C, sequenciamento do genoma) e filogenéticas (análise dos genes 16S RNAr e de genes housekeeping), visando uma análise polifásica A estirpe CNPSo 3391, isolada de um nódulo de soja na província de Zambézia, em Moçambique, foi identificada como Agrobacterium deltaense, cuja estirpe tipo foi isolada de um nódulo de Sesbania cannabina na China Já para a estirpe CNPSo 2736T, isolada de nódulo de feijoeiro inoculado com um solo do Mato Grosso do Sul, os resultados indicam que ela deve representar uma nova espécie, para a qual foi sugerido o nome de Agrobacterium fabaceae Quando os postulados de Koch foram seguidos, a habilidade de ambas estirpes nodular as leguminosas hospedeiras não foi confirmada, indicando que essas bactérias podem ser endofíticas, ou que adquirem facilmente um plasmídeo simbiótico que permite a nodulação temporária A condução de estudos sobre o papel dessas estirpes na simbiose com leguminosas é de grande relevância, pois pode fornecer informações valiosas sobre a evolução de bactérias simbióticas e patogênicasItem Caracterização genotípica e fenotípica dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de Proteus mirabilis isolados de carcaças de frango com celuliteSanches, Matheus Silva; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da [Orientador]; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Oba, Alexandre; Baptista, Ana Angelita Sampaio [Coorientadora]Resumo: Proteus mirabilis é um patógeno oportunista frequentemente associado a uma variedade de infecções em humanos, no qual as do trato urinário são consideradas as mais prevalentes Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as características genotípicas e fenotípicas dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de 34 cepas de P mirabilis isoladas de carcaças de frango com celulite em um abatedouro no norte do estado do Paraná, Brasil, a fim de inferir um possível risco zoonótico Das 34 cepas, duas foram escolhidas para avaliar a sua capacidade em reproduzir as lesões de celulite experimentalmente em frangos de corte, sendo uma cepa com maior quantidade de fatores de virulência (LBUEL-A33) e outra com menor quantidade (LBUEL-A34) Os genes mrpA, atfA (fímbrias) ireA (sideróforo), ptA, zapA (proteases) e hpmA (hemolisina) foram encontrados em todos os isolados, enquanto os genes pmfA e ucaA (fímbrias) foram encontrados em 33 (97,6%) e 17 (5%) cepas respectivamente Todas as cepas expressaram adesão agregativa em células HEp-2 e formaram biofime Das 34 cepas, 28 (82,35%) exibiram efeito citotóxico em células Vero Em relação ao perfil de resistência, 25 (78,13%) cepas foram consideradas multirresistentes A presença de genes blaESBL e blaampC conferindo resistência aos ß-lactâmicos e qnr às quinolonas também foram detectados nos isolados após a presunção no teste fenotípico, no qual 7 (21,88%) isolados continham o grupo CTX-M-2, 11 (34,38 %) continham grupo CIT e 19 (59,38%) continham qnrD Tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a LBUEL-A34 desenvolveram lesões de celulite em 24 horas pós-inoculação, no qual o grau das lesões foi estatisticamente similar ao grau das lesões causadas pelo controle positivo (p< ,5), uma Escherichia coli Patogênica de Aves (APEC 46) Microscopicamente, tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a APEC 46 ocasionaram lesões similares, caracterizadas pela presença de infiltrado inflamatório e necrose da derme e das fíbras musculares Conclui-se com o presente trabalho que P mirabilis isolados de carcaças de frango com lesões de celulite representam um risco zoonótico, pois possuem uma diversidade de fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos, bem como a capacidade de desenvolver lesões de celulite em frangos de corteItem Avaliação do potencial de Bacillus velezensis LABIM40 no biocontrole de fungos fitopatogênicosBaptista, Julia Pezarini; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de [Orientador]; Lescano, Luis Eduardo Azevedo Marques; Pereira, Ulisses de Pádua; Balbi-Peña, Maria Isabel [Coorientadora]Resumo: O desenvolvimento de produtos biológicos vem crescendo devido a vários fatores, entre eles a conscientização ambiental, a preocupação com a saúde humana e a seleção cada vez mais comum de patógenos resistentes aos produtos químicos sintéticos Dentre os gêneros estudados para o desenvolvimento de produtos biológicos, o gênero Bacillus spp tem se destacado devido a produção de muitas moléculas antimicrobianas e a resistência em condições ambientais adversas pela formação de endósporos Nesse contexto o objetivo do estudo foi identificar a cepa B velezensis LABIM4 para realizar análises in silico, envolvendo comparações filogenômicas e a predição dos metabólicos secundários Paralelamente, análises in vitro também foram realizadas para caracterização da atividade antifúngica de LABIM4, para isso, os ensaios foram conduzidos com os fungos: Sclerotinia sclerotiorum (SS), Macrophomina phaseolia (MP) e Botrytis cinerea (BC) As melhores condições de cultivo, a estabilidade aos valores de temperatura, pH e luz e a concentração inibitória mínima (CIM) foram avaliadas Além dessas análises, o efeito do sobrenadante de LABIM4 no micélio fúngico de SS foi visualizado em Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) O resultado do sequenciamento indicou que LABIM4 pertence ao grupo Bvelezensis e as análises de comparação mostraram uma alta similaridade com outras cepas com potencial biotecnológico já descrito Os dados de predição do genoma de LABIM4 indicaram a presença de 33 BGCs (Biosynthetic Gene Clusters), dessas, 11 apresentaram algum nível de similaridade com alguma BGC já depositada na base de dados do Minimum Information about Biosynthetic Gene clusters (MiBiG) O sobrenadante de LABIM4 apresentou ter grande potencial antifúngico ao inibir mais de 6 % os fungos testados, não perdendo a atividade nos parâmetros de temperatura, pH e luz, no entanto a atividade caiu ao ser submetido as temperaturas de 7, 1 e 121 °C Os dados da CIM foram 1,2% para SS, 2,5% MP e 2% para BC e alterações estruturais nas hifas de SS ao ser tratada com o sobrenadante livre de células também foram visualizadas, concluindo que B velezensis LABIM4 produz metabólitos antifúngicos com estabilidade nos parâmetros testados, caracterizando os seus compostos para o uso em diferentes condições ambientais, sendo, portanto, um bom agente de biocontrole Contudo muitas pesquisas ainda devem ser realizadas para otimizar a produção dos metabólitos antifúngicos, para identificar o princípio ativo e caracterizar a atividade in vivoItem Caracterização de determinantes de resistência adquirida aos antimicrobianos e de genes de virulência em isolados clínicos e ambientais de Pseudomonas spp. multirresistentesPalermo, Raquel Lima; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Tognim, Maria Cristina Bronharo; Paula, Suelen Balero de; Carrara-Marroni, Floristher Elaine [Coorientador]Resumo: O surgimento de isolados de Pseudomonas spp multirresistentes aos antimicrobianos (MR-PS) é um problema de saúde pública, uma vez que a maioria dos determinantes de resistência aos antimicrobianos são adquiridos e podem ser disseminados entre isolados, em diversos ambientes, por meio da transferência lateral de genes O objetivo desta pesquisa foi realizar a vigilância epidemiológica de MR-PS no ambiente hospitalar e comunitário contribuindo para o controle de infecções hospitalares no Hospital Universitário de Londrina (HU) Foram analisadas a presença de genes que codificam resistência adquirida aos antimicrobianos e virulência, e a relação clonal entre os isolados A identificação e o perfil de resistência foram, primeiramente, realizados pelo sistema automatizado Vitek-2 (BioMéuriex®) para os isolados clínicos e por testes bioquímicos convencionais para os isolados ambientais seguido por identificação molecular baseada em análises do gene 16S rRNA para espécies de Pseudomonas Os genes codificadores de resistência aos beta-lactâmicos e carbapenêmicos de classe A, B e D de Ambler, quinolonas (qnr), aminoglicosídeos (rmt) e colistina (mcr-1) foram pesquisados por PCR e a identidade confirmada por sequenciamento O contexto dos genes codificadores de carbapenemases foi investigado por PCR-mapping e a relação clonal entre os isolados foi analisada por ERIC-PCR Um total de 198 isolados clínicos recuperados entre os anos de 215 e 216 foram selecionados para o estudo com base nos seguintes critérios: isolados únicos, consecutivos e não sensíveis a ceftazidima e/ou imipenem e meropenem Além disso, foram incluídos no presente trabalho sete isolados ambientais de MR-PS produtores de carbapenemases, os quais foram recuperados de efluentes e faziam parte de uma coleção de isolados de Pseudomonas spp do Laboratório de estudos moleculares e resistência aos antimicrobianos (LEMRA) do Ambulatório de Especialidades do HU (AEHU) Com exceção das polimixinas (1,% sensíveis), altas taxas de resistência foram obtidas para todos os antimicrobianos testados Taxas preocupantes foram detectadas para os carbapenêmicos em isolados clínicos: 81,5% e 82,5% para imipenem e meropenem, respectivamente Dentre os 198 isolados clínicos MR-PS, 38 (19,2%) apresentaram genes codificadores de beta-lactamases, dos quais 32 (16,1%) apresentaram genes codificadores de carbapenemases Desta forma, a nova distribuição dos genes codificadores de beta-lactamases foi: em 14 isolados o gene blaSPM-1, seguido por 1 isolados carreando o gene blaKPC-2, 2 blaIMP-16, 6 blaCTX-M-2 e 6 blaGES-5, indicando um aumento da taxa de isolados portadores de blaKPC e uma redução de isolados portadores de blaSPM em comparação com as pesquisas anteriores Os genes investigados que codificam resistência às quinolonas, aminoglicosídeos e colistina não foram detectados neste estudo Os 32 isolados clínicos de MR-PS que apresentaram genes de carbapenemases foram agrupados em 12 clones (A-L) distribuídos ao longo do período analisado em diversas unidades hospitalares Os isolados que carreiam o gene blaSPM-1 foram agrupados em um único clone (A), sugerindo uma disseminação clonal e que este clone A é o responsável pela manutenção desse determinante de resistência no HU Os isolados codificadores de blaIMP-16 foram agrupados em 2 clones que diferiram fenotipicamente do clone que se manteve no hospital por 1 anos caracterizado pela sensibilidade ao meropenem Dentre os 1 isolados portadores do gene blaKPC-2, obtiveram-se 7 clones revelando a adaptação deste determinante de resistência em nosso hospital, provavelmente movido pela pressão seletiva do uso de carbapenêmicos A presença de uma nova carbapenemase do tipo GES-5 foi detectada em 6 isolados pertencentes a um mesmo clone (B) Todos os isolados exibiram um padrão de genes de virulência que condiz com sua a capacidade patogênica, porém não apresentaram correlação com a produção de carbapenemases, mas podem estar relacionados a clones epidêmicos mundiais Os isolados ambientais apresentaram-se clonalmente distintos dos isolados clínicos, representando 7 clones diferentes (A-G) condizendo com a diversidade esperada em isolados ambientais Além disso, a frequência de genes de virulência foi menor, revelando uma menor capacidade patogênica quando comparado aos isolados clínicos A presença de isolados produtores de carbapenemases recuperados de efluentes é alarmante uma vez que este ambiente é caracterizado pela notável capacidade de disseminação da resistência Além disso, esses resultados mostram que as taxas e a distribuição dos genes de resistência adquirida aos antimicrobianos podem flutuar em uma instituição e que a sua vigilância é essencial para estabelecer as medidas de controle de infecção para resguardar a eficácia dos antimicrobianos no tratamento de infecções por Pseudomonas sppItem Diversidade de bactérias cultiváveis em solos : efeito da adubação nitrogenada e inoculação com bactérias promotoras do crescimento em cana-de-açúcar e trigoFerreira, Danielle Cristina; Oliveira, André Luiz Martinez de [Orientador]; Cruz, Leonardo Magalhães; Hungria, MariangelaResumo: A população bacteriana no solo apresenta-se diversa, variável e possui um papel-chave na ciclagem de nutrientes e na manutenção da fertilidade do solo Estas populações vêm sendo exploradas para identificar novos indivíduos com potencial de uso como bactérias promotoras do crescimento vegetal (BPCV) na forma de inoculantes O registro de novos inoculantes no Brasil é regulamentado pelo MAPA que requer, dentre outras informações, a determinação da população de bactérias diazotróficas nativas nos solos utilizados para validação das novas formulações Este trabalho objetivou desenvolver uma metodologia padronizada para avaliar a população nativa e isolar bactérias diazotróficas autóctones em solos agrícolas, identificando e caracterizando a diversidade bacteriana culturável de solos sob cultivo de trigo e cana-de-açúcar, submetidos a diferentes práticas de manejo: níveis de adubação nitrogenada e inoculação com BPCV O isolamento das bactérias diazotróficas presentes nos solos estudados foi realizado através do uso de meios seletivos (LGI, LGI-P, JMV, JNFb, NFb) e também o meio mínimo A diversidade genética dos isolados foi avaliada por técnicas moleculares de BOX-PCR, MALDI-TOF e sequenciamento do gene 16S rDNA Os resultados obtidos revelaram presença de grande número de bactérias relacionadas aos gêneros Azospirillum, Herbaspirillum, Gluconacetobacter e Burkholderia como componentes das populações dos solos estudados As maiores populações de bactérias diazotróficas foram identificadas no solo da Fazenda Escola da UEL (Londrina, Log1 = 5,4, 2,5 x 15 cél/g solo), associadas ao cultivo de trigo conduzido com adição de 12 kg N/ha e na ausência de inoculação As menores populações de diazotróficos ocorreram no solo da Estação Experimental Prof Antônio Carlos dos Santos Pessoa (Marecha cândido Rondon,Log1 = 4,87, 7,5 x14 cél/g solo), em solo sob cultivo de trigo inoculado com Azospirillum brasilense AbV5 1 mL/kg e conduzido com adição de 12 kg N/ha Do total de 183 isolados obtidos nos três solos avaliados, foi possível identificar 15 filos bacterianos, com predominância do filo Proteobacteria com 43,5% dos isolados Através das análises de BOX-PCR, foi possível verificar que os solos da Fazenda Escola UEL apresentaram grande diversidade genética entre os isolados obtidos, enquanto que no solo de Marechal Cândido Rondon não foi observada uma grande diversidade devido o baixo número de isolados obtidos As análises de diversidade realizadas através da ferramenta de MALDI-TOF confirmaram os resultados de diversidade por BOX-PCR, indicando grande diversidade entre os isolados, com poucas ocorrências de isolados clonalmente relacionados Apesar de uma tendência de agrupamento dos isolados com base no perfil de BOX-PCR ter sido observada, estes agrupamentos não estiveram relacionados ao uso da tecnologia de inoculação com BPCV Em conjunto, os resultados indicam a viabilidade do uso de uma metodologia normalizada para o acesso da diversidade bacteriana culturável em solos agrícolas, em especial à diversidade de diazotróficos, podendo servir de referência para os levantamentos requeridos pelo MAPA para o registro de formulações inoculantesItem Caracterização molecular e fenotípica de Escherichia coli diarreiogênica isoladas de água subterrânea no norte do estado do ParanáSilva, Caroline Rodrigues da; Pelayo, Jacinta Sanchez [Orientador]; Faccin-Galhardi, Ligia Carla; Kobayashi, Renata Katsuko TakayamaResumo: As doenças transmitidas pela água, como a diarreia causada pela Escherichia coli diarreiogênica (DEC), são um dos principais problemas de saúde pública nos países em desenvolvimento Nesse contexto, este trabalho analisou a qualidade microbiológica de amostras de água utilizadas para consumo humano provindas de minas e poços rasos do norte do Estado do Paraná, no Brasil, além de caracterizar genotípica e fenotipicamente as cepas de DEC isoladas Das 21 amostras estudadas, 153 (72,9%) apresentaram coliformes totais e 96 (45,7%) E coli e dessas, 27 (28,1%) apresentavam DEC, sendo 13 (48,1%) E coli produtora de toxina Shiga (STEC), oito (29,6%) E coli enteroagregativa (EAEC), quatro (14,8%) E coli enteropatogênica (EPEC), uma (3,7%) E coli enterotoxigênica (ETEC) e uma (3,7%) E coli enteroinvasora (EIEC) Foram encontrados 25 sorotipos diferentes e um isolado de EPEC atípica apresentou o sorotipo O4437:H7, pela primeira vez relatado no Brasil Em relação ao filogrupo, 17 (63%) pertenciam ao B1, cinco (18,5%) ao C, três (11,1%) ao B2 e dois (7,4%) ao E Em células HEp-2, 25 DEC (92,6%) foram aderentes e a adesão agregativa foi a mais prevalente, 2 (74%), e todas DEC formaram biofilme As 13 cepas de STEC produziram efeito citotóxico em células Vero e quatro (14,8%) DEC foram resistentes a um dos antibióticos testados Os resultados demostram que a água é um importante reservatório de DEC, podendo atuar como fonte de infecção para humanos e animais, e que medidas de prevenção como a proteção de minas e poços rasos e o tratamento da água devem ser adotadas, evitando assim, contaminaçõesItem Detecção de escherichia coli diarreiogênica em carne bovina na região norte do Estado do Paraná, BrasilElias Junior, Antonio Roberto; Pelayo, Jacinta Sanchez [Orientador]; Oliveira, Tereza Cristina Rocha Moreira de; Rocha, Sérgio Paulo Dejato daResumo: A carne moída bovina é muito consumida pela população e se constitui em um excelente meio para a multiplicação de microrganismos pelos nutrientes e pela manipulação que passa até o consumo, podendo conter microrganismos patogênicos, como o grupo da Escherichia coli diarreiogênica (DEC) O trabalho teve por objetivo verificar a presença de patotipos de DEC, em amostras de carne moída bovina comercializadas na cidade de Londrina – PR, no período de 214 – 215, utilizando a técnica da PCR para pesquisa dos genes de virulência, padrão de adesão em células HEp-2, sorotipagem, teste de sensibilidade a antimicrobianos e filogenia Dos 4 isolados de E coli, cinco (5%) foram caracterizadas como E coli enteroagregativa, três (3%) como E coli produtora de toxina Shiga e duas (2%) como E coli enteropatogênica De acordo com a filogenia, dos dez isolados de DEC, cinco amostras (5%) pertencem ao grupo A, duas (2%) ao grupo E, duas (2%) ao grupo B1 e uma (1%) não foi classificada em nenhum dos sete filogrupos Os sorotipos encontrados foram: O152:H8, O93:H46, O175:H7, O15ab:H7, O156:H1, O93:H9 e O3:H2 Em relação aos antimicrobianos, uma amostra (1%) foi resistente à ampicilina, duas (2%) à sulfametoxazol-trimetoprim e uma (1%) a cefalotina Conclui-se assim, que a carne moída bovina pode ser um reservatório de DEC para o homem enfatizando-se a importância da higiene adequada, desde o preparo da carne até sua exposição à mesaItem A resposta imunológica inata na infecção inicial por Listeria monocytogenes não é Influenciada pela ausência de 5-LipoxigenaseKakitani, Daniel Hideo; Saridakis, Halha Ostrensky [Orientador]; Felipe, Ionice; Delfino, Vinicius Daher AlvaresResumo: Listeriose é uma doença encontrada por todo mundo e atinge tanto humanos quanto animais Sua importância deve-se ao fato de causar doença severa e possuir a maior taxa de mortalidade entre as infecções alimentares, cerca de 3% Por anos Listeria monocytogenes é utilizada como modelo experimental para infecção intracelular, principalmente contribuindo para desvendar o funcionamento da resposta imunológica a estes patógenos Sabe-se que na infecção por L monocytogenes principalmente o fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), interferon-gama (INF-?), interleucina-1 (IL-1), interleucina 6 (IL-6) e óxido nítrico (NO) possuem papel crucial no controle da infecção Os leucotrienos são mediadores inflamatórios muito relacionados com doenças inflamatórias crônicas, porem pouco se sabe em relação a inflamações agudas, entre elas as infecções O camundongo ALOX possui uma deleção genética para produção de 5-lipoxigenase, o que o torna deficiente na produção de leucotrienos Utilizando este camundongo em uma infecção por L monocytogenes em comparação com seu controle não foi encontrada diferenças significantes entre os resultados, a dosagem de plasmática de nitrato durante o curso da infecção sofreu um aumento continuo A contagem bacteriana não demonstrou diferenças significativas entre os grupos A IL-6 foi o mediador inflamatório com maior aumento entre os mediadores pesquisados, porem novamente sem diferença entre os gruposItem Avaliação da infecção por Paracoccidioides brasiliensis (Pb-18) e Paracoccidioides lutzii (LDR-2) no modelo de Galleria mellonellaArcos, Janneth Josefina Escobar; Itano, Eiko Nakagawa [Orientador]; Venâncio, Emerson José; Ono, Mário Augusto; Almeida, Ricardo Sérgio Couto de [Coorientador]Resumo: A Paracoccidioidomicose (PCM) causada pelo fungo dimórfico do gênero Paracoccidioides, é uma das micoses sistêmicas mais importantes da América Latina Por muito tempo, o fungo Paracoccidioides brasiliensis foi considerado como único agente causal da PCM, mas recentemente foi introduzida a nova espécie P lutzii também como agente da doença Vários modelos foram empregados na tentativa de simular a PCM humana, e o mais empregado tem sido o modelo murino Modelos invertebrados como as larvas de G mellonella foram introduzidas recentemente como uma alternativa para investigar esta infecção Com o objetivo de avaliar as interações patógeno-hospedeiro na infecção por P brasiliensis e P lutzii no modelo de G mellonella, foram analisadas curvas de sobrevivência, quantificação de melanização, densidade de hemócitos e ensaio de fagocitose Investigamos a capacidade de leveduras da espécie P lutzii para formar biofilme in vitro O presente trabalho é o primeiro estudo de biofilme in vivo de P brasiliensis e P lutzii em infecções experimentais entre células de biofilmes e células planctônicas As curvas de sobrevivência foram determinadas com três diferentes concentrações (5x16, 25x16, 1x16 células/larva) de P brasiliensis (Pb18) e P lutzii (LDR2) Para a determinação da densidade de hemócitos na hemolinfa, as larvas foram inoculadas com (5x16 células/larva) e a hemolinfa foi recolhida 2, 4 e 8 h após infecção, seguida de contagem de hemócitos totais Para biofilmes, foi utilizada uma placa de microtutulação de 24 poços com P brasiliensis (Pb18) e P lutzii (LDR2) na concentração de 1x18 células/mL durante 7 h, 48, 96 e 144 h e, a biomassa total determinada pela coloração de cristal violeta Para a quantificação da melanização, a hemolinfa das larvas foi coletada 4 e 12 horas pós-infecção Para o ensaio de fagocitose in vitro, os hemócitos e as leveduras foram coradas com MayGrünwald-Giemsa após 1 h de incubação a 37 ° C com 5% de CO2 A análise da curva de sobrevivência mostrou que, para P brasiliensis e P lutzii, 2 a 3 dias foram o tempo necessário para atingir 5% de morte (TD5%), e diferentes níveis de virulência de ambas espécies foram encontrados neste modelo (p<,5) A morte das larvas foi dependente do número de células/larva injetadas A quantificação da melanização indicou diferenças significativas entre as larvas inoculadas com P brasiliensis (Pb-18) e P lutzii (LDR2) após 4 e 12 h pós-infecção, e o acúmulo de melanina na hemolinfa aumentou ao longo do tempo A densidade de hemócitos diminuiu após 2 horas de infecção e esta diminuição permaneceu quase inalterada após 4 e 8 h de infecção em relação ao grupo controle, porém sem diferença significativa entre os dois fungos O ensaio de fagocitose in vitro mostrou que as células granulares e os plasmatócitos foram capazes de fagocitar estas células de levedura As infecções experimentais entre células planctônicas e biofilmes demonstraram que as células do biofilme de ambas espécies de fungos induziram a morte de 1% das larvas no período de observação Nossos dados confirmam diferentes níveis de virulência de ambas espécies com base nas curvas de sobrevivência e na quantificação da melanização As leveduras das duas espécies foram fagocitadas pelas células granulares e os plasmatócitos in vitro Demostramos a capacidade de leveduras do gênero P lutzii para formar biofilme in vitro As infecções experimentais em larvas de G mellonella com células de biofilme mostraram-se mais virulentas do que as células planctônicas Estudos adicionais são necessários para determinar o papel desses biofilmes in vivo envolvidos na morte prematura das larvasItem Avaliação do efeito probiótico de Lactobacillus sp. na invasão por Salmonella enterica sorovariedade TyphimuriumTsuruda, Carina Terumi; Nakazato, Gerson [Orientador]; Garcia, Sandra; Kobayashi, Renata Katsuko TakayamaResumo: Os probióticos são microrganismos vivos que quando administrados em quantidades adequadas conferem benefícios para a saúde do hospedeiro, impedindo a colonização e invasão de patógenos no intestino Lactobacillus é um dos principais agentes probióticos utilizados na prevenção de infecções e na restauração da microbiota intestinal Salmonella enterica sorovariedade Typhimurium é um importante agente causador de infecção intestinal de origem alimentar O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade protetora do Lactobacillus rhamnosus produtor de exopolissacarídeos (EPS) contra a invasão in vitro e in vivo por S Typhimurium Para isso foi realizada a pesquisa de bacteriocinas, ensaios de adesão e invasão celular in vitro Para o teste de desafio em camundongos BALB/c, realizou-se análise histopatológica e microbiológica do fígado, baço, placas de Peyer e íleo Os resultados mostraram que os lactobacilos foram capazes de produzir compostos antimicrobianos contra S Typhimurium Estes lactobacilos inibiram a adesão e invasão de S Typhimurium em células HeLa e HEp-2, respectivamente O ensaio de desafio no modelo murino mostrou uma diminuição da translocação do patógeno para o baço e fígado de camundongos tratados com probiótico, bem como a proteção no tecido intestinal íleo de camundongos (análise histopatológica) Esses resultados mostraram que os ensaios in vitro são interessantes para avaliação prévia de candidatos a probióticosItem Estudo taxonômico e filogenético de estirpes de rizóbios simbiontes de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) provenientes do MéxicoCordeiro, Andrey Barbosa; Hungria, Mariangela [Orientador]; Delamuta, Jakeline Renata Marçon; Ribeiro, Renan AugustoResumo: Bactérias diazotróficas conhecidas como rizóbios são importantes por realizarem a fixação biológica de nitrogênio (FBN) em simbiose com leguminosas, sendo, em alguns casos, utilizadas como inoculantes microbianos, substituindo o uso de fertilizantes nitrogenados A identificação e a classificação dos microrganismos capazes de realizar a FBN fornecem conhecimento sobre a evolução e a relação entre as espécies, permitindo estudar aquelas de maior interesse biotecnológico Em relação à planta hospedeira, o feijoeiro (Phaseolus vulgaris L) é a principal leguminosa utilizada na alimentação humana na América do Sul, América Central, África e em alguns países da Ásia O objetivo deste trabalho foi determinar o grupo taxonômico e as relações filogenéticas de três estirpes de rizóbios (CNPSo 661, 666 e 668), isoladas do centro principal de origem/diversidade genética da leguminosa hospedeira, o México, por meio de um estudo polifásico Em estudos prévios, essas três estirpes foram identificadas como pertencendo a uma nova linhagem (PEL-3) As sequências do gene 16S rRNA posicionaram as três estirpes em um grande grupo, incluindo R etli A análise de sequências multilocus (multilocus sequencing analysis, MLSA) de quatro genes conservados (recA, glnII, gyrB e rpoA) posicionou as três estirpes em um grupo distinto de todas as outras espécies descritas, com 1 % de suporte bootstrap e a identidade de nucleotídeos (nucleotide identity, NI) dos quatro genes concatenados com a espécie mais próxima, R etli, foi de 95, % Os valores médios de identidade de nucleotídeos do genoma total (average nucleotide identity, ANI) da estirpe CNPSo 668 com a espécie mais próxima, R etli, foi de 92,9 % Nas análises do gene de fixação do nitrogênio nifH e do gene de nodulação nodC, as estirpes foram agrupadas com outros simbiontes do feijoeiro Outros aspectos fenotípicos e genotípicos foram determinados para o novo grupo e os dados suportaram a descrição das três estirpes CNPSo como uma nova espécie, para a qual o nome Rhizobium esperanzae foi proposto e aceito A estirpe tipo representativa da nova espécie é a CNPSo 668T (= UMR 132T = Z87-8T = LMG 33T = U 11T)Item Atividade antibacteriana e antibiofilme in vitro e aplicação em catéter urinário de nanopartículas de prata contra Proteus mirabilis uropatogênicoSaikawa, Gustavo Issamu Asai; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da [Orientador]; La Porta, Felipe de Almeida; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves deResumo: Proteus mirabilis é um dos principais agentes causadores de infecções urinárias associadas à catéter Os tratamentos contra infecções bacterianas têm se tornado cada vez mais ineficazes devido à rápida emergência de bactérias resistentes a antimicrobianos, levado à necessidade crítica de novos agentes antimicrobianos Nanopartículas de prata (AgNPs) aparecem como candidatas por conta de sua atividade antimicrobiana e baixa toxicidade aos humanos Este trabalho teve como objetivo verificar a atividade de AgNPs biossintetizadas pelo fungo Fusarium oxysporum contra isolado clínico de P mirabilis uropatogênico e verificar a atividade antimicrobiana de catéteres de Foley revestidos com essas AgNPs As AgNPs foram sintetizadas pela adição de AgNO3 ao filtrado fúngico Análise de tamanho, potencial Zeta e morfologia das AgNPs foram determinados por espalhamento de luz dinâmico, laser doppler eletroforese, e microscopia eletrônica de transmissão, respectivamente Os ensaios de microdiluição em caldo e cinética de tempo de morte foram usados para determinar a atividade antibacteriana das AgNPs O ensaio de redução do XTT foi utilizado para determinação da atividade antibiofilme Além disso, fragmentos de catéter foram revestidos com duas e três camadas de AgNPs usando polidopamina como agente ancorante A caracterização da superfície foi realizada EDX Pedaços de catéter revestido foram incubados em urina inoculada com P mirabilis e o tempo necessário para incrustação foi determinado Imagens de MCE foram realizadas para comparar a formação de biofilme entre os catéteres pristino e revestidos As AgNPs apresentaram formato esférico, com tamanho médio de 126,3 nm e potencial Zeta de -36,86 mV A CIM foi 62,5 µM, causando inviabilidade celular total após 4 horas de ação A formação de biofilme foi inibida em 76,4% e o biofilme maduro foi reduzido em 1,9% A análise por EDX confirmou a presença de prata A incrustação dos catéteres de 2 e 3 camadas aconteceu após 13 e 2 dias, respectivamente, enquanto o catéter pristino apresentou incrustação no primeiro dia MCE mostrou que o revestimento do catéter reduziu a intensidade de fluorescência em mais de 98% Dessa forma, conclui-se que AgNPs biossintetizadas por F oxysporum possuem grande atividade antibacteriana e antibiofilme, sendo uma potencial alternativa ao tratamento com antibióticos em infecções por P mirabilis uropatogênicoItem Efeito de diferentes substratos na inoculação micorrízica, matéria seca, teores foliares de nitrogênio e fósforo e na produtividade de soja e milhoBarazetti, André Riedi; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Zucareli, ClaudemirResumo: O fósforo é um dos nutrientes essenciais mais exigidos durante o ciclo de vida vegetal, considerado um dos mais limitantes na produção agrícola O desenvolvimento de tecnologias que contribuam para um melhor aproveitamento do P do solo, gerando menor demanda por fertilizantes químicos é indispensável uma vez que se trata de um nutriente esgotável e não-renovável Fungos Micorrízico Arbusculares (FMA) são conhecidos por estabelecerem associações simbióticas com raízes de plantas, auxiliando na absorção de nutrientes, principalmente do P Neste contexto, a formulação de um inoculante a base de um FMA, que possa ser utilizado em larga escala, é uma alternativa para auxiliar na redução das quantidades de fertilizantes fosfatados utilizados O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da vermiculita, da turfa e do fosfato de rocha, como veículos na inoculação de sementes de soja (Glycine max) e milho (Zea mays) para o FMA Rhizophagus clarus produzido in vitro O experimento foi conduzido em área experimental da Universidade Estadual de Londrina, Brasil Foram elaborados sete tratamentos, distribuídos em cinco blocos casualizados, sendo: Tratamento Agronômico (TA); MA + Turfa + P (MAT+P); MA + Vermiculita + P (MAV+P); MA + Fosfato de Rocha + P (MAFR+P); MA + Turfa - P (MAT-P); MA + Vermiculita - P (MAV-P); MA + Fosfato de Rocha - P (MAFR-P) As plantas foram avaliadas quanto a: Colonização micorrízica; matéria seca; P e N da parte aérea e produtividade de grãos Para soja, foi observado incremento na produtividade de até 16,3% em relação a TA, com a utilização de vermiculita como veículo para o inóculo, sem adubação fosfatada Já as plantas de milho, utilizando turfa como veículo e adubação fosfatada, obtiveram ganhos de até 2% em produtividadeItem Seleção de mutantes aleatórios de Azomonas sp. com maior capacidade de produção de compostos indólicos e excreção de amônioRamos, Luan da Luz; Oliveira, André Luiz Martinez de [Orientador]; Sartori, Daniele; Rodrigues, Elisete PainsResumo: Diversas pesquisas têm mostrado que bactérias promotoras do crescimento vegetal (BPCV) são capazes de substituir total ou parcialmente insumos agrícolas industriais, atuando na disponibilização e no aumento da eficiência de uso de nutrientes disponíveis no solo Dentre os diferentes mecanismos de promoção do crescimento exibidos por BPCV, a atividade diazotrófica possui enorme importância agronômica, devido à escassez de nitrogênio em solos agrícolas, o elevado custo de aquisição e aplicação de fertilizantes nitrogenados, e o potencial de contaminação do ambiente pelo uso indiscriminado destes insumos No Brasil, algumas estirpes de microrganismos diazotróficos promotores de crescimento estão registradas para uso comercial em culturas de trigo, arroz, milho, e diversas espécies leguminosas Com isso, são também necessárias ações para o melhoramento destes microrganismos buscando incrementar os mecanismos ativos na promoção do crescimento vegetal, e desta forma proporcionar o desenvolvimento de novos produtos biotecnológicos Diante deste quadro foram aplicados processos mutagênicos aleatórios, químicos e físicos, sobre uma BPCV isolada de raízes de milho e identificada como Azomonas sp estirpe 4311, seguindo a seleção dos mutantes obtidos para identificar variantes com capacidade aumentada de excreção de amônio Esse trabalho resultou na identificação de 16 estirpes mutantes de Azomonas sp com alteração no metabolismo do nitrogênio, reveladas pela capacidade de crescimento em meio de cultivo adicionado com 3 mM de etilenodiamina, um composto inibidor da enzima glutamina sintetase responsável pela assimilação de amônio Dentre estes mutantes destacou-se a estirpe Azomonas sp B1T7-6, que apresentou níveis de excreção de amônio e produção de compostos indólicos superiores à estirpe selvagem Em adição, o desenvolvimento inicial de plantas de milho na presença da estirpe B1T7-6 resultou em incrementos na quantidade de matéria seca e no comprimento de raízes, quando comparadas às plantas inoculadas com a estirpe selvagem Os índices de excreção de amônio e produção de compostos indólicos pela estirpe B1T7-6 foram 86% e 1% superiores à estirpe selvagem, respectivamente, enquanto o acúmulo de matéria seca em plantas de milho foi 12% superior à mesma Estes resultados demonstraram que a eficiência dos processos biológicos utilizados na agricultura pode ser aumentada, e expandida para espécies bacterianas pouco utilizadas como insumo biotecnológico Futuros estudos serão necessários para melhor compreensão das alterações metabólicas e genéticas que possam ter influenciado o desempenho da estirpe mutanteItem Avaliação da atividade de compostos extracelulares de Pseudomonas aeruginosa no controle de Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum em tomateiro (Solanum lycopersicum)Munhoz, Luana Delgado; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Balbi-Peña, Maria Isabel; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves deResumo: O tomate é uma hortaliça de grande relevância econômica mundial e nacional A podridão mole do tomateiro é causada pela bactéria Gram negativa Pectobacterium carotovorum subsp carotovorum (Pcc) que coloniza os vasos condutores da planta em qualquer fase do cultivo, esta doença não é controlada com produtos químicos, existindo a necessidade de novas alternativas para controle da doença O uso de Pseudomonas sp tem potencial para exploração como pesticida biológico, reduzindo o uso de pesticidas químicos na agricultura Este estudo teve como objetivo avaliar a ação de compostos extracelulares de Pseudomonas aeruginosa no controle da Pcc em tomateiro O processo de produção e extração do composto antibiótico foi realizado de acordo com a patente registrada PI8335-1 – INPI 12/9/28As frações antibióticas foram obtidas por cromatografia líquida em coluna a partir da purificação dos metabólitos brutos da cepa LV Para purificação de fenazina-1-carboxiamida foi utilizada a metodologia de Shanmugaiah et al (21) adaptada para uso em sistema automatizado de cromatografia flash (FP 971 - Agilent®) Para avaliação da atividade antibiótica foram realizados os testes de difusão em disco, microdiluição em caldo, determinação da concentração inibitória mínima (CIM) em placa de 96 poços, avaliação ultra-estrutural in vitro por microscopia eletrônica de varredura (MEV) Na avaliação do controle da doença e da indução de resistência foram realizados testes in vivo em casa de vegetação com a F4A e o composto fenazina-1-carboxiamida, sendo avaliado também o efeito na produção do fruto A comprovação da indução de resistência foi avaliada pela atividade de três enzimas relacionadas com o sistema de defesa das plantas: peroxidase, fenoloxidase e fenilalanina-amônia-liase, em plantas inoculadas e não, tratadas com o composto fenazina-1-carboxamida Os testes em disco indicaram melhor atividade para a fração F4A em todas as concentrações testadas, sendo sua CIM 7812 µg mL-1 para Pcc O composto fenazina-1-carboxiamida não apresentou inibição da Pcc Na MEV foram observadas mudanças morfológicas provocadas pela fração F4A na célula bacteriana após 3 hrs de incubação Nos testes in vivo foi observado o controle da doença nas plantas tratadas, além do estímulo no crescimento e produção, mostrando uma possível indução de resistência sugerida pelo aumento das atividades enzimática Levando-se em conta a presença do composto fenazina-1-carboxamida na fração F4A, necessita-se de mais testes para comprovação da origem da ação dos resultados obtidos O biocontrole da Pcc com a utilização de compostos do metabolismo secundário bacteriano da cepa LV de P aeruginosa pode ser considerado uma ferramenta no manejo deste fitopatógenoItem Atividade do flavonóide baicaleína e fluconazol sobre células planctônicas, células pré-aderidas e biofilme de isolados de Candida parapsilosis stricto sensuFernandes, Mariana Massako Shibayama Ferrante; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Moralez, Alane Tatiana Pereira; Furlaneto-Maia, LucianaResumo: Candida parapsilosis é um dos principais agentes etiológicos fúngicos relacionados a infecções noscomiais Diante da capacidade desta espécie em formar biofilme e a ocorrência de resistência adquirida ao fluconazol, o interesse por novos antifúngicos tem sido observada Os objetivos do presente estudo foram avaliar a atividade antifúngica do flavonóide baicaleina e do fluconazol de forma isolada e combinada, frente a células planctônicas de isolados sanguíneos de C parapsilosis stricto sensu, analisar as possíveis alterações morfológicas ao nível ultraestrutural resultantes do efeito da baicaleina, do fluconazol e da combinação sinérgica entre eles e avaliar a atividade do fluconazol e da baicaleína em células pré-aderidas e biofilme Os valores de CIM5 de baicaleína foram de 8µg mL-1 para células planctônicas de isolados fluconazol-resistentes e de 4-8 µg mL-1 para isolados suscetíveis ao fluconazol O uso combinado do fluconazol com a baicaleína resultou em sinergismo para o isolado fluconazol-resistente 357 e para o isolado fluconazol-sensível 551 em termos de CIM5 Houve redução na concentração de CIM5 para pelo menos um dos compostos testados para a maioria dos isolados avaliados A análise ultraestrutural revelou que para o isolado em que ocorreu singergismo entre fluconazol e baicaleína, a morfogênese foi afetada em todos os tratamentos, com presença de matriz extracelular No tratamento combinado foi observada grande quantidade de matriz interligando as células Para o isolado em que a ação combinada foi indiferente a morfogênese não foi afetada, sendo que no tratamento com baicaleína resultou em grande quantidade de matriz extracelular, além disso, no tratatamento combinado foi observada alterações celulares indicativas de danos na membrana celular Para células pré-aderidas os resultados obtidos demontraram que a maioria dos isolados apresentaram menor suscetibilidade ao fluconazol, onde 25% dos isolados fluconazol-sensível, e 83% dos isolados fluconazol-resistentes apresentram valores de CIMA5 >2 µg mL-1 Para biofilme os compostos não apresentaram ação inibitória para maioria dos isolados, ou seja, 75% e 86% dos isolados apresentaram concentrações de CIMB5 de >8 µg mL-1 para fluconazol e para baicaleína, respectivamenteOs dados obtidos demonstram o potencial da baicaleína como agente antifúngico em células planctônicas de isolados de C parapsilosis, independentemente do perfil de suscetibilidade ao fluconazol Este estudo mostrou que biofilmes em estágio inicial apresentam menor suscetibilidade aos compostos avaliados comparativamente a células planctônicasItem Comparação entre os fatores de virulência de Escherichia coli uropatogênica sensíveis e multiresistente aos antimicrobianosAbshana, Laura Patricia Perez; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama [Orientador]; Pelayo, Jacinta Sanchez; Vespero, Eliana CarolinaResumo: Isolados de Escherichia coli uropatogênica podem possuir fatores específicos de virulência como adesinas, proteases, toxinas, sistemas de captura de ferro e fatores protetores contra o sistema imunológico, proporcionando maior capacidade de adaptação a novos ambientes e colonização, tornando-se o principal agente etiológico das infecções do trato urinário A relação entre a resistência aos antimicrobianos e a virulência em cepas de E coli, tem sido documentada, sugerindo uma associação genética importante O objetivo deste estudo foi comparar a frequência dos principais fatores de virulência em UPEC sensíveis e multirresistentes aos antimicrobianos Foram estudadas 5 cepas de E coli multirresistentes (UPEC MDR), 5 cepas UPEC sensíveis aos antimicrobianas (UPEC não-MDR) e 52 amostras de E coli de microbiota de origem fecal A pesquisa dos principais genes de virulência foi feita por reação em cadeia da polimerase Foram investigados 15 genes de virulência, nas cepas UPEC MDR, os genes mais prevalentes foram: iutA (7,%), traT (58,%), fyuA (44,%), tsh (42,%) e papC (32,%) Os genes de vrulencia mais prevalentes nas cepas UPEC não-MDR foram traT (68,%), fyuA (68,%), kpsII (58,%), hlyA (58,%), iutA (4,%) Em cepas de E coli comensais foram detectados os genes cvaA (55,8%), fyuA (48,8%) e traT (32,7%) Observou-se que as ilhas de patogenicidade estavam mais presentes na UPEC MDR, e que os isolados patogênicos pertenciam principalmente ao grupo filogenético B2, diferente das cepas comensais pertencentes aos grupos B1 e A Os resultados dos testes fenotípicos mostraram maior capacidade de invasão (34%) nos isolados patogênicos em relação aos isolados comensais (8%) além disso UPEC MDR é um forte produtor de biofilme em comparação com UPEC não-MDR e E coli comensal Estudos que correlacionam resistência e virulência favorecem uma melhor compreensão da patogênese desses microrganismos Por conseguinte, estes dados confirmam que as amostras de UPEC multiresistentes podem ser mais virulentas do que as cepas UPEC não-MDR e E coli comensais, alertando para o perigo da disseminação destas cepas e reforçando a importância da caracterização da resistência e virulência da UPEC