02 - Mestrado - Microbiologia

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Diversidade de bactérias isoladas de nódulos de leucena (Leucaena spp.) em solos do Mato Grosso do Sul, Brasil
(2025-03-06) Assunção, Mariana Cristina; Hungria, Mariangela; Ribeiro, Renan Augusto; Ercole, Tairine Graziella; Klepa, Milena Serenato
Os rizóbios são bactérias diazotróficas simbióticas capazes de se associar a leguminosas como a Leucaena spp. e formar estruturas especializadas nas raízes, chamadas nódulos, onde o nitrogênio atmosférico é convertido em amônia, em um processo conhecido como fixação biológica de nitrogênio. No entanto, ainda há pouco conhecimento sobre as espécies de rizóbios simbiontes de leucena no Brasil, bem como sua eficiência na fixação de nitrogênio. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade de bactérias isoladas de nódulos da planta Leucaena spp. de dez municípios do Mato Grosso do Sul (MS), Brasil, compreendendo dois dos três biomas do estado, Mata Atlântica e Cerrados. Foram realizadas caracterização morfofisiológica, análise do perfil genético por BOX-PCR, sequenciamento e análise filogenética dos genes 16S RNAr e genes housekeeping glnII, gyrB, recA e rpoB. Na análise de perfil de DNA por BOX-PCR de 68 isolados, considerando um cut-off de 70% de similaridade constatou-se alta diversidade genética, com a formação de cinco grupos e 21 bactérias em posições isoladas. Para o gene 16S RNAr, 30 isolados foram selecionados a partir do BOX-PCR, os quais foram identificados como Rhizobium (7), Agrobacterium (7), Herbaspirilum (2), Burkholderia (2), Paraburkholderia (2) e Pseudomonas (10). A partir da identificação inicial dos gêneros aos quais pertenciam, realizou-se a amplificação e o sequenciamento dos genes housekeeping glnII, gyrB, recA e rpoB para melhor identificação dos isolados e através da concatenação desses genes analisou-se Nucleotide Identity (NI) e Average Nucleotide Identity (ANI) para sugerir valores de corte para delineamento de novas espécies considerando 97,6% para Rhizobium e 97,1% para Agrobacterium. Com a construção das árvores filogenéticas dos genes housekeeping individuais e concatenados utilizando a ténica de Multilocus Sequence Analysis (MLSA), além da análise de ANI e Digital DNADNA hybridization (dDDH) com as sequências genômicas obtidas, foi possível confirmar o posicionamento filogenético das estirpes identificadas como pertencentes aos gêneros Agrobacterium e Rhizobium, além de identificar uma possível nova espécie. Os resultados obtidos nesta pesquisa indicam não apenas a alta diversidade genética de bactérias noduladoras de raízes de leucena presentes no estado do MS, Brasil, mas também a presença de uma nova espécie pertencente ao gênero Agrobacterium
Genotipagem de cepas de Mycobacterium tuberculosis e avaliação quanto a presença da linhagem beijing em isolados em Manaus – AM
(2025-07-30) Viana, Wesley Roberth Lima; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi; Suffys, Philip Noel; Carvalho, Clarice Maia; Ogusku, Mauricio Morishi
A tuberculose permanece como um grave problema de saúde pública na região amazônica, sendo marcada por elevados índices de incidência e desafios estruturais para seu controle. A compreensão da diversidade genética de Mycobacterium tuberculosis é fundamental para apoiar estratégias de vigilância epidemiológica e controle da doença. Este estudo teve como principal objetivo caracterizar geneticamente 40 isolados clínicos provenientes da região amazônica por meio da técnica de MIRU-VNTR 12 loci e PCR específica para detecção da família Beijing. A análise revelou a formação de três clusters, sendo dois da sublinhagem Haarlem e outro da sublinhagem EAI resultando numa taxa de agrupamento de 0,09. Além dessas sublinhagens já mencionadas, outras identificadas foram LAM e X. Nenhum isolado foi identificado como pertencente à linhagem Beijing, nem pela metodologia de MIRU-VNTR 12 loci assim como não foi encontrado nos sistemas de detecção utilizando reações de triagem pela técnica de PCR Este trabalho contribui com dados inéditos sobre a diversidade genética do M. tuberculosis na Amazônia e reforça a importância da vigilância molecular para aprimorar as estratégias de controle da tuberculose na região.
Descoloração de corante reativo têxtil por isolados fúngicos de origem ambiental: micélio imobilizado e não imobilizado
(2025-04-24) Silva, Thamires Romera da; Furlaneto, Marcia Cristina; Paulo, Eloiza Aparecida; França, Emanuele Júlio Galvão de
Os efluentes gerados pela indústria têxtil contêm elevadas concentrações de corantes sintéticos e outros compostos químicos, representando um desafio ambiental devido à sua toxicidade e à dificuldade de remoção por métodos convencionais de tratamento físico-químico. Nesse contexto, os processos biológicos que utilizam microrganismos destacam-se como alternativas sustentáveis para o tratamento de efluentes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de fungos filamentosos não imobilizado e imobilizado em esponja vegetal (Luffa cylindrica), para descolorir o corante reativo azul BF-5G (AZ-BF-5G). Foram utilizados dois fungos filamentosos: Penicillium sp. (ascomiceto) e o isolado B20 (basidiomiceto). Foram testadas diferentes concentrações de biomassa fúngica, tempos de incubação e concentrações do corante. A esponja vegetal foi escolhida como suporte de imobilização devido à sua biodegradabilidade, disponibilidade e alta porosidade. Também foi avaliada a capacidade de reutilização da biomassa imobilizada em ciclos subsequentes de descoloração e a eficiência na descoloração de efluente simulado por Penicillium sp. imobilizado. Inicialmente, o micélio não imobilizado de ambos os isolados foram testados. Penicillium sp. apresentou 80,92 ± 5,08% de descoloração em 24 horas, enquanto o isolado B20 descoloriu 54,1 ± 7,2% no mesmo período. O aumento da concentração do corante resultou em redução da capacidade de descoloração, evidenciando a importância da imobilização como estratégia de proteção contra estresses ambientais. O sistema de imobilização em esponja vegetal mostrou-se eficiente, com descolorações de 32,7 ± 2,0% e 87,04 ± 2,7% para B20 e Penicillium sp., respectivamente. O isolado B20 imobilizado demonstrou maior eficiência em descolorir concentrações elevadas de corante, enquanto Penicillium sp. destacou-se pela capacidade de descoloração em tempos menores de incubação, reutilização da biomassa imobilizada por três ciclos e descoloração de efluente simulado. Os resultados reforçam o potencial da esponja vegetal como suporte para imobilização de fungos filamentosos. Conclui-se que Penicillium sp. e B20 apresentam capacidade de descoloração do corante AZ-BF-5G, destacando-se como alternativas para o tratamento de efluentes têxteis, contribuindo, dessa forma, para práticas industriais mais sustentáveis.
Caracterização fenotípica e genotípica de Escherichia coli resistentes à polimixina isoladas de hortaliças comercializadas no norte do Paraná
(2025-02-25) Nascimento, Arthur Bossi do; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Vespero, Eliana Carolina
Hortaliças são componentes essenciais de uma dieta saudável e frequentemente consumidas cruas, o que pode facilitar a transmissão de patógenos como E. coli. Além de causar infecções, E. coli pode disseminar genes para outros microrganismos, como o mcr-1, que confere resistência às polimixinas. A resistência a antimicrobianos, especialmente à polimixina, um dos últimos recursos terapêuticos contra infecções por bactérias multirresistentes, tem se tornado uma preocupação crescente. Diante disso, torna-se importante avaliar a prevalência desses microrganismos em hortaliças. Este estudo teve como objetivo caracterizar fenotipicamente e genotipicamente cepas de E. coli resistentes à polimixina isoladas de hortaliças comercializadas em Londrina, PR, entre outubro de 2022 e fevereiro de 2023. De 514 amostras analisadas, foram analisadas 10 cepas de E. coli resistentes à polimixina, sendo 5 provenientes de alface, 2 de almeirão e 3 distribuídos entre agrião, couve e rúcula. A resistência à polimixina foi determinada por microdiluição em caldo, onde 8 isolados apresentaram Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 4 mg/L, enquanto 2 cepas demonstraram CIM de 8 mg/L e 16 mg/L, respectivamente. O teste de sensibilidade aos antimicrobianos mostrou que todas as cepas eram produtoras de AmpC, além de outras resistências. Quatro cepas transferiram a resistência à polimixina por conjugação, indicando a capacidade de transferência deste gene por plasmídeos. O sequenciamento do genoma revelou cepas de diferentes STs, sendo o mais prevalente o ST48 e presença de genes associados à patogenicidade, como csg, ibeC, ibeB, entre outros. Além de apresentar dois plasmídeos com o gene mcr-1, p0111_1__AP010962 e IncI1I(Alpha)_1__AP005147. A análise filogenética indicou relações das cepas com fontes diversas, como ambiente e animais. Este estudo reporta, pela primeira vez no Brasil, a presença de E. coli resistente à polimixina em hortaliças, destacando o risco zoonótico e a disseminação de genes de resistência por meio de plasmídeos móveis. Os resultados reforçam a necessidade de um monitoramento contínuo desses alimentos para mitigar a propagação da resistência antimicrobiana e proteger a saúde pública.
Taxonomia polifásica de estirpes de Rhizobium isoladas de nódulos de Vigna unguiculata em solos do Mato Grosso do Sul e descrição de novas espécies
(2025-03-06) Delai, Caroline Vanzzo; Hungria, Mariangela; Ribeiro, Renan Augusto; Ercole, Tairine Graziella; Klepa, Milena Serenato
Determinados microrganismos do solo caracterizam-se como excelentes aliados na produção sustentável de alimentos, especialmente ao promover o crescimento vegetal de culturas de grande impacto econômico. Uma das culturas que se beneficia diretamente da ação de bactérias do solo é a do feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp), tendo em vista que a leguminosa possui a capacidade de se associar a uma variedade de rizóbios, grupo específico de bactérias que se distinguem por realizar a fixação biológica de nitrogênio (FBN) em simbiose com plantas leguminosas. Como o nitrogênio (N) é um componente essencial para o crescimento vegetal, os rizóbios se tornaram vitais para o setor agrícola, atuando como alternativas sustentáveis aos fertilizantes químicos, além de apresentarem grande importância para a manutenção dos ecossistemas naturais. Atualmente, sabe-se que o conhecimento acerca da diversidade microbiana é ainda muito limitado. Dessa forma, não apenas grande parte da diversidade microbiana é desconhecida, mas também todo potencial biotecnológico que poderia ser explorado a partir dela. Neste contexto, a sistemática bacteriana, área de estudo que busca identificar, classificar e nomear as bactérias, bem como investigar a história evolutiva desses microrganismos, pode ser a solução para esse grande desafio enfrentado, especialmente por microbiologistas e biotecnologistas. Em vista disso, o objetivo do presente estudo foi realizar uma análise polifásica em estirpes de Rhizobium isoladas de nódulos de feijão-caupi, utilizado como planta-isca, inoculado com solos de terras indígenas do Mato Grosso do Sul. Em geral, os principais microssimbiontes de feijão-caupi são reconhecidos como sendo pertencentes ao gênero Bradyrhizobium, contudo, em estudo conduzido anteriormente por nosso grupo de pesquisa, foi identificado um número representativo de estirpes de Rhizobium isoladas de nódulos de V. unguiculata, de maneira que o estudo foi concentrado nessas estirpes. Foram realizadas caracterizações fenotípicas, genotípicas e filogenéticas de dez estirpes de Rhizobium. Os resultados obtidos para as filogenias do gene 16S RNAr e de quatro genes housekeeping isolados e concatenados (glnII, gyrB, recA e rpoB), bem como para as características fenotípicas, validaram a posição filogenética das estirpes. A análise polifásica revelou quatro estirpes pertencentes a três possíveis novas espécies, além de duas estirpes classificadas como R. dioscoreae, uma como R. hainanense, uma como ‘R. aureum’, uma como ‘R. centroccidentale’ e outra como ‘R. atlanticum’, enfatizando a rica biodiversidade das terras indígenas do Mato Grosso do Sul. Nenhuma das estirpes pertencentes as possíveis novas espécies, porém, foi capaz de nodular novamente o feijão-caupi, ou as leguminosas promíscuas Phaseolus vulgaris e Macroptilium atropurpureum. Estudos futuros são cruciais para revelar o papel dessas estirpes na nodulação ou crescimento do feijão-caupi e o potencial biotecnológico dessas novas espécies na agricultura.
Aumento do shelf life de inoculantes à base de Azospirillum brasilense com protetores celulares, seu efeito sobre a cultura do milho e compatibilidade com produtos químicos
(2025-02-25) Carvalho, Aryane Lima de; Nogueira, Marco Antonio; Klepa, Milena Serenato; Raitz, Walkyria Neiverth
O uso de microrganismos benéficos na agricultura, os chamados bioinsumos, vem crescendo significativamente nos últimos anos como alternativa para reduzir a dependência de insumos químicos. As bactérias promotoras do crescimento de plantas (BPCP) oferecem vários benefícios às plantas por meio de efeitos nutricionais ou atenuações de estresses bióticos e abióticos. As estirpes Ab-V5 e Ab-V6 de Azospirillum brasilense estão entre as BPCP mais bem caracterizadas e utilizadas na agricultura brasileira. Entretanto, a fabricação de inoculantes à base dessas estirpes tem sido um desafio devido ao seu tempo curto de prateleira (shelf life) e susceptibilidade a estresses ambientais, o que pode limitar seu uso. O uso de dissacarídeos e biopolímeros em formulações de inoculantes vem sendo uma estratégia para aumentar a proteção e a viabilidade celular. Este estudo teve como objetivo desenvolver formulações de inoculantes contendo aditivos visando a ação protetora celular das estirpes Ab-V5 e Ab-V6 de A. brasilense, o aumento do shelf life e de benefícios à planta hospedeira. Em laboratório, foram testadas individualmente quatro aditivos (goma guar, pullulan, sacarose e trealose), adicionadas no meio de cultivo para crescimento de A. brasilense. Para a avaliação do shelf life, as estirpes foram cultivadas em meio de cultura contendo o aditivo não utilizado como fonte de C pelo microrganismo. Os cultivos foram envasados assepticamente em bags e avaliados mensalmente por meio de recuperação celular durante dez meses. A eficiência agronômica das formulações na cultura do milho em casa de vegetação e em campo foi avaliada, assim como e a compatibilidade de A. brasilense em caldas contendo produtos químicos. Os quatro aditivos proporcionaram individualmente a produção de células de A. brasilense na ordem de 2 × 108 UFC mL-1. No entanto, a trealose com concentração 5% apresentou o melhor resultado para as duas estirpes de A. brasilense, tendo sido escolhida como aditivo na formulação, o que resultou em manutenção do shelf life por seis meses nas bags sem tamponante e por dez meses nas bags com agente tamponante. A trealose na concentração a 2% foi testada em campo, proporcionando aumento da produtividade e do teor de nitrogênio foliar do milho. A trealose com concentração 5%, escolhida para avaliação da compatibilidade de A. brasilense com fertilizantes líquidos em calda, não demonstrou efeito protetor, visto que na presença de três dos fertilizanes adicionados, não houve sobrevivência do microrganismo. O quarto fertilizante, entretanto, foi compatível e manteve a sobrevivência das estirpes testadas. Este estudo destaca o potencial da adição de trealose às formulações, estabilizando e otimizando a viabilidade celular de A. brasilense, além de destacar que a compatibilidade de bioinsumos com diferentes produtos químicos deve ser cuidadosamente considerada
Potencial biotecnológico de bactérias promotoras de crescimento de plantas
(2025-02-28) Garcia, Angelo Barrreiro; Oliveira Júnior, Admilton Gonçalves de; Roberto, Sergio Ruffo; Nogueira, Marco Antônio; Norile, Sandriele Aparecida; Nakazato, Gerson
O uso de bioinsumos microbianos surge como uma estratégia sustentável e promissora para o desenvolvimento de defensivos, bioestimulantes e fertilizantes, contribuindo para a produtividade agrícola e a redução do impacto ambiental. Este trabalho avaliou o potencial de 24 estirpes bacterianos do solo em promover o crescimento vegetal, destacando a produção de fitormônios e o controle de patógenos e doenças. As linhagens foram caracterizadas quanto à coloração de Gram, formação de endósporos por microscopia óptica de contraste de fase, produção de ácido-3-indolacético (AIA) em ensaios in vitro, capacidade de antagonismo a fitopatógenos em cultura dupla, formação de biofilme do tipo película em meio líquido e expansão por swarming em meio semi-solidificado. Dos estirpes avaliados, 23 foram Gram-positivos e apresentaram capacidade de formar endósporos, enquanto um isolado foi Gram-negativo, sem essa característica. A maioria das linhagens mostrou significativo potencial para produção de AIA e demonstrou mecanismos indiretos na promoção do crescimento vegetal, como o controle de patógenos e doenças. Esses resultados reforçam a importância de microrganismos do solo no desenvolvimento de bioinsumos agrícolas. Contudo, estudos adicionais são necessários para avaliar o desempenho dos estirpes em condições de campo e aprofundar o entendimento de seus mecanismos de ação. Isso permitirá elevar o nível de maturidade tecnológica dessas linhagens, viabilizando sua aplicação como ativos biotecnológicos em soluções sustentáveis para a agricultura moderna.
Geraniol potencializa o efeito do fluconazol em células planctônicas e sésseis de Candida tropicalis resistente a azol: análises in vitro e in vivo
(2025-03-18) Rodrigues, Gislaine da Silva; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Ishida, Kelly; Medeiros, Cássio Ilan Soares
Candida tropicalis é considerada um patógeno oportunista, causando doenças que variam de infecções superficiais a infecções disseminadas com risco de vida. A capacidade desta levedura de formar biofilmes e desenvolver resistência a antifúngicos representa um desafio terapêutico significativo. Neste estudo, foi avaliado o efeito do geraniol (GER), isolado e em combinação com fluconazol (FLZ), em células planctônicas e sésseis de C. tropicalis resistente aos azóis. GER apresentou um efeito fungicida dependente do tempo nas células planctônicas, comprometendo a integridade da membrana celular. Além disso, o GER inibiu o efluxo da proteína Cdr1 e as análises de docking molecular indicaram afinidade de ligação do GER à proteína Cdr1 de C. tropicalis. O GER apresentou sinergismo com FLZ contra as células planctônicas e sésseis, inibindo a adesão das células da levedura e a viabilidade dos biofilmes formados em superfícies abióticas durante 48 h. Biofilmes de C. tropicalis tratados com GER, isolado ou combinado com FLZ, exibiram alterações morfológicas e ultraestruturais, incluindo redução das camadas de células bem como a presença de células murchas. Além disso, GER isolado e combinado com FLZ não causaram toxicidade, e ambos os tratamentos prolongaram a sobrevivência das larvas de Galleria mellonella infectadas com C. tropicalis resistente aos azóis. Esses achados indicam que a combinação de GER e FLZ pode ser uma estratégia promissora para controlar infecções por C. tropicalis resistentes aos azóis.
Nanopartículas de prata biogênicas e sinvastatina: avaliação antifúngica e desenvolvimento de formulação contra Sporothrix brasiliensis e fungos de importância médica
(2025-06-17) Reis, Maria Gabriela Martins dos; Panagio, Luciano Aparecido; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Camilios Neto, Doumit
O crescente número de casos de resistência fúngica às terapias convencionais tem impulsionado a busca por novas estratégias terapêuticas. Dentre as infecções fúngicas, a esporotricose destaca-se por sua ampla distribuição, crescente incidência e dificuldade de tratamento. Outras infecções fúngicas superficiais abordadas neste trabalho também têm despertado preocupação na saúde pública. O objetivo desse estudo consiste em produzir, caracterizar e avaliar a atividade antifúngica de nanopartículas de prata biogênicas e da sinvastatina frente a fungos causadores de infecções subcutâneas e superficiais, bem como desenvolver uma formulação dermatológica tópica voltada para uso veterinário. Neste estudo, avaliou-se a atividade antifúngica de nanopartículas de prata (AgNPs) sintetizadas a partir do fungo Lichtheimia ornata, bem como de AgNPs extraídas da catuaba, obtidas da empresa GRAL bioativos, além da sinvastatina (SIM), isolada e em combinação com as AgNPs, frente a espécies de importância clínica como Sporothrix brasiliensis, Malassezia pachydermatis. Trichophyton mentagrophytes, Microsporum canis e Nannizzia gypsea. Inicialmente, as AgNPs produzidas a partir de L. ornata foram caracterizadas por espectroscopia UV-Vis, FTIR, fluorescência de raios X por dispersão em energia (EDXRF), espalhamento dinâmico de luz (DLS) e potencial zeta, revelando tamanho médio de 70 nm, morfologia predominantemente esférica e estabilidade coloidal. A atividade antifúngica foi avaliada por microdiluição em caldo, determinando-se a concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM) e a interação entre compostos por meio do ensaio checkerboard. Os resultados demonstraram efeito sinérgico entre as AgNPs e a sinvastatina frente à maioria das espécies testadas. Adicionalmente, avaliou-se a ação dos compostos isolados sobre biofilmes previamente formados por S. brasiliensis e M. pachydermatis. Todos os tratamentos apresentaram eficácia, promovendo redução da viabilidade fúngica. As formulações tópicas desenvolvidas foram analisadas quanto à estabilidade físico-química e às características organolépticas, demonstrando-se adequadas para aplicação tópica. Após o desenvolvimento das formulações, realizou-se o ensaio de curva de crescimento e morte para avaliação da eficácia antifúngica ao longo do tempo. Dentre as formulações testadas, F5 (AgNP de L. ornata + sinvastatina) e F6 (AgNP de catuaba + sinvastatina) apresentaram os melhores resultados, mantendo a viabilidade fúngica reduzida durante o período de 48 horas. A formulação F6 apresentou desempenho superior, mantendo a carga fúngica de S. brasiliensis e M. pachydermatis praticamente indetectável em todos os tempos avaliados. Os dados obtidos indicam que a associação de AgNPs biogênicas com sinvastatina é uma estratégia promissora para o desenvolvimento de terapias antifúngicas tópicas voltadas ao controle de infecções fúngicas.
Aspectos sobre o arsenal genético de isolados de Bacillus spp. e controle de Meloidogyne javanica em condições in vitro e in vivo
(2025-02-28) José, Fauzze Guilherme de Mântova; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Camilios Neto, Doumit; Silva, Santino Aleandro da; Noriler, Sandriele Aparecida; Gaeta, Marcos Letaif; Machado, Andressa Cristina Zamboni
Os fitonematoides, especialmente os nematoides das galhas (Meloidogyne spp.), representam uma ameaça significativa para a agricultura, causando perdas em culturas economicamente importantes, como a soja. Os nematoides do gênero Meloidogyne são responsáveis pela formação de galhas nas raízes, prejudicando o desenvolvimento da planta e absorção de nutrientes. O manejo integrado é a melhor opção para combater esses fitoparasitas e consiste na utilização de diversos métodos juntos. Entre eles, o controle biológico tem ganhado destaque nos últimos anos. Neste estudo, foi avaliada a eficácia de isolados de Bacillus spp. no controle de M. javanica e sua compatibilidade com as bactérias de importância agronômica Azospirillum brasilense e Bradyrhizobium japonicum. Foram realizados experimentos em condições de casa de vegetação para avaliar o controle populacional do fitonematoide e o desenvolvimento das plantas, utilizando como controle o padrão comercial biológico Arvatico® (B. velezensis CNPSo 3602). A atividade nematicida foi avaliada in vitro utilizando, também, o padrão comercial químico Ilevo® (Fluopiram). Os resultados indicam que o isolado B. subtilis B1 é compatível in vitro com A. brasilense e B. japonicum, destacando-se possivelmente para o uso integrado com inoculantes à base dessas bactérias. Todos os isolados reduziram significativamente (p < 0,05) a população de M. javanica em comparação à testemunha. No entanto, as variações encontradas nos dois ensaios sugerem a necessidade de mais experimentos para uma completa compreensão dos efeitos. Este estudo destaca o potencial dos isolados como agentes de biocontrole para M. javanica, contribuindo para o desenvolvimento de novos produtos biológicos.
Otimização de cultivo submerso do agente biológico Beauveria bassiana
(2025-02-07) Salomão, Julio Martins; Andrade Filho, Galdino; Pileggi, Marcos; Freitas, Emanuelle Neiverth de
O setor do agronegócio desempenha um papel crucial na economia brasileira, representando 21,5% do PIB em 2024. No entanto, a produção de grãos sofreu uma queda em relação à safra anterior, principalmente devido a períodos prolongados de baixa pluviosidade, que facilitaram o estabelecimento de diversas pragas e doenças em culturas estressadas. Os pesticidas químicos são comumente utilizados para o controle dessas pragas; entretanto, seu uso excessivo pode levar ao desenvolvimento de resistência e causar impactos ambientais. Uma alternativa sustentável é o Manejo Integrado de Pragas (MIP), que inclui métodos de controle biológico, como o uso de fungos entomopatogênicos. Dentre esses fungos, Beauveria bassiana é amplamente utilizado em produtos biológicos registrados no Brasil para o controle de insetos. Este estudo teve como objetivo otimizar o meio de cultivo para a produção de blastósporos de B. bassiana por fermentação submersa. A cepa de B. bassiana foi cultivada em frascos agitados, e o meio de cultura foi otimizado utilizando o delineamento Plackett-Burman, seguido de experimentos de validação. As condições otimizadas resultaram em alta produção de blastósporos (2,42 × 10⁹ blastósporos mL⁻¹) e biomassa fúngica (33,13 mg mL⁻¹). Testes de validação do meio otimizado foram realizados em um biorreator de tanque agitado. A manutenção do pH em 5,5 e do oxigênio dissolvido em 30% ao longo do processo resultou em uma contagem de blastósporos de 1,39 × 10⁹ blastósporos mL⁻¹, 3,58 × 10⁹ UFC mL⁻¹ e biomassa fúngica de 21,15 mg mL⁻¹ após quatro d de cultivo.
Atividade antilisterial de nanopartículas biogênicas de selênio (Bio-SeNPs)
(2025-04-28) Ormonde, Lorena Pilla Portela; Furlaneto, Marcia Cristina; Souza, Cássia Milena de; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da
Listeria spp. são amplamente encontradas na natureza, incluindo ambientes de processamento de alimentos, onde a formação de biofilmes representa risco à segurança alimentar. A listeriose, causada por L. monocytogenes, está associada a altas taxas de hospitalização e mortalidade. Além disso, isolados de Listeria resistentes a antibióticos têm sido identificados. Nesse cenário, as nanopartículas de selênio (SeNPs) emergem como uma alternativa para o controle desse patógeno. Portanto, este estudo teve por objetivo avaliar a atividade antimicrobiana da nanopartícula biogênica de selênio (Bio-SeNP) obtida por biossíntese extracelular contra sete isolados de Listeria, incluindo L. monocytogenes CLIST 2042 3b, L. monocytogenes 2048, L. ivanovii CLIST 2046, L. ivanovii CLIST 2047, L. innocua CLIST 2052, L. innocua CLIST 2053 e L. seeligeri CLIST 2067. Para a síntese da Bio-SeNP, utilizou-se o sobrenadante livre de células (CFS) de Enterococcus durans MF5. A atividade antilisterial foi avaliada por meio de ensaio de poço difusão, microdiluição em caldo para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM), além de análise da cinética de crescimento, citometria de fluxo e microscopia de fluorescência utilizando o marcador iodeto de propídio. A capacidade de formação de biofilme por Listeria spp. foi avaliada em microplacas de poliestireno assim como os efeitos da Bio-SeNP em biofilmes formados e pré-formados. Os resultados obtidos no ensaio de poço difusão demonstraram que nas concentrações de 5000 e 2500 μg/mL, todos os isolados tiveram seu crescimento inibido, com halos de inibição entre 8 e 20 mm. Os valores de CIM e CBM variaram de 78 μg/mL a 1250 μg/mL. A Bio-SeNP exibiu efeito bactericida, promovendo morte celular de forma dependente do tempo, com o menor tempo de ação observado em 60 minutos e o mais longo em 24 horas. Análises de citometria de fluxo mostraram que células dos isolados de Listeria apresentaram aumento do tamanho e granularidade celular após exposição à Bio-SeNP. A análise de microscopia de fluorescência revelou que a Bio-SeNP pode atuar comprometendo a integridade da membrana bacteriana. Todos os isolados de Listeria foram capazes de formar biofilme em microplacas de poliestireno, sendo que a exposição à Bio-SeNP resultou em redução na formação de biofilmes (45±0,2 – 66,1±0,9%) e de biofilmes pré-formados (43,8±2,9 – 50,5±0,3%). A partir destes resultados, conclui-se que a Bio-SeNP, produzida de maneira sustentável, possui atividade antilisterial e antibiofilme, destacando sua aplicabilidade para a prevenção e controle de Listeria spp. nas áreas de saúde pública e na indústria alimentícia.
Diagnóstico de COVID-19 em um laboratório de referência do estado de São Paulo: análises epidemiológica e espaço-temporal
(2025-02-10) Aquino, Marta Xavier Alfredo; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Galhardi, Lígia Carla Faccin; D'Andrea, Lourdes Aparecida Zampieri; Saeki, Erika Kushikawa
Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) é o agente etiológico da Coronavirus disease 19 (COVID-19), doença diagnosticada na China em dezembro de 2019, foi reconhecida como pandemia pela Organização Mundial de Saúde (OMS) em março de 2020 e causou impactos jamais vistos. O presente estudo teve como objetivo identificar o perfil epidemiológico e o padrão de distribuição espacial dos casos confirmados de infecção por SARS-CoV-2 pelo teste de RT- qPCR realizado em um laboratório de referência. As amostras de swabs de nasofaringe e orofaringe, entre outros materiais recebidos pelo CLR IAL PP V para diagnóstico da COVID-19, foram processadas para análise por RT qPCR (Quant Studio 5, Thermo Scientific®). O período de estudo foi de setembro de 2020 a outubro de 2022. Para isso, foram utilizados kits de extração rápida e automatizada de RNA viral e os kits Biomol OneStep/COVID-19 (IBMP) e molecular SARS-CoV-2 (E) (Bio-Manguinhos) para detecção de SARS-CoV-2, além do sequenciamento viral realizado pelo LEIAL. Foram analisadas características como sexo, idade e tempo de liberação dos resultados das amostras recebidas. Os dados foram obtidos no Sistema de Gerenciamento de Ambiente Laboratorial (GAL). No período de estudo foram analisadas 117.331 amostras, das quais 37.439 (31,9%) apresentaram resultado detectável para SARS-CoV-2, 79.860 (68,06%) não detectáveis e 32 (0,02%) tiveram resultado inconclusivo. As amostras com resultado detectável, 55% foram obtidas em pacientes do sexo feminino e 45% em pacientes do sexo masculino. A faixa etária mais acometida foi de 20 a 49 anos. Quanto ao tempo médio em dias de liberação de resultados para COVID-19 foi de 1,28 no CLR IAL PP V no período de estudo, sendo 1,75 em 2020, 1,0 em 2021 e 1,1 em 2022. Das 25 amostras sequenciadas em 2020, as variantes identificadas foram B.1.1.28 em catorze (14) amostras (56,0 %), B.1.1.33 em oito (8) amostras (32,0 %). Foi sequenciada 1 amostra de cada uma das variantes B.1 (4%), B.1.1 (4%) e P.2 (4%) totalizando 12%. Em 2021, foram sequenciados 104 vírus e entre estes vírus, as variantes encontradas mais frequentemente foram P.1 em 52 amostras (50,0%) e P.2 em 15 amostras (14,4%). Em menor quantidade foram encontradas as variantes AY.101, identificadas em 6 amostras (5,8%), AY.43.1 identificadas em 6 amostras (5,8%), B.1.1.28 em 4 amostras (3,8%), B.1.1.7 em 4 amostras (3,8%) e BA.1.1 em 3 amostras (2,9%). As variantes AY.99.2, BA.1, BA.1.14, BA.1.15 e P.1.14 foram identificadas em duas (2) amostras cada (1,9%), totalizando 9,5%. Outras variantes foram encontradas em número mais limitado, isto é, em apenas uma (1) amostra cada (1%): AY.43.2, AY.75.2, AY.99.1 e P.1.8, e totalizaram 4% de amostras sequenciadas em 2021. A distribuição espacial da COVID-19 na região ocorreu de forma heterogênea. A ação do CLR IAL PP V como laboratório de saúde pública foi imprescindível como resposta ao tipo de emergência enfrentada com a pandemia de COVID-19.
Avaliação do potencial de agentes biológicos e seus produtos no controle da cancro cítrico causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri
(2006-02-06) Camargo, Flávia Regina Spago; Andrade Filho, Galdino; Mello, João Carlos Palazzo de; Homechin, Martin
O Cancro cítrico asiático, causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) (Hasse), é uma doença mundialmente conhecida na maioria das áreas de produção comercial de citrus. Estratégias limitadas existem para o controle do cancro cítrico nos cultivares mais susceptíveis. A aplicação de microrganismos como agentes para controlar a doença é um grande progresso ecológico para solucionar o problema. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação e bactérias antagonistas (EC, FRC, LV e LN) e seus produtos (suspensões bacterianas, sobrenadantes livre-de-células e a fração acetato de etila obtida pelo tratamento do sobrenadante de LN com solventes orgânicos) foram testados para o controle da população de Xac, da incidência e severidade do cancro cítrico.em folhas de laranja(Citrus sinensis cv. Valencia). Os produtos bacterianos foram pulverizados nas folhas ou deixados em contato direto com as mesmas antes (pré) ou após (pós) a inoculação de Xac. Os resultados mostraram uma redução na população de Xac quando a suspensão bacteriana da cepa EC foi aplicada. Em outro experimento todas as cepas reduziram o número de lesões e a área de lesão quando as folhas foram tratadas com o sobrenadante livre-de-células, também foi observado o mesmo efeito quando as folhas foram tratadas com a fração de acetato de etila da cepa LN. Todos os efeitos inibitórios foram observados quando as folhas foram tratadas com os produtos bacterianos após a inoculação de Xac. Esses resultados mostram que bactérias antagonistas e seus produtos podem ser usados no controle do cancro cítrico.
Atividade antimicrobiana de nanopartícuas de silênio sintetizadas a partir de extratos de Allium cepa, Malpighia emarginata e Vernonia condensata
(2021-02-23) Souza, Lucas Marcelino dos Santos; Nakazato, Gerson; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Medeiros, Leonardo Pinto
A resistência bacteriana aos antimicrobianos é um grande problema para a saúde pública e a nanotecnologia vem sendo empregada no controle do crescimento bacteriano, incluindo os multirresistentes. Nesse contexto estudos com nanopartículas de diferentes elementos, principalmente metais, como: prata, ouro e ferro, apresentam desejável atividade antimicrobiana. Outro elemento que vem se destacando é o selênio (Se), cuja nanopartículas possui alta bioatividade e ação antibacteriana. Portanto, o objetivo do trabalho foi realizar a biossíntese de nanopartículas de selênio (SeNps) a partir de extratos de três plantas: Allium cepa (cebola), Malpighia emarginata (Acerola), e Vernonia condensata (boldo-baiano). As nanopartículas sintetizadas foram caracterizadas por dynamic light scattering (DLS) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foram utilizadas. A atividade antibacteriana foi avaliada pelos métodos de microdiluição em caldo e curva de sobrevivência contra cepas padrão Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) BEC 9393, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 25922. Os efeitos citotóxicos das SeNps sintetizadas foram avaliados através da capacidade hemolítica. As SeNps apresentaram tamanho entre 219 a 340 nm e morfologia majoritariamente esférica, também tiveram ação contra todas as bactérias Gram positivas com CIM variando de 6,125 a 98 μg/ml, porém sem ação nas Gram negativas testadas. E em relação à hemólise as CC50 variaram de 0,82 a 2,1 mg/ml. Esses resultados indicam que elas podem ser usadas contra bactérias Gram positivas por possuírem boa atividade antimicrobiana, além de possuírem baixa concentração hemolítica abrindo uma grande variedade de opções para suas aplicações.
Efeito da aspirina sobre a resposta inflamatória e interação de células raw 264.7 com vesículas extracelulares secretadas por Trypanosoma Cruzi
(2022-06-24) Santos, Lucas Felipe; Pinge Filho, Phileno; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Toledo, Karina Alves de
Durante a infecção por Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, a resposta imunológica é importante para o controle do parasitismo e sobrevida do hospedeiro. Macrófagos são células com reconhecida ação tripanocida e que produzem diversos mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO) e eicosanóides que atuam no controle da carga parasitária e no desenvolvimento da infecção. Contudo, o parasito apresenta mecanismos de evasão, como a liberação de vesículas extracelulares, que ao carrearem moléculas funcionais, sinalizam para células do hospedeiro, modulando a resposta inflamatória favorecendo o parasito. Os processos de invasão celular e controle da carga parasitária estão sob forte influência de mediadores lipídicos, especialmente aqueles derivados das vias das ciclooxigenases 1 e 2 (COX-1/COX2). A aspirina (ASA) é classificada como um antiinflamatório não esteroidal que atua no bloqueio de COX-1/COX2 responsáveis pela conversão do ácido araquidônico em eicosanóides. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da ASA sobre a ação exercida pelas vesículas extracelulares de T. cruzi cepa Y (EVs-Y). Foram realizados ensaios de viabilidade celular em macrófagos RAW 264.7 tratados com as concentrações de 0,625mM, 1,25mM e 2,5mM de ASA. Após a infecção dessas células foi determinado o índice de internalização do parasito e quantificado a produção de nitrito como estimativa da produção de NO. Análises estatísticas foram realizadas no programa “GraphPad Prism 8”, One-Way ANOVA seguida de teste de Turkey de comparações múltiplas. As concentrações de ASA utilizadas não apresentaram citotoxicidade. Macrófagos expostos à EVs-Y e posteriormente infectados com formas tripomastigotas de T. cruzi apresentaram menor produção de NO e aumento no número de formas amastigotas no citoplasma, demonstrando a modulação exercida pelas EVs-Y em favor do parasito. Surpreendentemente, quando os macrófagos foram tratados com ASA antes da exposição às EVs-Y e subsequente infecção com tripomastigotas, houve maior produção de NO, assim como menor internalização de parasitos e consequente menor presença de formas amastigotas no citoplasma das células, em comparação com os controles. Esses resultados sugerem que EVs-Y modula a resposta de macrófagos em favor do T. cruzi e indicam um papel para COX na modulação imune exercida por EVs-Y.
Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Escherichia coli de um caso clínico de colite histiocítica ulcerativa canina
(2021-05-17) Dibo, Miriam; Nakazato, Gerson; Rocha, Sérgio Paulo Dejato; Sarmiento, Juan Josue Puño
A colite histiocítica ulcerativa (CHU) é uma doença inflamatória intestinal que pode acometer principalmente cães jovens das raças Boxer e buldogue francês, sendo associada à presença de Escherichia coli Aderente-Invasiva (AIEC). Deste modo, o presente estudo teve como objetivo realizar as caracterizações fenotípica e genotípica de isolados de E. coli e sua associação a um CHU em uma fêmea da raça buldogue francês. Neste estudo, foram obtidos 46 isolados de E. coli, sendo todos resistentes a ampicilina, ciprofloxacino, enrofloxacino e sulfametoxazol trimetoprima. Também foram encontradas resistências a amoxicilina-ácido clavulânico, azitromicina, cefazolina, cloranfenicol, gentamicina e tetraciclina. Todos os isolados obtidos foram classificados como multirresistentes e apenas um deles foi positivo no teste fenotípico de produção de beta-lactamases de espectro extendido, pertencendo ao grupo CTX-M-2. Com relação à classificação filogenética de Clermont, a maioria das cepas pertence aos grupos C e B1, enquanto os grupos B2 e F apresentaram apenas um representante cada. Os genes de virulência de E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC) encontrados foram ecpA, fimH, hlyF, iroN, iss, iutA, ompT, sitA e traT. Nenhuma das cepas apresentou capacidade de replicação no interior de macrófagos J774A.1 em 24 horas, no entanto, três cepas apresentaram capacidade de sobrevivência. A cepa 1.4 apresentou nove genes de virulência de ExPEC, ausência de fatores de virulência de E. coli diarreiogênica, e classificação no grupo filogenético B2. Essas características, juntamente com os sintomas apresentados pelo animal, indicam a possibilidade de que infecção por AIEC. No entanto, o teste de sobrevivência e replicação em macrófagos não apresentou resultados conclusivos, sendo necessário realizar os testes fenotípicos de adesão e invasão para confirmação da hipótese
Atividade antimicrobiana da fração F4A obtida de cultura de Pseudomonas aeruginosa LV em Staphylococcus aureus
(2020-05-19) Gonçalves, Guilherme Bartolomeu; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Tavares, Eliandro Reis; Navarro, Miguel Octavio Pérez
Staphylococcus aureus é um patógeno relevante nos âmbitos comunitário e de assistência à saúde, conhecido pela dificuldade terapêutica associada à resistência antimicrobiana e à formação de biofilmes. A partir de 1940, S. aureus passou a ter notoriedade global, devido à resistência à penicilina e, em 1961, à meticilina. Como infecções causadas por essa bactéria dificultam a prática clínica, se faz notável a necessidade de pesquisas por novas substâncias antibióticas para tratar os pacientes acometidos. Ao longo da história, produtos naturais, especificamente metabólitos secundários de microrganismos, têm sido usados para combater patógenos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade inibitória da fração F4A, obtida da purificação do sobrenadante de cultura de Pseudomonas aeruginosa cepa LV, sobre células planctônicas e sésseis de S. aureus, as alterações morfológicas causadas nessas células e sua toxicidade para células de mamíferos. Para isso, foram selecionados 26 isolados clínicos de S. aureus da coleção do Laboratório de Biologia Molecular de Microrganismos, da Universidade Estadual de Londrina (UEL). Os valores de CIM de F4A variaram de 1,56 a 6,25 µg/mL; 19 isolados apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) de 3,13 µg/mL (73,1%), 6 apresentaram CIM de 1,56 µg/mL (23,1%) e 1 isolado apresentou CIM de 6,25 µg/mL(3,8%). Concentração bactericida mínima (CBM) de 3,13 µg/mL foi detectada em 84,6% dos isolados (n=21) e 18 apresentaram valores idênticos de CIM e CBM, evidenciando o potencial efeito bactericida da fração. Pela cinética do tempo de morte, observou-se que S. aureus reduziu significativamente o número de unidades formadoras de colônias (UFCs) a partir de 4 h de tratamento com a CIM/CBM de F4A. A microscopia eletrônica de transmissão das cepas de referência tratadas com a CIM/CBM de F4A evidenciou alterações ultraestruturais como: diminuição na eletrodensidade citoplasmática, discreto espessamento e diminuição na compactação da parede celular, inibição da formação de septo e descolamento da membrana citoplasmática. O biofilme de todos os isolados apresentou redução significativa na atividade metabólica nas concentrações de 12,5 e 25 µg/mL. A maioria dos isolados apresentou concentração inibitória mínima para 50% das células sésseis (SCIM50) de 6,25 µg/mL (n=15), seguido de 12,5 µg/mL (n=8), 3,13 µg/mL (n=2) e 25,0 µg/mL (n=1). Para a maior concentração testada (50 µg/mL), a atividade hemolítica foi superior a 3%, enquanto as outras concentrações (25 a 0,1 µg/mL) não ultrapassaram 1% de hemólise; a concentração citotóxica para 50% das células (CC50) LLCMK2 de F4A após 24 h foi de 3,44 µg/mL. Como conclusão, a fração F4A apresentou atividade bactericida contra S. aureus, incluindo atividade antibiofilme. Embora mais estudos sejam necessários em relação à sua toxicidade para células de mamíferos e ensaios in vivo, a fração F4A pode ser promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.
Avaliação de efeitos da intoxicação aguda pela ocratoxina A em frangos e análise de tratamento com L-triptofano
(2021-02-22) Galdino Ricci, Fernando; Itano, Eiko Nakagawa; Hirooka, Elisa Yoko; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Venâncio, José
A Ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina produzida por Penicillium spp. e Aspergillus spp. que são capazes de contaminar produtos de origem vegetal, muto utilizados na alimentação dos animais. Através da exposição oral, pelo consumo dos alimentos contaminados, a OTA pode afetar vários sistemas dos animais, tais como os sistemas imunológico e gastrointestinal. Os objetivos do presente estudo foram avaliar o impacto da intoxicação pela OTA em pintainhos, e verificar se o tratamento com Ltriptofano pode inibir seus efeitos tóxicos. Após a inoculação de uma dose única de OTA (1,4 mg/kg de peso vivo) em frangos de um dia de idade (Cobb 500), no primeiro dia do experimento, foram administradas quatro doses diárias de L-triptofano (100 mg/kg de peso vivo). No 14º dia foram avaliadas as respostas do sistema imunológico sistêmico e local através de quantificação dos níveis de imunoglobulinas A e Y (IgY/IgA) plasmáticas e presentes no conteúdo cecal, níveis de leucócitos totais circulantes, titulação dos anticorpos vacinais maternos contra o Vírus da Doença de Newcastle (NDV) e contagem do número de células IgA positivas (IgA+) na mucosa do duodeno, além do impacto na mucosa local com a avaliação da morfometria do duodeno. Adicionalmente, foram avaliados alguns parâmetros hematológicos e bioquímicos. Para quantificação de IgA/IgY foi realizado o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) de imunocaptura, a revelação das células IgA+ por imunohistoquímica, a titulação de anticorpos vacinais por ELISA direto, os níveis de leucócitos totais circulantes por contagem (câmara de Neubauer) e a morfometria do duodeno pela mensuração dos tecidos corados com hematoxilina/eosina. Os níveis de IgA/IgY no conteúdo cecal, o número de células IgA+ e a altura das vilosidades e profundidade das criptas do duodeno dos animais contaminados apenas com OTA diminuíram significativamente, assim como os níveis de leucócitos totais circulantes e do hematócrito dos animais contaminados apenas por OTA (p<0,05), o que demonstrou seus efeitos tóxicos na mucosa local e na hematopoiese. O tratamento com L-triptofano foi benéfico para os animais em diversos parâmetros, os animais contaminados com OTA e tratados com L-triptofano tiveram níveis de IgA/IgY do conteúdo cecal, células IgA+ do duodeno e leucócitos totais circulantes similares aos animais do grupo controle, assim como o hematócrito e a altura das vilosidades do duodeno (p>0,05). Conclui-se que a exposição à uma dose alta de OTA no início da vida dos pintainhos induz a alterações na mucosa local e a utilização do tratamento com L-triptofano é válido para diminuir os efeitos prejudiciais da OTA, ao estimular a produção de imunoglobulinas locais e manter a integridade da mucosa.
Cicatrização de feridas e biacúmulo de prata em ratos wistar tratados topicamente com o antimicrobiano nanopartícula de prata
(2020-02-27) Camargo, Larissa Ciappina; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Lonni, Audrey Alesandra Stinghen Garcia; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama
Infecções nas feridas dos pacientes com queimaduras, pós-operatório, entre outros, são umas das mais temidas complicações, pois o ferimento atua como um meio de cultura ideal para a colonização e proliferação de microrganismos. Nesses casos a pele que normalmente serve como uma barreira física contra micróbios encontra-se lesionada e precisa ser reparada de forma rápida e adequada. Devido a essa problemática o objetivo do presente trabalho foi formular géis contendo nanopartículas de prata (bio-AgNP) obtidas a partir da biomassa de Fusarium oxysporum, e avaliar a sua atividade antibacteriana, cicatrizante e verificar a ocorrência do bioacúmulo da prata no organismo. Para o teste de cicatrização, foram usados 60 ratos adultos, da raça Wistar, nos quais foi feita uma lesão na região dorsal. As feridas foram tratadas diariamente com as formulações (F250 e F500), a base do produto (componentes da formulação sem bio-AgNP), a sulfadiazina de prata (controle positivo) e com solução fisiológica (controle negativo) de acordo com o grupo experimental. Registros da avaliação macroscópica e coleta do tecido epitelial da lesão foram feitos nos dias: 1°, 5°, 9° e 17° dias após a cirurgia, para avaliação histológica. Os animais tratados tiveram coletados o cérebro, um dos rins, o fígado, testículo, baço e sangue para quantificação de prata por espectrofotometria de absorção atômica. Para a verificação da atividade antimicrobiana dos produtos desenvolvidos foi realizada a técnica de curva de sobrevivência e morte. Os microrganismos testados foram Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. O resultado do ensaio in vitro mostrou que as formulações com bio-AgNP tiveram ação antimicrobiana, assim como o controle positivo (sulfadiazina de prata - SD). Referente à cicatrização, não foram observadas variações significativas entre as médias das áreas das lesões tratadas com as diferentes formulações em relação à solução fisiológica (CTL) e a SD. Quanto ao acúmulo de prata nos diversos órgãos e no sangue, não houve diferença significativa entre o grupo CTL e os grupos experimentais após 17 dias de tratamento, o que indica que os tratamentos com os produtos formulados nãoocasionam acúmulo de prata no organismo. O produto formulado contendo nanopartículas de prata biológicas apresentou potente proteção contra microrganismos, pois diminuiu a carga microbiana na lesão no decorrer dos dias de tratamento. Além disso, mostrou que não interferiu no proceso de cicatrização e não resulta em acúmulo de prata nos órgãos estudados, sendo uma alternativa para o tratamento de pacientes com feridas.

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