02 - Mestrado - Microbiologia

URI Permanente para esta coleção

http://repositorio.uel.br/handle/123456789/25

Navegar

Agora exibindo 1 - 20 de 214

Avaliação do potencial de agentes biológicos e seus produtos no controle da cancro cítrico causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri
(2006-02-06) Camargo, Flávia Regina Spago; Andrade Filho, Galdino; Mello, João Carlos Palazzo de; Homechin, Martin
O Cancro cítrico asiático, causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) (Hasse), é uma doença mundialmente conhecida na maioria das áreas de produção comercial de citrus. Estratégias limitadas existem para o controle do cancro cítrico nos cultivares mais susceptíveis. A aplicação de microrganismos como agentes para controlar a doença é um grande progresso ecológico para solucionar o problema. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação e bactérias antagonistas (EC, FRC, LV e LN) e seus produtos (suspensões bacterianas, sobrenadantes livre-de-células e a fração acetato de etila obtida pelo tratamento do sobrenadante de LN com solventes orgânicos) foram testados para o controle da população de Xac, da incidência e severidade do cancro cítrico.em folhas de laranja(Citrus sinensis cv. Valencia). Os produtos bacterianos foram pulverizados nas folhas ou deixados em contato direto com as mesmas antes (pré) ou após (pós) a inoculação de Xac. Os resultados mostraram uma redução na população de Xac quando a suspensão bacteriana da cepa EC foi aplicada. Em outro experimento todas as cepas reduziram o número de lesões e a área de lesão quando as folhas foram tratadas com o sobrenadante livre-de-células, também foi observado o mesmo efeito quando as folhas foram tratadas com a fração de acetato de etila da cepa LN. Todos os efeitos inibitórios foram observados quando as folhas foram tratadas com os produtos bacterianos após a inoculação de Xac. Esses resultados mostram que bactérias antagonistas e seus produtos podem ser usados no controle do cancro cítrico.
Cicatrização de feridas e biacúmulo de prata em ratos wistar tratados topicamente com o antimicrobiano nanopartícula de prata
(2020-02-27) Camargo, Larissa Ciappina; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Lonni, Audrey Alesandra Stinghen Garcia; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama
Infecções nas feridas dos pacientes com queimaduras, pós-operatório, entre outros, são umas das mais temidas complicações, pois o ferimento atua como um meio de cultura ideal para a colonização e proliferação de microrganismos. Nesses casos a pele que normalmente serve como uma barreira física contra micróbios encontra-se lesionada e precisa ser reparada de forma rápida e adequada. Devido a essa problemática o objetivo do presente trabalho foi formular géis contendo nanopartículas de prata (bio-AgNP) obtidas a partir da biomassa de Fusarium oxysporum, e avaliar a sua atividade antibacteriana, cicatrizante e verificar a ocorrência do bioacúmulo da prata no organismo. Para o teste de cicatrização, foram usados 60 ratos adultos, da raça Wistar, nos quais foi feita uma lesão na região dorsal. As feridas foram tratadas diariamente com as formulações (F250 e F500), a base do produto (componentes da formulação sem bio-AgNP), a sulfadiazina de prata (controle positivo) e com solução fisiológica (controle negativo) de acordo com o grupo experimental. Registros da avaliação macroscópica e coleta do tecido epitelial da lesão foram feitos nos dias: 1°, 5°, 9° e 17° dias após a cirurgia, para avaliação histológica. Os animais tratados tiveram coletados o cérebro, um dos rins, o fígado, testículo, baço e sangue para quantificação de prata por espectrofotometria de absorção atômica. Para a verificação da atividade antimicrobiana dos produtos desenvolvidos foi realizada a técnica de curva de sobrevivência e morte. Os microrganismos testados foram Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. O resultado do ensaio in vitro mostrou que as formulações com bio-AgNP tiveram ação antimicrobiana, assim como o controle positivo (sulfadiazina de prata - SD). Referente à cicatrização, não foram observadas variações significativas entre as médias das áreas das lesões tratadas com as diferentes formulações em relação à solução fisiológica (CTL) e a SD. Quanto ao acúmulo de prata nos diversos órgãos e no sangue, não houve diferença significativa entre o grupo CTL e os grupos experimentais após 17 dias de tratamento, o que indica que os tratamentos com os produtos formulados nãoocasionam acúmulo de prata no organismo. O produto formulado contendo nanopartículas de prata biológicas apresentou potente proteção contra microrganismos, pois diminuiu a carga microbiana na lesão no decorrer dos dias de tratamento. Além disso, mostrou que não interferiu no proceso de cicatrização e não resulta em acúmulo de prata nos órgãos estudados, sendo uma alternativa para o tratamento de pacientes com feridas.
Atividade antimicrobiana da fração F4A obtida de cultura de Pseudomonas aeruginosa LV em Staphylococcus aureus
(2020-05-19) Gonçalves, Guilherme Bartolomeu; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Tavares, Eliandro Reis; Navarro, Miguel Octavio Pérez
Staphylococcus aureus é um patógeno relevante nos âmbitos comunitário e de assistência à saúde, conhecido pela dificuldade terapêutica associada à resistência antimicrobiana e à formação de biofilmes. A partir de 1940, S. aureus passou a ter notoriedade global, devido à resistência à penicilina e, em 1961, à meticilina. Como infecções causadas por essa bactéria dificultam a prática clínica, se faz notável a necessidade de pesquisas por novas substâncias antibióticas para tratar os pacientes acometidos. Ao longo da história, produtos naturais, especificamente metabólitos secundários de microrganismos, têm sido usados para combater patógenos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade inibitória da fração F4A, obtida da purificação do sobrenadante de cultura de Pseudomonas aeruginosa cepa LV, sobre células planctônicas e sésseis de S. aureus, as alterações morfológicas causadas nessas células e sua toxicidade para células de mamíferos. Para isso, foram selecionados 26 isolados clínicos de S. aureus da coleção do Laboratório de Biologia Molecular de Microrganismos, da Universidade Estadual de Londrina (UEL). Os valores de CIM de F4A variaram de 1,56 a 6,25 µg/mL; 19 isolados apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) de 3,13 µg/mL (73,1%), 6 apresentaram CIM de 1,56 µg/mL (23,1%) e 1 isolado apresentou CIM de 6,25 µg/mL(3,8%). Concentração bactericida mínima (CBM) de 3,13 µg/mL foi detectada em 84,6% dos isolados (n=21) e 18 apresentaram valores idênticos de CIM e CBM, evidenciando o potencial efeito bactericida da fração. Pela cinética do tempo de morte, observou-se que S. aureus reduziu significativamente o número de unidades formadoras de colônias (UFCs) a partir de 4 h de tratamento com a CIM/CBM de F4A. A microscopia eletrônica de transmissão das cepas de referência tratadas com a CIM/CBM de F4A evidenciou alterações ultraestruturais como: diminuição na eletrodensidade citoplasmática, discreto espessamento e diminuição na compactação da parede celular, inibição da formação de septo e descolamento da membrana citoplasmática. O biofilme de todos os isolados apresentou redução significativa na atividade metabólica nas concentrações de 12,5 e 25 µg/mL. A maioria dos isolados apresentou concentração inibitória mínima para 50% das células sésseis (SCIM50) de 6,25 µg/mL (n=15), seguido de 12,5 µg/mL (n=8), 3,13 µg/mL (n=2) e 25,0 µg/mL (n=1). Para a maior concentração testada (50 µg/mL), a atividade hemolítica foi superior a 3%, enquanto as outras concentrações (25 a 0,1 µg/mL) não ultrapassaram 1% de hemólise; a concentração citotóxica para 50% das células (CC50) LLCMK2 de F4A após 24 h foi de 3,44 µg/mL. Como conclusão, a fração F4A apresentou atividade bactericida contra S. aureus, incluindo atividade antibiofilme. Embora mais estudos sejam necessários em relação à sua toxicidade para células de mamíferos e ensaios in vivo, a fração F4A pode ser promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.
Avaliação de efeitos da intoxicação aguda pela ocratoxina A em frangos e análise de tratamento com L-triptofano
(2021-02-22) Galdino Ricci, Fernando; Itano, Eiko Nakagawa; Hirooka, Elisa Yoko; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Venâncio, José
A Ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina produzida por Penicillium spp. e Aspergillus spp. que são capazes de contaminar produtos de origem vegetal, muto utilizados na alimentação dos animais. Através da exposição oral, pelo consumo dos alimentos contaminados, a OTA pode afetar vários sistemas dos animais, tais como os sistemas imunológico e gastrointestinal. Os objetivos do presente estudo foram avaliar o impacto da intoxicação pela OTA em pintainhos, e verificar se o tratamento com Ltriptofano pode inibir seus efeitos tóxicos. Após a inoculação de uma dose única de OTA (1,4 mg/kg de peso vivo) em frangos de um dia de idade (Cobb 500), no primeiro dia do experimento, foram administradas quatro doses diárias de L-triptofano (100 mg/kg de peso vivo). No 14º dia foram avaliadas as respostas do sistema imunológico sistêmico e local através de quantificação dos níveis de imunoglobulinas A e Y (IgY/IgA) plasmáticas e presentes no conteúdo cecal, níveis de leucócitos totais circulantes, titulação dos anticorpos vacinais maternos contra o Vírus da Doença de Newcastle (NDV) e contagem do número de células IgA positivas (IgA+) na mucosa do duodeno, além do impacto na mucosa local com a avaliação da morfometria do duodeno. Adicionalmente, foram avaliados alguns parâmetros hematológicos e bioquímicos. Para quantificação de IgA/IgY foi realizado o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) de imunocaptura, a revelação das células IgA+ por imunohistoquímica, a titulação de anticorpos vacinais por ELISA direto, os níveis de leucócitos totais circulantes por contagem (câmara de Neubauer) e a morfometria do duodeno pela mensuração dos tecidos corados com hematoxilina/eosina. Os níveis de IgA/IgY no conteúdo cecal, o número de células IgA+ e a altura das vilosidades e profundidade das criptas do duodeno dos animais contaminados apenas com OTA diminuíram significativamente, assim como os níveis de leucócitos totais circulantes e do hematócrito dos animais contaminados apenas por OTA (p<0,05), o que demonstrou seus efeitos tóxicos na mucosa local e na hematopoiese. O tratamento com L-triptofano foi benéfico para os animais em diversos parâmetros, os animais contaminados com OTA e tratados com L-triptofano tiveram níveis de IgA/IgY do conteúdo cecal, células IgA+ do duodeno e leucócitos totais circulantes similares aos animais do grupo controle, assim como o hematócrito e a altura das vilosidades do duodeno (p>0,05). Conclui-se que a exposição à uma dose alta de OTA no início da vida dos pintainhos induz a alterações na mucosa local e a utilização do tratamento com L-triptofano é válido para diminuir os efeitos prejudiciais da OTA, ao estimular a produção de imunoglobulinas locais e manter a integridade da mucosa.
Atividade antimicrobiana de nanopartícuas de silênio sintetizadas a partir de extratos de Allium cepa, Malpighia emarginata e Vernonia condensata
(2021-02-23) Souza, Lucas Marcelino dos Santos; Nakazato, Gerson; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Medeiros, Leonardo Pinto
A resistência bacteriana aos antimicrobianos é um grande problema para a saúde pública e a nanotecnologia vem sendo empregada no controle do crescimento bacteriano, incluindo os multirresistentes. Nesse contexto estudos com nanopartículas de diferentes elementos, principalmente metais, como: prata, ouro e ferro, apresentam desejável atividade antimicrobiana. Outro elemento que vem se destacando é o selênio (Se), cuja nanopartículas possui alta bioatividade e ação antibacteriana. Portanto, o objetivo do trabalho foi realizar a biossíntese de nanopartículas de selênio (SeNps) a partir de extratos de três plantas: Allium cepa (cebola), Malpighia emarginata (Acerola), e Vernonia condensata (boldo-baiano). As nanopartículas sintetizadas foram caracterizadas por dynamic light scattering (DLS) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foram utilizadas. A atividade antibacteriana foi avaliada pelos métodos de microdiluição em caldo e curva de sobrevivência contra cepas padrão Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) BEC 9393, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 25922. Os efeitos citotóxicos das SeNps sintetizadas foram avaliados através da capacidade hemolítica. As SeNps apresentaram tamanho entre 219 a 340 nm e morfologia majoritariamente esférica, também tiveram ação contra todas as bactérias Gram positivas com CIM variando de 6,125 a 98 μg/ml, porém sem ação nas Gram negativas testadas. E em relação à hemólise as CC50 variaram de 0,82 a 2,1 mg/ml. Esses resultados indicam que elas podem ser usadas contra bactérias Gram positivas por possuírem boa atividade antimicrobiana, além de possuírem baixa concentração hemolítica abrindo uma grande variedade de opções para suas aplicações.
Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Escherichia coli de um caso clínico de colite histiocítica ulcerativa canina
(2021-05-17) Dibo, Miriam; Nakazato, Gerson; Rocha, Sérgio Paulo Dejato; Sarmiento, Juan Josue Puño
A colite histiocítica ulcerativa (CHU) é uma doença inflamatória intestinal que pode acometer principalmente cães jovens das raças Boxer e buldogue francês, sendo associada à presença de Escherichia coli Aderente-Invasiva (AIEC). Deste modo, o presente estudo teve como objetivo realizar as caracterizações fenotípica e genotípica de isolados de E. coli e sua associação a um CHU em uma fêmea da raça buldogue francês. Neste estudo, foram obtidos 46 isolados de E. coli, sendo todos resistentes a ampicilina, ciprofloxacino, enrofloxacino e sulfametoxazol trimetoprima. Também foram encontradas resistências a amoxicilina-ácido clavulânico, azitromicina, cefazolina, cloranfenicol, gentamicina e tetraciclina. Todos os isolados obtidos foram classificados como multirresistentes e apenas um deles foi positivo no teste fenotípico de produção de beta-lactamases de espectro extendido, pertencendo ao grupo CTX-M-2. Com relação à classificação filogenética de Clermont, a maioria das cepas pertence aos grupos C e B1, enquanto os grupos B2 e F apresentaram apenas um representante cada. Os genes de virulência de E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC) encontrados foram ecpA, fimH, hlyF, iroN, iss, iutA, ompT, sitA e traT. Nenhuma das cepas apresentou capacidade de replicação no interior de macrófagos J774A.1 em 24 horas, no entanto, três cepas apresentaram capacidade de sobrevivência. A cepa 1.4 apresentou nove genes de virulência de ExPEC, ausência de fatores de virulência de E. coli diarreiogênica, e classificação no grupo filogenético B2. Essas características, juntamente com os sintomas apresentados pelo animal, indicam a possibilidade de que infecção por AIEC. No entanto, o teste de sobrevivência e replicação em macrófagos não apresentou resultados conclusivos, sendo necessário realizar os testes fenotípicos de adesão e invasão para confirmação da hipótese
Alterações celulares e moleculares de morfotipos de Candida tropicalis pré e pós exposição ao fluconazol
(2022-01-28) Santos, Murilo Moreira dos; Furlaneto, Márcia Cristina; Ishida, Kelly; Panaggio, Luciano Aparecido
Candida tropicalis é uma das 15 espécies do gênero Candida que são patogênicas ao ser humano. A espécie tem sua relevância epidemiológica traduzida como a segunda ou terceira espécie mais isolada do gênero, com prevalência registrada em regiões tropicais e subtropicais, como América Latina e Ásia, incluindo o Brasil. A levedura tem capacidade de promover infecções com taxa de mortalidade semelhante à de Candida albicans e superiores às de outras espécies não-Candida albicans. O switching fenotípico, considerado um fator de virulência descrito como capaz de promover variabilidade a partir de linhagens isogênicas, podendo acarretar em aumento na virulência. Neste sentido, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito do switching fenotípico em aspectos moleculares e celulares de morfotipos (linhagem parental, Variante Crepe e Revertente de Crepe – RC) de C. tropicalis expostos ao fluconazol. Para isso, as metodologias utilizadas visaram avaliar a influência do switching fenotípico pré e pós exposição ao fluconazol na concentração inibitória mínima (CIM) do fármaco, na expressão dos genes ERG11 (gene que codifica a enzima lanosterol 14-α-desmetilase da via de síntese do ergosterol) e CDR1 (gene que codifica uma bomba de efluxo para múltiplas drogas para o gênero Candida), na porosidade de parede celular, no tamanho e granulosidade celular, na quantidade de componentes de parede celular e na integridade de membrana plasmática. Os resultados demonstraram o morfotipo (RC) com o maior valor de CIM50, menor porosidade de parede celular e superexpressão do gene CDR1. Além disso, destaca-se a superexpressão do gene ERG11 para o morfotipo Crepe, sugerindo que há uma maquinaria molecular morfotipo dependente para morfotipos de C. tropicalis em resposta ao fluconazol. Para todas as análises foi possível evidenciar o efeito do switching fenotípico, mostrando que o fator de virulência tem a capacidade de modificar características moleculares e celulares em C. tropicalis.
Efeito da aspirina sobre a resposta inflamatória e interação de células raw 264.7 com vesículas extracelulares secretadas por Trypanosoma Cruzi
(2022-06-24) Santos, Lucas Felipe; Pinge Filho, Phileno; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Toledo, Karina Alves de
Durante a infecção por Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, a resposta imunológica é importante para o controle do parasitismo e sobrevida do hospedeiro. Macrófagos são células com reconhecida ação tripanocida e que produzem diversos mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO) e eicosanóides que atuam no controle da carga parasitária e no desenvolvimento da infecção. Contudo, o parasito apresenta mecanismos de evasão, como a liberação de vesículas extracelulares, que ao carrearem moléculas funcionais, sinalizam para células do hospedeiro, modulando a resposta inflamatória favorecendo o parasito. Os processos de invasão celular e controle da carga parasitária estão sob forte influência de mediadores lipídicos, especialmente aqueles derivados das vias das ciclooxigenases 1 e 2 (COX-1/COX2). A aspirina (ASA) é classificada como um antiinflamatório não esteroidal que atua no bloqueio de COX-1/COX2 responsáveis pela conversão do ácido araquidônico em eicosanóides. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da ASA sobre a ação exercida pelas vesículas extracelulares de T. cruzi cepa Y (EVs-Y). Foram realizados ensaios de viabilidade celular em macrófagos RAW 264.7 tratados com as concentrações de 0,625mM, 1,25mM e 2,5mM de ASA. Após a infecção dessas células foi determinado o índice de internalização do parasito e quantificado a produção de nitrito como estimativa da produção de NO. Análises estatísticas foram realizadas no programa “GraphPad Prism 8”, One-Way ANOVA seguida de teste de Turkey de comparações múltiplas. As concentrações de ASA utilizadas não apresentaram citotoxicidade. Macrófagos expostos à EVs-Y e posteriormente infectados com formas tripomastigotas de T. cruzi apresentaram menor produção de NO e aumento no número de formas amastigotas no citoplasma, demonstrando a modulação exercida pelas EVs-Y em favor do parasito. Surpreendentemente, quando os macrófagos foram tratados com ASA antes da exposição às EVs-Y e subsequente infecção com tripomastigotas, houve maior produção de NO, assim como menor internalização de parasitos e consequente menor presença de formas amastigotas no citoplasma das células, em comparação com os controles. Esses resultados sugerem que EVs-Y modula a resposta de macrófagos em favor do T. cruzi e indicam um papel para COX na modulação imune exercida por EVs-Y.
Enterococcus faecium dependente de vancomicina : caracterização fenotípica e genotípica
Lopes, Gilselena Kerbauy; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi; Perugini, Marcia Regina Eches
Resumo: A vancomicina, um antimicrobiano de amplo espectro, é indicada para tratamento de infecções graves Enterococcus spp resistente a este glicopeptídeo, com predomínio de Enterococcus faecium estão entre os principais agentes etiológicos de infecções relacionadas aos serviços de saúde Além disso, enterococos dependente de vancomicina para o crescimento foram isolados de amostras clínicas Neste trabalho Enterococcus faecium vanA, que cresce apenas na presença de vancomicina (VDEfm-UEL), foi isolado de fezes de uma paciente em antibioticoterapia endovenosa com vancomicina para tratamento de sepse por Staphylococcus aureus resistente a oxacilina VDEfm-UEL também apresentou resistência a ampicilina, ciprofloxacina, cloranfenicol, eritromicina, levofloxacina, penicilina, rifampicina e teicoplanina Além disso os genes que codificaram fatores associados a virulência: efaA, gelE e esp, foram detectados no genoma da bactéria A dependência de vancomicina parece estar associada a mutações em D-Ala-D-Ala ligase (Ddl), importante enzima com função na síntese da parede celular A inserção de uma adenosina mono fosfatada na sequência genética de ddl, resultou na formação de um códon terminador da tradução prematuro Este é o primeiro relato de VDE E faecium isolado em um Hospital Universitário no Brasil
Efeito da inoculação de bactérias diazotróficas de vida- livre e fungo micorrízico arbuscular (Glomus clarum) em arroz (Orysa sativa
Raimam, Milena Pupo; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Zangaro Filho, Waldemar; Albino, Ulisses Brigatto
Resumo: O arroz é cultivado normalmente em solos deficientes em nitrogênio, exigindo que este elemento seja acrescentado à cultura através de fertilizantes nitrogenados a base de uréia e nitrato, causando problemas de poluição ambiental A utilização da tecnologia da fixação biológica de nitrogênio (FBN) pode diminuir a aplicação destes fertilizantes, reduzindo riscos ambientais Este estudo avaliou os efeitos de quatro gêneros de bactérias fixadoras de N, isoladas da planta carnívora Drosera villosa var villosa, encontrada em solos oligotróficos, e sua interação com fungo micorrízico arbuscular (Glomus clarum), sobre o desenvolvimento de arroz cultivado nos sistemas de sequeiro e irrigado, em casa de vegetação Na condição de sequeiro foram testadas as cepas Methylobacterium sp, Burkholderia sp e Sphingomonas sp, e na condiçãoirrigado foram inoculadas as cepas Burkholderia sp, Pseudomonas sp E Sphingomonas sp As cepas foram inoculadas isoladas e na forma de pool, com ou sem G clarum Os experimentos foram realizados em blocos casualizados, com cinco repetições A presença de G clarum diminuiu ou não afetou o crescimento da planta nas duas condições de cultivo Por outro lado, o fungo estimulou a população de bactérias fixadoras de N na condição de sequeiro Os gêneros de bactérias tiveram diferentes efeitos sob as duas condições de cultivo Alguns gêneros aumentaram o crescimento de raiz e parte aérea em diferentes estágios de crescimento da planta em relação aos controles
Soroepidemiologia de paracoccidioimicose em caprinos do município de Pitanga, Paraná
Ferreira, Jacqueline Bueno; Ono, Mário Augusto [Orientador]; Freire, Roberta Lemos; Watanabe, Maria Angélica Ehara
Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica em países da América Latina como Brasil, Venezuela, Colômbia e Argentina, que tem como agente etiológico o fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis Alguns aspectos da ecoepidemiologia deste fungo ainda precisam ser esclarecidos, mas acredita-se que várias espécies de animais domésticos e silvestres possam infectar-se Ensaios imunológicos têm sido utilizados para detectar a infecção por P brasiliensis em humanos e em outras espécies de animais Este estudo teve como objetivo avaliar a infecção por P brasiliensis em caprinos do município de Pitanga, Paraná, através dos métodos de ELISA e imunodifusão radial dupla (IDRD), utilizando como antígenos a gp43 e o exoantígeno, respectivamente Dois caprinos foram imunizados com células leveduriformes inativadas de P brasiliensis para a avaliação da produção de anticorpos anti-gp43 Os dois animais imunizados produziram anticorpos anti-gp43 detectados por ELISA indireto Foram analisadas 22 amostras de soros de caprinos obtidas em três propriedades rurais do município de Pitanga, sendo que 26,24% foram positivas pelo método de ELISA e nenhuma amostra reagiu pela IDRD, sugerindo que os animais apresentavam apenas PCM-infecção Do total de amostras positivas, mais de 8% eram de animais com idade superior a 18 meses, indicando que animais adultos possam estar há mais tempo em contato com o provável habitat do fungo e portanto mais sujeitos à infecção Este é o primeiro estudo que demonstrou a infecção de caprinos por P brasiliensis no Estado do Paraná
Avaliação da técnica de PCR na detecção de mycobacterium leprae em raspado de mucosa nasal
Custódio, Luiz Antonio; Jankevicius, Shiduca Itow [Orientador]; Garcia, Lourdes Botelho; Saridakis, Halha Ostrensky
Resumo: A hanseníase, doença debilitante, deformante e com elevado apelo social, causada pelo Mycobacterium leprae é um sério problema de saúde pública no Brasil e em outras regiões do mundo A complexidade deste microrganismo tem desafiado os estudiosos durante anos As novas técnicas de biologia molecular, como o PCR e seus avanços, podem permitir uma melhor compreensão e controle desta praga que assola a espécie humana há milhares de anos Descrevemos uma técnica de next-PCR para amplificar uma seqüência do gene lsr2 do M leprae com 1% de especificidade com um limite de detecção de 3 fg de DNA padrão Foi detectado presença de DNA do M leprae na mucosa nasal de 41,2% dos pacientes com hanseníase tuberculóide, 7,2% dos pacientes com hanseníase indeterminada e em 23,1% dos contatos
Atividade antiviral e modo de ação de um peptídeo 6 kDa isolado de Helianthus annus L e sinergismo com Aciclovir
Oliveira, Amanda Bortoluci da Silva; Dias Filho, Benedito Prado [Orientador]; Nakamura, Tânia Ueda; Ogatta, Sueli Fumie Yamada
Resumo: HSV-1 está geralmente associado a infecções faciais, oftálmicas e genitais Sua grande característica está em causar uma lesão primária, auto-limitante em pacientes imunocompetentes, que é capaz de reativar por toda a vida do paciente Eventualmente, pode estar associado a lesões graves no sistema nervoso central, como encefalites necrosantes agudas e meningites, principalmente em pacientes imunocomprometidos Muitos tratamentos são baseados no uso de aciclovir e em outros análogos de nucleosídeos, mas eles são tóxicos e alguns pacientes com lesões recorrentes podem albergar cepas resistentes No presente estudo foi isolado um peptídeo anti-HSV-1 das sementes de girassol (Helianthus annus) utilizando técnicas cromatográficas A caracterização parcial do peptídeo revelou que ele apresenta aproximadamente 6 kDa e que possivelmente seja aniônico A atividade antiviral contra HSV-1 foi investigada através de vários experimentos, entre eles estão a determinação do modo de ação, pela adição do peptídeo em várias etapas do ciclo replicativo do HSV-1; pelo ensaio de penetração e pelo sinergismo utilizando aciclovir O peptídeo mostrou-se altamente eficiente ao impedir as etapas iniciais do ciclo replicativo, a adsorção e penetração, o que pode ser comprovado pelos valores de IC5, 5,3 µg/ml quando o peptídeo foi adicionado antes da infecção por HSV-1 e 4,5 µg/ml quando adicionado durante a infecção por HSV-1 Atividade virucida moderada foi observada quando o peptídeo foi incubado com o HSV-1 por 1 h a 37 ºC antes da infecção (IC5 igual a 78,6 µg/ml), enquanto que o peptídeo se mostrou inativo depois que a infecção viral estivesse estabelecida 5 µg/ml do peptídeo impediu 86 % da penetração viral durante os primeiros 2 minutos de incubação Através do isobolograma, pode-se verificar que o peptídeo apresentou sinergismo quando associado ao aciclovir, com índice de concentração fracional inibitória (FICI) de ,375
Avaliação da atividade antimicrobiana de enterocinas produzidas por isolados de Enterococcus sp
Ogaki, Mayara Baptistucci; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Nakazato, Gerson; Menezes, Cristiano Ragagnin de; Maia, Luciana Furla Neto [Coorientadora]
Resumo: Enterococcus sptêm sido amplamente pesquisadas quanto a sua aplicabilidade em alimentos, sendo utilizados como aditivos para atribuir sabor e aroma a alimentos fermentados, mas também como culturas protetoras, devido a sua capacidade de produzir peptídeos antimicrobianos, denominados enteriocinas Em função de seu espectro antimicrobiano, as enteriocinas têm sido testadas como bioconservadores em diversos produtos, mostrando atividade contra micro-organismos patogênicos, como Listeria monocytogenes e Staphylococcus aureus Considerando os benefícios e os resultados positivos que as enteriocinas vêm apresentando, o presente trabalho teve por objetivo genotipar isolados de Enterococcus sp potencialmente produtores de enterocinas A, B, P, L5A e L5B, e por fim avaliar e caracterizar sua atividade antimicrobiana Foram avaliados 135 isolados, dos quais 59,26% apresentaram pelo menos um gene que codifica enterocina (Gene+), sendo o gene da enterocina A, o mais frequente Entre os isolados Gene+, 825% apresentaram atividade antimicrobiana frente a pelo menos um micro-organismo indicador Os melhores isolados produtores em meio solidificado em diferentes meios de cultivo (Efm2, Ent22, Efm24, Efm25, Efm26eEfs27) foram caracterizados quanto à atividade antimicrobiana de enterocinas presentes no CFS (sobrenadante de cultivo livre de células), outros testes foram realizados a fim de descartar uma possível inibição por outros agentes antimicrobianos que não fossem as enterocinas, como o gás carbônico e o peróxido de hidrogênioNenhum dos isolados produziu dióxido de carbono,e Efm26 foi o único capaz de produzir peróxido de hidrogênio Os níveis mais elevados de atividade antimicrobiana foram obtidos pelo isolados Efm2, Ent22, Efm24, Efm26, e Efs27(8 UAml-1) seguido por Efm25(4 UAml-1) O meio MRS suplementado com lactose foi determinado como melhor meio de cultivo líquido para a produção de enterocina A atividade antimicrobiana do CFS foi inativada após tratamento com enzimas proteolíticas, masse manteve quando o CFS foi termicamente tratado a 8°C e 1°C e também quando tratado com catalase, o que confirma que a atividade antimicrobiana do CFS não está relacionada com a ação de H2O2 e ácido láctico (CFS neutralizado com NaOH), massim comagentesproteicos, as enterocinas Em conclusão, constatou-seque os isolados avaliados apresentam grande potencial para serem aplicados na bioconservação de produtos alimentícios
Caracterização genotípica e fenotípica dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de Proteus mirabilis isolados de carcaças de frango com celulite
Sanches, Matheus Silva; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da [Orientador]; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Oba, Alexandre; Baptista, Ana Angelita Sampaio [Coorientadora]
Resumo: Proteus mirabilis é um patógeno oportunista frequentemente associado a uma variedade de infecções em humanos, no qual as do trato urinário são consideradas as mais prevalentes Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as características genotípicas e fenotípicas dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de 34 cepas de P mirabilis isoladas de carcaças de frango com celulite em um abatedouro no norte do estado do Paraná, Brasil, a fim de inferir um possível risco zoonótico Das 34 cepas, duas foram escolhidas para avaliar a sua capacidade em reproduzir as lesões de celulite experimentalmente em frangos de corte, sendo uma cepa com maior quantidade de fatores de virulência (LBUEL-A33) e outra com menor quantidade (LBUEL-A34) Os genes mrpA, atfA (fímbrias) ireA (sideróforo), ptA, zapA (proteases) e hpmA (hemolisina) foram encontrados em todos os isolados, enquanto os genes pmfA e ucaA (fímbrias) foram encontrados em 33 (97,6%) e 17 (5%) cepas respectivamente Todas as cepas expressaram adesão agregativa em células HEp-2 e formaram biofime Das 34 cepas, 28 (82,35%) exibiram efeito citotóxico em células Vero Em relação ao perfil de resistência, 25 (78,13%) cepas foram consideradas multirresistentes A presença de genes blaESBL e blaampC conferindo resistência aos ß-lactâmicos e qnr às quinolonas também foram detectados nos isolados após a presunção no teste fenotípico, no qual 7 (21,88%) isolados continham o grupo CTX-M-2, 11 (34,38 %) continham grupo CIT e 19 (59,38%) continham qnrD Tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a LBUEL-A34 desenvolveram lesões de celulite em 24 horas pós-inoculação, no qual o grau das lesões foi estatisticamente similar ao grau das lesões causadas pelo controle positivo (p< ,5), uma Escherichia coli Patogênica de Aves (APEC 46) Microscopicamente, tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a APEC 46 ocasionaram lesões similares, caracterizadas pela presença de infiltrado inflamatório e necrose da derme e das fíbras musculares Conclui-se com o presente trabalho que P mirabilis isolados de carcaças de frango com lesões de celulite representam um risco zoonótico, pois possuem uma diversidade de fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos, bem como a capacidade de desenvolver lesões de celulite em frangos de corte
Investigação de atividade biológica de composto carbolínico sobre Trypanosoma cruzi
Valdez, Rodrigo Hinojosa; Nakamura, Celso Vataru [Orientador]; Lautenschlager, Sueli de Oliveira Silva; Pelayo, Jacinta Sanchez
Resumo: A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, a qual afeta 18 milhões de pessoas em toda a América Latina A terapêutica disponível atualmente é limitada e parcialmente eficaz, em função disto torna-se evidente que novos compostos com atividade tripanocida devem ser desenvolvidos Alguns compostos carbolínicos têm demonstrado atividades biológicas interessantes tais como, anti-tumoral, inseticida e antiparasitário No presente trabalho foi realizado um estudo com quinze compostos carbolínicos, a fim de avaliar a sua atividade anti-proliferativa sobre formas epimastigotas de T cruzi O composto que obteve o melhor resultado, denominado C4 (N-butil-1- (4dimethylamino)fenil-1,2,3,4-tetrahidro - ??- carbolínico - 3 - carboxamida), apresentou o valor de IC5 de 14,9 µM Dessa forma, avaliou-se a atividade deste composto, C4, sobre a viabilidade de formas tripomastigotas e amastigotas, na interação do parasita com células de mamífero, na morfologia e ultraestrutura do parasita através de técnicas de microscopia eletrônica bem como avaliar o potencial citotóxico sobre linhagens de células de mamífero O C4 demonstrou possuir atividade antiparasitária sobre as três formas evolutivas do protozoário e uma baixa citotoxicidade A concentração que lisou 5 % (EC5) das formas tripomastigotas a 4 °C foi de 77 µM, e a 37 °C de 45 µM Já sobre as formas amastigotas o EC5 a 4° C foi 149 µM e a 37 °C de 33 µM Na concentração de 128 µM o composto diminuiu em 93,5 % o número de parasitas intracelulares A microscopia eletrônica de transmissão revelou que os parasitas tratados apresentaram um inchaço da mitocôndria, o aparecimento de vacúolos e o cinetoplasto apresentou-se difuso Estes resultados obtidos encorajam o aprofundamento de estudos in vitro e in vivo dos compostos carbolínicos, para compreender melhor o seu modo de ação e desenvolver uma formulação farmacêutica para o tratamento da doença de Chagas
Formação de biofilme e genes relacionados à constituição do pili em isolados de Enterococcus faecalis
Ohashi, Danielle Karine; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Moralez, Alane Tatiana Pereira; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da; Furla Neto-Maia, Luciana [Coorientadora]
Resumo: Enterococcus sp são bactérias amplamente disseminados na natureza e nos seres humanos, sendo que nestes podem ser encontrados como parte da microbiota do trato gastrointestinal Embora sejam considerados microrganismos comensais podem atuar como patógenos oportunistas causando surtos de infecções Ainda, são potencialmente formadores de biofilme, o que lhe permite maior facilidade de colonização em superfícies bióticas e abióticas, contribuindo para ineficiência de muitos agentes antimicrobianos e maior adaptabilidade das bactérias em ambientes hospitalares Esta capacidade de formar biofilme esta relacionada à expressão de vários fatores de virulência, entre eles o operon ebp, responsável pela expressão dos pili, na qual desempenham um papel importante na formação do biofilme e adesão das células a superfície do hospedeiro Os objetivos do presente estudo foram avaliar a freqüência dos genes pertencente ao operon ebp e sortase C em isolados clínicos de não-clínicos em E faecalis, bem como verificar sua capacidade de formar biofilme em superfície de poliestireno e elastômero de silicone Entre os genes pertencente ao operon ebp o que apresentou maior freqüência foi ebpB 84%, seguido pelo ebpA 58% Sendo que os isolados de origem não-clínico prevaleceu o perfil genotípico para os genes ebpAB e sortase C 31%, já os de origem clínico houve uma prevalência para ebpBC e sortase 37,5% Também foram pesquisados outros genes relacionados à virulência e formação de biofilme na qual ace, asa1 e gelE apresentaram uma freqüência maior que 7% para cada um Foi testada a capacidade destes isolados em formarem biofilme em superfície de poliestireno, sendo que 95% dos isolados conseguiram formar biofilme Também averiguou, se a capacidade de formar biofilme poderia ser influenciada usada glicose e íons ferro, na qual ocorreu um aumento e redução respectivamente (p<,5) da formação de biofilme em superfície de poliestireno No presente trabalho relatou-se pela primeira vez a formação de biofilme em superfície de elastômero de silicone em isolados de enterococos, sendo este um dos principais constituintes dos dispositivos médicos; na qual maioria dos isolados foram capazes de formar biofilme e quando suplementados com glicose e íons ferro também aumentou e reduziu respectivamente sua formação de biofilme Utilizou-se a microscopia eletrônica de varredura (MEV) para verificar a morfologia e distribuição das células na formação de biofilme nas superfícies de poliestireno e elastômero de silicone Os dados mostraram que independe da origem dos isolados estes apresentaram uma freqüência variada para os genes do operon ebp e que a sua presença não prediz que ocorrerá a formação biofilme
Qualidade microbiológica da água e dialisatos em uma unidade de hemodiálise em Ponta Grossa - Pr
Borges, Cíntia Regina Mezzomo; Pelayo, Jacinta Sanchez [Orientador]
Resumo: Objetivo: avaliar a qualidade bacteriológica de amostras de água e dialisatos em uma Unidade de Hemodiálise Metodologia e Resultados: 72 amostras de água e 72 de dialisatos foram coletadas no período de novembro de 23 a abril de 24 Foram realizadas as seguintes análises microbiológicas: pesquisa de coliformes totais e fecais, a qual resultou negativa para todas as amostras; contagem total de bactérias heterotróficas, onde três amostras de água e duas de dialisatos apresentaram contagens superiores aos limites permitidos pela legislação; pesquisa de endotoxina que revelou quantidades elevadas somente nas amostras de água que antecederam a Osmose Reversa Foram identificadas bactérias Gram-negativas não fermentadoras em 54 amostras de dialisatos e em 26 de água sendo que a maioria dos microrganismos pertencia aos gêneros: Pseudomonas (32,5%), Burkholderia (25%) e Acinetobacter (17,5%) Teste de adesão à superfície inerte, mostrou que várias bactérias são capazes de formar biofilme Algumas bactérias apresentaram resistência ao hipoclorito de sódio na concentração de 5 ppm, por 1 minutos (27%) e a três ou mais antimicrobianos (6%) Conclusões: os resultados sugerem que a água e dialisatos podem ser uma fonte de infecção para pacientes que necessitam de hemodiálise Significância e Impacto do Estudo: um adequado sistema de tratamento de água, desinfecção do sistema de hemodiálise e monitoramento microbiológico da água e dialisatos são necessários para a redução de surtos de bacteremia e pirogenia, melhorando a qualidade do serviço de hemodiálise e protegendo a saúde dos pacientes
Atividades enzimáticas na rizosfera de espécies leguminosas nativas mediadas por rizobactérias e micorrizas arbusculares
Knob, Adriana; Nogueira, Marco Antonio [Orientador]
Fator hemolítico em Candida tropicalis
Favero, Daniel; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Furlaneto-Maia, Luciano; Svidzinski, Terezinha Inez Estivalet
Resumo: Embora o fator hemolítico seja reconhecido como um possível fator que contribui para a patogenicidade de espécies de Candida, a atividade hemolítica de Candida tropicalis e sua expressão ainda permanecem pouco conhecidas Neste estudo foi analisada a secreção do fator hemolítico em 16 isolados de C tropicalis provenientes de diversos sítios de infecção (urina, sangue, mucosa oral, escarro, unha e mucosa vaginal) Todos os 16 isolados de C tropicalis exibiram hemólise-beta (lise completa dos eritrócitos) com um halo externo de hemólise-alfa (lise parcial dos eritrócitos) A atividade do fator hemolítico no sobrenadante de cultivo de C tropicalis também foi analisada Similarmente ao encontrado no ensaio em placa, não houve diferenças significativas (P>,5) na atividade hemolítica entre os isolados testados Ainda, a atividade hemolítica não foi inibida pelo tratamento com o calor (1°C) ou pela adição de pepstatina A Em nível molecular, foi identificado um possível gene que confere um fator hemolítico em C tropicalis (CtHLP) e sua expressão foi avaliada utilizando a técnica de RT-PCR quantitativa (RT-qPCR) Em experimentos preliminares, o emprego de oligonucleotídeos especificamente desenhados para o possível gene CtHLP e para o gene de controle constitutivo CtACT, nos permitiu verificar que possivelmente o fator hemolítico é diferencialmente expresso em função do tempo de incubação A expressão do gene CtHLP foi máxima em 7 h de incubação em meio RPMI, onde tempos posteriores resultaram em queda na expressão Os resultados obtidos ampliam nosso conhecimento das bases moleculares e bioquímicas da atividade hemolítica em C tropicalis

Navegar

Navegando 02 - Mestrado - Microbiologia por Data de Publicação

Resultados por página

Opções de Ordenação