02 - Mestrado - Microbiologia
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Item Avaliação do potencial de agentes biológicos e seus produtos no controle da cancro cítrico causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri(2006-02-06) Camargo, Flávia Regina Spago; Andrade Filho, Galdino; Mello, João Carlos Palazzo de; Homechin, MartinO Cancro cítrico asiático, causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) (Hasse), é uma doença mundialmente conhecida na maioria das áreas de produção comercial de citrus. Estratégias limitadas existem para o controle do cancro cítrico nos cultivares mais susceptíveis. A aplicação de microrganismos como agentes para controlar a doença é um grande progresso ecológico para solucionar o problema. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação e bactérias antagonistas (EC, FRC, LV e LN) e seus produtos (suspensões bacterianas, sobrenadantes livre-de-células e a fração acetato de etila obtida pelo tratamento do sobrenadante de LN com solventes orgânicos) foram testados para o controle da população de Xac, da incidência e severidade do cancro cítrico.em folhas de laranja(Citrus sinensis cv. Valencia). Os produtos bacterianos foram pulverizados nas folhas ou deixados em contato direto com as mesmas antes (pré) ou após (pós) a inoculação de Xac. Os resultados mostraram uma redução na população de Xac quando a suspensão bacteriana da cepa EC foi aplicada. Em outro experimento todas as cepas reduziram o número de lesões e a área de lesão quando as folhas foram tratadas com o sobrenadante livre-de-células, também foi observado o mesmo efeito quando as folhas foram tratadas com a fração de acetato de etila da cepa LN. Todos os efeitos inibitórios foram observados quando as folhas foram tratadas com os produtos bacterianos após a inoculação de Xac. Esses resultados mostram que bactérias antagonistas e seus produtos podem ser usados no controle do cancro cítrico.Item Cicatrização de feridas e biacúmulo de prata em ratos wistar tratados topicamente com o antimicrobiano nanopartícula de prata(2020-02-27) Camargo, Larissa Ciappina; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Lonni, Audrey Alesandra Stinghen Garcia; Kobayashi, Renata Katsuko TakayamaInfecções nas feridas dos pacientes com queimaduras, pós-operatório, entre outros, são umas das mais temidas complicações, pois o ferimento atua como um meio de cultura ideal para a colonização e proliferação de microrganismos. Nesses casos a pele que normalmente serve como uma barreira física contra micróbios encontra-se lesionada e precisa ser reparada de forma rápida e adequada. Devido a essa problemática o objetivo do presente trabalho foi formular géis contendo nanopartículas de prata (bio-AgNP) obtidas a partir da biomassa de Fusarium oxysporum, e avaliar a sua atividade antibacteriana, cicatrizante e verificar a ocorrência do bioacúmulo da prata no organismo. Para o teste de cicatrização, foram usados 60 ratos adultos, da raça Wistar, nos quais foi feita uma lesão na região dorsal. As feridas foram tratadas diariamente com as formulações (F250 e F500), a base do produto (componentes da formulação sem bio-AgNP), a sulfadiazina de prata (controle positivo) e com solução fisiológica (controle negativo) de acordo com o grupo experimental. Registros da avaliação macroscópica e coleta do tecido epitelial da lesão foram feitos nos dias: 1°, 5°, 9° e 17° dias após a cirurgia, para avaliação histológica. Os animais tratados tiveram coletados o cérebro, um dos rins, o fígado, testículo, baço e sangue para quantificação de prata por espectrofotometria de absorção atômica. Para a verificação da atividade antimicrobiana dos produtos desenvolvidos foi realizada a técnica de curva de sobrevivência e morte. Os microrganismos testados foram Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. O resultado do ensaio in vitro mostrou que as formulações com bio-AgNP tiveram ação antimicrobiana, assim como o controle positivo (sulfadiazina de prata - SD). Referente à cicatrização, não foram observadas variações significativas entre as médias das áreas das lesões tratadas com as diferentes formulações em relação à solução fisiológica (CTL) e a SD. Quanto ao acúmulo de prata nos diversos órgãos e no sangue, não houve diferença significativa entre o grupo CTL e os grupos experimentais após 17 dias de tratamento, o que indica que os tratamentos com os produtos formulados nãoocasionam acúmulo de prata no organismo. O produto formulado contendo nanopartículas de prata biológicas apresentou potente proteção contra microrganismos, pois diminuiu a carga microbiana na lesão no decorrer dos dias de tratamento. Além disso, mostrou que não interferiu no proceso de cicatrização e não resulta em acúmulo de prata nos órgãos estudados, sendo uma alternativa para o tratamento de pacientes com feridas.Item Atividade antimicrobiana da fração F4A obtida de cultura de Pseudomonas aeruginosa LV em Staphylococcus aureus(2020-05-19) Gonçalves, Guilherme Bartolomeu; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Tavares, Eliandro Reis; Navarro, Miguel Octavio PérezStaphylococcus aureus é um patógeno relevante nos âmbitos comunitário e de assistência à saúde, conhecido pela dificuldade terapêutica associada à resistência antimicrobiana e à formação de biofilmes. A partir de 1940, S. aureus passou a ter notoriedade global, devido à resistência à penicilina e, em 1961, à meticilina. Como infecções causadas por essa bactéria dificultam a prática clínica, se faz notável a necessidade de pesquisas por novas substâncias antibióticas para tratar os pacientes acometidos. Ao longo da história, produtos naturais, especificamente metabólitos secundários de microrganismos, têm sido usados para combater patógenos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade inibitória da fração F4A, obtida da purificação do sobrenadante de cultura de Pseudomonas aeruginosa cepa LV, sobre células planctônicas e sésseis de S. aureus, as alterações morfológicas causadas nessas células e sua toxicidade para células de mamíferos. Para isso, foram selecionados 26 isolados clínicos de S. aureus da coleção do Laboratório de Biologia Molecular de Microrganismos, da Universidade Estadual de Londrina (UEL). Os valores de CIM de F4A variaram de 1,56 a 6,25 µg/mL; 19 isolados apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) de 3,13 µg/mL (73,1%), 6 apresentaram CIM de 1,56 µg/mL (23,1%) e 1 isolado apresentou CIM de 6,25 µg/mL(3,8%). Concentração bactericida mínima (CBM) de 3,13 µg/mL foi detectada em 84,6% dos isolados (n=21) e 18 apresentaram valores idênticos de CIM e CBM, evidenciando o potencial efeito bactericida da fração. Pela cinética do tempo de morte, observou-se que S. aureus reduziu significativamente o número de unidades formadoras de colônias (UFCs) a partir de 4 h de tratamento com a CIM/CBM de F4A. A microscopia eletrônica de transmissão das cepas de referência tratadas com a CIM/CBM de F4A evidenciou alterações ultraestruturais como: diminuição na eletrodensidade citoplasmática, discreto espessamento e diminuição na compactação da parede celular, inibição da formação de septo e descolamento da membrana citoplasmática. O biofilme de todos os isolados apresentou redução significativa na atividade metabólica nas concentrações de 12,5 e 25 µg/mL. A maioria dos isolados apresentou concentração inibitória mínima para 50% das células sésseis (SCIM50) de 6,25 µg/mL (n=15), seguido de 12,5 µg/mL (n=8), 3,13 µg/mL (n=2) e 25,0 µg/mL (n=1). Para a maior concentração testada (50 µg/mL), a atividade hemolítica foi superior a 3%, enquanto as outras concentrações (25 a 0,1 µg/mL) não ultrapassaram 1% de hemólise; a concentração citotóxica para 50% das células (CC50) LLCMK2 de F4A após 24 h foi de 3,44 µg/mL. Como conclusão, a fração F4A apresentou atividade bactericida contra S. aureus, incluindo atividade antibiofilme. Embora mais estudos sejam necessários em relação à sua toxicidade para células de mamíferos e ensaios in vivo, a fração F4A pode ser promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.Item Avaliação de efeitos da intoxicação aguda pela ocratoxina A em frangos e análise de tratamento com L-triptofano(2021-02-22) Galdino Ricci, Fernando; Itano, Eiko Nakagawa; Hirooka, Elisa Yoko; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Venâncio, JoséA Ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina produzida por Penicillium spp. e Aspergillus spp. que são capazes de contaminar produtos de origem vegetal, muto utilizados na alimentação dos animais. Através da exposição oral, pelo consumo dos alimentos contaminados, a OTA pode afetar vários sistemas dos animais, tais como os sistemas imunológico e gastrointestinal. Os objetivos do presente estudo foram avaliar o impacto da intoxicação pela OTA em pintainhos, e verificar se o tratamento com Ltriptofano pode inibir seus efeitos tóxicos. Após a inoculação de uma dose única de OTA (1,4 mg/kg de peso vivo) em frangos de um dia de idade (Cobb 500), no primeiro dia do experimento, foram administradas quatro doses diárias de L-triptofano (100 mg/kg de peso vivo). No 14º dia foram avaliadas as respostas do sistema imunológico sistêmico e local através de quantificação dos níveis de imunoglobulinas A e Y (IgY/IgA) plasmáticas e presentes no conteúdo cecal, níveis de leucócitos totais circulantes, titulação dos anticorpos vacinais maternos contra o Vírus da Doença de Newcastle (NDV) e contagem do número de células IgA positivas (IgA+) na mucosa do duodeno, além do impacto na mucosa local com a avaliação da morfometria do duodeno. Adicionalmente, foram avaliados alguns parâmetros hematológicos e bioquímicos. Para quantificação de IgA/IgY foi realizado o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) de imunocaptura, a revelação das células IgA+ por imunohistoquímica, a titulação de anticorpos vacinais por ELISA direto, os níveis de leucócitos totais circulantes por contagem (câmara de Neubauer) e a morfometria do duodeno pela mensuração dos tecidos corados com hematoxilina/eosina. Os níveis de IgA/IgY no conteúdo cecal, o número de células IgA+ e a altura das vilosidades e profundidade das criptas do duodeno dos animais contaminados apenas com OTA diminuíram significativamente, assim como os níveis de leucócitos totais circulantes e do hematócrito dos animais contaminados apenas por OTA (p<0,05), o que demonstrou seus efeitos tóxicos na mucosa local e na hematopoiese. O tratamento com L-triptofano foi benéfico para os animais em diversos parâmetros, os animais contaminados com OTA e tratados com L-triptofano tiveram níveis de IgA/IgY do conteúdo cecal, células IgA+ do duodeno e leucócitos totais circulantes similares aos animais do grupo controle, assim como o hematócrito e a altura das vilosidades do duodeno (p>0,05). Conclui-se que a exposição à uma dose alta de OTA no início da vida dos pintainhos induz a alterações na mucosa local e a utilização do tratamento com L-triptofano é válido para diminuir os efeitos prejudiciais da OTA, ao estimular a produção de imunoglobulinas locais e manter a integridade da mucosa.Item Atividade antimicrobiana de nanopartícuas de silênio sintetizadas a partir de extratos de Allium cepa, Malpighia emarginata e Vernonia condensata(2021-02-23) Souza, Lucas Marcelino dos Santos; Nakazato, Gerson; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Medeiros, Leonardo PintoA resistência bacteriana aos antimicrobianos é um grande problema para a saúde pública e a nanotecnologia vem sendo empregada no controle do crescimento bacteriano, incluindo os multirresistentes. Nesse contexto estudos com nanopartículas de diferentes elementos, principalmente metais, como: prata, ouro e ferro, apresentam desejável atividade antimicrobiana. Outro elemento que vem se destacando é o selênio (Se), cuja nanopartículas possui alta bioatividade e ação antibacteriana. Portanto, o objetivo do trabalho foi realizar a biossíntese de nanopartículas de selênio (SeNps) a partir de extratos de três plantas: Allium cepa (cebola), Malpighia emarginata (Acerola), e Vernonia condensata (boldo-baiano). As nanopartículas sintetizadas foram caracterizadas por dynamic light scattering (DLS) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foram utilizadas. A atividade antibacteriana foi avaliada pelos métodos de microdiluição em caldo e curva de sobrevivência contra cepas padrão Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) BEC 9393, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 25922. Os efeitos citotóxicos das SeNps sintetizadas foram avaliados através da capacidade hemolítica. As SeNps apresentaram tamanho entre 219 a 340 nm e morfologia majoritariamente esférica, também tiveram ação contra todas as bactérias Gram positivas com CIM variando de 6,125 a 98 μg/ml, porém sem ação nas Gram negativas testadas. E em relação à hemólise as CC50 variaram de 0,82 a 2,1 mg/ml. Esses resultados indicam que elas podem ser usadas contra bactérias Gram positivas por possuírem boa atividade antimicrobiana, além de possuírem baixa concentração hemolítica abrindo uma grande variedade de opções para suas aplicações.Item Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Escherichia coli de um caso clínico de colite histiocítica ulcerativa canina(2021-05-17) Dibo, Miriam; Nakazato, Gerson; Rocha, Sérgio Paulo Dejato; Sarmiento, Juan Josue PuñoA colite histiocítica ulcerativa (CHU) é uma doença inflamatória intestinal que pode acometer principalmente cães jovens das raças Boxer e buldogue francês, sendo associada à presença de Escherichia coli Aderente-Invasiva (AIEC). Deste modo, o presente estudo teve como objetivo realizar as caracterizações fenotípica e genotípica de isolados de E. coli e sua associação a um CHU em uma fêmea da raça buldogue francês. Neste estudo, foram obtidos 46 isolados de E. coli, sendo todos resistentes a ampicilina, ciprofloxacino, enrofloxacino e sulfametoxazol trimetoprima. Também foram encontradas resistências a amoxicilina-ácido clavulânico, azitromicina, cefazolina, cloranfenicol, gentamicina e tetraciclina. Todos os isolados obtidos foram classificados como multirresistentes e apenas um deles foi positivo no teste fenotípico de produção de beta-lactamases de espectro extendido, pertencendo ao grupo CTX-M-2. Com relação à classificação filogenética de Clermont, a maioria das cepas pertence aos grupos C e B1, enquanto os grupos B2 e F apresentaram apenas um representante cada. Os genes de virulência de E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC) encontrados foram ecpA, fimH, hlyF, iroN, iss, iutA, ompT, sitA e traT. Nenhuma das cepas apresentou capacidade de replicação no interior de macrófagos J774A.1 em 24 horas, no entanto, três cepas apresentaram capacidade de sobrevivência. A cepa 1.4 apresentou nove genes de virulência de ExPEC, ausência de fatores de virulência de E. coli diarreiogênica, e classificação no grupo filogenético B2. Essas características, juntamente com os sintomas apresentados pelo animal, indicam a possibilidade de que infecção por AIEC. No entanto, o teste de sobrevivência e replicação em macrófagos não apresentou resultados conclusivos, sendo necessário realizar os testes fenotípicos de adesão e invasão para confirmação da hipóteseItem Alterações celulares e moleculares de morfotipos de Candida tropicalis pré e pós exposição ao fluconazol(2022-01-28) Santos, Murilo Moreira dos; Furlaneto, Márcia Cristina; Ishida, Kelly; Panaggio, Luciano AparecidoCandida tropicalis é uma das 15 espécies do gênero Candida que são patogênicas ao ser humano. A espécie tem sua relevância epidemiológica traduzida como a segunda ou terceira espécie mais isolada do gênero, com prevalência registrada em regiões tropicais e subtropicais, como América Latina e Ásia, incluindo o Brasil. A levedura tem capacidade de promover infecções com taxa de mortalidade semelhante à de Candida albicans e superiores às de outras espécies não-Candida albicans. O switching fenotípico, considerado um fator de virulência descrito como capaz de promover variabilidade a partir de linhagens isogênicas, podendo acarretar em aumento na virulência. Neste sentido, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito do switching fenotípico em aspectos moleculares e celulares de morfotipos (linhagem parental, Variante Crepe e Revertente de Crepe – RC) de C. tropicalis expostos ao fluconazol. Para isso, as metodologias utilizadas visaram avaliar a influência do switching fenotípico pré e pós exposição ao fluconazol na concentração inibitória mínima (CIM) do fármaco, na expressão dos genes ERG11 (gene que codifica a enzima lanosterol 14-α-desmetilase da via de síntese do ergosterol) e CDR1 (gene que codifica uma bomba de efluxo para múltiplas drogas para o gênero Candida), na porosidade de parede celular, no tamanho e granulosidade celular, na quantidade de componentes de parede celular e na integridade de membrana plasmática. Os resultados demonstraram o morfotipo (RC) com o maior valor de CIM50, menor porosidade de parede celular e superexpressão do gene CDR1. Além disso, destaca-se a superexpressão do gene ERG11 para o morfotipo Crepe, sugerindo que há uma maquinaria molecular morfotipo dependente para morfotipos de C. tropicalis em resposta ao fluconazol. Para todas as análises foi possível evidenciar o efeito do switching fenotípico, mostrando que o fator de virulência tem a capacidade de modificar características moleculares e celulares em C. tropicalis.Item Efeito da aspirina sobre a resposta inflamatória e interação de células raw 264.7 com vesículas extracelulares secretadas por Trypanosoma Cruzi(2022-06-24) Santos, Lucas Felipe; Pinge Filho, Phileno; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Toledo, Karina Alves deDurante a infecção por Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, a resposta imunológica é importante para o controle do parasitismo e sobrevida do hospedeiro. Macrófagos são células com reconhecida ação tripanocida e que produzem diversos mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO) e eicosanóides que atuam no controle da carga parasitária e no desenvolvimento da infecção. Contudo, o parasito apresenta mecanismos de evasão, como a liberação de vesículas extracelulares, que ao carrearem moléculas funcionais, sinalizam para células do hospedeiro, modulando a resposta inflamatória favorecendo o parasito. Os processos de invasão celular e controle da carga parasitária estão sob forte influência de mediadores lipídicos, especialmente aqueles derivados das vias das ciclooxigenases 1 e 2 (COX-1/COX2). A aspirina (ASA) é classificada como um antiinflamatório não esteroidal que atua no bloqueio de COX-1/COX2 responsáveis pela conversão do ácido araquidônico em eicosanóides. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da ASA sobre a ação exercida pelas vesículas extracelulares de T. cruzi cepa Y (EVs-Y). Foram realizados ensaios de viabilidade celular em macrófagos RAW 264.7 tratados com as concentrações de 0,625mM, 1,25mM e 2,5mM de ASA. Após a infecção dessas células foi determinado o índice de internalização do parasito e quantificado a produção de nitrito como estimativa da produção de NO. Análises estatísticas foram realizadas no programa “GraphPad Prism 8”, One-Way ANOVA seguida de teste de Turkey de comparações múltiplas. As concentrações de ASA utilizadas não apresentaram citotoxicidade. Macrófagos expostos à EVs-Y e posteriormente infectados com formas tripomastigotas de T. cruzi apresentaram menor produção de NO e aumento no número de formas amastigotas no citoplasma, demonstrando a modulação exercida pelas EVs-Y em favor do parasito. Surpreendentemente, quando os macrófagos foram tratados com ASA antes da exposição às EVs-Y e subsequente infecção com tripomastigotas, houve maior produção de NO, assim como menor internalização de parasitos e consequente menor presença de formas amastigotas no citoplasma das células, em comparação com os controles. Esses resultados sugerem que EVs-Y modula a resposta de macrófagos em favor do T. cruzi e indicam um papel para COX na modulação imune exercida por EVs-Y.Item Efeito da restrição hídrica na fixação biológica de nitrogênio em sojaCerezini, Paula; Nogueira, Marco Antonio [Orientador]; Cunha, Mariangela Hungria da; Pípolo, Antônio EduardoResumo: A fixação biológica de nitrogênio (FBN) é indispensável para a viabilidade econômica e ambiental da cultura da soja, mas estresses ambientais como a seca, prejudicam a cultura e a FBN Neste trabalho, avaliaram-se efeitos da restrição hídrica em parâmetros relacionados à FBN e desenvolvimento das plantas em genótipos de soja que apresentam FBN com diferentes níveis de tolerância à seca O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado em arranjo fatorial 5 × 2, com 7 repetições Empregaram-se os genótipos R1-581F, R1-416F, R2-1325, com capacidade de manter a FBN sob restrição hídrica, e os suscetíveis CD 215 e BRS 317, em combinação com suprimento adequado de água (7% da capacidade de campo - CC), ou restrição hídrica (3% CC) entre 45 e 55 dias após a emergência Apenas o genótipo R1-581F não apresentou diminuição da fotossíntese sob restrição hídrica, com médias de 15,7 e 17,31 µmol CO2 m-2 s-1, na condição de 3 e 7% CC, respectivamente Além disso, apresentou maior taxa transpiratória (3,67 mmol H2O m-2 s-1) e concentração intercelular de CO2 (253 µmol CO2 mol-1), em relação aos demais genótipos, que variaram suas taxas transpiratórias de 1,78 a 2,34 mmol H2O m-2 s-1, e a concentração intercelular de CO2 de 185 a 236 µmol CO2 mol-1, quando submetidos à restrição hídrica Todos os genótipos apresentaram redução no teor de clorofila a 3% CC, com variação entre 18,46 e 21,34 µg cm-2, porém, menos intensa nos genótipos tolerantes R1-581F (de 22,3 para 2,96 µg cm-2) e R2-1325 (de 22,43 para 21,34 µg cm-2) À exceção do genótipo R1-416F, todos apresentaram redução da massa de nódulos secos a 3% CC, sendo que, nessa mesma condição, todos tiveram diminuição do número de nódulos, de 329 para 243 A massa da parte aérea (PA) seca diminuiu (de 28,3 para 22,7 g), enquanto a massa de raízes secas aumentou (de 7,32 para 8,24 g) sob estresse hídrico Os maiores teores de macro e micronutrientes na PA foram observados nos genótipos R1-581F, R1-416F e R2-1325, independente da condição hídrica, sendo que o genótipo R1-581F apresentou o maior teor de N, sob restrição hídrica, com 32, e 33,5 g kg-1 na condição de 3 e 7% CC, respectivamente Na condição de 3% CC, o genótipo R1-416F aumentou a concentração de açúcares solúveis totais (AST) na PA (de 118 para 168 mg g-1); os genótipos R1-581F e R2-1325 não foram afetados, enquanto CD 215 e BRS 317 tiveram redução, de 171,9 para 121,9 mg g-1 e de 157,1 para 18,5 mg g-1, respectivamente Todos os genótipos tiveram aumento de AST nos nódulos quando submetidos à restrição hídrica (de 18 para 233 mg kg-1), assim como o teor de ureídos nas folhas (de 4,5 para 5,54 µmol g-1), pecíolos (de 6,5 para 8,7 µmol g-1) e nódulos (de 8,83 para 22,5 µmol g-1) também aumentaram A restrição hídrica afetou a maioria das variáveis analisadas, sendo que os genótipos considerados tolerantes demonstraram melhor desempenho nessa condição em relação aos genótipos suscetíveis, sugerindo maior proteção da FBN e melhor ajuste fisiológico sob secaItem Efeito antifúngico do extrato da casca de Poincianella pluviosa e sinergismo com anfotericina B sobre Cryptococcus sppAndriani, Gabriella Maria; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Tavares, Eliandro Reis; Santos, Pollyana Myrella Capela dos; Faccin-Galhardi, Ligia Carla; Tavares, Eliandro Reis [Coorientador]Resumo: As leveduras dos complexos Cryptococcus gattii e Cryptococcus neoformans são agentes etiológicos da criptococose, doença invasiva e potencialmente fatal em indivíduos imunossuprimidos e imunocompetentes A anfotericina B é o fármaco de escolha, no entanto, seu caráter tóxico dificulta a sua utilização em períodos prolongados, enquanto que outros antifúngicos disponíveis mostram-se menos efetivos Além disso, sabe-se que há um progressivo relato de cepas resistentes às terapias consolidadas Neste contexto, os produtos naturais constituem-se em fontes promissoras para o isolamento de novas moléculas antimicrobianas Estudos com as leguminosas do gênero Poincianella mostraram inúmeras propriedades biológicas, como atividade antimicrobiana, anti-inflamatória e antioxidante Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico do extrato da casca de P pluviosa (sibipiruna) e sua combinação com antifúngicos comerciais sobre células planctônicas e sésseis de cepas de referência e isolados clínicos dos complexos C gattii e C neoformans A concentração inibitória mínima (CIM) do extrato bruto (EB), fração etil acetato (FAc) e fração FC (FC) foi determinada pelo método de microdiluição em caldo e a concentração fungicida mínima (CFM) considerada aquela capaz de inibir 1% a contagem de unidades formadoras de colônia (UFC), comparado com um controle de crescimento não tratado A CIM para EB variou de 62,25 a >1 µg/mL, FC 15,62 a >1 µg/mL e FAc 31,25 a >1 µg/mL, que, por exibir melhor perfil de sensibilidade, foi selecionada para as análises subsequentes O efeito da combinação entre a FAc e os antifúngicos comerciais fluconazol e anfotericina B foi realizado pelo método de checkerboard e os resultados interpretados utilizando o Índice da Concentração Inibitória Fracionária (FICI) A combinação entre fluconazol e FAc foi considerada sinérgica somente para C neoformans ATCC 6631 e C neoformans IV A combinação entre anfotericina B e FAc mostrou-se sinérgica para todas as cepas testadas, C gattii ATCC 2465, C gattii II, C neoformans ATCC 6631 e C neoformans IV, com FICI de ,34; ,125, ,69 e ,34 respectivamente e por esse motivo foi escolhida para os demais experimentos A cinética do tempo de morte das células planctônicas em presença da CIM de FAc sozinha e em combinação com o antifúngico foi analisada durante 72 horas, exibindo ação fungistática para todos os isolados testados O efeito inibitório de FAc sozinha e em combinação com anfotericina B foi também avaliado durante a fase de formação e sobre o biofilme maduro, resultando em inibição significativa da atividade metabólica A maior porcentagem de inibição foi observada para C gattii ATCC 2465 na fase inicial de formação (57,93%) e sobre o biofilme formado (68,1%), seguido por C neoformans ATCC 6631 (24,3 – 36,2%) A combinação com anfotericina B teve efeito sinérgico sobre as duas cepas somente na fase de formação do biofilme, com redução dos valores de SCIM superior a 16 vezes Esses resultados indicam o potencial antifúngico da FAc da casca de P pluviosa sozinha e em combinação com anfotericina B Esta planta pode ser uma fonte importante de novas moléculas com atividade antifúngica para formulação de produtos e utilização em tratamentos da criptococoseItem Frequência de espécies de Candida no Hospital Universitário de LondrinaRota, Juliana Frasnelli; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]Resumo: Leveduras do gênero Candida são as principais causas de infecções fúngicas nosocomiais em pacientes imunocomprometidos Os objetivos deste trabalho foram identificar, através de técnicas moleculares, amostras clínicas de Candida spp obtidas de pacientes do HU, bem como analisar o perfil de susceptibilidade in vitro à antifúngicos e os fatores de risco associados episódios de candidemia Foram isoladas 27 amostras clínicas de Candida spp de pacientes atendidos no período de janeiro de 24 a dezembro de 27 A origem das amostras foi: urina (n=156), sangue (n=4), mucosas (n=54) e lesão superficial (unha e pele) (n=2) O emprego da técnica de PCR permitiu a identificação de cinco espécies: C albicans, C tropicalis, C krusei, C glabrata e C parapsilosis A freqüência de isolamento das diferentes espécies variou de acordo com o local da infecção, sendo a maior freqüência de C albicans em amostras de urina (71,3%) Das espécies não-albicans, C tropicalis foi predominante em amostras de urina (65,5%) seguida de sangue (15,5%); C parapsilosis ocorreu predominantemente em amostras de mucosas (53%); C glabrata ocorreu predominantemente em amostras de urina (86,4%) e C krusei foi observada somente em amostras de sangue (5%) e urina (5%) Estas leveduras tiveram predominância de isolamento em pacientes do sexo masculino (4%) e em neonatos (35%) Vários fatores de risco parecem estar relacionados aos episódios de candidemia, destacando-se o uso prévio de antibiótico (1%) e o uso cateter venoso (87,5%) Podemos ainda destacar fatores como entubação orotraqueal (7%), nutrição parenteral (75%) e presença de cateter urinário (57,5%) Testes de fungigrama revelaram variação quanto à susceptibilidade aos antifúngicos empregados A maioria das amostras de C albicans foi susceptível aos antifúngicos testados O mesmo foi observado para amostras de C tropicalis, embora, 23% das amostras foram resistentes ao itraconazol e 7,7% foram resistentes a anfotericina B e ao cetoconazol O maior nível de resistência foi observado para C krusei Neste estudo foi também realizada a genotipagem empregando a metodologia de RAPD O dendrograma de similaridade genética gerou três agrupamentos, um correspondente a cada espécie, com valores de coeficientes de similaridade (SBA) de 85%, 42% e 33% para C parapsilosis, C tropicalis e C albicans, respectivamente 8% dos isolados do agrupamento de C parapsilosis (44,4% SDD e 11,1% R ao itraconazol) estão reunidos em um único agrupamento com aproximadamente 93% de similaridade genética (isolados altamente semelhantes) 67% dos isolados do agrupamento de C tropicalis (31% 23% R e 8% SDD ao itraconazol) estão reunidos em um agrupamento com aproximadamente 78% de similaridade genética Por fim, 81% dos isolados do agrupamento de C albicans (6% SDD ao itraconazol) estão reunidas em um único agrupamentoItem Desenvolvimento de inoculante microbiano promotor de crescimento de Schizolobium parahyba (Vell.) BlakeGonçalves, Priscila Jane Romano de Oliveira; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Leal, Alex Carneiro; Nakazato, Gerson; Andrade Filho, Galdino [Coorientador]Resumo: No contexto do desmatamento ocorrido ao longo dos anos no Estado do Paraná com a perda drástica da cobertura vegetal nativa e a crescente demanda por projetos de recuperação da mata ciliar, o estudo do Schizolobium parahyba (guapuruvú) para avaliar o seu potencial como fonte de madeira e de cobertura vegetal incrementar seu uso por ser uma espécie arbórea nativa da mata atlântica de rápido crescimento O objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de inoculantes microbianos que promovam o crescimento do guapuruvú em substituição ao adubo químico Como inoculantes foram utilizados 1 g de inóculo bruto do fungo micorrízico arbuscular (FMA) Glomus clarum e como fixador de N, 1 mL de suspensão de 17 UFC de uma cepa de Rhizobium sp No controle positivo foi aplicado 1 g por cova de adubo químico formulado NPK 2-5-2 O experimento foi conduzido em condição de campo, na estação experimental do IAPAR no município de Xambrê, PR O delineamento experimental foi de blocos completos casualizados com cinco repetições e oito tratamentos (n = 8) A altura das plantas foi avaliada aos 3, 6, 12 18 e 24 dias Os dados foram submetidos à ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Tukey (p<,5) Aos 3 dias as plantas não inoculadas com fungo MA apresentaram um maior crescimento quando comparadas com as inoculadas O rizóbio e a micorriza não apresentaram efeito no crescimento das plantas A alta concentração de P presente no solo pode ter influenciado negativamente o estabelecimento da simbiose com o FMA Aos 6, 12, 18 e 24 dias, o guapuruvú respondeu significativamente ao tratamento com adubo em comparação com as plantas inoculadas A sobrevivência foi maior no tratamento com adubo Estes resultados demonstram que nos estádios iniciais a inoculação com microrganismos mostra-se pouco eficiente principalmente em plantas arbóreas nativas do grupo sucessional das pioneiras que apresentam uma alta taxa de crescimento como é o caso do guapuruvú quando cultivada em área de pastagem com Brachiaria decumbensItem Staphylococcus aureus resistente à meticilina : determinação do perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, fatores de virulência e diversidade genéticaOliveira, Caio Ferreira de; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Lopes, Gilselena Kerbauy; Pelayo, Jacinta Sanchez; Perugini, Marcia Regina Eches [Coorientadora]Resumo: Staphylococcus aureus é um patógeno oportunista que pode causar desde doenças de pele e tecidos moles a infecções disseminadas fatais No início da década de 194, as infecções causadas por esta bactéria foram tratadas com penicilina, logo após a sua introdução na terapia clínica No entanto, o surgimento de isolados resistentes a este antimicrobiano levou ao desenvolvimento de penicilinas semissintéticas (meticilina) Crucialmente, em 1961, o primeiro relato de S aureus resistente à meticilina (MRSA: methicillin-resistant S aureus) foi descrito no Reino Unido Atualmente, MRSA é uma das principais causas de infecções relacionadas à assistência à saúde (HA-MRSA: healthcare-associated MRSA) em todo o mundo, e em adição, isolados desta espécie bacteriana tem emergido como uma das principais causas de infecções em indivíduos saudáveis em ambientes comunitários (CA-MRSA: community-associated MRSA) Nos dias de hoje, as comunidades médica e científica são desafiadas com a emergência de S aureus resistentes aos glicopeptídeos (vancomicina e teicoplanina), uma das últimas escolhas para o tratamento intravenoso de infecções causadas por cepas de MRSA A partir deste novo cenário, observou-se o surgimento de VRSA (vancomycin-resistantS aureus), VISA (vancomycin-intermediate S aureus) e hVISA (hetero-VISA)MRSA constitui-se em um dos principais agentes de infecções em pacientes atendidos no Hospital Universitário de Londrina, PR Assim, o objetivo deste trabalho foi determinaro perfil de sensibilidade a antimicrobianos, fatores de virulência e diversidade genética de isolados clínicos de MRSA Foram utilizados 123 isolados clínicos de MRSA de pacientes assistidos no HU, entre janeiro de 21 e junho de 213 A maioria dos isolados foi obtida de amostras de sangue (43/123; 34,95%), seguido por fragmento de tecido (21/123; 17,7%) Todos os isolados foram sensíveis a linezolida e teicoplanina e resistentes à penicilina e cefoxitina A maioria dos isolados apresentou resistência a oxacilina (116/123; 94,31%), eritromicina (116/123; 94,31%), ciprofloxacina (114/123; 92,68%) e clindamicina (113/123; 91,87%)A maioria dos isolados (73; 59,35%) foi sensível à vancomicina e destes, 62 (5,41%) apresentou CIM (Concentração Inibitória Mínima) de 2,µg/mLTodos os isolados apresentaram o gene icaA, e 112 isolados (91,5%) apresentaram os genes hlb e hld Em relação à tipagem de SCCmec, o tipo II foi o mais freqüente entre os isolados (66; 53,66%), seguido pelo SCCmec tipo I (28; 22,76%) A partir da genotipagem por rep-PCR e análise do dendograma, os isolados foram reunidos em 17 grupos, denominados de A à Q, adotando-se 65% de similaridade O grupo E reuniu a maioria dos isolados (5), seguido pelo grupo F (16) e H (14) Assim, observa-se que não há disseminação clonal de MRSA no HU, e que os isolados apresentam resistência heterogênea aos antimicrobianos O trabalho contribuirá para adoção de medidas de controle da infecção hospitalar, assim como embasamento para o tratamento de infecções por S aureusItem Caracterização de leveduras isoladas de dialisato e morcegos urbanosBotelho, Natália de Souza; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Svidzinski, Terezinha I. Estivalet; Panagio, Luciano AparecidoResumo: As leveduras são organismos eucariotos, unicelulares, presentes nos mais diversos ambientes Em pessoas saudáveis, as leveduras vivem como comensais, mas, na presença de certos fatores de risco esses microrganismos podem levar ao desenvolvimento de infecções localizadas ou sistêmicas Em vista do exposto, o principal objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial patogênico de leveduras isoladas de dois ambientes distintos Nos dois trabalhos, a identificação das leveduras foi realizada através de métodos fenotípicos padrões Em geral, foram ainda analisados os seguintes parâmetros: perfil de sensibilidade a agentes antimicrobianos, fatores de virulência como, atividade de protease, fosfolipase e hemolisina, e formação de biofilme No primeiro trabalho, foi estudada uma amostra de levedura isolada de dialisato utilizado em unidade de hemodiálise Essa amostra foi identificada como Cfamata No segundo trabalho, foi realizado o estudo de leveduras presentes na porção inferior do trato gastrintestinal de morcegos Foram encontradas as seguintes espécies: Clusitaneae, Ckrusei, Cparapsilosis, Cguilliermondii, Saccharomyces cerevisiae, Cpellliculosa Independente da origem dos isolados, todos apresentaram atividade de protease, foram negativos para fosfolipase e apresentaram capacidade para formação de biofilme Os valores médios dos isolados não diferiram significativamente entre os ensaios de protease e biofilme, embora três isolados de dialisato (D9, D12sa, D16) apresentassem alta capacidade de formação de biofilme Em relação a atividade hemolítica, todos os isolados de morcego produziram alfa-hemólise em presença de sangue de carneiro Somente duas amostras provenientes de dialisato apresentaram alfa-hemólise (D12 e D12sa) e as demais foram consideradas positivas (beta-hemólise) Os resultados obtidos no nosso trabalho sugerem, de uma maneira geral, um potencial patogênico para as leveduras isoladas de dialisato Outros estudos deverão ser realizados para avaliar o papel dessas espécies no desenvolvimento de processos infecciosos no homem Com relação os morcegos urbanos, a presença de leveduras potencialmente patogênicas nas fezes desses animais aumenta os riscos de infecção em pacientes debilitados Portanto a presença de morcegos em centros urbanos ou habitados deve ser controlada, uma vez que podem ser fontes de infecção humanaItem Caracterização parcial de fator(es) hemolítico(s) de Arthrographis kalraeNagashima, Luciene Airy; Itano, Eiko Nakagawa [Orientador]; Ono, Mário Augusto; Nogueira, Marco AntonioResumo: No presente estudo, componentes solúveis de Arthrographis kalrae foram investigados em relação à imunogenicidade/antigenicidade e atividade hemolítica Para avaliação da imunogenicidade/antigenicidade, o estudo foi realizado utilizando cell-free antigens (CFA) e antígenos sonicados e anticorpos anti-CFA de coelho por imunodifusão (ID)/ELISA/western blotting e também análise de frações cromatográficas de Sephadex G-1 e G-2 por ELISA A atividade hemolítica foi estudada em duas etapas: na primeira foram utilizadas hemácias de carneiro e, na segunda, hemácias de camundongo e anticorpos de camundongo anti-CFA e anti-hemácia de camundongo sensibilizada com CFA (anti-He-CFA) Na segunda etapa, amostras de CFA na forma nativa, CFA aquecido (56 oC, 3 min) ou tratado com anti-He-CFA e as frações obtidas por cromatografia de CFA em coluna de Sephadex G-2, foram analisadas pelo teste de hemólise Adicionalmente, a reatividade de anti-He-CFA e anti-CFA com antígeno CFA foi analisada por ELISA utilizando frações de cromatografia de G-2 ou por western blotting Os resultados da primeira etapa demonstraram um pico de reatividade das frações de CFA em Sephadex G-1 e dois picos de reatividade em Sephadex G-2 com soro imune de coelho Os resultados de western blotting mostraram que anti-CFA de coelho reconheceram várias bandas com MM distintas, sendo o perfil diferenciado em relação ao preparado antigênico A análise de atividade hemolítica resultou em lise das hemácias de carneiro Utilizando eritrócitos de camundongo foi observada atividade lítica similar com CFA na forma nativa e CFA aquecido, e diminuição da atividade com amostras de CFA tratadas com anti-He-CFA, sugerindo especificidade dos anticorpos aos fatores responsáveis pela hemólise Atividade hemolítica foi observada nas frações obtidas por cromatografia em Sephadex G-2, também positivas com IgG de camundongo anti-He-CFA por ELISA Western blotting resultou em duas bandas principais com MM ~252 kDa e ~79 kDa reconhecidas por IgG de camundongo anti-He-CFA Conclui-se que o fungo A kalrae libera pelo menos dois componentes principais com antigenicidade, imunogenicidade e atividade hemolítica, os quais são termoestáveis e com MM > 2 kDa e ~79 kDaItem Detecção dos genes de hemolisinas em isolados uropatogênicos de Proteus mirabilis e caracterização físico-quimica da hemolisina HpmACestari, Silvia Emanoele; Pelayo, Jacinta Sanchez [Orientador]; Linhares, Rosa Elisa C.; Venâncio, Emerson JoséResumo: Infecção do trato urinário (ITU) é uma das infecções bacterianas mais freqüentemente documentados em humanos Proteus mirabilis está associado principalmente a ITU em indivíduos com anormalidade urinária ou relacionada com cateterismo vesical e que podem ser difíceis de tratar, devido à formação de cálculos na bexiga e rins Estes cálculos são formados devido à presença de urease sintetizada pelas bactérias Outro fator importante é que a hemolisina HpmA produzida por P mirabilis é utilizada pelas bactérias para danificar os tecidos renais Amostras de Proteus spp também podem expressar hemolisina HlyA, semelhante à encontrada em Escherichia coli Um total de 211 isolados uropatogênicos de P mirabilis foram analisados para detectar a presença dos genes hpmA e hpmB pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) e dot blot e o gene hlyA por PCR Os genes hpmA e hpmB foram expressos pela técnica RT-PCR e dois isolados de P mirabilis foram sequenciados para os genes hpmA e hpmB A presença dos genes hpmA e hpmB foi confirmada por PCR em 25 (97,15%) dos 211 isolados O dot blot confirmou a presença dos genes hpmA e hpmB nos isolados que não amplificaram na PCR Nenhum dos isolados estudados apresentou o gene hlyA Os genes hpmA e hpmB que foram sequenciados apresentaram 98% de identidade com os mesmos genes da amostra de P mirabilis HI432 Este estudo mostrou que a técnica de PCR apresenta boa sensibilidade para detectar os genes hpmA e hpmB de P mirabilisItem Análise de isolados clínicos de herpes simplex associados à resistência aos antiviraisBomfim, Weslei Andrade; Nozawa, Carlos [Orientador]; Almeida, Fernanda Simões de; Faccin-Galhardi, Ligia CarlaResumo: Infecções causadas pelo vírus herpes simplex (HSV) são tratadas com antiviral análogo de nucleosídeo, sendo o de escolha o aciclovir (ACV) Entretanto, em algumas circunstâncias, por exemplo, após tratamento prolongado, pode ocorrer a seleção de cepas resistentes Esta resistência ao ACV é geralmente adquirida através de mutações no gene da timidina quinase (tk) (ul23), não sendo incomum a resistência cruzada com outros análogos de nucleosídeos dependentes da tk viral, como o penciclovir (PCV) e a brivudina (BVDU) Como tratamento opcional, são empregados os fármacos que não dependem da tk viral para sua ação, porém inibem o gene da DNA polimerase (ul3), como o foscarnet (FOS) e o cidofovir (CDV), compostos estes correlacionados à frequentes efeitos secundários tóxicos Este trabalho teve o intuito de estudar 25 amostras clínicas virais que foram adaptadas em cultura celular e avaliar as cepas de HSV-1 frente aos antivirais de ação dependente dos genes ul23 e ul3, por meio dos testes de MTT e ensaio de redução de plaque, utilizando a concentração inibitória de 5% (CI5), comparativamente às cepas padrões Foram identificadas quatro cepas resistentes a pelo menos um dos antivirais, sendo que três apresentaram resistência cruzada ao ACV, PCV e BVDU (análogos de nucleosídeos de ação dependente do gene ul23) Nenhum isolado apresentou resistência aos antivirais FOS e CDV, de ação dependente do gene ul3Item Perfil de adesão à superfícies biótica e abiótica por isolados clínicos e morfotipos derivados de switching fenotípico de Candida tropicalisSouza, Cássia Milena de; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Furlaneto-Maia, Luciana; Miranda-Sapla, Milena MenegazzoResumo: Candida tropicalis é um dos agentes etiológicos mais frequente em infecções fúngicas humanas O evento de switching fenotípico em C tropicalis está associado a alterações no padrão de virulência, no entanto, não existem dados acerca do papel de switching na habilidade de adesão de C tropicalis O presente estudo teve como objetivo avaliar a adesão de isolados clínicos de C tropicalis à superfícies de poliestireno, células HeLa e Vero, e avaliar o efeito do estado de switching na adesão de C tropicalis a estas superfícies Para tal, foram empregados três sistemas de switching que compreendem isolados clínicos (497, 11 e 3357), linhagens variantes ( Morotipos Crepe e Rugosa do sistema 497; Morfotipos Crepe e Flocada do sistema 11 e o Morfotipo variante de Centro irregular do sistema 3357) e revertentes derivados de switching (Morfotipos Revertente de Crepe e Revertente de Rugosa do sistema 497; Morfotipos Revertente de Crepe e Flocada do sistema 11 e o Morfotipo Revertente de Centro irregular do sistema 3357) Os isolados diferiram quanto a capacidade de adesão às superfícies testadas, no entanto foi observada maior adesão ao poliestireno, seguido por HeLa e Vero Os isolados 11 e 3357 exibiram maior número de leveduras aderidas por HeLa em relação a células Vero No entanto, foi observada correlação perfeita (r² 1, p ,1) entre células HeLa e Vero quanto o número de células de C tropicalis por célula epitelial O switching alterou o perfil de adesão de C tropicalis à superficies bióticas e abiótica, uma vez que as linhagens variantes e revertentes apresentaram variações no perfil de adesão às superfícies testadas Em poliestireno, foi evidênciado um aumento na capacidade de adesão em decorrência deste evento epigenético, particularmente pelos morfotipos variantes, o que pode estar associado a maior capacidade de morfogênese Por outro lado, a maioria (8%) dos morfotipos revertentes exibiram redução na capacidade de adesão comparativamente ao observado para seus respectivos variantes O estado de switching também alterou o perfil de adesão de morfotipos de C tropicalis a linhagens celulares HeLa (7%) e Vero (6%) sendo verificado um aumento de adesão em relação as linhagens parentais Os morfotipos revertentes (6%) foram mais aderentes a ambas linhagens celulares, comparativamente aos parentais Além disso, 8% dos revertentes apresentaram número superior de leveduras aderidas por célula HeLa, em relação aos seus respectivos variantes O mesmo padrão de adesão foi observado em células Vero A maioria dos morfotipos (92,3%) apresentou maior afinidade a linhagem HeLa, no entanto o padrão de adesão dos morfotipos entre ambos os modelos de infecção in vitro foi perfeitamente correlato (Correlação de Pearson: r2 1, p <,1) Concluímos que o estado de switching altera a capacidade de adesão de C tropicalis, sendo que a maioria dos morfotipos de switching apresentou aumento na capacidade adesão tanto em superfície abiótica (poliestireno) quanto em células epiteliais A adesão acentuada dos morfotipos variantes em poliestireno, bem como dos revertentes à células epiteliais sugerem que o switching possa estar relacionado a ampliação da plasticidade do patógeno durante esta etapa inicial de colonização e infecçãoItem Filogenia de rizóbios utilizados em inoculantes comerciais brasileiros, com base no sequenciamento do gene ribossomal 16SPereira, Pâmela Menna; Hungria, Mariangela [Orientador]; Barcellos, Fernando Gomes; Furlaneto, Márcia CristinaResumo: Rizóbios são bactérias que, quando em simbiose com determinadas plantas da família Leguminosae, são capazes de fixar nitrogênio atmosférico e convertê-lo a uma forma assimilável pela planta Contudo, apesar da importância ecológica e econômica, os rizóbios têm sido relativamente pouco estudados Baseado nos dados de seqüênciamento do gene 16S RNAr estão definidos atualmente, cinco gêneros de rizóbios, Azorhizobium, Bradyrhizobium, Mesorhizobium, Rhizobium e Sinorhizobium e mais de 4 espécies, compreendidos na subclasse alfa das Proteobacterias Vários estudos vêm sendo conduzidos, a fim de determinar a diversidade existente entre os rizóbios, bem como estabelecer relações filogenéticas com outras bactérias e estruturar hipóteses quanto à evolução simbiótica Nesse contexto, uma coleção de 68 estirpes de rizóbios provenientes da coleção SEMIA (Seção de Microbiologia Agrícola, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária), isoladas de 63 espécies de leguminosas, foram analisadas visando determinar diferenças morfológicas, fisiológicas e genéticas A variabilidade genética bem como suas relações filogenéticas foram determinadas com base na análise das seqüências do gene 16S RNAr As estirpes foram isoladas de leguminosas pertencentes às três subfamílias e 17 tribos da família Leguminosae Foi possível observar que 25% das estirpes apresentaram reação ácida em meio de cultura contendo extrato de levedura e manitol (YMA) e, em geral, foram caracterizadas como altas produtoras de muco; 7% das estirpes apresentaram reação alcalina em YMA, sendo a maioria produtora de pouco muco, e apenas três estirpes não alteraram o pH do meio YMA Em relação aos parâmetros morfológicos avaliados (cor, transparência, bordas e elevação), nenhum padrão contrastante foi observado quanto aos dois grupos fisiológicos dominantes O dendrograma resultante após a análise das seqüências do 16S RNAr, revelou heterogeneidade e dividiu as estirpes em nove grupos principais, reunidos em um nível de similaridade de 77,8%, sendo sete deles relatados aos gêneros/espécies: Bradyrhizobium japonicum, B elkanii, Rhizobium tropici/Agrobacterium (reclassificado como Rhizobium), R leguminosarum, Sinorhizobium meliloti/S fredii, Mesorhizobium ciceri/M loti, e Azorhizobium caulinodans Contudo algumas estirpes diferiram em mais de 15 nucleotídeos das estirpes-tipo de cada espécie de rizóbio, sugerindo que podem representar novas espécies Dois outros grupos incluíram bactérias similares aos gêneros Methylobacterium e Burkholderia, e a presença dos genes nifH e/ou nodC foi confirmada nessas estirpes Diversas estirpes foram capazes de nodular leguminosas de diferentes tribos e subfamílias O elevado grau de diversidade observado nesse estudo enfatiza que os trópicos são um importante reservatório de genes fixadores de nitrogênioItem Comparação da qualidade bacteriológica de água mineral, água de poços artesianos e água de abastecimento municipal : potencial patogênico de pseudomonas aeruginosa isoladasSilva, Marie Eliza Zamberlan da; Dias Filho, Benedito Prado [Orientador]