02 - Mestrado - Microbiologia
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Item Geraniol potencializa o efeito do fluconazol em células planctônicas e sésseis de Candida tropicalis resistente a azol: análises in vitro e in vivo(2025-03-18) Rodrigues, Gislaine da Silva; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Ishida, Kelly; Medeiros, Cássio Ilan SoaresCandida tropicalis é considerada um patógeno oportunista, causando doenças que variam de infecções superficiais a infecções disseminadas com risco de vida. A capacidade desta levedura de formar biofilmes e desenvolver resistência a antifúngicos representa um desafio terapêutico significativo. Neste estudo, foi avaliado o efeito do geraniol (GER), isolado e em combinação com fluconazol (FLZ), em células planctônicas e sésseis de C. tropicalis resistente aos azóis. GER apresentou um efeito fungicida dependente do tempo nas células planctônicas, comprometendo a integridade da membrana celular. Além disso, o GER inibiu o efluxo da proteína Cdr1 e as análises de docking molecular indicaram afinidade de ligação do GER à proteína Cdr1 de C. tropicalis. O GER apresentou sinergismo com FLZ contra as células planctônicas e sésseis, inibindo a adesão das células da levedura e a viabilidade dos biofilmes formados em superfícies abióticas durante 48 h. Biofilmes de C. tropicalis tratados com GER, isolado ou combinado com FLZ, exibiram alterações morfológicas e ultraestruturais, incluindo redução das camadas de células bem como a presença de células murchas. Além disso, GER isolado e combinado com FLZ não causaram toxicidade, e ambos os tratamentos prolongaram a sobrevivência das larvas de Galleria mellonella infectadas com C. tropicalis resistente aos azóis. Esses achados indicam que a combinação de GER e FLZ pode ser uma estratégia promissora para controlar infecções por C. tropicalis resistentes aos azóis.Item Nanopartículas de prata biogênicas e sinvastatina: avaliação antifúngica e desenvolvimento de formulação contra Sporothrix brasiliensis e fungos de importância médica(2025-06-17) Reis, Maria Gabriela Martins dos; Panagio, Luciano Aparecido; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Camilios Neto, DoumitO crescente número de casos de resistência fúngica às terapias convencionais tem impulsionado a busca por novas estratégias terapêuticas. Dentre as infecções fúngicas, a esporotricose destaca-se por sua ampla distribuição, crescente incidência e dificuldade de tratamento. Outras infecções fúngicas superficiais abordadas neste trabalho também têm despertado preocupação na saúde pública. O objetivo desse estudo consiste em produzir, caracterizar e avaliar a atividade antifúngica de nanopartículas de prata biogênicas e da sinvastatina frente a fungos causadores de infecções subcutâneas e superficiais, bem como desenvolver uma formulação dermatológica tópica voltada para uso veterinário. Neste estudo, avaliou-se a atividade antifúngica de nanopartículas de prata (AgNPs) sintetizadas a partir do fungo Lichtheimia ornata, bem como de AgNPs extraídas da catuaba, obtidas da empresa GRAL bioativos, além da sinvastatina (SIM), isolada e em combinação com as AgNPs, frente a espécies de importância clínica como Sporothrix brasiliensis, Malassezia pachydermatis. Trichophyton mentagrophytes, Microsporum canis e Nannizzia gypsea. Inicialmente, as AgNPs produzidas a partir de L. ornata foram caracterizadas por espectroscopia UV-Vis, FTIR, fluorescência de raios X por dispersão em energia (EDXRF), espalhamento dinâmico de luz (DLS) e potencial zeta, revelando tamanho médio de 70 nm, morfologia predominantemente esférica e estabilidade coloidal. A atividade antifúngica foi avaliada por microdiluição em caldo, determinando-se a concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM) e a interação entre compostos por meio do ensaio checkerboard. Os resultados demonstraram efeito sinérgico entre as AgNPs e a sinvastatina frente à maioria das espécies testadas. Adicionalmente, avaliou-se a ação dos compostos isolados sobre biofilmes previamente formados por S. brasiliensis e M. pachydermatis. Todos os tratamentos apresentaram eficácia, promovendo redução da viabilidade fúngica. As formulações tópicas desenvolvidas foram analisadas quanto à estabilidade físico-química e às características organolépticas, demonstrando-se adequadas para aplicação tópica. Após o desenvolvimento das formulações, realizou-se o ensaio de curva de crescimento e morte para avaliação da eficácia antifúngica ao longo do tempo. Dentre as formulações testadas, F5 (AgNP de L. ornata + sinvastatina) e F6 (AgNP de catuaba + sinvastatina) apresentaram os melhores resultados, mantendo a viabilidade fúngica reduzida durante o período de 48 horas. A formulação F6 apresentou desempenho superior, mantendo a carga fúngica de S. brasiliensis e M. pachydermatis praticamente indetectável em todos os tempos avaliados. Os dados obtidos indicam que a associação de AgNPs biogênicas com sinvastatina é uma estratégia promissora para o desenvolvimento de terapias antifúngicas tópicas voltadas ao controle de infecções fúngicas.Item Aspectos sobre o arsenal genético de isolados de Bacillus spp. e controle de Meloidogyne javanica em condições in vitro e in vivo(2025-02-28) José, Fauzze Guilherme de Mântova; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Camilios Neto, Doumit; Silva, Santino Aleandro da; Noriler, Sandriele Aparecida; Gaeta, Marcos Letaif; Machado, Andressa Cristina ZamboniOs fitonematoides, especialmente os nematoides das galhas (Meloidogyne spp.), representam uma ameaça significativa para a agricultura, causando perdas em culturas economicamente importantes, como a soja. Os nematoides do gênero Meloidogyne são responsáveis pela formação de galhas nas raízes, prejudicando o desenvolvimento da planta e absorção de nutrientes. O manejo integrado é a melhor opção para combater esses fitoparasitas e consiste na utilização de diversos métodos juntos. Entre eles, o controle biológico tem ganhado destaque nos últimos anos. Neste estudo, foi avaliada a eficácia de isolados de Bacillus spp. no controle de M. javanica e sua compatibilidade com as bactérias de importância agronômica Azospirillum brasilense e Bradyrhizobium japonicum. Foram realizados experimentos em condições de casa de vegetação para avaliar o controle populacional do fitonematoide e o desenvolvimento das plantas, utilizando como controle o padrão comercial biológico Arvatico® (B. velezensis CNPSo 3602). A atividade nematicida foi avaliada in vitro utilizando, também, o padrão comercial químico Ilevo® (Fluopiram). Os resultados indicam que o isolado B. subtilis B1 é compatível in vitro com A. brasilense e B. japonicum, destacando-se possivelmente para o uso integrado com inoculantes à base dessas bactérias. Todos os isolados reduziram significativamente (p < 0,05) a população de M. javanica em comparação à testemunha. No entanto, as variações encontradas nos dois ensaios sugerem a necessidade de mais experimentos para uma completa compreensão dos efeitos. Este estudo destaca o potencial dos isolados como agentes de biocontrole para M. javanica, contribuindo para o desenvolvimento de novos produtos biológicos.Item Otimização de cultivo submerso do agente biológico Beauveria bassiana(2025-02-07) Salomão, Julio Martins; Andrade Filho, Galdino; Pileggi, Marcos; Freitas, Emanuelle Neiverth deO setor do agronegócio desempenha um papel crucial na economia brasileira, representando 21,5% do PIB em 2024. No entanto, a produção de grãos sofreu uma queda em relação à safra anterior, principalmente devido a períodos prolongados de baixa pluviosidade, que facilitaram o estabelecimento de diversas pragas e doenças em culturas estressadas. Os pesticidas químicos são comumente utilizados para o controle dessas pragas; entretanto, seu uso excessivo pode levar ao desenvolvimento de resistência e causar impactos ambientais. Uma alternativa sustentável é o Manejo Integrado de Pragas (MIP), que inclui métodos de controle biológico, como o uso de fungos entomopatogênicos. Dentre esses fungos, Beauveria bassiana é amplamente utilizado em produtos biológicos registrados no Brasil para o controle de insetos. Este estudo teve como objetivo otimizar o meio de cultivo para a produção de blastósporos de B. bassiana por fermentação submersa. A cepa de B. bassiana foi cultivada em frascos agitados, e o meio de cultura foi otimizado utilizando o delineamento Plackett-Burman, seguido de experimentos de validação. As condições otimizadas resultaram em alta produção de blastósporos (2,42 × 10⁹ blastósporos mL⁻¹) e biomassa fúngica (33,13 mg mL⁻¹). Testes de validação do meio otimizado foram realizados em um biorreator de tanque agitado. A manutenção do pH em 5,5 e do oxigênio dissolvido em 30% ao longo do processo resultou em uma contagem de blastósporos de 1,39 × 10⁹ blastósporos mL⁻¹, 3,58 × 10⁹ UFC mL⁻¹ e biomassa fúngica de 21,15 mg mL⁻¹ após quatro d de cultivo.Item Atividade antilisterial de nanopartículas biogênicas de selênio (Bio-SeNPs)(2025-04-28) Ormonde, Lorena Pilla Portela; Furlaneto, Marcia Cristina; Souza, Cássia Milena de; Rocha, Sérgio Paulo Dejato daListeria spp. são amplamente encontradas na natureza, incluindo ambientes de processamento de alimentos, onde a formação de biofilmes representa risco à segurança alimentar. A listeriose, causada por L. monocytogenes, está associada a altas taxas de hospitalização e mortalidade. Além disso, isolados de Listeria resistentes a antibióticos têm sido identificados. Nesse cenário, as nanopartículas de selênio (SeNPs) emergem como uma alternativa para o controle desse patógeno. Portanto, este estudo teve por objetivo avaliar a atividade antimicrobiana da nanopartícula biogênica de selênio (Bio-SeNP) obtida por biossíntese extracelular contra sete isolados de Listeria, incluindo L. monocytogenes CLIST 2042 3b, L. monocytogenes 2048, L. ivanovii CLIST 2046, L. ivanovii CLIST 2047, L. innocua CLIST 2052, L. innocua CLIST 2053 e L. seeligeri CLIST 2067. Para a síntese da Bio-SeNP, utilizou-se o sobrenadante livre de células (CFS) de Enterococcus durans MF5. A atividade antilisterial foi avaliada por meio de ensaio de poço difusão, microdiluição em caldo para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM), além de análise da cinética de crescimento, citometria de fluxo e microscopia de fluorescência utilizando o marcador iodeto de propídio. A capacidade de formação de biofilme por Listeria spp. foi avaliada em microplacas de poliestireno assim como os efeitos da Bio-SeNP em biofilmes formados e pré-formados. Os resultados obtidos no ensaio de poço difusão demonstraram que nas concentrações de 5000 e 2500 μg/mL, todos os isolados tiveram seu crescimento inibido, com halos de inibição entre 8 e 20 mm. Os valores de CIM e CBM variaram de 78 μg/mL a 1250 μg/mL. A Bio-SeNP exibiu efeito bactericida, promovendo morte celular de forma dependente do tempo, com o menor tempo de ação observado em 60 minutos e o mais longo em 24 horas. Análises de citometria de fluxo mostraram que células dos isolados de Listeria apresentaram aumento do tamanho e granularidade celular após exposição à Bio-SeNP. A análise de microscopia de fluorescência revelou que a Bio-SeNP pode atuar comprometendo a integridade da membrana bacteriana. Todos os isolados de Listeria foram capazes de formar biofilme em microplacas de poliestireno, sendo que a exposição à Bio-SeNP resultou em redução na formação de biofilmes (45±0,2 – 66,1±0,9%) e de biofilmes pré-formados (43,8±2,9 – 50,5±0,3%). A partir destes resultados, conclui-se que a Bio-SeNP, produzida de maneira sustentável, possui atividade antilisterial e antibiofilme, destacando sua aplicabilidade para a prevenção e controle de Listeria spp. nas áreas de saúde pública e na indústria alimentícia.Item Diagnóstico de COVID-19 em um laboratório de referência do estado de São Paulo: análises epidemiológica e espaço-temporal(2025-02-10) Aquino, Marta Xavier Alfredo; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Galhardi, Lígia Carla Faccin; D'Andrea, Lourdes Aparecida Zampieri; Saeki, Erika KushikawaSevere acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) é o agente etiológico da Coronavirus disease 19 (COVID-19), doença diagnosticada na China em dezembro de 2019, foi reconhecida como pandemia pela Organização Mundial de Saúde (OMS) em março de 2020 e causou impactos jamais vistos. O presente estudo teve como objetivo identificar o perfil epidemiológico e o padrão de distribuição espacial dos casos confirmados de infecção por SARS-CoV-2 pelo teste de RT- qPCR realizado em um laboratório de referência. As amostras de swabs de nasofaringe e orofaringe, entre outros materiais recebidos pelo CLR IAL PP V para diagnóstico da COVID-19, foram processadas para análise por RT qPCR (Quant Studio 5, Thermo Scientific®). O período de estudo foi de setembro de 2020 a outubro de 2022. Para isso, foram utilizados kits de extração rápida e automatizada de RNA viral e os kits Biomol OneStep/COVID-19 (IBMP) e molecular SARS-CoV-2 (E) (Bio-Manguinhos) para detecção de SARS-CoV-2, além do sequenciamento viral realizado pelo LEIAL. Foram analisadas características como sexo, idade e tempo de liberação dos resultados das amostras recebidas. Os dados foram obtidos no Sistema de Gerenciamento de Ambiente Laboratorial (GAL). No período de estudo foram analisadas 117.331 amostras, das quais 37.439 (31,9%) apresentaram resultado detectável para SARS-CoV-2, 79.860 (68,06%) não detectáveis e 32 (0,02%) tiveram resultado inconclusivo. As amostras com resultado detectável, 55% foram obtidas em pacientes do sexo feminino e 45% em pacientes do sexo masculino. A faixa etária mais acometida foi de 20 a 49 anos. Quanto ao tempo médio em dias de liberação de resultados para COVID-19 foi de 1,28 no CLR IAL PP V no período de estudo, sendo 1,75 em 2020, 1,0 em 2021 e 1,1 em 2022. Das 25 amostras sequenciadas em 2020, as variantes identificadas foram B.1.1.28 em catorze (14) amostras (56,0 %), B.1.1.33 em oito (8) amostras (32,0 %). Foi sequenciada 1 amostra de cada uma das variantes B.1 (4%), B.1.1 (4%) e P.2 (4%) totalizando 12%. Em 2021, foram sequenciados 104 vírus e entre estes vírus, as variantes encontradas mais frequentemente foram P.1 em 52 amostras (50,0%) e P.2 em 15 amostras (14,4%). Em menor quantidade foram encontradas as variantes AY.101, identificadas em 6 amostras (5,8%), AY.43.1 identificadas em 6 amostras (5,8%), B.1.1.28 em 4 amostras (3,8%), B.1.1.7 em 4 amostras (3,8%) e BA.1.1 em 3 amostras (2,9%). As variantes AY.99.2, BA.1, BA.1.14, BA.1.15 e P.1.14 foram identificadas em duas (2) amostras cada (1,9%), totalizando 9,5%. Outras variantes foram encontradas em número mais limitado, isto é, em apenas uma (1) amostra cada (1%): AY.43.2, AY.75.2, AY.99.1 e P.1.8, e totalizaram 4% de amostras sequenciadas em 2021. A distribuição espacial da COVID-19 na região ocorreu de forma heterogênea. A ação do CLR IAL PP V como laboratório de saúde pública foi imprescindível como resposta ao tipo de emergência enfrentada com a pandemia de COVID-19.Item Avaliação do potencial de agentes biológicos e seus produtos no controle da cancro cítrico causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri(2006-02-06) Camargo, Flávia Regina Spago; Andrade Filho, Galdino; Mello, João Carlos Palazzo de; Homechin, MartinO Cancro cítrico asiático, causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) (Hasse), é uma doença mundialmente conhecida na maioria das áreas de produção comercial de citrus. Estratégias limitadas existem para o controle do cancro cítrico nos cultivares mais susceptíveis. A aplicação de microrganismos como agentes para controlar a doença é um grande progresso ecológico para solucionar o problema. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação e bactérias antagonistas (EC, FRC, LV e LN) e seus produtos (suspensões bacterianas, sobrenadantes livre-de-células e a fração acetato de etila obtida pelo tratamento do sobrenadante de LN com solventes orgânicos) foram testados para o controle da população de Xac, da incidência e severidade do cancro cítrico.em folhas de laranja(Citrus sinensis cv. Valencia). Os produtos bacterianos foram pulverizados nas folhas ou deixados em contato direto com as mesmas antes (pré) ou após (pós) a inoculação de Xac. Os resultados mostraram uma redução na população de Xac quando a suspensão bacteriana da cepa EC foi aplicada. Em outro experimento todas as cepas reduziram o número de lesões e a área de lesão quando as folhas foram tratadas com o sobrenadante livre-de-células, também foi observado o mesmo efeito quando as folhas foram tratadas com a fração de acetato de etila da cepa LN. Todos os efeitos inibitórios foram observados quando as folhas foram tratadas com os produtos bacterianos após a inoculação de Xac. Esses resultados mostram que bactérias antagonistas e seus produtos podem ser usados no controle do cancro cítrico.Item Atividade antimicrobiana de nanopartícuas de silênio sintetizadas a partir de extratos de Allium cepa, Malpighia emarginata e Vernonia condensata(2021-02-23) Souza, Lucas Marcelino dos Santos; Nakazato, Gerson; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Medeiros, Leonardo PintoA resistência bacteriana aos antimicrobianos é um grande problema para a saúde pública e a nanotecnologia vem sendo empregada no controle do crescimento bacteriano, incluindo os multirresistentes. Nesse contexto estudos com nanopartículas de diferentes elementos, principalmente metais, como: prata, ouro e ferro, apresentam desejável atividade antimicrobiana. Outro elemento que vem se destacando é o selênio (Se), cuja nanopartículas possui alta bioatividade e ação antibacteriana. Portanto, o objetivo do trabalho foi realizar a biossíntese de nanopartículas de selênio (SeNps) a partir de extratos de três plantas: Allium cepa (cebola), Malpighia emarginata (Acerola), e Vernonia condensata (boldo-baiano). As nanopartículas sintetizadas foram caracterizadas por dynamic light scattering (DLS) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foram utilizadas. A atividade antibacteriana foi avaliada pelos métodos de microdiluição em caldo e curva de sobrevivência contra cepas padrão Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) BEC 9393, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 25922. Os efeitos citotóxicos das SeNps sintetizadas foram avaliados através da capacidade hemolítica. As SeNps apresentaram tamanho entre 219 a 340 nm e morfologia majoritariamente esférica, também tiveram ação contra todas as bactérias Gram positivas com CIM variando de 6,125 a 98 μg/ml, porém sem ação nas Gram negativas testadas. E em relação à hemólise as CC50 variaram de 0,82 a 2,1 mg/ml. Esses resultados indicam que elas podem ser usadas contra bactérias Gram positivas por possuírem boa atividade antimicrobiana, além de possuírem baixa concentração hemolítica abrindo uma grande variedade de opções para suas aplicações.Item Efeito da aspirina sobre a resposta inflamatória e interação de células raw 264.7 com vesículas extracelulares secretadas por Trypanosoma Cruzi(2022-06-24) Santos, Lucas Felipe; Pinge Filho, Phileno; Kobayashi, Renata Katsuko Katayma; Toledo, Karina Alves deDurante a infecção por Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, a resposta imunológica é importante para o controle do parasitismo e sobrevida do hospedeiro. Macrófagos são células com reconhecida ação tripanocida e que produzem diversos mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO) e eicosanóides que atuam no controle da carga parasitária e no desenvolvimento da infecção. Contudo, o parasito apresenta mecanismos de evasão, como a liberação de vesículas extracelulares, que ao carrearem moléculas funcionais, sinalizam para células do hospedeiro, modulando a resposta inflamatória favorecendo o parasito. Os processos de invasão celular e controle da carga parasitária estão sob forte influência de mediadores lipídicos, especialmente aqueles derivados das vias das ciclooxigenases 1 e 2 (COX-1/COX2). A aspirina (ASA) é classificada como um antiinflamatório não esteroidal que atua no bloqueio de COX-1/COX2 responsáveis pela conversão do ácido araquidônico em eicosanóides. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da ASA sobre a ação exercida pelas vesículas extracelulares de T. cruzi cepa Y (EVs-Y). Foram realizados ensaios de viabilidade celular em macrófagos RAW 264.7 tratados com as concentrações de 0,625mM, 1,25mM e 2,5mM de ASA. Após a infecção dessas células foi determinado o índice de internalização do parasito e quantificado a produção de nitrito como estimativa da produção de NO. Análises estatísticas foram realizadas no programa “GraphPad Prism 8”, One-Way ANOVA seguida de teste de Turkey de comparações múltiplas. As concentrações de ASA utilizadas não apresentaram citotoxicidade. Macrófagos expostos à EVs-Y e posteriormente infectados com formas tripomastigotas de T. cruzi apresentaram menor produção de NO e aumento no número de formas amastigotas no citoplasma, demonstrando a modulação exercida pelas EVs-Y em favor do parasito. Surpreendentemente, quando os macrófagos foram tratados com ASA antes da exposição às EVs-Y e subsequente infecção com tripomastigotas, houve maior produção de NO, assim como menor internalização de parasitos e consequente menor presença de formas amastigotas no citoplasma das células, em comparação com os controles. Esses resultados sugerem que EVs-Y modula a resposta de macrófagos em favor do T. cruzi e indicam um papel para COX na modulação imune exercida por EVs-Y.Item Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Escherichia coli de um caso clínico de colite histiocítica ulcerativa canina(2021-05-17) Dibo, Miriam; Nakazato, Gerson; Rocha, Sérgio Paulo Dejato; Sarmiento, Juan Josue PuñoA colite histiocítica ulcerativa (CHU) é uma doença inflamatória intestinal que pode acometer principalmente cães jovens das raças Boxer e buldogue francês, sendo associada à presença de Escherichia coli Aderente-Invasiva (AIEC). Deste modo, o presente estudo teve como objetivo realizar as caracterizações fenotípica e genotípica de isolados de E. coli e sua associação a um CHU em uma fêmea da raça buldogue francês. Neste estudo, foram obtidos 46 isolados de E. coli, sendo todos resistentes a ampicilina, ciprofloxacino, enrofloxacino e sulfametoxazol trimetoprima. Também foram encontradas resistências a amoxicilina-ácido clavulânico, azitromicina, cefazolina, cloranfenicol, gentamicina e tetraciclina. Todos os isolados obtidos foram classificados como multirresistentes e apenas um deles foi positivo no teste fenotípico de produção de beta-lactamases de espectro extendido, pertencendo ao grupo CTX-M-2. Com relação à classificação filogenética de Clermont, a maioria das cepas pertence aos grupos C e B1, enquanto os grupos B2 e F apresentaram apenas um representante cada. Os genes de virulência de E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC) encontrados foram ecpA, fimH, hlyF, iroN, iss, iutA, ompT, sitA e traT. Nenhuma das cepas apresentou capacidade de replicação no interior de macrófagos J774A.1 em 24 horas, no entanto, três cepas apresentaram capacidade de sobrevivência. A cepa 1.4 apresentou nove genes de virulência de ExPEC, ausência de fatores de virulência de E. coli diarreiogênica, e classificação no grupo filogenético B2. Essas características, juntamente com os sintomas apresentados pelo animal, indicam a possibilidade de que infecção por AIEC. No entanto, o teste de sobrevivência e replicação em macrófagos não apresentou resultados conclusivos, sendo necessário realizar os testes fenotípicos de adesão e invasão para confirmação da hipóteseItem Atividade antimicrobiana da fração F4A obtida de cultura de Pseudomonas aeruginosa LV em Staphylococcus aureus(2020-05-19) Gonçalves, Guilherme Bartolomeu; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Tavares, Eliandro Reis; Navarro, Miguel Octavio PérezStaphylococcus aureus é um patógeno relevante nos âmbitos comunitário e de assistência à saúde, conhecido pela dificuldade terapêutica associada à resistência antimicrobiana e à formação de biofilmes. A partir de 1940, S. aureus passou a ter notoriedade global, devido à resistência à penicilina e, em 1961, à meticilina. Como infecções causadas por essa bactéria dificultam a prática clínica, se faz notável a necessidade de pesquisas por novas substâncias antibióticas para tratar os pacientes acometidos. Ao longo da história, produtos naturais, especificamente metabólitos secundários de microrganismos, têm sido usados para combater patógenos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade inibitória da fração F4A, obtida da purificação do sobrenadante de cultura de Pseudomonas aeruginosa cepa LV, sobre células planctônicas e sésseis de S. aureus, as alterações morfológicas causadas nessas células e sua toxicidade para células de mamíferos. Para isso, foram selecionados 26 isolados clínicos de S. aureus da coleção do Laboratório de Biologia Molecular de Microrganismos, da Universidade Estadual de Londrina (UEL). Os valores de CIM de F4A variaram de 1,56 a 6,25 µg/mL; 19 isolados apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) de 3,13 µg/mL (73,1%), 6 apresentaram CIM de 1,56 µg/mL (23,1%) e 1 isolado apresentou CIM de 6,25 µg/mL(3,8%). Concentração bactericida mínima (CBM) de 3,13 µg/mL foi detectada em 84,6% dos isolados (n=21) e 18 apresentaram valores idênticos de CIM e CBM, evidenciando o potencial efeito bactericida da fração. Pela cinética do tempo de morte, observou-se que S. aureus reduziu significativamente o número de unidades formadoras de colônias (UFCs) a partir de 4 h de tratamento com a CIM/CBM de F4A. A microscopia eletrônica de transmissão das cepas de referência tratadas com a CIM/CBM de F4A evidenciou alterações ultraestruturais como: diminuição na eletrodensidade citoplasmática, discreto espessamento e diminuição na compactação da parede celular, inibição da formação de septo e descolamento da membrana citoplasmática. O biofilme de todos os isolados apresentou redução significativa na atividade metabólica nas concentrações de 12,5 e 25 µg/mL. A maioria dos isolados apresentou concentração inibitória mínima para 50% das células sésseis (SCIM50) de 6,25 µg/mL (n=15), seguido de 12,5 µg/mL (n=8), 3,13 µg/mL (n=2) e 25,0 µg/mL (n=1). Para a maior concentração testada (50 µg/mL), a atividade hemolítica foi superior a 3%, enquanto as outras concentrações (25 a 0,1 µg/mL) não ultrapassaram 1% de hemólise; a concentração citotóxica para 50% das células (CC50) LLCMK2 de F4A após 24 h foi de 3,44 µg/mL. Como conclusão, a fração F4A apresentou atividade bactericida contra S. aureus, incluindo atividade antibiofilme. Embora mais estudos sejam necessários em relação à sua toxicidade para células de mamíferos e ensaios in vivo, a fração F4A pode ser promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.Item Avaliação de efeitos da intoxicação aguda pela ocratoxina A em frangos e análise de tratamento com L-triptofano(2021-02-22) Galdino Ricci, Fernando; Itano, Eiko Nakagawa; Hirooka, Elisa Yoko; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Venâncio, JoséA Ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina produzida por Penicillium spp. e Aspergillus spp. que são capazes de contaminar produtos de origem vegetal, muto utilizados na alimentação dos animais. Através da exposição oral, pelo consumo dos alimentos contaminados, a OTA pode afetar vários sistemas dos animais, tais como os sistemas imunológico e gastrointestinal. Os objetivos do presente estudo foram avaliar o impacto da intoxicação pela OTA em pintainhos, e verificar se o tratamento com Ltriptofano pode inibir seus efeitos tóxicos. Após a inoculação de uma dose única de OTA (1,4 mg/kg de peso vivo) em frangos de um dia de idade (Cobb 500), no primeiro dia do experimento, foram administradas quatro doses diárias de L-triptofano (100 mg/kg de peso vivo). No 14º dia foram avaliadas as respostas do sistema imunológico sistêmico e local através de quantificação dos níveis de imunoglobulinas A e Y (IgY/IgA) plasmáticas e presentes no conteúdo cecal, níveis de leucócitos totais circulantes, titulação dos anticorpos vacinais maternos contra o Vírus da Doença de Newcastle (NDV) e contagem do número de células IgA positivas (IgA+) na mucosa do duodeno, além do impacto na mucosa local com a avaliação da morfometria do duodeno. Adicionalmente, foram avaliados alguns parâmetros hematológicos e bioquímicos. Para quantificação de IgA/IgY foi realizado o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) de imunocaptura, a revelação das células IgA+ por imunohistoquímica, a titulação de anticorpos vacinais por ELISA direto, os níveis de leucócitos totais circulantes por contagem (câmara de Neubauer) e a morfometria do duodeno pela mensuração dos tecidos corados com hematoxilina/eosina. Os níveis de IgA/IgY no conteúdo cecal, o número de células IgA+ e a altura das vilosidades e profundidade das criptas do duodeno dos animais contaminados apenas com OTA diminuíram significativamente, assim como os níveis de leucócitos totais circulantes e do hematócrito dos animais contaminados apenas por OTA (p<0,05), o que demonstrou seus efeitos tóxicos na mucosa local e na hematopoiese. O tratamento com L-triptofano foi benéfico para os animais em diversos parâmetros, os animais contaminados com OTA e tratados com L-triptofano tiveram níveis de IgA/IgY do conteúdo cecal, células IgA+ do duodeno e leucócitos totais circulantes similares aos animais do grupo controle, assim como o hematócrito e a altura das vilosidades do duodeno (p>0,05). Conclui-se que a exposição à uma dose alta de OTA no início da vida dos pintainhos induz a alterações na mucosa local e a utilização do tratamento com L-triptofano é válido para diminuir os efeitos prejudiciais da OTA, ao estimular a produção de imunoglobulinas locais e manter a integridade da mucosa.Item Cicatrização de feridas e biacúmulo de prata em ratos wistar tratados topicamente com o antimicrobiano nanopartícula de prata(2020-02-27) Camargo, Larissa Ciappina; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Lonni, Audrey Alesandra Stinghen Garcia; Kobayashi, Renata Katsuko TakayamaInfecções nas feridas dos pacientes com queimaduras, pós-operatório, entre outros, são umas das mais temidas complicações, pois o ferimento atua como um meio de cultura ideal para a colonização e proliferação de microrganismos. Nesses casos a pele que normalmente serve como uma barreira física contra micróbios encontra-se lesionada e precisa ser reparada de forma rápida e adequada. Devido a essa problemática o objetivo do presente trabalho foi formular géis contendo nanopartículas de prata (bio-AgNP) obtidas a partir da biomassa de Fusarium oxysporum, e avaliar a sua atividade antibacteriana, cicatrizante e verificar a ocorrência do bioacúmulo da prata no organismo. Para o teste de cicatrização, foram usados 60 ratos adultos, da raça Wistar, nos quais foi feita uma lesão na região dorsal. As feridas foram tratadas diariamente com as formulações (F250 e F500), a base do produto (componentes da formulação sem bio-AgNP), a sulfadiazina de prata (controle positivo) e com solução fisiológica (controle negativo) de acordo com o grupo experimental. Registros da avaliação macroscópica e coleta do tecido epitelial da lesão foram feitos nos dias: 1°, 5°, 9° e 17° dias após a cirurgia, para avaliação histológica. Os animais tratados tiveram coletados o cérebro, um dos rins, o fígado, testículo, baço e sangue para quantificação de prata por espectrofotometria de absorção atômica. Para a verificação da atividade antimicrobiana dos produtos desenvolvidos foi realizada a técnica de curva de sobrevivência e morte. Os microrganismos testados foram Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. O resultado do ensaio in vitro mostrou que as formulações com bio-AgNP tiveram ação antimicrobiana, assim como o controle positivo (sulfadiazina de prata - SD). Referente à cicatrização, não foram observadas variações significativas entre as médias das áreas das lesões tratadas com as diferentes formulações em relação à solução fisiológica (CTL) e a SD. Quanto ao acúmulo de prata nos diversos órgãos e no sangue, não houve diferença significativa entre o grupo CTL e os grupos experimentais após 17 dias de tratamento, o que indica que os tratamentos com os produtos formulados nãoocasionam acúmulo de prata no organismo. O produto formulado contendo nanopartículas de prata biológicas apresentou potente proteção contra microrganismos, pois diminuiu a carga microbiana na lesão no decorrer dos dias de tratamento. Além disso, mostrou que não interferiu no proceso de cicatrização e não resulta em acúmulo de prata nos órgãos estudados, sendo uma alternativa para o tratamento de pacientes com feridas.Item Alterações celulares e moleculares de morfotipos de Candida tropicalis pré e pós exposição ao fluconazol(2022-01-28) Santos, Murilo Moreira dos; Furlaneto, Márcia Cristina; Ishida, Kelly; Panaggio, Luciano AparecidoCandida tropicalis é uma das 15 espécies do gênero Candida que são patogênicas ao ser humano. A espécie tem sua relevância epidemiológica traduzida como a segunda ou terceira espécie mais isolada do gênero, com prevalência registrada em regiões tropicais e subtropicais, como América Latina e Ásia, incluindo o Brasil. A levedura tem capacidade de promover infecções com taxa de mortalidade semelhante à de Candida albicans e superiores às de outras espécies não-Candida albicans. O switching fenotípico, considerado um fator de virulência descrito como capaz de promover variabilidade a partir de linhagens isogênicas, podendo acarretar em aumento na virulência. Neste sentido, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito do switching fenotípico em aspectos moleculares e celulares de morfotipos (linhagem parental, Variante Crepe e Revertente de Crepe – RC) de C. tropicalis expostos ao fluconazol. Para isso, as metodologias utilizadas visaram avaliar a influência do switching fenotípico pré e pós exposição ao fluconazol na concentração inibitória mínima (CIM) do fármaco, na expressão dos genes ERG11 (gene que codifica a enzima lanosterol 14-α-desmetilase da via de síntese do ergosterol) e CDR1 (gene que codifica uma bomba de efluxo para múltiplas drogas para o gênero Candida), na porosidade de parede celular, no tamanho e granulosidade celular, na quantidade de componentes de parede celular e na integridade de membrana plasmática. Os resultados demonstraram o morfotipo (RC) com o maior valor de CIM50, menor porosidade de parede celular e superexpressão do gene CDR1. Além disso, destaca-se a superexpressão do gene ERG11 para o morfotipo Crepe, sugerindo que há uma maquinaria molecular morfotipo dependente para morfotipos de C. tropicalis em resposta ao fluconazol. Para todas as análises foi possível evidenciar o efeito do switching fenotípico, mostrando que o fator de virulência tem a capacidade de modificar características moleculares e celulares em C. tropicalis.Item Atividade antibacteriana e anti-biofilme in vitro de enterocina isolada e combinada com vancomicina contra Enterococcus vancomicina resistente (VRE)Santana, Giovanna Caroline; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Coelho, Alexandre Rodrigo; Rocha, Sérgio Paulo Dejato daResumo: Enterococcus sp são patógenos oportunistas reconhecidos por causar graves infecções hospitalares A resistência aos antibióticos glicopeptídios, como vancomicina e teicoplanina, é a preocupação atual da resistência dos Enterococcus e coincidiu com o aumento da resistência à penicilina e aos aminoglicosídeos, configurando assim um desafio Combinações entre peptídeos antimicrobianos e fármacos antibacterianos tradicionais, podem amenizar o problema da resistência bacteriana, pois o possível efeito sinérgico se torna estratégico, possibilitando o uso de doses menores dos fármacos no tratamento de doenças infecciosas, reduzindo os custos e diminuindo a toxicidade Neste trabalho, a ação de enterocinas não concentradas e não purificadas produzidas por Enterococcus sp obtidos de leite e queijo foi avaliada quanto ao seu potencial antibacteriano sobre isolados de Enterococcus sp resistentes à vancomicina, bem como a ação sinérgica in vitro entre enterocina, produzida pelo isolado de Enterococcus sp L3, e o antimicrobiano vancomicina (concentrações 16, 32 µg/mL) contra células planctonicas e biofilme de Enterococcus sp resistentes à vancomicina (VRE) Os isolados foram selecionados a partir de ensaio de PCR, onde foram avaliados os perfis de expressão de genes relacionados a produção de enterocina e genes relacionados à resistência à vancomicina Foi realizado o teste de ação antagônica por spot on lawn, seguido da obtenção do sobrenadante livre de células (CFS), o qual foi submetido a testes enzimáticos e de termoestabilidade O CFS obtido foi exposto aos isolados VRE utilizando a técnica de poço difusão A visualização de halos de inibição ao redor dos cultivos de Enterococcus VRE demonstrou a potencial ação antibacteriana dessas enterocinas sobre os isolados resistentes à vancomicina A análise da interação entre enterocina e vancomicina foi realizada pela metodologia de checkerboard Os resultados foram mensurados pela contagem celular e análise de densidade optica para compor o Indice de Concentração Inibitória Fracionada A viabilidade celular também foi mensurada a partir da visualização da coloração de Iodeto de propídeo em microscopia de fluorescência Foi demonstrado ação sinérgica contra 8% dos isolados VRE, sendo que para um isolado foi verificada interação parcial, os resultados obtidos trazem uma nova abordagem e perspectiva ao tratamento de infecções por VREItem Efeito da adubação e microrganismos promotores de crescimento no desenvolvimento de Schizolobium parahybaFreitas, Vanessa Fogaça de; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Leal, Alex Carneiro; Zangaro Filho, WaldemarResumo: A espécie Schizolobium parahyba da família Leguminoseae contém duas variedades, Schizolobium parahyba var parahyba, popularmente conhecida como guapuruvu, endêmica da Mata Atlântica e Schizolobium parahyba var amazonicum, mais conhecida como paricá, endêmica da Amazônia Por apresentarem um rápido crescimento, entre outras características, estas variedades tornam-se aptas para a produção de madeira e para o reflorestamento de áreas degradadas Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adubação e de microrganismos promotores de crescimento, Rhizobium sp e Rhizophagus clarus, no desenvolvimento do paricá e do guapuruvu Os experimentos foram conduzidos em campo em duas áreas da estação experimental do IAPAR do município de Xambrê, Paraná, Brasil O delineamento experimental para ambas as áreas foi de blocos completos casualizados com cinco repetições e oito tratamentos: Controle; Rhizobium; R clarus; Adubo; Rhizobium + Adubo; Rhizobium + R clarus; R clarus + Adubo; Rhizobium + R clarus + Adubo Na área de estudo do guapuruvu foram amostradas 6 árvores por parcela e no experimento com o paricá 1 árvores por parcela Para a produção dos tratamentos foram utilizados 1 gramas de inóculo bruto do fungo micorrízico arbuscular R clarus, 1 mL de suspensão de células (3,3 x17 UFC/mL) da bactéria Rhizobium sp e 13 g de adubo químico NPK 2-5-2 por cova A altura total das plantas foi avaliada 37, 11, 25 e 36 dias após o plantio e o diâmetro do colo em 25 e 36 dias, a sobrevivência e análise foliar aos 36 dias As médias dos tratamentos foram analisadas pela ANOVA e comparadas pelo teste de Duncan (p<,5) Em todos os períodos avaliados ambas as variedades de S parahyba apresentaram um efeito positivo em altura, diâmetro e sobrevivência para os tratamentos adubados Com relação à analise foliar não houve diferença significativa na quantidade de nitrogênio e fósforo entre os tratamentos Para o guapuruvu os tratamentos com fungo MA e fungo MA + Rhizobium sp proporcionaram uma porcentagem de sobrevivência inferior ao controle, sugerindo que essa diminuição na sobrevivência pode ter ocorrido por haver crescimento de gramínea nas áreas experimentais, uma vez que, a competição com gramínea pode influenciar na interação entre os fungos MA e as espécies arbóreas iniciais causando depressão na espécie arbórea, o que intensifica os efeitos negativos da competição no solo Estes resultados demonstram que o adubo favoreceu o desenvolvimento das duas variedades de S parahyba e que a inoculação com microrganismos promotores de crescimentos mostra-se pouco eficiente quando cultivada em área com gramíneaItem Caracterização fenotípica e molecular de determinantes de resistência adquirida aos antimicrobianos e da produção de biofilme em Acinetobacter baumannii isolados de corrente sanguíneaRomanin, Priscila; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi [Orientador]; Petroli, Suelen Balero de Paula; Tognim, Maria Cristina Bronharo; Carrara-Marroni, Floristher Elaine [Coorientador]Resumo: A baumannii multirresistentes constituem um dos maiores desafios mundiais no tratamento de infecções hospitalares A facilidade em adquirir determinantes de resistência somada a capacidade de formação de biofilme representam importantes fatores associados ao sucesso da disseminação e à permanência deste microrganismo nos hospitais Este estudo teve como objetivo caracterizar os principais mecanismos de resistência adquirida aos antimicrobianos e investigar a capacidade de formação de biofilme em isolados multirresistentes de A baumannii isolados de corrente sanguínea de pacientes internados no Hospital Universitário de Londrina (HU) no período de novembro de 26 a dezembro de 216 Um total de 13 isolados foram analisados, sendo todos identificados como A baumannii por meio da amplificação dos genes blaOXA-51-like e rpoB A análise dos aspectos clínicos revelou que os isolados de A baumannii foram recuperados predominantemente de pacientes do sexo masculino, com idade média de 6 anos, internados nas unidades de terapia intensiva, com uma média de permanência hospitalar de 28 dias O desfecho clínico que resultou em mortalidade foi observado na maioria (816%) dos pacientes Altas taxas de resistência (1%-17%) foram obtidas para os antimicrobianos avaliados incluindo colistina, polimixina B e tigeciclina e, na sua maioria, os isolados foram classificados como extensivamente resistentes (786%) A produção de carbapenemases foi observada em em 922% dos isolados Todos os isolados resistentes aos carbapenêmicos apresentaram um dos genes codificadores das carbapenem hydrolyzing class-D ß-lactamase (CHDL) adquiridas blaOXA-23-like (979%) ou blaOXA-143-like (21%) Nenhum dos isolados apresentou os genes blaOXA-24-like, blaOXA-58-like, blaOXA-48, blaKPC, blaNDM, blaSPM-1, blaSIM-1, blaVIM, blaIMP, blaGIM, blaGES, mcr-1, qnrA, qnrB, qnrC, qnrS, and qnrVc Como contexto genético do gene blaOXA-23-like predominou o Tn26 e em menor frequência o Tn28 Os isolados carreadores do gene blaOXA-143-like apresentaram a variante blaOXA-253-like O gene bap foi detectado em 835% dos isolados, e todos os isolados recuperados após o ano de 211 apresentaram este gene A maioria dos isolados apresentaram capacidade de formação de biofilme (98%), e 864% dos isolados foram fortes formadores de biofilme Um perfil policlonal foi observado dentre os isolados de A baumannii, sendo detectada a presença dos complexos clonais epidêmicos internacionais CC113/79, CC19/1, CC11/25, e CC13/15, com prevalência do CC113/79 Os dados obtidos mostram que a produção de CHDL e, principalmente, a permanência do gene blaOXA-23 constituiu um importante mecanismo de resistência aos carbapenêmicos em A baumannii no HU As altas taxas de resistência ao antimicrobianos obtidas e o número elevado de isolados extensivamente resistentes demonstram a dificuldade no tratamento das infecções causadas por A baumannii no HU e alertam para a emergência de infecções intratáveis O perfil policlonal, a prevalência de clones epidêmicos mundiais, e a capacidade de formação de biofilme reforçam a importância de medidas de controle de infecção e da necessidade continua do desenvolvimento de programas de stewardship para evitar a disseminação de novos determinantes de resistência e potenciais surtos por este patógenoItem Taxonomia polifásica de bactérias do gênero Agrobacterium isoladas de nódulos radiculares de Phaseolus vulgaris e Glycine maxScherer, Anderson José; Hungria, Mariangela [Orientador]; Delamuta, Jakeline Renata Marçon; Ribeiro, Renan AugustoResumo: Os membros do gênero Agrobacterium são Gram-negativos, alfaproteobacterias associadas a solo e plantas, e conhecidos por sua patogenicidade e pelo uso como ferramenta biotecnológica A ciência taxonômica faz uso de uma série de dados para a validação dos táxons O presente estudo utilizou isolados de nódulos de soja (Glycine max) e feijoeiro (Phaseolus vulgaris) pertencentes à “Coleção de Bactérias Diazotróficas e Promotoras de Crescimento Vegetal da Embrapa Soja” e que, em estudos prévios, apresentaram propriedades transitórias entre Rhizobium e Agrobacterium Foram avaliadas propriedades morfofisiológicas (morfologia de colônias, crescimento sob diferentes condições, perfil de ácidos graxos), genéticas (perfil de BOX-PCR, conteúdo G+C, sequenciamento do genoma) e filogenéticas (análise dos genes 16S RNAr e de genes housekeeping), visando uma análise polifásica A estirpe CNPSo 3391, isolada de um nódulo de soja na província de Zambézia, em Moçambique, foi identificada como Agrobacterium deltaense, cuja estirpe tipo foi isolada de um nódulo de Sesbania cannabina na China Já para a estirpe CNPSo 2736T, isolada de nódulo de feijoeiro inoculado com um solo do Mato Grosso do Sul, os resultados indicam que ela deve representar uma nova espécie, para a qual foi sugerido o nome de Agrobacterium fabaceae Quando os postulados de Koch foram seguidos, a habilidade de ambas estirpes nodular as leguminosas hospedeiras não foi confirmada, indicando que essas bactérias podem ser endofíticas, ou que adquirem facilmente um plasmídeo simbiótico que permite a nodulação temporária A condução de estudos sobre o papel dessas estirpes na simbiose com leguminosas é de grande relevância, pois pode fornecer informações valiosas sobre a evolução de bactérias simbióticas e patogênicasItem Caracterização genotípica e fenotípica dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de Proteus mirabilis isolados de carcaças de frango com celuliteSanches, Matheus Silva; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da [Orientador]; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Oba, Alexandre; Baptista, Ana Angelita Sampaio [Coorientadora]Resumo: Proteus mirabilis é um patógeno oportunista frequentemente associado a uma variedade de infecções em humanos, no qual as do trato urinário são consideradas as mais prevalentes Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as características genotípicas e fenotípicas dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de 34 cepas de P mirabilis isoladas de carcaças de frango com celulite em um abatedouro no norte do estado do Paraná, Brasil, a fim de inferir um possível risco zoonótico Das 34 cepas, duas foram escolhidas para avaliar a sua capacidade em reproduzir as lesões de celulite experimentalmente em frangos de corte, sendo uma cepa com maior quantidade de fatores de virulência (LBUEL-A33) e outra com menor quantidade (LBUEL-A34) Os genes mrpA, atfA (fímbrias) ireA (sideróforo), ptA, zapA (proteases) e hpmA (hemolisina) foram encontrados em todos os isolados, enquanto os genes pmfA e ucaA (fímbrias) foram encontrados em 33 (97,6%) e 17 (5%) cepas respectivamente Todas as cepas expressaram adesão agregativa em células HEp-2 e formaram biofime Das 34 cepas, 28 (82,35%) exibiram efeito citotóxico em células Vero Em relação ao perfil de resistência, 25 (78,13%) cepas foram consideradas multirresistentes A presença de genes blaESBL e blaampC conferindo resistência aos ß-lactâmicos e qnr às quinolonas também foram detectados nos isolados após a presunção no teste fenotípico, no qual 7 (21,88%) isolados continham o grupo CTX-M-2, 11 (34,38 %) continham grupo CIT e 19 (59,38%) continham qnrD Tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a LBUEL-A34 desenvolveram lesões de celulite em 24 horas pós-inoculação, no qual o grau das lesões foi estatisticamente similar ao grau das lesões causadas pelo controle positivo (p< ,5), uma Escherichia coli Patogênica de Aves (APEC 46) Microscopicamente, tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a APEC 46 ocasionaram lesões similares, caracterizadas pela presença de infiltrado inflamatório e necrose da derme e das fíbras musculares Conclui-se com o presente trabalho que P mirabilis isolados de carcaças de frango com lesões de celulite representam um risco zoonótico, pois possuem uma diversidade de fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos, bem como a capacidade de desenvolver lesões de celulite em frangos de corteItem Avaliação do potencial de Bacillus velezensis LABIM40 no biocontrole de fungos fitopatogênicosBaptista, Julia Pezarini; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de [Orientador]; Lescano, Luis Eduardo Azevedo Marques; Pereira, Ulisses de Pádua; Balbi-Peña, Maria Isabel [Coorientadora]Resumo: O desenvolvimento de produtos biológicos vem crescendo devido a vários fatores, entre eles a conscientização ambiental, a preocupação com a saúde humana e a seleção cada vez mais comum de patógenos resistentes aos produtos químicos sintéticos Dentre os gêneros estudados para o desenvolvimento de produtos biológicos, o gênero Bacillus spp tem se destacado devido a produção de muitas moléculas antimicrobianas e a resistência em condições ambientais adversas pela formação de endósporos Nesse contexto o objetivo do estudo foi identificar a cepa B velezensis LABIM4 para realizar análises in silico, envolvendo comparações filogenômicas e a predição dos metabólicos secundários Paralelamente, análises in vitro também foram realizadas para caracterização da atividade antifúngica de LABIM4, para isso, os ensaios foram conduzidos com os fungos: Sclerotinia sclerotiorum (SS), Macrophomina phaseolia (MP) e Botrytis cinerea (BC) As melhores condições de cultivo, a estabilidade aos valores de temperatura, pH e luz e a concentração inibitória mínima (CIM) foram avaliadas Além dessas análises, o efeito do sobrenadante de LABIM4 no micélio fúngico de SS foi visualizado em Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) O resultado do sequenciamento indicou que LABIM4 pertence ao grupo Bvelezensis e as análises de comparação mostraram uma alta similaridade com outras cepas com potencial biotecnológico já descrito Os dados de predição do genoma de LABIM4 indicaram a presença de 33 BGCs (Biosynthetic Gene Clusters), dessas, 11 apresentaram algum nível de similaridade com alguma BGC já depositada na base de dados do Minimum Information about Biosynthetic Gene clusters (MiBiG) O sobrenadante de LABIM4 apresentou ter grande potencial antifúngico ao inibir mais de 6 % os fungos testados, não perdendo a atividade nos parâmetros de temperatura, pH e luz, no entanto a atividade caiu ao ser submetido as temperaturas de 7, 1 e 121 °C Os dados da CIM foram 1,2% para SS, 2,5% MP e 2% para BC e alterações estruturais nas hifas de SS ao ser tratada com o sobrenadante livre de células também foram visualizadas, concluindo que B velezensis LABIM4 produz metabólitos antifúngicos com estabilidade nos parâmetros testados, caracterizando os seus compostos para o uso em diferentes condições ambientais, sendo, portanto, um bom agente de biocontrole Contudo muitas pesquisas ainda devem ser realizadas para otimizar a produção dos metabólitos antifúngicos, para identificar o princípio ativo e caracterizar a atividade in vivo