01 - Doutorado - Microbiologia
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Item Abordagem polifásica na taxonomia, filogenia e eficiência da fixação biológica do nitrogênio de rizóbios simbiontes de feijoeiroCardoso, Juscélio Donizete; Hungria, Mariangela [Orientador]; Barcellos, Fernando Gomes; Silva, Krisle da; Nogueira, Marco Antonio; Andrade, Diva Souza [Coorientadora]Resumo: O feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L) é uma leguminosa com baixa especificidade em nodular com uma variedade de estirpes de rizóbios, os quais muitas vezes têm baixa efetividade na fixação de nitrogênio O objetivo geral desta tese foi o de estudar a eficiência simbiótica e a filogenia de um grupo elite de estirpes de rizóbios, microssimbiontes do feijoeiro, utilizando uma abordagem polifásica Avaliaram-se a eficiência simbiótica, características fenotípicas e genotípicas de estirpes de rizóbios isoladas de sementes, nódulos de feijoeiro, nódulos de amendoinzeiro (Arachis hypogaea L) e mucuna anã (Mucuna pruriens) cultivadas em solos de diversos agroecossistemas Quarenta e cinco estirpes elite foram analisadas quanto às propriedades simbióticas (nodulação, massa da parte aérea seca, N- total na parte aérea, porcentagem de N-ureído da seiva do xilema) em casa de vegetação, em vasos contendo solo arenoso não estéril cultivado com feijoeiro As estirpes elite também foram caracterizadas em relação às propriedades morfo-fisiológicas, perfis genéticos de rep-PCR (BOX) e polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP – Restriction Fragment of Length Polymorphism) do gene 16S rRNA, utilizando-se quatro enzimas de restrição Na análise parcial das sequências do 16S rRNA, foram utilizadas 17 estirpes representantes obtidas dos principais grupos resultantes das análises anteriores A estirpe mais eficiente foi a IPR-Pv268, que agrupou com Rhizobium sp, enquanto a IPR-Pv583, mostrando menor eficácia na fixação do N2 foi agrupada com Herbaspirillum lusitanum Estirpes 2 eficientes foram agrupadas com espécies simbióticas e gêneros pouco comuns entre simbióticos, incluindo Leifsonia xyli, Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia e Enterobacter As seis estirpes que apresentaram dissimilaridade do gene 16S RNA do gênero Rhizobium foram submetidas às análises do MLSA (Multilocus Sequence Analyses) e do gene nifH Os índices de diversidade (Shannon), com base nas características fenótipicas (eficiência simbiótica, morfo-fisiológicas) e genéticas (BOX-PCR, RFLP do 16S rRNA e sequências do gene 16S rRNAs), calculados em função do número de grupos e de estirpes em cada grupo, apresentaram valores de 1,5 e 1,47, respectivamente Algumas estirpes utilizadas neste estudo se destacaram quanto à sua capacidade de fixação de nitrogênio e, portanto, mostraram alto potencial biotecnológico para a utilização em inoculantes comerciaisItem Ação antibacteriana de enterocinas produzidas por espécies de Enterococcus sobre células planctônicas e biofilmesRocha, Kátia Real; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Costa, Giselle Aparecida Nobre; França, Emanuele Júlio Galvão de; Rocha, Sérgio Paulo Dejato da; Panagio, Luciano Aparecido; Furla Neto-Maia, Luciana [Coorientadora]Resumo: Enterocococcus spp pertencem ao grupo bactérias ácido láticas produtoras de bacteriocinas (enterocinas) que apresentam atividade contra várias bactérias patogênicas de origem alimentar Este estudo foi realizado primeiramente para selecionar enterococos produtores de enterocinas contra Listeria innocua 12612, bem como seu espectro de ação contra outras bactérias oportunistas e em seguida avaliar a influência de suas enterocinas em biofilme bacteriano Para tal, os isolados potencialmente produtores de enterocinas (Ent+) contra L innocua 12612 foram caracterizados quanto a presença de genes estruturais para enterocinas e produção de componente hemolítico Em seguida foi obtido o sobrenadante de cultivo livre de células (CFS) dos Ent+, para avaliar sua ação contra L innocua 12612 por método de disco-difusão, após tratamento com calor (8°C e 1°C), enzimas proteolíticas (a- quimiotripsina, protease e tripsina), resistência a catalase, quantificação da atividade antibacteriana do CFS e do CFS parcialmente purificado por unidade arbitrária (UA), bem como determinar seu respectivo modo de ação e espectro antibacteriano contra outras bactérias Dos 76 enterococos de diferentes fontes, 11 foram considerados Ent+ (5 isolados provenientes de alimentos e 6 de ambiente), além disso 9 destes apresentavam ao menos um gene codificador de enterocina, entA, entB, entP, ent171 e/ou entX Não houve isolados com atividade hemolítica Após a obtenção dos CFS 7/11 dos isolados Ent+ (5 de alimentos e 2 de ambientes) apresentaram halo de inibição contra L innocua Esses 7 CFS foram termoestáveis, de natureza proteica e a ação antibacteriana por peróxido de hidrogênio foi descartada pela utilização de catalase, indicando a ação antagônica pela presença de enterocina Ao concentrar a enterocina (CFS parcialmente purificado) os valores de UA tenderam a aumentar O modo de ação observado foi bactericida A ativididade antagônica dos 7 CFS contendo enterocina contra outras 33 bactérias indicadoras ocorreu principalmente em L innocua, Listeria monocytogenes e Listeria ivanovii Os CFS que apresentaram maiores valores de UA e espectro de ação foram os provenientes de alimentos, provavelmente isso possa estar relacionada com a maior quantidade de genes codificadores de enterocinas por parte desses isolados Além disso, foram selecionados 4 CFS provenientes de alimentos para avaliar sua atividade anti-biofilme de Listeria spp, no desenvolvimento e após a pré- formação do biofilme por 24h a 3°C e 37°C O biofilme foi formado em superfícies abiótica e avaliado por biomassa total (cristal violeta), atividade metabólica (redução de XTT) e microscopio de fluorescência (com marcador de célula morta utilizando iodeto de propidio) Para tal, 8 Listeria spp foram avaliadas quanto a formação de biofime por biomassa total Dessas foram selecionados 3 Listeria spp (Listeria monocytogenes 232, Listeria ivanovii 256 e Listeria innocua 25) para serem submetidas ao tratamento com os CFS Os resultados mostraram que houve atividade anti-biofilme das Listeria spp, por parte de todos os CFS avaliados (desenvolvimento e no biofilme pré-formado), em ambas temperaturas avaliadas De uma maneira geral, a atividade anti-biofilme listerial provocadas pelos CFS, foi acompanhada por uma menor atividade metabólica, bem como redução da estrutura do biofilme e maior quantidade de células mortas nas imagens obtidas, quando comparado com o controle Concluindo, com base nos esforços consideráveis para a busca por novas bacteriocinas para serem aplicadas na área alimentícia principalmente contra Listeria, um importante patógeno alimentar, tem que os enterococos aqui avaliados apresentam-se como potenciais candidatos no controle de bactérias patogênicas sejam em células planctônicas ou sésseisItem Ação protetora de extrato de sementes de Artocarpus integrifolia L. contra infecção por Candida albicans através do aumento das funções de fagócitosLoyola, Wagner; Felipe, Ionice [Orientador]; Silva, João Santana da; Saridakis, Halha Ostrensky; Gaziri, Luis Carlos Jabur; Panagio, Luciano AparecidoResumo: Este trabalho pesquisou os principais efeitos de extrato de sementes de Artocarpus integrifolia (EJ), na fagocitose e morte de Candida albicans, na produção de TNF-a e envolvimento com a sobrevivência dos animais a um inóculo letal do fungo Os macrófagos de animais pré-tratados com EJ por 72 h foram co-incubados 1:5 leveduras de C albicans (CR15) por 3 minutos a 37ºC A eficiência fagocítica foi de 68% de macrófagos fagocitantes na presença de soro, cuja atividade fungicida reduziu 76% do inóculo de C albicans Esta ativação dos fagócitos pode ser explicada pelo aumento significativo na produção de anion superóxido comparado ao de fagócitos de animais controle (PBS) A atividade dos receptores foi pesquisada na presença de Manose (5 mM) e Manana (1mg) ou Laminarina (1mg) A eficiência da fagocitose aumentou significativamente (52%) nos macrófagos de camundongos pré-tratados com JE 72 h antes dos ensaios, contra 2% dos macrófagos controle Este aumento foi reduzido a 34% na presença de bloqueadores do receptor de manose (Manose mais Manana) e para 16% na presença de glucana solúvel (laminarina), um inibidor do receptor Dectina-1 Os macrófagos pré-tratados com JE 72h apresentaram aumento na produção de TNF-a após serem co-incubados com C albicans, por 2h, ação que foi inibida com a presença de laminarina durante os ensaios Neste trabalho, avaliamos também a ação do EJ na proteção contra candidíase, assim, animais pré-tratados 72h com o extrato, apresentaram aumento na produção de TNF-a após 2h de infecção com C albicans e uma redução na concentração do fungo no exsudato peritoneal, fígado, baço e rim durante este tempo Estes resultados sugerem que EJ aumentou significativamente os níveis de TNF-a, a atividade dos receptores de Manose, Dectina-1 e de Complemento, sendo estes processos relacionados com maior atividade fagocítica e candidacida, o que possibilitou 9% dos animais tratados com extrato sobreviverem a um inóculo letal de C albicans versus 2% do controleItem Aderência in vitro de isolados bucais de Candida albicans em diferentes materiais dentáriosCamacho, Daiane Pereira; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Svidzinski, Terezinha Inez Estivalet; Silva, Cléverson de Oliveira e; Panagio, Luciano Aparecido; Almeida, Ricardo Sérgio Couto deResumo: Atualmente, diferentes técnicas e materiais têm sido empregados para reabilitação bucal por meio de próteses dentárias ou implantes A aderência inicial e a colonização por micro-organismos às superfícies rígidas como implante é um pré-requisito para a formação do biofilme que pode ocasionar infecções bucais O papel da levedura Candida albicans na patogênese de lesão peri-implantar está associado a sua característica de micro-organismo oportunista Sua transição de comensal para agente infeccioso depende tanto de fatores de virulência da levedura como da susceptibilidade do hospedeiro Entretanto, os processos biológicos que podem levar à falha dos implantes após a confecção das próteses ainda são pouco compreendidos Neste contexto, o presente estudo tem como objetivo avaliar a aderência in vitro de isolados bucais de Candida albicans em diferentes materiais dentários, diferenciação celular ao nível ultraestrutural, determinar a produção de biofilme e o padrão de expressão de genes ALS Foram utilizados seis isolados clínicos e uma cepa padrão Candida albicans para a avaliação do perfil de aderência e a diferenciação celular dos isolados sobre a superfície de diferentes materiais dentários, produção de biofilme, bem como o padrão de expressão de genes da família ALS Os isolados avaliados apresentam eficiência quanto à formação de biofilme Todos os isolados apresentaram elevado potencial de aderência aos materiais confeccionados em resina composta microhíbridra com nanopartículas e liga metálica de Níquel-Cromo, enquanto que os menores valores de aderência foram observados nos materiais em porcelana feldspática e resinas acrílicas Observou-se uma diversidade no padrão de aderência e diferenciação celular, entre os isolados, de forma isolado-dependente Os isolados foram classificados conforme o perfil de adesão às superfícies dos materiais, seguindo quatro variações sendo estas: aderência difusa, localizada, agregativa e pseudo-hifal As maiores taxas de aderência dos isolados bucais de Candida albicans foram relacionadas principalmente às superfícies hidrofóbicas Foi observado um padrão complexo de expressão de genes da família ALS por isolados em modelo de aderência in vitro em diferentes materiais dentários Considerando os isolados individualmente, os transcritos mais frequentes em células aderidas aos diferentes materiais avaliados foram dos genes ALS1, ALS2 A indução de determinados genes ALS, no nosso caso ALS1 e ALS4, em função do material no qual o isolado estava aderido foi isolado-dependente; já a repressão de genes ALS7 e ALS9 parece ser dependente do material dentário, uma vez que em determinados tipos de materiais nenhum dos seis isolados analisados produziram transcritos relacionados as adesinas Als7 e Als9 Os resultados obtidos no presente estudo confirmam o potencial de aderência e consequente formação de biofilme por Candida albicans de origem bucal Entretanto a variação no padrão de expressão dos genes ALS nos diferentes materiais testados ocorreu de forma isolado- dependente Desta forma, nossos dados podem contribuir para o entendimento do processo da peri-implantite, corroborando com seu caráter multifatorial, sugerindo que este processo é dependente do material dentário utilizado nos implantes, bem como da capacidade do micro-organismo em desenvolver a infecção, via expressão diferenciada de genes associados a patogêneseItem Análise da expressão e caracterização funcional da hemaglutinina temperatura sensível de Escherichia coliKobayashi, Renata Katsuko Takayama; Gaziri, Luiz Carlos Jabur [Orientador]; Venancio, Ermerson José; Saridakis, Halha Ostrensky; Felipe, Ionice; Vidotto, Marilda CarlosResumo: Escherichia coli é um agente importante de infecções extraintestinais em humanos e em animais Em aves, é responsável por grandes perdas econômicas, sendo conhecida como E coli patogênica para aves (APEC), e causa a colibacilose, a qual inicia como infecção do trato respiratório e evolui para aerosaculite, pericardite, perihepatite e septicemia Vários genes de virulência estão envolvidos, sendo tsh um deles O gene tsh codifica a proteína autotransportada hemaglutinina temperatura sensível (Tsh), que tem atividade hemaglutinante e proteolítica Tsh é sintetizada como uma proteína precursora de 14 kDa, que é clivada, em um domínio passageiro de 16 kDa (Tshs) e um beta-domínio de 33 kDa (Tshb) Em nosso trabalho observamos que a presença destas proteínas é dependente da temperatura e do meio de cultura utilizado para o crescimento bacteriano Observamos ainda que, tanto a Tsh recombinante (14 kDa) quanto o sedimento da amostra selvagem APEC 13, que contém Tshb (33 kDa), aglutinaram eritrócitos de galinha Tanto a Tsh recombinante (14kDa) quanto o sobrenadante da APEC 13, que contém Tshs (16 kDa), causam proteólise da mucina O anti-Tsh do soro de galinha inibiu a hemaglutinação da APEC 13 e da recombinante E coli BL21/pET11-tsh, e inibiu também a atividade mucinolítica da proteína Tsh A comprovação da atividade mucinolítica da proteína Tsh, foi possível através de SDS-PAGE em géis copolimerizados com mucinas de diferentes origensItem Análise da produção e expressão de fator hemolítico em Candida sppFavero, Daniel; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Svidzinski, Terezinha Inez Estivalet; Gandra, Rinaldo Ferreira; Felipe, Ionice; Costa, Ivete ConchonResumo: A produção de fator hemolítico, embora ainda pouco estudada, é reconhecida como um importante fator de virulência em espécies de Candida Neste trabalho, nós analisamos a produção do fator hemolítico por isolados clínicos de Candida albicans, Candida tropicalis e Candida parapsilosis, a expressão do gene que codifica para uma possível proteína semelhante à hemolisina (HLP), o possível efeito de eritrócitos (RBCs) sobre a expressão do gene HLP e sobre a atividade hemolítica, bem como a correlação entre este perfil de expressão e a atividade hemolítica em isolados clínicos C tropicalis Dados de hemólise em meio solidificado revelaram que a maioria dos isolados de C albicans apresentaram níveis moderados de atividade hemolítica, enquanto que a maioria dos isolados de C tropicalis níveis elevados Nenhum dos isolados testados de C parapsilosis exibiu hemólise Dados de produção do fator hemolítico liberados nos sobrenadantes de cultivo, revelaram diferentes níveis de hemólise entre as espécies, onde os isolados de C tropicalis apresentaram a maior produção (P <,5), seguidos dos isolados de C albicans e C parapsilosis Não houve diferenças intraespecíficas significativas (P> ,5) na atividade hemolítica Dois perfis de hemólise foram observados entre os isolados de C tropicalis cultivados em presença de RBCs: 66,7% evidenciaram aumentos estatisticamente significativos na promoção de hemólise (P <,5), enquanto 33,3% evidenciaram uma diminuição nesta promoção, sem diferenças significativas Em nível molecular, todos os isolados de C tropicalis foram positivos para a expressão do gene HLP Os perfis de expressão deste gene permitiram verificar que ele é diferentemente expresso em função da presença de RBCs de uma maneira isolado-dependente A comparação deste perfil de expressão e a atividade hemolítica dos isolados de C tropicalis mostrou uma correlação altamente positiva Assim, nossos dados ampliam o conhecimento sobre a regulação e a base molecular da atividade hemolítica em Candida spp Este é o primeiro estudo que revela diferenças espécie-específicas na produção de fator hemolítico por isolados de Candida associados com infecções de corrente sanguínea Evidencia ainda, pela primeira vez, a secreção de um fator hemolítico por isolados de C parapsilosis, o papel do gene HLP na hemólise de C tropicalis, bem como o fato de que RBCs podem induzir alterações nos níveis de transcrição do gene HLP em C tropicalisItem Análise do potencial de virulência de isolados de Cryptococcus gattii sensu latoYoshizawa, Natália de Souza Botelho; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi; Morey, Alexandre Tadachi; Izumi, Érika; Ribeiro, Renan AugustoResumo: A criptococose é uma doença fúngica que atinge mais de um milhão de pessoas no mundo todo, sendo os principais agentes causadores Cryptococus neoformans e Cgattii, que estão amplamente distribuídos pelos mais diversos ambientes Esse trabalho teve como objetivo analisar os fatores de virulência (produção de cápsula, melanina, crescimento a 37oC e produção de enzimas), determinar o perfil de sensibilidade à anfotericina B e à nanopartículas de prata biológicas de isolados ambientais e clínicos de Cryptococcus gattii Além disso, também foi realizada infecção experimental em camundongos BALB/c e análises histológicas dos órgãos infectados Todos isolados apresentaram cápsula, apenas dois não apresentaram produção de melanina Todos isolados cresceram a 37oC, porém, nenhum isolado estudado apresentou elevada produção das enzimas analisadas (proteases e fosfolipases) A concentração inibitória de anfotericina B variou de ,25 a 8 µg/mL, sendo um isolado de origem ambiental classificado como resistente a este antifúngico (CIM > 16 µg/mL) As CIMs das nanopartículas de prata variaram de ,39 a 2 µM Para a infecção experimental foi utilizada a via nasal para inoculação das leveduras nos camundongos Os animais infectados apresentaram sintomas como pelo eriçado, dificuldade em abrir os olhos, movimentos repetitivos de coçar e andar em círculos, indicando alterações no sistema nervoso central Durante o período de observação (6 dias) 12,8% dos animais foram a óbito Em conclusão, os diferentes isolados de C gattii, independente da origem, expressam fatores de virulência e são capazes de desenvolver infecção em camundongo imunocompetente Outras análises devem ser conduzidas para esclarecer os mecanismos envolvidos na patogênese de C gattii e dessa forma desenvolver novas estratégias de controle da criptococoseItem Análise estrutural de genes policetídeos sintases (pks) de Aspergillus nigerFerracin, Lara Munique; Fungaro, Maria Helena Pelegrinelli [Orientador]; Azevedo, João Lúcio de; Paião, Fernanda Gonzales; Vilas-Bôas, Laurival Antônio; Furlaneto, Márcia CristinaResumo: Os genes que codificam proteínas envolvidas no metabolismo secundário geralmente encontram-se agrupados um ao lado do outro, ditos em clusters Estes clusters gênicos comumente contêm genes que codificam hidrolases, oxidases, metilases, proteínas reguladoras e proteínas de transporte que estão adjacentes a genes que codificam para policetídeos sintases (PKS) e peptídeos não-ribossomais sintases (NRPS) Devido os genes pks e nrps serem característicos de metabolismo secundário, um procedimento apropriado para encontrar clusters associados a um dado processo, é primeiramente buscar estes genes típicos e depois examinar as adjacências Embora Aspergillus niger seja um fungo há muitos anos utilizado para obtenção de produtos destinados à indústria de alimentos, mais recentemente foi descrita a habilidade de algumas linhagens desta espécie em produzir micotoxinas, tais como ocratoxina A e fumonisina (FB2 e FB4) Nesta tese, análises de bioinformática foram aplicadas para inventariar genes pks de dois genomas de A niger (CBS 51388 e ATCC 115) visando a identificação de clusters relacionados ao metabolismo secundário que sejam linhagem-específicos A comparação in silico de 34 genes pks preditos na linhagem CBS 51388 com os genes presentes no genoma da linhagem ATCC 115 desta mesma espécie, revelou alta identidade de sequências de nucleotídeos para 31 deles (91%) No entanto, a linhagem CBS 51388 possui três genes pks (An1g113, An11g594 e An15g792) em que homólogos não são encontrados em ATCC 115 Baseando-se em sequências de nucleotídeos de CBS 51388 depositada no banco de dados do NCBI, pares de primers de PCR foram idealizados e usados na investigação destes genes únicos em 119 linhagens de A niger coletadas de diferentes substratos e regiões geográficas Amplicons dos genes pks An1g113, An11g594 e An15g792 foram detectados, respectivamente, em 97%, 71% e 26% das linhagens A identidade destes amplicons foi confirmada por sequenciamento Devido um dos genes pks linhagem-específico (An15g792) estar localizado em um cluster possivelmente envolvido na biossíntese de ocratoxina A, investigações adicionais acerca deste gene foram conduzidas A capacidade de produção de ocratoxina A das 119 linhagens de A niger foi avaliada Um total de trinta e um isolados (26%) foi produtor desta micotoxina Uma associação positiva entre a presença de amplicons correspondente ao gene An15g792 e a capacidade das linhagens produzirem a referida toxina, foi claramente demonstrada Dados de Southern blot confirmaram a associação entre a presença do gene An15g792 e produção da ocratoxina AItem Análise microbiológica de pontas de cateteres venosos centrais de pacientes do Hospital Universitário - Londrina - ParanáRoss, Claudia; Pelayo, Jacinta Sanchez [Orientador]; Venâncio, Emerson José; Saridakis, Halha Ostrensky; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Bedendo, JoãoResumo: Cateteres venosos centrais (CVC) são utilizados com a finalidade de facilitar o diagnóstico e o tratamento de pacientes hospitalizados Entretanto, o uso destes oferece riscos de infecção local e sistêmica Staphylococcus aureus e S epidermidis são agentes etiológicos de infecções relacionadas a CVC e possuem a capacidade de produzir biofilme A formação do biofilme depende da produção de uma substância chamada Polysaccharide Intercellular Adhesin (PIA) sintetizada pelo operon ica O presente trabalho teve por objetivos isolar e identificar microrganismos de pontas de CVC de pacientes internados entre junho de 23 à junho de 24, no Hospital Universitário (HU) da Universidade Estadual de Londrina (UEL) Estabelecer o perfil de resistência dos isolados frente a anti-sépticos, desinfetantes, e antimicrobianos e realizar a ribotipagem de cepas de S aureus e S epidermidis através da técnica Ribosome Spacer-Polymerase Chain Reaction (RS-PCR) Investigar a presença dos genes icaA e icaD nessas cepas através do método da Polymerase Chain Reaction (PCR), verificar a expressão fenotípica de biofilme através dos testes em Microplaca de Poliestireno (MP) e em Ágar Vermelho Congo (AVC) e avaliar a eficácia desses métodos utilizados na detecção de cepas produtoras de biofilme Neste estudo, 198 pontas de CVC foram avaliadas e 15 (53%) foram consideradas positivas, pois apresentaram crescimento microbiano igual ou superior a 15 Unidades Formadoras de Colônia (UFC) Os microrganismos mais isolados foram: Estafilococos coagulase-negativa (ECN) (35,2%), S aureus (25,7%), Klebsiella pneumoniae (8,5%), Acinetobacter baumannii (7,6%), Pseudomonas aeruginosa (7,6%), e Candida albicans (4,7%) Todas as bactérias estudadas foram sensíveis ao PVP-I degermante 1%, Clorexidina alcoólica ,5%, Clorexidina degermante 2%, e ao Ácido peracético ,5% Duas (4%) cepas de Staphylococcus sp foram resistentes ao PVP-I tópico 1% e 3 (6%) resistentes ao Hipoclorito de sódio 1% Entre as bactérias Gram-negativas, 1 (4%) foi resistente ao PVP-I tópico 1% e 4 (16%) resistentes ao Hipoclorito de sódio 1% O perfil de resistência de cepas de ECN e S aureus aos antimicrobianos foi: ciprofloxacina (81,5 e 91,3%), eritromicina (81,5 e 1%), gentamicina (81,5 e 91,3%), oxacilina (96,3 e 95,7%), penicilina (1%), respectivamente Nenhuma cepa apresentou resistência a vancomicina O perfil de resistência apresentado por A baummannii, P aeruginosa e K pneumoniae foi: amicacina (1, 75 e 6%), ampicilina-sulbactam (5, 62,5, e 1%) cefotaxima (1%), ceftazidima (1%), ciprofloxacina (1, 87,5, e 4%), gentamicina (1, 1 e 8%), respectivamente A baumannii e P aeruginosa apresentaram 37,5% e 75% de resistência ao imipenem, e todas as cepas de K pneumoniae foram sensíveis Cem por cento (1%) das cepas de A baumannii foram sensíveis ao meropenem e 37,5% das cepas de P aeruginosa foram resistentes ao meropenem, mas sensíveis a colistina A tipagem molecular mostrou 6 diferentes perfis de ribotipagem para S aureus O perfil I foi verificado em 21 (8,8%) das cepas que também foram multiresistentes a antimicrobianos Destas, 18 (69,2%) cepas de S aureus apresentaram a mesma biotipagem, perfil de resistência a antimicrobianos e ribotipagem Observou-se que os outros perfis de ribotipagem encontrados (perfil II-VI) estavam associados com cepas de S aureus que mostraram uma menor resistência a antimicrobianos S epidermidis apresentaram biotipagem e perfil de resistência a antimicrobianos diferentes, porém o mesmo perfil de ribotipagem Os genes icaA1 e icaD1 foram detectados em 22 (95,7%) cepas de S aureus e os genes icaA2 e icaD2 em 16 (8%) cepas de S epidermidis Todos os isolados estudados de S aureus e 19 (95%) de S epidermidis foram produtores de biofilme em MP Apenas 1 (4,3%) cepa de S aureus e 7 (35%) de S epidermidis foram positivas em AVC A identificação de microrganismos isolados em pontas de CVC e o conhecimento do perfil de resistência destes frente aos anti-sépticos, desinfetantes e antimicrobianos são de extrema importância para o controle de infecções e para a determinação de ações terapêuticas e epidemiológicas A técnica de RS-PCR pode ser usada para tipagem de cepas de S aureus, por ser um método rápido, barato e reprodutível O método PCR permitiu a detecção de genes ica nos isolados analisados de S aureus e S epidermidis e o teste em MP foi mais eficaz para a detecção fenotípica de biofilme do que o AVCItem Análise polifásica de estirpes brasileiras de beta-rizóbios do gênero ParaburkholderiaPaulitsch, Fabiane; Hungria, Mariangela [Orientador]; Batista, Jesiane Stefânia da Silva; Reis Junior, Fábio Bueno dos; Helene, Luisa Caroline Ferraz; Ribeiro, Renan AugustoResumo: Um grupo restrito de bactérias diazotróficas presentes no solo é capaz de realizar simbiose com plantas da familia Fabaceae, levando à formação de nódulos radiculares, especializados no processo de Fixação Biológica do Nitrogênio (FBN) Esses microrganismos são coletivamente chamados de rizóbios e estão presentes nas classes Alfa e Betaproteobacteria Dentre as Betaproteobacterias, o gênero Paraburkholderia se destaca pela sua diversidade, encontrada especialmente no Brasil e na África do Sul No sentido de melhor compreender a diversidade e evolução de rizóbios do gênero Paraburkholderia, quatro estudos foram conduzidos Utilizando a taxonomia polifásica, foram descritas as novas espécies P guartelaensis (Estudo 1), P atlantica e P franconis (Estudo 2) A espécie P guartelaensis foi isolada de nódulos de Mimosa gymnas em uma região de ecótono entre a Mata Atlântica e o Cerrado As análises filogenéticas revelaram que as estirpes em estudo apresentam uma posição isolada em relação as outras espécies conhecidas do gênero: apresentou como espécies mais próximas P oxyphila na análise do 16S RNAr, compartilhando 98,7–98,9% de IN (identidade nucleotídica), e P nodosa Br3437T na análise de sequências multilocus (MLSA), apresentando menos de 95,7% de IN Análises comparativas baseadas em sequenciamento genômico resultaram em valores inferiores aos sugeridos para a delimitação de espécie, respaldando a descrição da nova espécie No mesmo sentido, o estudo 2 descreve as espécies P atlantica e P franconis, isoladas de solos da Mata Atlantica no estado do Rio de Janeiro, utilizando como plantas-iscas Mimosa pudica e Phaseolus vulgaris As estirpes de P atlantica apresentaram maior IN na filogenia do 16S RNAr (99,6%) e MLSA (96,5%) com P piptadeniae enquanto as estirpes de P franconis apresentaram como espécie mais próxima P tuberum, com IN de 99% e 96% nas filogenias do 16S RNAr e MLSA, respectivamente Nas análises genômicas, as estirpes de P atlantica e P franconis apresentaram os valores de 94,4% e 92,7% de identidade genômica com as espécies mais próximas O estudo 3 identificou simbiovares dentre as espécies de rizóbios do gênero Paraburkholderia Os genes simbióticos nodA, nodC e nifH foram submetidos à análises filogenéticas, revelando a presença de pelo menos cinco simbiovares distintos dentro do gênero Paraburkholderia, com alto suporte estatístico Os simbiovares sugeridos foram denominados como mimosae, atlantica, tropicalis, piptadeniae e africana Por fim, o estudo 4 tem como objetivo realizar uma revisão sobre Paraburkholderia nodulíferas com ênfase em estirpes brasileiras As informações foram relacionadas com a descoberta da capacidade de nodulação e FBN pelas bactérias desse gênero, o histórico taxônomico, a distribuição mundial das espécies, a presença de simbiovares, características filogenéticas, ecológicas e o potencial agrobiotecnológico Os referidos estudos demonstram que o Brasil é um rico reservatório de espécies nodulíferas de Paraburkholderia e nossos resultados contribuíram para compreensão das relações evolutivas dentre as espécies do gênero e com seus hospedeiros Por fim, os quatro estudos reforçam a grande diversidade genotípica e metabólica de rizóbios do gênero Paraburkholderia, em especial no Brasil, que pode ser considerado um importante centro de diversidade do gênero e fonte de bactérias com potenciais inovadoresItem Análise polifásica de estirpes de Bradyrhizobium e descrição de novas espéciesDelamuta, Jakeline Renata Marçon; Hungria, Mariangela [Orientador]; Zilli, Jerri Édson; Gomes, Douglas Fabiano; Ribeiro, Renan Augusto; Barcellos, Fernando GomesResumo: O Brasil sobressai no cenário agrícola por ser um grande produtor de diversas culturas de importância econômica, como por exemplo, a soja (Glycine max) Atualmente, tem-se buscado incrementar a produtividade das culturas, mas o manejo inadequado dos solos e das culturas pode limitar a qualidade dos solos e a sustentabilidade agropecuária A fixação biológica de nitrogênio, realizada por bactérias diazotróficas conhecidas de modo geral como rizóbios, em simbiose com plantas leguminosas, destaca-se como uma importante prática na sustentabilidade agrícola, mas estima-se que a diversidade dessas bactérias ainda é pouco conhecida A técnica polifásica, utilizada hoje na taxonomia e sistemática dos procariotos, engloba informações genotípicas, fenotípicas e filogenéticas para garantir uma classificação apropriada dos microrganismos A essas informações deve-se destacar o incremento, na última década, na incorporação de dados de sequências genômicas e os avanços computacionais para analisar tais sequências, proporcionando uma verdadeira revolução nos estudos taxonômicos e filogenéticos de procariotos Neste trabalho, foram conduzidos estudos polifásicos, incluindo a análise genômica, em grupos de estirpes de Bradyrhizobium com forte indicativo de representarem novas espécies O primeiro estudo englobou duas estirpes, CNPSo 1112 e CNPSo 2833, microssimbiontes de soja perene (Neonotonia wightii) e desmodium (Desmodium heterocarpon), inicialmente relacionadas às espécies Bradyrhizobium elkanii e Bradyrhizobium pachyrhizi, respectivamente A análise polifásica dos dados morfofisiológicos, genotípicos e genômicos suportam a proposta de duas novas espécies, para as quais estão sendo propostos os nomes Bradyrhizobium tropiciagri sp nov (CNPSo 1112) e Bradyrhizobium embrapense sp nov (CNPSo 2833) No segundo estudo, diferenças genéticas (rep-PCR, hibridação DNADNA), genômicas (identidade média de nucleotídeos, conteúdo C+G), fenotípicas (testes morfofisiológicos e perfil de ácidos graxos) e filogenéticas (análise do gene 16S RNAr e multilocus sequence analysis - MLSA) revelaram que um grupo representado por quatro estirpes relevantes para a agricultura e simbiontes de soja, classificadas como Bradyrhizobium japonicum grupo Ia deveriam ser reclassificadas na nova espécie Bradyrhizobium diazoefficiens, sendo a estirpe USDA 11 eleita como estirpe tipo Os resultados obtidos contribuem para o maior conhecimento da diversidade de rizóbios, com ênfase no gênero Bradyrhizobium, que aparentemente representa a maior porcentagem de rizóbios nos trópicos Também houve grande aporte de conhecimento sobre a aplicação da genômica em estudos de sistemática procarióticaItem Aspectos citopatológicos e moleculares da cepa 1154 de rotavírus porcinoLauretti, Flávio; Nozawa, Carlos Mitihiko [Orientador]; Almeida, Álvaro Manuel Rodrigues; Felipe, Ionice; Castilho, Juliana Galera; Filippsen, Laerte FranciscoResumo: Os rotavírus são os mais importantes agentes de gastroenterite em crianças e animais jovens Neste trabalho, os aspectos da patogenia em cultura de células MA-14 infectadas com a cepa 1154 de rotavirus porcino foram determinados e comparados com a cepa padrão SA-11 Foi determinado que a cepa 1154 pertence ao genótipo G5P[6], não possui atividade hemaglutinante e é dependente de ácido siálico nos receptores celulares e da tripsina para formação do plaque A cepa desenvolve efeito citopático (ECP) rápido, com grande capacidade de disseminação entre as células adjacentes, além de possuir mutantes com tamanho de plaque diferente Em paralelo ao ECP foi observado o efeito de fragmentação nuclear de células infectadas, seguido da diminuição da atividade desidrogenásica mitocondrial Sugere-se que estes efeitos ajam de modo cooperativo e acabem levando à morte celular com implicações diretas para patogenia da infecção pelos RVItem Atividade anti-herpética de compostos originários da alga marinha Enteromorpha compressa e do fruto de Morinda citrifoliaLopes, Nayara; Nozawa, Carlos [Orientador]; Vespero, Eliana Carolina; Nakazato, Gerson; Linhares, Rosa Elisa CarvalhoResumo: As doenças causadas pelo vírus herpes simplex (HSV) representam um importante problema médico e social, principalmente devido à sua transmissibilidade, estabelecimento de infecção latente e recorrência Além disso, o HSV infecta 7-9% da população em geral Portanto, a busca de novos compostos anti-herpéticos, se torna de extrema relevância Neste contexto, as substâncias naturais capazes de apresentar mecanismos de ação alternativos podem ser potenciais candidatos para o controle de infecções virais O objetivo deste estudo é investigar a atividade antiviral de sete polissacarídeos da alga verde (Enteromorpha compressa) (F1, SU1F1, SU1F2, SU2F1, SU2F2, SU3F1 e SU3F2) e quatro pectinas do fruto do noni (Morinda citrifolia) (PDN-A, PDN-B, PDN-N, PDN-S) para HSV-1 em culturas de células HEp-2 A citotoxicidade dos compostos foi avaliada pelo ensaio do MTT em células HEp-2 A atividade antiviral dos compostos foi investigada pelo ensaio de redução de plaques, utilizando os protocolos de tempo de adição (tratamentos antes, durante e após a infecção), além dos testes de inibição da adsorção e de atividade virucida Dentre os polissacarídeos da alga, apenas o composto SU1F1 apresentou inibição viral satisfatória, sendo que esta atividade ocorreu principalmente nos estágios iniciais da replicação viral Este composto foi, adicionalmente, avaliado pelo ensaio de imunofluorescência e RT-PCR (reação em cadeia da polimerase associada à transcriptase reversa), sendo confirmado o perfil de inibição viral, principalmente, na transcrição dos genes precoces imediatos Dentre as pectinas do noni, três (PDN-A, PDN-B e PDN-N) demonstraram inibição viral com um desejável índice de seletividade, quando adicionadas concomitantemente à infecção viral Porém, apenas a PDN-A apresentou inibição viral nos tratamentos pós-infecção Diante da importância do desenvolvimento de novos antivirais, este trabalho exalta a eficácia dos compostos naturais no controle de infecções viraisItem Atividade antibacteriana de nanopartículas de prata associadas ao eugenolBodnar, Giovana Carolina; Nakazato, Gerson [Orientador]; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Panagio, Luciano Aparecido; Perugini, Marcia Regina Eches; Campos, Anna Carolina Leonelli Pires deResumo: Bactérias multirresistentes representam um grande problema que desafiam a saúde pública em encontrar estratégias utilizando os antimicrobianos atuais disponíveis no mercado para combater estas infecções Por outro lado, o desenvolvimento de novos fármacos não ocorre no mesmo ritmo dos mecanismos de resistência desenvolvidos pelas bactérias A resistência aos antimicrobianos não é apenas um problema da área clínica No setor de alimentos diversos patógenos humanos vêm adquirindo resistência aos desinfetantes utilizados na indústria alimentícia Sendo assim, pesquisadores buscam por novas substâncias antimicrobianas que podem auxiliar no tratamento das infecções multirresistentes pelo desenvolvimento de alternativas aos antibióticos e aos desinfetantes disponíveis Os produtos naturais e a associação de compostos tornaram-se um importante campo de pesquisa para descoberta de novos antimicrobianos O objetivo desta pesquisa foi avaliar a atividade antibacteriana de nanopartículas de prata biologicamente sintetizada pelo fungo Fusarium oxysporum em associação ao eugenol Eugenol e bio-AgNP demonstraram efeito bactericida, com concentração inibitória mínima (MIC) entre 12 a 2% (v/v) e 394 a 63 µM, respectivamente; e todos os isolados clínicos de Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA) analisados foram sensíveis aos compostos Para a curva de crescimento e morte, eugenol agiu em menos de 2 h, enquanto as nanopartículas levaram de 5 a 1 h para eliminar totalmente as bactérias Gram-negativas e 24 h para as Gram-positivas O efeito sinérgico ou aditivo foi observado quando os compostos foram combinados, com redução dos valores de MIC, para ½ MIC, 1/3 MIC ou até mesmo ¼ MIC, o que melhorou o tempo de ação da bio-AgNP comparado ao uso em isolado A Microscopia Eletrônica de Varredura demonstrou alterações morfológicas celulares após os tratamentos com os compostos em isolado ou em combinação No ensaio de biofilme, a combinação dos compostos reduziu em 5-log o número de células As bio-AgNP associadas ao eugenol, composto derivado do óleo de cravo, são alternativas antimicrobianas que neste estudo demonstraram um importante papel contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, incluindo também cepas multirresistentes, além de atuar contra o biofilme formado por estas bactérias Sendo assim, podem ser uma estratégia alternativa para o controle de infecções, e apresentam um potencial não somente na área clínica/hospitalar, mas também aplicação na indústriaItem Atividade antibacteriana de nanopartículas poliméricas doadoras de óxido nítrico contra Staphylococcus aureus e Escherichia coliCardozo, Viviane Ferreira; Nakazato, Gerson [Orientador]; Nakamura, Celso Vataru; Vespero, Eliana Carolina; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Lonni, Audrey Alesandra Stinghen Garcia; Seabra, Amedea Barozzi [Coorientadora]Resumo: A mastite bovina é uma grave enfermidade veterinária que causa grande perda para a indústria de laticínios em todo o mundo Ela é uma das principais doenças infecciosas, e é de difícil tratamento e controle Além disso, o surgimento de bactérias multirresistentes que causam a mastite tem complicado o seu controle O radical livre óxido nítrico (NO) é um potente agente antimicrobiano Assim, o objetivo deste estudo foi sintetizar partículas poliméricas doadoras de NO, e avaliar a atividade antibacteriana contra cepas de Staphylococcus aureus (MBSA) e Escherichia coli (MBEC) isoladas de mastite bovina Quinze isolados de MBSA e quinze de MBEC foram obtidos de vacas com mastite bovina subclínica e clínica Partículas poliméricas biocompatíveis compostas de alginato/quitosana, ou quitosana/tripolifosfato de sódio (TPP), foram sintetizadas e utilizadas para encapsular o ácido mercaptosuccínico (MSA), que é uma molécula contendo tiol A nitrosação de grupo tiol em partículas contendo MSA formaram as partículas S- nitroso-MSA, que são doadores de NO A cinética de liberação das partículas de S- nitroso-MSA mostrou liberação de NO constante e controlada durante várias horas A atividade antibacteriana das partículas liberadoras de NO foi avaliada pela incubação das nanopartículas com uma cepa de MBSA multirresistente, o qual é responsável por causar mastite bovina Ensaios de atividade anti-biofilme na formação e em biofilmes maduros foram realizados utilizando as cepas de S aureus e as partículas poliméricas de S-nitroso-MSA liberadoras de NO A concentração mínima inibitória das partículas de S-nitroso-MSA-alginato/quitosana contra cepas de MBSA variou de 125 a 25 µg/mL As mesmas nanopartículas apresentaram atividade anti-biofilme nas concentrações de 25 e 5 µg/mL para as cepas de MBSA Os resultados indicam que o uso de partículas poliméricas doadoras de NO é uma interessante alternativa para combater a resistência bacteriana no tratamento e prevenção da mastite bovinaItem Atividade antibacteriana e mecanismos de ação de nanopartículas de ouroNishio, Erick Kenji; Nakazato, Gerson [Orientador]; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Nakamura, Celso Vataru; Bodnar, Giovana Carolina; Cyoia, Paula SignolfiResumo: Os metais nobres têm um histórico de uso na medicina bastante antigo Há relatos de uso desde 15 AC, no entanto deram lugar aos antibióticos após a grande descoberta da penicilina Porém com a emergência de microrganismos multirresistentes, a busca por “novos antimicrobianos” tem levado pesquisadores a “antigos medicamentos”, como o ouro Apesar de antigo, o ouro vem ganhando uma nova forma de destaque, a nanopartícula de ouro (AuNP) Neste estudo, foi avaliada a atividade antimicrobiana de AuNP quimicamente sintetizadas, bem como seus possíveis mecanismos de ação A atividade antibacteriana foi testada frente a cepas Gram-positivas e Gram-negativas, incluindo multirresistentes utilizando técnicas de microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e curva de tempo e morte Já as alterações na bactéria, internas e externas, foram avaliadas através de microscopia eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV) respectivamente Com relação a avaliação dos mecanismos que a AuNP age sobre a bactéria, foram testados permeabilidade de membrana, produção total de espécies reativas de oxigênio (EROs), peroxidação lipídica, carbonilação de proteínas, degradação de ácidos nucleicos e perfil de proteínas totais Além disso, foi avaliada a citotoxicidade em células primárias (hemácias) e de linhagem (HEp-2) Os valores de CIM5 foram de ,5 µg/ml e de 1,56 µg/ml, para Gram-positivos e Gram-negativos, respectivamente Para ambos os grupos, a AuNP apresentou efeito bactericida Nas imagens de MEV observamos extravasamento de material citoplasmático, e na MET observamos acúmulo de AuNP na membrana e citoplasma, lise de membrana e liberação de vesículas de membrana externa, que podem estar relacionadas ao quorum-sensing ocasionando aglomeração das células bacterianas Os ensaios de mecanismos mostraram desestabilização de membrana e permeabilidade, indução de EROs e consequente danos a proteínas, lipídeos e material genético Já os ensaios de citotoxicidade mostraram uma concentração citotóxica (CC5) de 2,12 µg/ml, e uma concentração hemolítica (HC5) de 5,97 µg/ml Esses resultados indicam um grande potencial bactericida das AuNP, agindo em vários alvos dentro da bactéria O valor de CC5 relativamente baixo, pode ser devido às propriedades antitumorais relatadas para as AuNP Portanto, as AuNPs exibem um grande potencial para aplicação como antimicrobiano e controle de microrganismos multirresistentesItem Atividade antibiótica de metabólito secundário produzido por Pseudomonas aeruginosa em Klebsiella pneumoniae produtora de carbapenemaseLopes, Gilselena Kerbauy; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Nakamura, Celso Vataru; Vespero, Eliana Carolina; Nakazato, Gerson; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Coorientadora]Resumo: Mais da metade das infecções relacionadas à assistência à saúde são causadas por microrganismos resistentes aos antimicrobianos, desafiando a terapia com os fármacos disponíveis A resistência bacteriana aos carbapenêmicos, com destaque para infecções causadas por Klebsiella pneumoniae produtora da arbapenemase KPC, estão associadas à elevadas taxas de mortalidade diretamente relacionadas às limitações impostas por este importante mecanismo de resistência Em contrapartida, o desenvolvimento de novos fármacos não mantém o mesmo rítmo dos múltiplos mecanismos de resistência desenvolvidos pelas bactérias Tendo em vista este cenário, a pesquisa por novas substâncias antimicrobianas é indispensável para o controle das infecções multirresistentes Os produtos naturais desempenham papel importante na descoberta de novos fármacos antimicrobianos Neste sentido, metabólitos secundários de Pseudomonas aeruginosa possuem potencial na produção de substâncias antibióticas, tendo em vista sua complexidade genética e diversidade metabólicaItem Atividade antimicrobiana de benzoiltioureias em agentes etiológicos de sepse neonatalBiasi-Garbin, Renata Perugini; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Bispo, Marcelle de Lima Ferreira; Tavares, Eliandro Reis; Lopes, Gilselena Kerbauy; Navarro, Miguel Octávio PérezResumo: Sepse neonatal representa importante causa de morbidade e mortalidade em recém-nascidos e Streptococcus agalactiae (Estreptococo do Grupo B - EGB) continua sendo o principal agente etiológico envolvido nessa infecção A dificuldade no diagnóstico e a emergência de isolados resistentes aos antimicrobianos comerciais representam desafio para prevenir esta infecção Considerando as atividades biológicas descritas para compostos contendo o núcleo tioureia, o objetivo deste estudo foi sintetizar e avaliar a atividade antimicrobiana in vitro de benzoiltioureias contra importantes agentes etiológicos de sepse neonatal e realizar um estudo preliminar de relação estrutura-atividade Uma série de vinte e seis benzoiltioureias com vários substituintes alifáticos e aromáticos na porção tioureia foi apropriadamente sintetizada Posteriormente, a substância que apresentou o melhor potencial antimicrobiano (N-(butilcarbamotioil) benzamida, composto 5, foi modificada através da introdução de diferentes substituintes na porção benzoíla, fornecendo mais três derivados Além disso, o composto 5 foi convertido nos derivados guanidina e ureia correspondentes, com o objetivo de confirmar a importância da fração tioureia para a atividade antimicrobiana Inicialmente, a atividade antimicrobiana dos compostos foi avaliada frente a cepas de referência de bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e leveduras, pelo ensaio de microdiluição em caldo, e as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) foram determinadas Entre todos os derivados avaliados, os compostos alifáticos, principalmente 3, 5 e 6, foram mais ativos que os aromáticos contra todas as bactérias e leveduras utilizadas Streptococcus agalactiae ATCC 13813 foi a espécie mais sensível, apresentando valores de CIM de 62,5 µg/mL (5), 125, µg/mL (6) e 5, µg/mL (3), indicando que, para esta espécie, a atividade antibacteriana foi sensível ao comprimento da cadeia alquílica Além disso, a substituição isostérica de enxofre por nitrogênio ou oxigênio não produziu melhora no efeito antimicrobiano contra essa bactéria, sugerindo que o grupo tiouréia poderia ser considerado um grupo farmacóforo Em seguida, a atividade do composto 5 foi avaliada sobre células planctônicas e sésseis de isolados clínicos de EGB O composto 5 inibiu o crescimento de todos os isolados de EGB, com valores de CIM variando de 15,6 µg/mL a 62,5 µg/mL e valores de CBM iguais a 1, µg/mL para todos os isolados, indicando um efeito bacteriostático Este resultado foi corroborado pela análise da curva de morte e microscopia eletrônica de transmissão, que mostraram que o composto 5 na CIM reduziu a população de células planctônicas em aproximadamente 4 a 6 log após 24 h de tratamento e provocou mudanças significativas na ultraestrutura de EGB após 4 horas de incubação Com exceção de três cepas de EGB, o composto 5 na CIM diminuiu a viabilidade da maioria dos biofilmes maduros (24h) de EGB Adicionalmente, o composto 5 apresentou toxicidade seletiva para as cepas de EGB em comparação com seu efeito sobre as células de mamíferos, HeLa e eritrócitos humanos Estes resultados sugerem que o composto 5 apresenta potencial como protótipo para o desenvolvimento de uma nova classe de agentes antimicrobianos contra EGBItem Atividade antimicrobiana de compostos naturais aplicados em queijosCampos, Anna Carolina Leonelli Pires de; Nakazato, Gerson [Orientador]; Nogueira, Alessandro; Pelayo, Jacinta Sanchez; Ribeiro, Jéssica Caroline Bigasky; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Fagan, Eder Paulo [Coorientador]Resumo: O queijo artesanal é amplamente consumido no Brasil, no entanto por, em sua maioria, ser fabricado com leite cru, pode estar contaminado com bactérias patogênicas A presença de fungos e bactérias é um problema para o setor industrial, visto que pode ocasionar defeitos nos queijos, e levar a consideráveis perdas econômicas Neste estudo, avaliamos a presença de Escherichia coli e Staphylococcus aureus em queijos artesanais oriundos de diferentes estados do Brasil e, posteriormente, analisamos a atividade antimicrobiana do óleo essencial de orégano (OEO), e da associação de méis de Scaptotrigona bipunctata Lepeletier 1836 (HSB) e de Apis mellifera Latreille africanizada (HAM), no controle de microrganismos contaminantes de queijos durante o processo de maturação A partir de 147 amostras de queijos, foram identificados 25 isolados de S aureus (1 amostras de queijo) e 39 de E coli (29 amostras de queijos) Entre esses isolados, destacamos a presença de um isolado de E coli enteropatogênica atípica (aEPEC), e dois isolados de E coli patogênica extraintestinais (ExPEC) Um novo sorotipo (O64474:H8) de E coli foi detectado em um desses queijos, sendo o primeiro relato no Brasil Um dos isolados de E coli mostrou resistência a três importantes antimicrobianos (tetraciclina, ampicilina e ácido nalidíxico), e um isolado de S aureus apresentou resistência a cinco antimicrobianos (ampicilina, estreptomicina, cefoxitina, penicilina e ciprofloxacina Alguns desses isolados de E coli e S aureus foram utilizados como bactérias contaminantes dos queijos contendo antimicrobianos naturais (OEO ou méis) Fungos filamentos (Aspergillus sp, Fusarium sp e Penicillium sp) também foram utilizados para contaminar os queijos produzidos e maturados por 3 dias, seguindo diferentes tratamentos O OEO a ,2 % (v/v) demonstrou alta atividade antibacteriana e antifúngica, reduzindo as populações bacterianas à zero até o sexto dia de maturação, e inibindo a germinação dos esporos fúngicos Já a combinação dos méis (HSB 5% e HAM 25%, v/v) também apresentou atividade antibacteriana, reduzindo a população de E coli e S aureus a zero após 15 e 6 dias, respectivamente, bem como a germinação dos fungos A utilização desses antimicrobianos naturais foi muito eficiente para os microrganismos testados durante a maturação, e o OEO assim como a combinação de méis pode ser uma interessante alternativa para os antimicrobianos convencionais (nisina e natamicina) contra importantes patógenos, como o novo sorogrupo de E coli isolado nesses queijos artesanaisItem Atividade antiviral de polissacarídeos isolados de Azadirachta indica na infecção por poliovírus e herpesvírus, in vitroGalhardi, Lígia Carla Faccin; Nozawa, Carlos [Orientador]; Kawai, Juliana Galera Castilho; Watanabe, Maria Angélica Ehara; Linhares, Elisa Carvalho; Rocha, Sérgio Paulo Dejato daResumo: O poliovírus (PV), agente etiológico da poliomielite, é um vírus não envelopado com genoma de RNA fita-simples, positiva Atualmente, a doença está controlada na maior parte dos países, mas, ainda é endêmica na África e Ásia Os herpesvírus são vírus envelopados, com DNA de fita-dupla e possuem uma ampla gama de hospedeiros, além de causarem infecções persistentes com possíveis reativações O herpesvírus bovino-1 (BoHV-1) produz diversas infecções, como, rinotraqueíte, vulvovaginite, balanopostite e infecções sistêmicas fatais O vírus herpes simplex-1 (HSV-1) ocasiona infecções em humanos, normalmente, benignas, porém, em indivíduos imunocomprometidos pode levar a infecção generalizada, encefalite e ceratoconjuntivite Além da importância médica e animal, esses agentes são modelos de vírus de RNA e DNA, para diversos estudos in vitro A Azadirachta indica (nim) tem sido amplamente utilizada etnofarmacologicamente para o tratamento de diversas doenças, entre elas as infecções virais, sendo algumas com base científica Neste trabalho avaliamos a atividade antiviral dos polissacarídeos (P1 e P2) e seus derivados químicos sulfatados (P1S e P2S), obtidos de A indica, na infecção por PV, BoHV-1 e HSV-1, em células HEp-2 A citotoxicidade foi avaliada pelo MTT, a atividade antiviral pelo ensaio de redução de plaques (PRA) e a inibição da síntese proteica viral pela reação de imunofluorescência (IF) A reação em cadeia de polimerase (PCR) foi aplicada para estudar a inibição da síntese do DNA na replicação do HSV-1 Demonstramos que P1 e P1S inibiram a replicação do BoHV-1, com concentração inibitória 5% (CI5)/índice de seletividade (IS) de 15,2µg/ml/3,6 e 32,1µg/ml/>51,4, respectivamente, sendo P1S mais efetivo que P1 P1 e P1S demonstraram inibição dose-dependente na síntese proteica A maior inibição foi encontrada quando os compostos foram adicionados simultaneamente a infecção (tempo h) Os compostos testados exibiram efeito antiviral contra o PV, com CI5 de 8µg/ml (P1), 37,5µg/ml (P1S), 77,5µg/ml (P2) e 12,1µg/ml (P2S) e IS variando de 18-131,9, demonstrando também, melhor efeito inibitório no tempo h Quando testados contra HSV-1, P1S e P2S também exibiram melhor atividade antiviral no tempo h, com CI5/IS de 31,1µg/ml/> 51,4 e 8,5µg/ml/>19,8, respectivamente Os compostos apresentaram pequeno efeito profilático, cerca de 2% O P1S demonstrou melhor efeito inibitório de 91,8% em comparação com P1 (5%), P2 (71,1%) e P2S (7%) em 2µg/ml A inibição da síntese proteica foi dose-dependente, em concordância com os resultados de PRA Os polissacarídeos inibiram a síntese de DNA do HSV-1 em todas as concentrações testadas no PRA, para P1 e P1S, e até 5µg/ml, para P2 e P2S Neste caso, os grupos sulfatos de P1S e P2S não alteraram o efeito inibitório dos polissacarídeos originais Portanto, os nossos resultados demonstraram a atividade antiviral dos polissacarídeos de A indica contra PV, BoHV-1 e HSV-1 com ação nas fases iniciais da replicação, além da inibição da síntese proteica viral e ação virucida A inibição em etapas diferentes da infecção viral representa uma vantagem em relação aos antivirais convencionais que, normalmente, atuam em uma única etapa, com menor probabilidade de selecionar mutantes resistentes, além da inocuidade e de outros benefícios relatados