Ação antibacteriana de enterocinas produzidas por espécies de Enterococcus sobre células planctônicas e biofilmes
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Resumo: Enterocococcus spp pertencem ao grupo bactérias ácido láticas produtoras de bacteriocinas (enterocinas) que apresentam atividade contra várias bactérias patogênicas de origem alimentar Este estudo foi realizado primeiramente para selecionar enterococos produtores de enterocinas contra Listeria innocua 12612, bem como seu espectro de ação contra outras bactérias oportunistas e em seguida avaliar a influência de suas enterocinas em biofilme bacteriano Para tal, os isolados potencialmente produtores de enterocinas (Ent+) contra L innocua 12612 foram caracterizados quanto a presença de genes estruturais para enterocinas e produção de componente hemolítico Em seguida foi obtido o sobrenadante de cultivo livre de células (CFS) dos Ent+, para avaliar sua ação contra L innocua 12612 por método de disco-difusão, após tratamento com calor (8°C e 1°C), enzimas proteolíticas (a- quimiotripsina, protease e tripsina), resistência a catalase, quantificação da atividade antibacteriana do CFS e do CFS parcialmente purificado por unidade arbitrária (UA), bem como determinar seu respectivo modo de ação e espectro antibacteriano contra outras bactérias Dos 76 enterococos de diferentes fontes, 11 foram considerados Ent+ (5 isolados provenientes de alimentos e 6 de ambiente), além disso 9 destes apresentavam ao menos um gene codificador de enterocina, entA, entB, entP, ent171 e/ou entX Não houve isolados com atividade hemolítica Após a obtenção dos CFS 7/11 dos isolados Ent+ (5 de alimentos e 2 de ambientes) apresentaram halo de inibição contra L innocua Esses 7 CFS foram termoestáveis, de natureza proteica e a ação antibacteriana por peróxido de hidrogênio foi descartada pela utilização de catalase, indicando a ação antagônica pela presença de enterocina Ao concentrar a enterocina (CFS parcialmente purificado) os valores de UA tenderam a aumentar O modo de ação observado foi bactericida A ativididade antagônica dos 7 CFS contendo enterocina contra outras 33 bactérias indicadoras ocorreu principalmente em L innocua, Listeria monocytogenes e Listeria ivanovii Os CFS que apresentaram maiores valores de UA e espectro de ação foram os provenientes de alimentos, provavelmente isso possa estar relacionada com a maior quantidade de genes codificadores de enterocinas por parte desses isolados Além disso, foram selecionados 4 CFS provenientes de alimentos para avaliar sua atividade anti-biofilme de Listeria spp, no desenvolvimento e após a pré- formação do biofilme por 24h a 3°C e 37°C O biofilme foi formado em superfícies abiótica e avaliado por biomassa total (cristal violeta), atividade metabólica (redução de XTT) e microscopio de fluorescência (com marcador de célula morta utilizando iodeto de propidio) Para tal, 8 Listeria spp foram avaliadas quanto a formação de biofime por biomassa total Dessas foram selecionados 3 Listeria spp (Listeria monocytogenes 232, Listeria ivanovii 256 e Listeria innocua 25) para serem submetidas ao tratamento com os CFS Os resultados mostraram que houve atividade anti-biofilme das Listeria spp, por parte de todos os CFS avaliados (desenvolvimento e no biofilme pré-formado), em ambas temperaturas avaliadas De uma maneira geral, a atividade anti-biofilme listerial provocadas pelos CFS, foi acompanhada por uma menor atividade metabólica, bem como redução da estrutura do biofilme e maior quantidade de células mortas nas imagens obtidas, quando comparado com o controle Concluindo, com base nos esforços consideráveis para a busca por novas bacteriocinas para serem aplicadas na área alimentícia principalmente contra Listeria, um importante patógeno alimentar, tem que os enterococos aqui avaliados apresentam-se como potenciais candidatos no controle de bactérias patogênicas sejam em células planctônicas ou sésseis
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Palavras-chave
Enterococcus, Bactérias gram-positivas, Infecções enterocócicas, Virulência (Microbiologia), Gram-positive bacteria, Enterococcicas infections, Virulence (Microbiology)