02 - Mestrado - Microbiologia

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Navegando 02 - Mestrado - Microbiologia por Autor "Almeida, Ricardo Sérgio Couto de"

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    Avaliação da interação entre linhagens derivadas de switching fenotípico de Candida tropicalis e larvas de Galleria mellonella
    Perini, Hugo Felix; Furlaneto, Márcia Cristina [Orientador]; Almeida, Ricardo Sérgio Couto de; Furlaneto-Maia, Luciana
    Resumo: Dentre os fatores de virulência descritos para Candida tropicalis, switching fenotípico tem se destacado por gerar variabilidade fenotípica dentro de populações Galleria mellonella se apresenta responsiva no estudo de virulência de variantes fenotípicos advindos de switching fenotípico, no entanto, pouco se conhece da relação parasito/hospedeiro desse lepdóptero com tais linhagens O presente trabalho teve como objetivo analisar repostas celulares e humorais de G mellonella à infecção com linhagens fenotípicas (Parental, anel, rugosa, revertente de anel e revertente de rugosa) de C tropicalis, assim como observar a interação diferenciada da levedura com componentes do sistema imune da larva Em relação à resposta humoral, todos os morfotipos analisados foram capazes de induzir melanização nas larvas de G mellonella Após 24 horas de infecção, todos os derivantes de switching apresentaram maior indução de melanização em relação ao parental Além da melanização, houve estímulo após uma hora de infecção, da expressão do gene responsável pela síntese de Galiomicina em todos os morfotipos, com exceção do morfotipo Anel Esse morfotipo apresentou a maior indução desse gene após 4 horas de infecção, mostrando que a resposta da larva é mais tardia para essa característica para esse morfotipo A expressão de Gallerimicina, outro peptídeo antimicrobiano, se manteve baixa nos dois tempos analisados Parental, Anel e Rugosa apresentaram diminuição na expressão desse peptídeo, enquanto os respectivos revertentes mantiveram a mesma taxa de expressão das larvas que receberam apenas inóculo com PBS Além do componente humoral, o componente celular também mostrou respostas diferenciadas frente ao contato com os morfotipos analisados O morfotipo Anel, mais virulento no modelo invertebrado, induziu maior diminuição no número de hemócitos e maior sobrevivência quando cultivado na presença dessas células, além disso, seu revertente, embora morfologicamente semlhante ao parental, mostrou semelhança nas características analisadas à morfologia mais estruturada, mostrando que embora ocorra o retorno à morfologia parental, morfologias revertentes podem manter fatores de resposta semelhate aos de morfologias mais estruturadas Com isso o presente trabalho conclui que diferenças na virulência dos morfotipos advindos do evento de switching fenotípico, estão ligadas a eventos multifatoriais relacionados não só à capacidade de resposta imune do hospedeiro, mas também à características expressas pelas leveduras que culminam tanto na expressão tardia de padrões de resposta humoral, quanto na capacidade de escape da resposta celular
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    Candida spp. isoladas da mucosa bucal de pacientes portadores de HIV : identificação, expressão de fatores de virulência e sensibilidade às substâncias antifúngicas
    Paula, Suelen Balero de; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Bizerra, Fernando César; Almeida, Ricardo Sérgio Couto de
    Resumo: A introdução da terapia antirretroviral associada aos inibidores de protease (IP) reduziu a ocorrência de infecções oportunistas em indivíduos portadores do HIV (Human immunodeficiency virus) Contudo, a candidíase orofaríngea continua sendo a infecção fúngica oportunista mais frequente nesses indivíduos A sensibilidade variada e a emergência de isolados resistentes aos antifúngicos entre essas espécies reforçam a necessidade de um diagnóstico microbiológico específico para essas infecções Além disso, a resistência apresentada pelo biofilme à maioria dos fármacos justifica o estudo de novas substâncias com potencial antifúngico Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi identificar, e caracterizar leveduras isoladas da cavidade bucal de pacientes HIV positivos quanto a: sensibilidade a nistatina e fluconazol; expressão dos fatores de virulência; efeito do eugenol sobre células planctônicas e sésseis de Candida dubliniensis e Candida tropicalis Amostras de enxágue bucal de 244 pacientes foram utilizadas nesse trabalho Do total de pacientes, 5,41% estavam colonizados por Candida spp, sendo que 11 pacientes apresentaram co-colonização por duas espécies Candida albicans (1) foi a espécie mais prevalente, correspondendo a 74,1% dos isolados Outras espécies foram isoladas de 35 pacientes, sendo 27 C glabrata, 2 C krusei, 3 C tropicalis e 3 C dubliniensis A maioria dos isolados (59,26%) foi considerada sensível ao fluconazol, 22,96% e 18,52% dos isolados foram considerados sensíveis dose-dependente e resistentes ao fluconazol, respectivamente A maioria dos isolados (86,7%) apresentou CIM entre 2 e 4 µg/mL e 14,15% apresentaram entre 8 e 128 µg/mL para a nistatina A média relativa de HSC (hidrofobicidade da superfície celular) analisada pelo método bifásico, utilizando xileno como hidrocarboneto, foi de 63,47 ± 21,48 e a maioria dos isolados (54,81%) foi classificada como altamente hidrofóbicos Todos os isolados foram capazes de formar biofilme na superfície de poliestireno, entretanto foi observada maior atividade metabólica em biofilmes formados por isolados de C tropicalis Cinco isolados não apresentaram atividade proteolítica em presença de albumina de soro bovino (BSA), entretanto 48,89%, 36,29% e 11,11% apresentaram alta, intermediária e baixa atividade de protease, respectivamente Somente 36,29% dos isolados apresentaram atividade de fosfolipases extracelulares em presença de gema de ovo como substrato A hemólise completa de sangue de carneiro foi observada em apenas 17,4% dos isolados Foi possível verificar, por PCR em tempo real, uma redução significativa na expressão das SAP2 de C albicans isoladas de pacientes em tratamento com os IP quando comparados com aqueles sem esse tratamento O eugenol apresentou atividade sobre células planctônicas, sobre a formação de biofilme e biofilme maduro, sendo que o tratamento com o eugenol reduziu drasticamente a quantidade de células sobre as superfícies O tratamento com o eugenol foi capaz de reduzir a CSH, a adesão em células Hep-2 e em poliestireno Além disso, o tratamento com o eugenol reprimiu a expressão dos genes ALS Os resultados corroboram a importância da identificação e análise do perfil de sensibilidade aos antifúngicos para o planejamento terapêutico adequado para cada paciente