01 - Doutorado - Patologia Experimental

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Navegando 01 - Doutorado - Patologia Experimental por Autor "Araújo, Eduardo José de Almeida"

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    Alterações morfofisiológicas no cólon de ratos após exposição a baixas doses de malation
    (2021-11-23) Pupim, Andréia Carla Eugenio; Araújo, Eduardo José de Almeida; Fernandes, Glaura Scantamburlo Alves; Buttow, Nilza Cristina; Castelucci, Patrícia; Sant Ana, Débora de Mello Gonçales
    Malation (MAL) é um inseticida organofosforado inibidor das colinesterases, muito utilizado para o controle de pragas na agricultura como no combate de mosquitos vetores transmissores de várias arboviroses. O uso deste pesticida químico, expõe os seres humanos aos seus efeitos tóxicos. Sintomas gastrointestinais são observados devido acúmulo de acetilcolina e de alterações no sistema nervoso entérico (SNE) resultando em modificações morfofisiológicas dos órgãos do trato gastrointestinal. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da exposição contínua de duas doses de MAL: 10 e 50 mg/Kg, consideradas baixas de acordo com DL50 oral, no cólon de ratos avaliando a estrutura da parede e parâmetros de motilidade colônica. Ratos Wistar foram distribuídos em três grupos: Controle que recebeu solução salina 0,9% e os grupos M10 e M50 que receberam 10 e 50 mg/Kg, respectivamente, de MAL via gavagem por 40 dias. O cólon foi coletado para análises histopatológicas, do SNE, atividade de colinesterase e análises funcionais. Os dados coletados foram avaliados de acordo com o tipo de distribuição. Ambos os grupos foram comparados em relação ao controle. As diferenças estatísticas foram consideradas quando P<0,05. Após período experimental foi observado em ambos os grupos alterações significativas no fenótipo dos pellets fecais, menor tempo de trânsito intestinal no grupo M50. Após eutanásia constatou-se redução da atividade da butirilcolinesterase. Alterações macroscópicas não foram significativas. Microscopicamente houve atrofia da mucosa em M10 e hipertrofia no M50, e aumento da profundidade das criptas em M50. As camadas submucosa e musculares dos grupos estavam atrofiadas, com redução da massa citoplasmática das células dos estratos musculares demonstrada com aumento do número de núcleos. Na avaliação da densidade populacional de neurônios do SNE, não foram observadas alterações de neurônios imunorreativos (IR) para HuC/D e calrretinina no plexo submucoso (PS) e de neurônios IR para HuC/D, ChAT e nNOS no plexo mioentérico (PM), com redução da proporção de neurônios colinérgicos em relação ao total de neurônios no grupo M50 no cólon proximal (CP), porém no PM no cólon distal (CD) houve perda neuronal de neurônios IR para HuC/D em ambos grupos e menor número para nNOS em M10. Os corpos celulares neuronais estavam hipertrofiados em M10 em ambas as porções e no M50 no CD, com atrofia do M50 na CP no PS. No PM observou-se atrofia no grupo M10 para todas as populações avaliadas no CP e no CD para HuC/D e nNOS, e hipertrofia para ChAT no CD no M50. As baixas doses de MAL desencadearam uma série de alterações nos padrões de motilidade do cólon e da frequência, a duração e a direção dos Complexos Motores Migratórios Colônicos (CMMCs). Em M10, observou-se contrações simultâneas que apresentavam maior pressão e tempo de duração, e aumento no intervalo entre as contrações, sem alterar o perfil dos CMMCs. Em M50, a alteração de motilidade foi mais expressiva, com redução na frequência de CMMCs anterógrados e aumento na frequência de CMMCs retrógrados. Conclui-se que a exposição oral contínua ao MAL causou modificações estruturais e funcionais do cólon de ratos em ambas as doses.
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    Alterações morfológicas e fisiológicas no cólon de camundongos com retocolite ulcerativa aguda e crônica induzida por dextran sulfato de sódio
    (2021-02-25) Watanabe, Paulo da Silva; Araújo, Eduardo José de Almeida; Fernandes, Glaura Scantamburlo A.; Melo, Gessilda de Alcantara Nogueira de; Sant Ana, Debora de Mello Gonçales; Santos, Armenio Aguiar dos
    A doença inflamatória intestinal é uma inflamação recorrente que afeta o trato gastrointestinal, causando alterações na motilidade colônica. A evolução dessas alterações não é completamente compreendida e possivelmente está relacionada a sintomas que aparecem em diferentes graus da inflamação intestinal. Os estudos realizados em modelos animais para avaliar motilidade colônica usualmente utilizam apenas uma porção do cólon, e logo, os resultados geralmente não refletem as alterações que ocorrem em todo o órgão. Mais estudos são necessários para avaliar o desenvolvimento da colite, investigando as alterações causadas no epitélio intestinal e na parede do cólon, no modelo agudo e crônico da doença e investigar se essas alterações morfológicas interferem na motilidade de diferentes porções do cólon. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações estruturais e de motilidade do cólon durante o desenvolvimento da retocolite ulcerativa (RCU) aguda e crônica induzida por DSS em camundongos C57Bl/6. Os animais foram distribuídos em 5 grupos, sendo um grupo controle e os demais grupos expostos ao DSS 3% por 2, 5, 7 dias (RCU aguda) ou 2 semanas (RCU crônica). Durante a indução da RCU, os animais foram monitorados diariamente para obter o índice de atividade da doença (IAD). Após eutanásia, os cólons foram removidos e processados para análises histológicas e para as técnicas de imunofluorecência para avaliação de células tuft e neurônios mioentéricos. A motilidade do cólon foi determinada usando um aparelho de manometria convencional de perfusão multilúmen. De acordo com o IAD, o modelo foi eficaz em induzir a RCU tanto de forma aguda como crônica. Houve um aumento na espessura das camadas mucosa, submucosa, dos estratos da camada muscular, na parede total e redução no número de células tuft. Além disso, observou-se depleção de células caliciformes e um aumento na densidade de fibras de colágeno, bem como aumento numérico de neurônios colinérgicos no plexo mioentérico dos animais com RCU crônica. Tanto a população total como as subpopulações avaliadas de neurônios mioentéricos estavam atrofiadas nos grupos com RCU. A exposição progressiva ao DSS foi acompanhada de acúmulo de ajustes no padrão de motilidade colônica. O avanço da RCU provocou, dentre outros aspectos característicos de dismotilidade, redução no número de contrações, no número de complexos motores de migração colônica e no tempo total de trânsito gastrointestinal. De uma forma geral, a inflamação progressiva fez com que as contrações se tornaram mais vigorosas nas extremidades e mais longas na região medial do cólon. Concluímos que durante o progresso da RCU induzida por DSS ocorrem alterações estruturais no cólon, incluindo aumento no número de neurônios mioentéricos colinérgicos, seguidas de variações no padrão de motilidade de diferentes regiões do cólon que, em conjunto, caracterizam dismotilidade colônica
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    Alterações morfológicas em jejuno de ratos wistar expostos a baixas doses de malation
    (2021-12-17) Basso, Camila Regina; Araújo, Eduardo José de Almeida; Guarnier, Flávia Alessandra; Melo, Gessilda de Alcantara Nogueira de; Natali, Maria Raquel Marçal; Buttow, Nilza Cristina
    Os organofosforados (OF) são mundialmente utilizados na agricultura e centros urbanos de países tropicais para o controle de pragas e vetores de doenças como Dengue e Chinkunguya. São reconhecidos por causar a morte de insetos por atuar em alvos colinérgicos. Contudo, estudos demonstram que pode ocorrer ação em alvos não colinérgicos favorecendo problemas de saúde frente à exposição a baixas doses de forma prolongada. Neste trabalho, objetivou-se avaliar os efeitos decorrentes da exposição contínua a baixas doses do OF malation sobre o jejuno de ratos. Todos os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Estadual de Londrina (UEL). Ratos machos Wistar com 21 dias de idade distribuídos em três grupos, controle, o qual recebeu solução salina 0,9% e os grupos que receberam baixas doses de malation, 10mg/kg (M10) e 50 mg/kg (M50), via gavagem por 40 dias. No 41º dia experimental foi realizada a eutanásia e coleta do jejuno para avaliar a estrutura morfológica da parede do órgão, quantificar e mensurar as populações neuronais dos plexos nervosos, evidenciados por imunofluorescência. Também foi avaliado o consumo de ração, massa de pellets fecais e a atividade de butilcolinesterase no jejuno. Os dados foram avaliados quanto ao tipo de distribuição para definição de testes estatísticos de comparação entre grupos. O teste t de student foi utilizado para dados com distribuição normal e Mann Withney para os dados com distribuição livre, considerando p<0,05 como nível de significância. Em ambos os tratamentos foi observado aumento significantivo na massa corporal, na massa bruta e seca dos pellets fecais. No M10 ainda foi observado aumento na massa jejunal (p<0,05) e no tratamento M50 aumento no consumo de ração e na área das placas de Peyer (p<0,05). Quanto às características morfológicas da parede do jejuno, o M10 apresentou atrofia em todos os paramêtros da camada mucosa, da tela submucosa, e das musculares (p<0,05). Já no grupo M50, observou-se atrofia da camada mucosa, da altura de enterócitos e núcleos, de vilos, da muscular da mucosa e tela submucosa (p<0,05). No plexo submucoso, no grupo M10, os neurônios da população geral, subpopulação fracamente marcada para calretinina tiveram redução do número de neurônios, e junto à subpopulação fortemente marcada para calretinina, sofreram hipertrofia e os corpos celulares no grupo M50 da população geral e da subpopulação fracamente marcada sofreram atrofia (p<0,05). No plexo mioentérico, M10 apresentou atrofia dos corpos celulares da subpopulação colinérgica e hipertrofia da subpopulação nitrérgica (p<0,05), sendo que em M50 as duas subpopulações sofreram hipertrofia (p<0,05). Conclui-se que as doses de malation avaliadas apresentam baixa toxicidade para o jejuno de ratos, pois provocam atrofia das estruturas microscópicas da parede jejunal e alteram o tamanho dos corpos celulares dos plexos nervosos.
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    Análise da perda de força e de massa muscular na síndrome da caquexia induzida pela forma sólida do adenocarcinoma de Ehrlich
    (2020-07-21) Bordini, Heloiza Paranzini; Guarnier, Flávia Alessandra; Araújo, Eduardo José de Almeida; Cecchini, Rubens; Sczepanski, Cláudia Roberta Brunnquell; Borghi, Sergio Marques
    Caquexia é uma síndrome complexa que afeta pacientes com doenças crônicas, como o câncer e piora a qualidade de vida e o prognóstico da doença, pois faz com que o indivíduo se torne resistente à terapia anticâncer, culminando em um mau prognóstico em cerca de 70-80% dos pacientes com estágio avançado. A caquexia é diretamente responsável por 20-30% das mortes por câncer, devido à falência cardíaca e respiratória. Sabe-se que espécies reativas de oxigênio têm importante participação na caquexia, afetando principalmente o músculo esquelético, levando ao dano oxidativo e perda de massa muscular, o que provoca fraqueza e fatigabilidade, distúrbios no metabolismo de todo o corpo, recuperação tardia de doenças e lesões agudas, aumento da morbimortalidade por doenças crônicas, quedas, estadas hospitalares prolongadas e perda de vida independente. O objetivo deste estudo é avaliar a interferência do estresse oxidativo na atrofia e perda de força presentes na síndrome da caquexia em tempos experimentais diferentes (14 dias e 28 dias), em um novo modelo experimental de tumor de Ehrlich, comparando dois tipos de fibras musculares: fibras lentas e fibras rápidas. Malondialdeído (MDA) foi quantificado por TBARS, os hidroperóxidos lipídicos por quimiluminescência, e proteínas carbonílicas por ELISA. A área de secção transversa foi analisada para avaliar a área das fibras. As fibras rápidas mostram mais estresse oxidativo comparado às fibras lentas em 14 dias; no entanto, estas fibras mostram menos estresse oxidativo em 28 dias, sugerindo que este tipo de fibra tem ação de algum efeito protetor. Alguns parâmetros oxidativos, como a carbonilação de proteínas e a hidroperodixação lipídica não parecem ser danos importantes para as fibras rápidas, ao contrário do MDA, que parece ser o principal indutor de atrofia neste tipo de músculo, que apresenta maior diminuição na área das fibras, mesmo em 14 dias. Este trabalho tràs à luz a sugestão de que diferentes tipos de fibras musculares se comportam de maneira diferente, de acordo com o modelo experimental indutor de caquexia. Portanto, o estudo de diferentes modelos experimentais se faz necessário para que se possa compreender quais são as possíveis alterações que acontecem na síndrome da caquexia no câncer.
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    Perfil da recuperação do pâncreas e rins de ratos wistar diabéticos tratados com fração acetato de etila de Trichilia catigua : análise bioquímica, morfologia tecidual e estado redox
    Paulo, Luis Fernando de; Armani, Alessandra Lourenço Cecchini [Orientador]; Araújo, Eduardo José de Almeida; Tonon, Jair; Perles, Juliana Vanessa Colombo Martins; Luiz, Rodrigo Cabral; Zanoni, Jacqueline Nelisis [Coorientador]
    Resumo: O diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica de distribuição mundial, e caracteriza-se pela deficiência ou não produção de insulina pelas células ß pancreáticas Essa deficiência apresenta como principal resultado a hiperglicemia crônica, que por sua vez produz alterações metabólicas e sistêmicas O diabetes apresenta 4 tipos básicos: o DM Tipo 1, DM Tipo 2, Diabetes Gestacional e outros tipos de DM Dentre as principais complicações do DM temos alterações bruscas nos níveis da glicose (hiperglicemia e hipoglicemia) e o desenvolvimento de doenças secundárias ao estado diabético, como a retinopatia, complicações cardiovasculares, neuropatia e nefropatia A nefropatia diabética caracteriza-se por alterações histopatológicas no tecido renal, que levam a lesão dos glomérulos e túbulos distais muitas vezes por mecanismos de estresse oxidativo, e juntamente com lesões pancreáticas criam um ambiente favorável para o desenvolvimento das complicações do DM A utilização de compostos naturais no tratamento de doenças crônicas tem sido bastante estudado A Catuaba (Trichilia catigua) é popularmente utilizada no tratamento de estresse, impotência, déficit de memória e fadigas, e estudos recentes mostram resultados promissores apresentando efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a Fração de Acetato de Etila de Trichilia catigua (EAF) possui algum efeito atenuador ou farmacológico sobre as complicações decorrentes do DM Para isso, utilizou-se Ratos Wistar divididos em 4 grupos: N - normoglicêmico, N-EAF – normoglicêmico tratado com EAF (2 mg / kg); D: diabéticos e D-EAF: diabético tratado com EAF (2 mg / kg) O diabetes foi induzido por uma única injecção de estreptozotocina (STZ) (35 mg / kg) na veia peniana Dois dias após a injecção de STZ, o EAF foi administrado por gavagem, 7 dias por semana, durante 8 semanas Durante o período do experimento os animais foram analisados quanto a parâmetros metabólicos: peso, ingestão de água e ingestão de ração Após esse período foram coletados o sangue total dos animais para análises bioquímicas (glicemia, função renal, função hepática e função pancreática) e análises hematológicas O pâncreas e os rins foram coletados para análises morfométricas e histopatológicas Os ratos do grupo D apresentaram redução de peso corporal, tecido adiposo e massa muscular (p <,5) Estes animais apresentaram aumento na ingestão de alimentos e água e hiperglicemia com atrofia das ilhotas pancreáticas (p <,5) No entanto, a administração EAF no grupo D-EAF atenuou a perda de massa corporal e redução da ingestão de alimentos e de água (p<,5) Além disso, o tratamento EAF em ratos D-EAF promoveu um efeito hipoglicemiante com redução de 24% da glicose no sangue (P <,5) e melhora a outros parâmetros bioquímicos A análise da imuno-histoquímica para marcação da insulina mostra aumento do número de células ß e ilhotas tamanho significativo no grupo D-EAF por proliferação de células-ß marcado com PCNA Além disso, os nossos estudos histopatológicos mostraram que EAF promove redução nos danos do tecido renal (glomeruloesclerose, degeneração glicogênica e depósito de colágeno) em ratos com diabetes tratados com EAF as análises do estresse oxidativo aprsentaram a capacidade da T catigua proteger os rins da peroxidação lipídica O presente estudo mostrou que extrato de T catigua melhora a homeostase da glicose, protege o pâncreas das ações da STZ sobre as células ß, e protege os rins da peroxidação liídica inibindo o desenvolvimento da nefropatia diabética em ratos induzidos por STZ