02 - Mestrado - Microbiologia

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Ação antibiótica de metabólito de Pseudomonas sp. no controle da Xanthomonas arboricola pv. pruni
Vasconcellos, Fernanda Corrêa da Silva; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Mello, João Carlos Palazzo de; Zangaro Filho, Waldemar
Resumo: A bacteriose no pessegueiro é causada pela bactéria Xanthomonas arboricola pv pruni (Xap) que é considerada um dos maiores problemas da cultura São utilizados para o controle desta doença produtos à base de cobre e antibióticos, que podem causar resistência bacteriana e contaminar o meio ambiente Com isso, o controle biológico é uma alternativa para controlar os fitopatógenos Portanto, avaliou-se o metabólito produzido pela bactéria Pseudomonas sp no controle da Xap A Pseudomonas sp foi cultivada em caldo nutriente + CuCl2 por 15 dias (28 °C, 1 rpm) e em seguida centrifugada (9 rpm, 2 min, 4 °C) O sobrenadante foi tratado com diclorometano, concentrado em rotavapor a 45 °C, congelado em nitrogênio líquido e liofilizado A fase diclorometano (FD) obtida foi fracionada por cromatografia líquida a vácuo (CLV) utilizando os solventes, Hexano (F1), Diclorometano (F2) e Acetato de Etila (F3) A fração F3 foi testada quanto à atividade antibiótica contra a Xap através da técnica de difusão em ágar, na concentração inibitória mínima, na avaliação ultra-estrutural utilizando a microscopia eletrônica de varredura e na avaliação sobre a ocorrência de lesões em folha Nesta avaliação as plantas foram mantidas em casa de vegetação e foram tratadas com a fração F3 em dois tempos de aplicação (pré e pós tratamento) nas concentrações de 5, 15, 45 µg mL-1 O número de lesões foi avaliado a partir da contagem nas folhas das plantas No teste de difusão em ágar todas as concentrações inibiram a Xap, sendo a concentração inibitória mínima de 5 µg mL-1 Na avaliação ultra-estrutural pode-se observar alterações no exopolissacarídeo e na morfologia bacteriana Na ultima avaliação os dois tratamentos foram significativos no controle da Xap sendo a concentração 45 µg mL-1 mais efetiva contra a bacteriose Com isso, pode-se concluir que a fração F3 pode ser uma boa alternativa de controle para a bacteriose, diminuindo assim o uso de agrotóxicos, sendo necessário mais estudos desta fração para ser utilizada no campo
Atividade antibiótica de metabólito secundário produzido por pseudomonas aeruginosa em células planctônicas e biofilme de enterococcus faecium
Amichi, Deise Palazini; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Lopes, Gilselena Kerbauy; Morey, Alexandre Tadachi
Resumo: Os enterococos são uma das principais causas de infecções relacionadas à assistência à saúde, devido ao aumento da resistência a uma vasta gama de antibióticos Enterococcus faecium e Enterococcus faecalis são os isolados mais comuns O desenvolvimento de resistência à vancomicina tem sido descrito a partir do final da década de 8 e desde então foi observado um aumento das infecções e colonizações por VRE O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antibiótica da substância bioativa produzida por Pseudomona aeruginosa, cepa LV, sobre células planctônicas e biofilme de E faecium resistente à vancomicina (VREfm) Avaliou-se a atividade antibiótica em células planctônicas por microdiluição, determinando a concentração inibitória mínima (CIM) e o efeito da ação desta substância sobre a viabilidade celular, adesão à superfície de poliestireno e formação de biofilme A menor concentração capaz de inibir 1% do crescimento foi de 15,6 µg mL-1 Na curva de crescimento e tempo de morte observou-se uma redução das células viáveis entre 2-8 horas A substância F3d provocou redução, de 6%, na inibição de adesão das amostras de VREfm em superfície de poliestireno nas concentrações de 15,6 µg mL-1 e 7,8 µg mL-1 Houve uma diminuição de 8% de células viáveis durante a formação do biofilme, nas mesmas concentrações, e ainda uma redução acima de 5% do biofilme formado, na concentração de 25 µ g mL-1, com significativa redução da viabilidade celular A atividade efetiva antibiótica e a baixa toxicidade para o hospedeiro sugerem um potencial agente antibacteriano Entretanto, novos estudos farmacológicos serão necessários para confirmar esta hipótese
Atividade de metabólitos secundários bacterianos no controle do cancro cítrico
Murate, Letícia Sayuri; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Homechin, Martin; Mello, João Carlos Palazzo de
Resumo: O desafio é encontrar novos métodos para o controle da doença do cancro Atualmente, o controle é feito através de erradicação ou uso de metais pesados (cobre) como bactericidas A bactéria LN foi cultivada em meio liquido e o sobrenadante, centrifugado para retirada de células, foi tratado com metanol (AMF) e acetato de etila (AEF), e posteriormente o extrato foi concentrado, filtrado, liofilizado; e fracionado por cromatografia liquida a vácuo (CLV) Depois da CLV, oito frações foram obtidas: FAM, FAE, CLV1, CLV2, CLV3, CLV4, CLV5 e CLV6 Todas as frações foram testadas para atividade contra Xanthomonas axanopodis pv citri (Xac 36) para nesaios de atividade antimicrobiana, em placas de petri e placas de cultura com 24 poços, esse método demonstrou efeito inibitório mas em diferentes concentrações Efeito citotóxico em todas as frações em 5 µg/mL-1 Em plantas somente CLV3 mostrou resultados significantes (p<,5), reduzindo a incidência de lesões de cancro
Avaliação da atividade antibiótica de compostos extracelulares bacteriano no controle de Xanthomonas axonopodis pv. citri cepa 306
Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Mello, João Carlos Palazzo de; Homechin, Martin
Resumo: O Cancro cítrico causado pela Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac) é considerado um dos maiores problemas fitossanitários e econômicos para citricultura mundial Atualmente, a forma mais utilizada de controle é a erradicação das plantas doentes e/ou pulverização com produtos a base de cobre A obtenção de novos produtos para controle do cancro cítrico é necessária, uma vez que as formas atuais de controle não atuam efetivamente na doença e podem contaminar o ambiente pelo uso de metal pesado A bactéria cepa LV (Pseudomonas sp) foi cultivada em caldo nutriente + CuCl2 2H2O (1 mg L-1) por 15 dias (28 °C, 1 rpm) em seguida centrifugada (9 rpm, 2 min, 4°C), sendo o sobrenadante tratado com diclorometano por partição líquido-líquido, concentrado em rotavapor a 45°C, congelado em nitrogênio líquido e liofilizado A fase diclorometano (FD) obtida, foi fracionada por cromatografia líquida a vácuo (CLV) utilizando seis solventes com polaridade crescente Foi testad a ação antibiótica da FD e das frações obtidas na CLV contra a Xac cepa 36 através da técnica de difusão em ágar, e determinada à concentração inibitória mínima em placas de cultura de 24 poços onde a FD e a fração F3 tiveram maior efeito antibiótico As plantas foram tratadas com a FD e com a fração F3 que apresentou maior ação in vitro Os resultados mostraram que ocorreu a diminuição da presença de lesão em cerca de 8% e 94% nas plantas tratadas com FD e F3 respectivamente Estes resulta dos indicam que o uso de substâncias com ação antibiótica pode ser uma excelente ferramenta para o controle da Xac
Avaliação da atividade antibiótica de produtos naturais sobre contaminação bacteriana na produção de etanol
Beranger, Jamile Priscila de Oliveira; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Mello, João Carlos Palazzo de; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de
Resumo: O biocombustível etanol é uma alternativa viável à utilização de combustíveis fósseis, principalmente quanto às questões ambientais, pois o etanol é uma fonte energética renovável, e quando comparado a combustíveis como o petróleo apresenta menores taxas de emissão de gases estufa A produção de etanol é influenciada pela contaminação bacteriana durante o processo fermentativo realizado pela levedura Saccharomyces cerevisiae As bactérias contaminantes na indústria sucroalcooleira são geralmente Gram-positivas, principalmente as espécies de Lactobacillus O controle destes contaminantes geralmente é realizado com o uso de antibióticos, porém devido à seleção de cepas resistentes é necessária a busca de alternativas para este controle Os produtos naturais como os metabólitos secundários bacterianos são fontes promissoras na prospecção por novos antibióticos Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibiótica das frações semi-purificadas de metabólitos produzidos por Pseudomonas aeruginosa (cepa LV) no controle de Lactobacillus sp, contaminante do processo de fermentação etanólica Os metabólitos produzidos pela cepa LV, foram purificados por métodos cromatográficos Todas as frações obtidas foram testadas quanto a atividade antibiótica As Frações F6a, F6a4, F6a6, F6a7 e F6a8 e principalmente F6a74, F6a75 apresentaram resultados satisfatórios no controle do contaminante Lactobacillus sp, sem prejudicarem o crescimento da levedura S cerevisiae, responsável pela produção do etanol A concentração inibitória mínima para as frações F6a74 e F6a75 foi de 31, 25 µgmL-1 e de 25 µgmL-1 para F6a76 Os resultados observados neste estudo demonstraram que compostos isolados a partir de metabólitos secundário de P aeruginosa, cepa LV, podem ser uma ferramenta para o controle de Lactobacillus sp, importante contaminante na produção de etanol
Avaliação da atividade antibiótica in vitro de compostos extracelulares bacteriano sobre Xanthomonas axonopodis e no controle da mancha foliar em eucalipto
Lopes, Lucilene de Paula; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Balbi-Peña, Maria Isabel; Nakazato, Gerson
Resumo: A mancha foliar, causada por Xanthomonas axonopodis, é uma das principais bacterioses que afeta a cultura do eucalipto O patógeno causa lesões foliares que diminuem a área fotossintética e impedem o crescimento da planta O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antibiótica de metabólitos produzidos por Pseudomonas sp, extraídos com diclorometano e fracionados por cromatografia líquida a vácuo, contra X axonopodis A atividade antibiótica da fase acetato de etíla (F3) foi determinada por testes de difusão em agar, bioautografia, determinação da concentração inibitória mínima e ação sobre a morfologia das células de X axonopodis, por microscopia eletrônica de varredura Em experimento em casa de vegetação, mudas de eucalipto foram pulverizadas com F3 antes ou depois da infecção com X axonopodis Resultados da microscopia eletrônica mostraram mudanças nos exopolissacarídeos e na morfologia das células tratadas Em plantas pulverizadas com F3 e inoculadas com X axonopodis , o número de lesões foliares foi 939% menor, quando comparado com as plantas não tratadas Conclui-se que F3 apresenta atividade antibiótica contra X axonopodis e pode ser uma alternativa no controle da mancha foliar em mudas de eucalipto
Avaliação da atividade de compostos extracelulares de Pseudomonas aeruginosa no controle de Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum em tomateiro (Solanum lycopersicum)
Munhoz, Luana Delgado; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Balbi-Peña, Maria Isabel; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de
Resumo: O tomate é uma hortaliça de grande relevância econômica mundial e nacional A podridão mole do tomateiro é causada pela bactéria Gram negativa Pectobacterium carotovorum subsp carotovorum (Pcc) que coloniza os vasos condutores da planta em qualquer fase do cultivo, esta doença não é controlada com produtos químicos, existindo a necessidade de novas alternativas para controle da doença O uso de Pseudomonas sp tem potencial para exploração como pesticida biológico, reduzindo o uso de pesticidas químicos na agricultura Este estudo teve como objetivo avaliar a ação de compostos extracelulares de Pseudomonas aeruginosa no controle da Pcc em tomateiro O processo de produção e extração do composto antibiótico foi realizado de acordo com a patente registrada PI8335-1 – INPI 12/9/28As frações antibióticas foram obtidas por cromatografia líquida em coluna a partir da purificação dos metabólitos brutos da cepa LV Para purificação de fenazina-1-carboxiamida foi utilizada a metodologia de Shanmugaiah et al (21) adaptada para uso em sistema automatizado de cromatografia flash (FP 971 - Agilent®) Para avaliação da atividade antibiótica foram realizados os testes de difusão em disco, microdiluição em caldo, determinação da concentração inibitória mínima (CIM) em placa de 96 poços, avaliação ultra-estrutural in vitro por microscopia eletrônica de varredura (MEV) Na avaliação do controle da doença e da indução de resistência foram realizados testes in vivo em casa de vegetação com a F4A e o composto fenazina-1-carboxiamida, sendo avaliado também o efeito na produção do fruto A comprovação da indução de resistência foi avaliada pela atividade de três enzimas relacionadas com o sistema de defesa das plantas: peroxidase, fenoloxidase e fenilalanina-amônia-liase, em plantas inoculadas e não, tratadas com o composto fenazina-1-carboxamida Os testes em disco indicaram melhor atividade para a fração F4A em todas as concentrações testadas, sendo sua CIM 7812 µg mL-1 para Pcc O composto fenazina-1-carboxiamida não apresentou inibição da Pcc Na MEV foram observadas mudanças morfológicas provocadas pela fração F4A na célula bacteriana após 3 hrs de incubação Nos testes in vivo foi observado o controle da doença nas plantas tratadas, além do estímulo no crescimento e produção, mostrando uma possível indução de resistência sugerida pelo aumento das atividades enzimática Levando-se em conta a presença do composto fenazina-1-carboxamida na fração F4A, necessita-se de mais testes para comprovação da origem da ação dos resultados obtidos O biocontrole da Pcc com a utilização de compostos do metabolismo secundário bacteriano da cepa LV de P aeruginosa pode ser considerado uma ferramenta no manejo deste fitopatógeno
Avaliação de agentes biológicos e seus produtos na incidência de lesões foliares do cancro cítrico
Rampazo, Luís Gustavo de Lázaro; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Saridakis, Halha Ostrensky; Leite Junior, Rui Pereira
Resumo: O cancro cítrico, causado por Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), é um grave problema para a citricultura, pois o principal método de controle é a erradicação das plantas contaminadas O controle biológico com microrganismos representa uma alternativa no controle da doença Foram obtidos quatro isolados bacterianos, de lesões de cancro cítrico em folhas (LV, LN), fruto (FRC) e água residual de leiteria (EC), que demonstraram antagonismo contra Xac Mudas de laranja (Citrus sinensis cv Valencia) foram pulverizadas com suspensões de bactérias e sobrenadantes de culturas dos isolados antagonistas, associados com pré ou pós-aplicação com suspensão de Xac Os resultados mostraram redução na média de lesões de cancro cítrico por folha com as suspensões dos quatro isolados Com os sobrenadantes, EC e FRC reduziram o número total de lesões, a média de lesões por folha e, assim como LV, a porcentagem de folhas lesionadas Foi observado um aumento do número de lesões de cancro com o sobrenadante de LN e do total de folhas lesionadas com a suspensão de células de LV Estes resultados indicam que a antibiose é um importante mecanismo de interação dos isolados no filoplano e que o antagonismo entre bactérias pode ser uma excelente ferramenta para o controle do cancro cítrico
Avaliação de substâncias extracelulares de Burkholderia pyrrocinia RV7S3 no controle de Rhizoctonia solani em Nicotiana tabacum
Farias, Tiago Nunes; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Gionco, Bárbara; Navarro, Miguel Octávio Pérez
Resumo: O fungo fitopatogênico Rhizoctonia solani, possui inúmeros hospedeiros e distribuição geográfica, sendo comumente encontrado no solo, onde pode infectar diversas culturas de interesse econômico, tais como soja, milho, algodão e tabaco, causando perdas consideráveis na agricultura ao redor do mundo Atualmente, o controle de R solani na agricultura é realizado pelo tratamento das sementes com fungicidas de origem sintética O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica de substâncias naturais, produzidas pelo metabolismo secundário da cepa RV7S3 de Burkholderia pyrrocinia, extraídas e semipurificadas, contra R solani A bactéria foi cultivada em caldo nutriente (CN), centrifugada e o sobrenadante submetido a uma partição líquido-líquido com acetato de etila (FA) A fase orgânica obtida foi testada in vitro através de teste de disco-difusão, onde foi verificada a formação de um halo de inibição com raio de 21 mm, mostrando ser esta uma fração altamente ativa contra R solani Em seguida, fez-se a purificação de FA por Cromatografia Líquida à Vácuo (CLV) onde foram obtidas quatro novas frações, das quais apenas F1 mostrou atividade in vitro contra R solani, com um halo de inibição de 17,5 mm A Concentração Inibitóra Mínima (CIM) para F1 frente à R solani foi de 25 µgmL-1 Avaliou-se ainda a atividade de F1 em casa de vegetação frente a infecções experimentais pelo fitopatógeno em tabaco Dois regimes de tratamento foram utilizados, pré e pós Os resultados indicaram inibição significativa dos níveis de podridão caulinar quando comparados com os controles dos tratamentos O pré-tratamento apresentou redução de 69,2% e o pós-tratamento 76,9% Não houve diferença de inibição entre os regimes de tratamento avaliados a 5% de propabilidade Estes resultados sugerem que B pyrrocinia RV7S3 produz compostos antifúngicos que inibem o crescimento de R solani, reduzindo também a incidência de podridão caulinar causada por este fitopatógeno em culturas de tabaco Por se tratar de substâncias naturais, estes compostos mostram-se promissores para o manejo sustentável da doença, tornando-se uma alternativa ao uso de agrotóxicos
Avaliação do impacto ambiental da soja transgênica resistente ao glifosato sobre alguns grupos funcionais de microorganismos do solo
Santinoni, Ivana Abonízio; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Nogueira, Marco Antonio; Zangaro Filho, Waldemar
Resumo: Quando um ecossistema sofre algum tipo de interferência, reações químicas e bioquímicas do solo podem ser alteradas Proteínas de plantas transgênicas podem ser liberadas e influenciar seletivamente a comunidade microbiana na rizosfera O objetivo desse trabalho foi avaliar em casa de vegetação, a influência da soja transgênica resistente ao glifosato, sobre grupos funcionais de microrganismos e algumas características bioquímicas do solo, em comparação com sua variedade parental não transgênica O experimento utilizou duas variedades de sojas resistentes ao glifosato, geneticamente modificadas (GM), BRS – 244 – Londrina (RR EMBRAPA 59) e Soja Valiosa (RR Conquista), e suas parentais não GM, EMBRAPA 59 e Soja Conquista – Uberaba As plantas foram inoculadas ou não com fungo micorrrízico arbuscular (MA) Glomus clarum e G etunicatum e todas foram inoculadas com Bradyrhizobium japonicum SEMIA 58 e B elkanii SEMIA 587 O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com arranjo fatorial 2 x 2 em cinco repetições Durante 43 dias de cultivo foram realizadas as quantificações das populações dos grupos funcionais de microrganismos do ciclo do C (celulolíticos, proteolíticos, amilolíticos, actinomicetos, pseudomonas fluorescente, fungos saprofíticos e bactérias heterotróficas), grupos funcionais dos ciclos do N (proteolíticos, flagelados e ciliados) e grupos funcionais do ciclo do fósforo (solubilizadores de fosfato e colonização micorrízica) Foram também avaliadas a atividade de enzimas do ciclo do C (desidrogenase e celulase), do ciclo do N (urease e asparaginase) e do ciclo do P (fosfatase ácida) e as biomassas microbianas de C e N Em relação ao crescimento da planta foram avaliados os seguintes parâmetros: massa seca e fresca de raiz, parte aérea e nódulos, número de nódulos e comprimento de raiz Os resultados mostraram que não houve diferenças significativas entre as variedades GM e suas parentais não GM com exceção da biomassa microbiana de Nitrogênio e colonização micorrízica que apresentaram menores resultados nas plantas transgênicas e a atividade enzimática da celulase que foi maior nesses tratamentos A inoculação de MA foi o fator que mais influenciou nos resultados, geralmente estimulando os grupos funcionais de microrganismos na rizosfera e inibindo algumas atividades enzimáticas no solo
Avaliação do impacto do algodão transgênico - Bollgard I- sobre alguns atributos microbiológicos do solo
Coimbra, Suzana Sosa; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Andrade, Diva de Souza; Nogueira, Marcos Antônio
Resumo: Quando um ecossistema sofre algum tipo de interferência, a microbiota do solo assim como as reações biogeoquímicas e transformações podem sofrer alterações significativas acarretando em efeitos nocivos a saúde do solo e conseqüentemente no crescimento da planta Proteínas de plantas transgênicas podem ser liberadas, acumuladas e influenciar seletivamente sobre a comunidade microbiana O objetivo desse trabalho foi avaliar, em casa de vegetação, a influência do algodão trasgênico- Bollgard I sobre grupos funcionais de microrganismos do solo, em comparação com a sua variedade parental O experimento utilizou o algodão Bollgard I, que apresenta resistência a lagartas de Lepidoptera, e sua variedade parental não geneticamente modificada (Non-GMP), inoculadas ou não com fungo micorrrízico arbuscular (MA) O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos, cinco tempos de avaliação e cinco repetições que totalizam 1 parcelas experimentais, ao longo de 12 dias após a germinação Foram realizadas análises sobre os atributos microbiológicos: bactérias celulolíticas, proteolíticas e amilolíticas, actinomicetos, pseudomonas fluorescente, fungos totais, bactérias heterotróficas, microrganismos solubilizadores de fosfato, protozoários flagelados e ciliados e colonização micorrízica, respiração basal, biomassa microbiana de carbono e do nitrogênio; bioquímicos: atividades enzimáticas no solo (fosfatase ácida, desidrogenase, urease, celulase e asparaginase) e químicas: pH Assim como, foi avaliado o peso da massa seca da parte aérea, raiz e o comprimento de raiz Os resultados revelaram que os tratamentos influenciaram a atividade enzimática ao longo do tempo amostral O pH foi influenciado em todos os tempos, sendo constatados os maiores valores nas plantas parentais não GMP A interação entre plantas geneticamente modificadas e micorrizas arbusculares influenciou a maioria dos grupos funcionais ao longo dos tempos analisados, constatando-se um efeito deletério sobre a comunidade de bactérias heterotróficas A micorrização demonstrou diferenças ao longo dos 12 dias na grande maioria das enzimas analisadas A interação PGM*MA se revelou significativa para pelo menos uma das cinco enzimas analisadas ao longo dos 12 dias Os tratamentos não influenciaram a taxa de desprendimento de CO2,,os teores de C e de N da biomassa microbiana A presença da planta transgênica não afetou o estabelecimento das relações simbióticas entre a planta e o fungo, sendo considerados altos os níveis de colonização micorrízica nos dois tratamentos A inoculação do FMA influenciou no crescimento da planta tanto na variedade parental quanto na GMPO comprimento específico da raiz por planta foi maior nas plantas micorrizadas durante todos os tempos de avaliação
Bioindicadores de qualidade em solo sob plantio direto e convencional, com e sem adubação verde de inverno
Bernal, Laura Priscila Toledo; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Nogueira, Marco Antonio; Zangaro Filho, Waldemar
Resumo: Os bioindicadores de qualidade de solo, principalmente os relacionados aos ciclos do carbono (C) e nitrogênio (N) são úteis para avaliar o efeito do manejo do solo e da rotação de culturas sobre a dinâmica do C e do N no solo O objetivo desse trabalho foi avaliar as alterações que ocorrem em indicadores biológicos, físicos, químicos e bioquímicos de qualidade, em solo sob plantio direto ou convencional, com ou sem adubação verde de inverno O estudo foi realizado na Fazenda-escola da Universidade Estadual de Londrina/PR em área há 5 anos sob plantio direto ou convencional, em combinação a realização ou não de adubação verde de inverno com aveia preta (Avena sativa) e cultivado com milho (Zea mays) no verão, em um Nitossolo Vermelho eutroférrico As amostras de solo (-1 cm) foram obtidas em novembro/27, antes da instalação da cultura de verão Foram avaliadas variáveis como respirometria, carbono e nitrogênio da biomassa microbiana, relação C/N da biomassa, qCO2, carbono e nitrogênio totais, razão Cmic/Corg e Nmic/Norg, taxa de amonificação e nitrificação, pH, argila dispersa em água, fósforo disponível, desidrogenase, celulase, glutaminase e fosfatase ácida Com relação às variáveis do ciclo do C, a maioria dos resultados obtidos não foi influenciada pelos tratamentos Entretanto, houve efeito significativo sobre a maioria das variáveis relacionadas ao ciclo do N, indicando maior sensibilidade dessa variável ao manejo do solo A área sob plantio direto com adubação verde apresentou maior biomassa microbiana de nitrogênio, o que esteve relacionado com o teor de nitrogênio total e a razão Nmic/Norg O qCO2 não apresentou diferença significativa entre os tratamentos, porém houve uma tendência em ser menor na área de plantio direto e com adubação verde de inverno Desidrogenase e celulase mostraram tendência contrária às variáveis do nitrogênio, com maior atividade na área sob plantio convencional sem aveia e plantio convencional com aveia, respectivamente Entretanto, a glutaminase apresentou alta atividade, relacionando-se com as variáveis do ciclo do N, no tratamento sob plantio direto com presença de adubação verde, diferente da fosfatase ácida, que se apresentou com uma atividade reduzida no sistema de plantio convencional sem adubação verde de inverno As variáveis relacionadas ao ciclo do N apresentaram maior dinâmica em função dos tratamentos, elegendo-as como sensíveis indicadores para avaliar efeito do manejo e cobertura vegetal do solo
Bioprodutos para o controle da contaminação bacteriana na fermentação alcoólica
Simionato, Ane Stéfano; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Aquino, Gisele Silva de; Macedo Junior, Fernando César de; Oliveira Júnior, Admilton Gonçalves de [Coorientador]
Resumo: O etanol combustível possui uma queima limpa e é derivado de produtos agrícolas renováveis, sendo uma alternativa para a alta dependência mundial de petróleo A fermentação industrial para produção do etanol é um processo não-estéril, e desta forma, pode ocorrer o aumento da população de bactérias contaminantes, diminuindo a produção e causando perdas econômicas significativas ao setor Outro ponto crítico para a fermentação alcoólica é a formação de biofilme nos equipamentos do processo fermentativo, devido a difícil identificação e controle Este trabalho teve como objetivo a purificação e identificação dos metabólitos com ação antimicrobiana afim de controlar contaminantes microbianos em fermentadores Os compostos produzidos pela Pseudomonas aeruginosa cepa LV foram purificados através de métodos cromatográficos e todas as frações obtidas foram testadas quanto a atividade antimicrobiana pela técnica de disco difusão e spot-on-lawn A fração semi-purificada CF9 apresentou aditismo com nanopartículas de prata sintetizadas biologicamente (bio-AgNP) para células planctônicas de todos os microrganismos testados O composto isolado CF9d apresentou atividade antimicrobiana seletiva para células planctônicas de Lactobacillus sp Outro composto isolado do metabolismo secundário, CF4b, mostrou atividade inibitória na formação de biofilme de 26,51% com 62,5 µg/mL para Lactobacillus fermentum e 34,93% com 31,25 µg/mL para Leuconostoc mesenteroides Os resultados obtidos neste estudo corroboram com trabalhos realizados anteriormente, tornando as frações e compostos isolados uma alternativa para o desenvolvimento de novas produtos para o controle da contaminação microbiana e formação de biofilmes na produção de etanol
Controle de Candidatus Liberibacter asiaticus em plantas de Citrus sinensis mediado por biocomposto
Pistori, Juliana Fonteque; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Wulff, Nelson Arno; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de
Resumo: O Huanglongbing (HLB, ex-greening),é considerado a mais grave das doenças de citros Não há medidas de controle efetivas e de baixo custo, nem mesmo métodos curativos para o HLB Neste sentido, este estudo teve como objetivo avaliar a atividade da fração F4A resultante do metabolismo secundário de Pseudomonas aeruginosa (cepa LV) em plantas de Citrus sinensis no controle do Huanglongbing O primeiro experimento teve como objetivo avaliar diferenças na população bacteriana de Ca Liberibacter asiaticus pela técnica de q-PCR, plantas de Citrus sienensis do cultivar Valencia foram inoculados com Ca Liberibacter asiaticus pela técnica de enxertia e três concentrações da fração F4A foram avaliadas sendo elas 1µg/mL-1 1µg/mL-1 e 1µg/mL-1 em dois tempos de aplicação denominados de preventivo e curativo, tendo como delineamento experimental blocos cazualizados, com sete replicas biológicas para cada tratamento O segundo experimento teve como objetivo investigar o potencial indutor de resistência da fração através da expressão do gene ß-1,3 glucanase em plantas de Citrus sinensis (Valencia) pela técnica de RT-PCR Três replicatas biológicas foram utilizadas por tratamento, os tratamentos foram os seguintes: aplicação da fração F4A nas concentrações de 1µg/mL-1 1µg/mL-1 e 1µg/mL-1, como controle positivo foi utilizado o produto comercial BION e como controle negativo apenas água destilada, o experimento foi avaliado 24h, 7 dias e 15 dias após a aplicação dos compostos No primeiro experimento o tratamento curativo com 1µg/mL-1 da Fração F4A foi capaz de reduzir em duas unidade de Log a população de Ca Liberibacter asiaticus em comparação com as plantas testemunhas No segundo experimento a expressão do gene de resistência para ß-1,3 gluacanase foi 9 vezes mais expressa no tratamento com 1µg/mL-1 da Fração F4A após 24h da aplicação e 12,9 vezes mais expressa após o sétimo dia de aplicação Os resultados deste estudo mostram-se promissores e sugerem que os compostos produzidos pela cepa LV de Pseudomonas aeruginosa surgem como uma possível alternativa no controle da doença Huanglongbing
Controle de Lactobacillus sp. no processo agroindustrial de fermentação etanólica por compostos do metabolismo secundário de Pseudomonas aeruginosa
Gois, Cintia Greice Matsuoca; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Andrade, Diva de Souza; Nakazato, Gerson
Resumo: A contaminação bacteriana na indústria sucroalcooleira, causada principalmente por Lactobacillus sp, é um dos principais problemas que afetam a fermentação etanólica, pelo fato deste contaminante reduzir os rendimentos na produção do álcool A fração F4 é produzida por Pseudomonas aeruginosa e extraída a partir do tratamento com diclorometano e em seguida fracionada por cromatografia líquida a vácuo com solventes com polaridade crescente e obtida na fase metanol O objetivo deste estudo foi avaliar o controle de Lactobacillus sp no microcosmo da dorna durante a fermentação alcoólica Foi testado a ação da fração F4 em combinação ou não com produtos já utilizados no controle de bactérias contaminantes na indústria sucroalcooleira tais como o ácido sulfúrico e o antibiótico Kamoram® A atividade antibiótica da fase metanol (F4) foi determinada por testes de difusão em agar, bioautografia e determinação da concentração inibitória mínima A avaliação de eficiencia da fermentação foi determinada pela formação de espuma e a floculação, teor alcoólico, acidez total e açúcar redutor residual Também foi determinado a viabilidade celular, brotamento, viabilidade de brotamente, e as populações de Saccharomyces cerevisiae e de Lactobacillus sp Os resultados deste estudo revelam que a fração F4 em comparação com os demais tratamentos possui também atividade antibiótica frente à Lactobacillus sp sem causar efeitos adversos na levedura e melhora o processo de fermentação devido a diminuição de espuma e da floculação Conclui-se que F4 apresenta atividade antibiótica contra Lactobacillus sp e pode ser uma alternativa no controle da contaminação na fermentação etanólica
Desenvolvimento de inoculante microbiano promotor de crescimento de Schizolobium parahyba (Vell.) Blake
Gonçalves, Priscila Jane Romano de Oliveira; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Leal, Alex Carneiro; Nakazato, Gerson; Andrade Filho, Galdino [Coorientador]
Resumo: No contexto do desmatamento ocorrido ao longo dos anos no Estado do Paraná com a perda drástica da cobertura vegetal nativa e a crescente demanda por projetos de recuperação da mata ciliar, o estudo do Schizolobium parahyba (guapuruvú) para avaliar o seu potencial como fonte de madeira e de cobertura vegetal incrementar seu uso por ser uma espécie arbórea nativa da mata atlântica de rápido crescimento O objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de inoculantes microbianos que promovam o crescimento do guapuruvú em substituição ao adubo químico Como inoculantes foram utilizados 1 g de inóculo bruto do fungo micorrízico arbuscular (FMA) Glomus clarum e como fixador de N, 1 mL de suspensão de 17 UFC de uma cepa de Rhizobium sp No controle positivo foi aplicado 1 g por cova de adubo químico formulado NPK 2-5-2 O experimento foi conduzido em condição de campo, na estação experimental do IAPAR no município de Xambrê, PR O delineamento experimental foi de blocos completos casualizados com cinco repetições e oito tratamentos (n = 8) A altura das plantas foi avaliada aos 3, 6, 12 18 e 24 dias Os dados foram submetidos à ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Tukey (p<,5) Aos 3 dias as plantas não inoculadas com fungo MA apresentaram um maior crescimento quando comparadas com as inoculadas O rizóbio e a micorriza não apresentaram efeito no crescimento das plantas A alta concentração de P presente no solo pode ter influenciado negativamente o estabelecimento da simbiose com o FMA Aos 6, 12, 18 e 24 dias, o guapuruvú respondeu significativamente ao tratamento com adubo em comparação com as plantas inoculadas A sobrevivência foi maior no tratamento com adubo Estes resultados demonstram que nos estádios iniciais a inoculação com microrganismos mostra-se pouco eficiente principalmente em plantas arbóreas nativas do grupo sucessional das pioneiras que apresentam uma alta taxa de crescimento como é o caso do guapuruvú quando cultivada em área de pastagem com Brachiaria decumbens
Efeito da adubação e microrganismos promotores de crescimento no desenvolvimento de Schizolobium parahyba
Freitas, Vanessa Fogaça de; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Leal, Alex Carneiro; Zangaro Filho, Waldemar
Resumo: A espécie Schizolobium parahyba da família Leguminoseae contém duas variedades, Schizolobium parahyba var parahyba, popularmente conhecida como guapuruvu, endêmica da Mata Atlântica e Schizolobium parahyba var amazonicum, mais conhecida como paricá, endêmica da Amazônia Por apresentarem um rápido crescimento, entre outras características, estas variedades tornam-se aptas para a produção de madeira e para o reflorestamento de áreas degradadas Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adubação e de microrganismos promotores de crescimento, Rhizobium sp e Rhizophagus clarus, no desenvolvimento do paricá e do guapuruvu Os experimentos foram conduzidos em campo em duas áreas da estação experimental do IAPAR do município de Xambrê, Paraná, Brasil O delineamento experimental para ambas as áreas foi de blocos completos casualizados com cinco repetições e oito tratamentos: Controle; Rhizobium; R clarus; Adubo; Rhizobium + Adubo; Rhizobium + R clarus; R clarus + Adubo; Rhizobium + R clarus + Adubo Na área de estudo do guapuruvu foram amostradas 6 árvores por parcela e no experimento com o paricá 1 árvores por parcela Para a produção dos tratamentos foram utilizados 1 gramas de inóculo bruto do fungo micorrízico arbuscular R clarus, 1 mL de suspensão de células (3,3 x17 UFC/mL) da bactéria Rhizobium sp e 13 g de adubo químico NPK 2-5-2 por cova A altura total das plantas foi avaliada 37, 11, 25 e 36 dias após o plantio e o diâmetro do colo em 25 e 36 dias, a sobrevivência e análise foliar aos 36 dias As médias dos tratamentos foram analisadas pela ANOVA e comparadas pelo teste de Duncan (p<,5) Em todos os períodos avaliados ambas as variedades de S parahyba apresentaram um efeito positivo em altura, diâmetro e sobrevivência para os tratamentos adubados Com relação à analise foliar não houve diferença significativa na quantidade de nitrogênio e fósforo entre os tratamentos Para o guapuruvu os tratamentos com fungo MA e fungo MA + Rhizobium sp proporcionaram uma porcentagem de sobrevivência inferior ao controle, sugerindo que essa diminuição na sobrevivência pode ter ocorrido por haver crescimento de gramínea nas áreas experimentais, uma vez que, a competição com gramínea pode influenciar na interação entre os fungos MA e as espécies arbóreas iniciais causando depressão na espécie arbórea, o que intensifica os efeitos negativos da competição no solo Estes resultados demonstram que o adubo favoreceu o desenvolvimento das duas variedades de S parahyba e que a inoculação com microrganismos promotores de crescimentos mostra-se pouco eficiente quando cultivada em área com gramínea
Efeito da fluopsina C em Acinetobacter baumannii extensivamente resistentes aos antimicrobianos : atividade antibiofilme e interação com a polimixina B
Silva, Leandro Afonso da; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Gionco-Cano, Bárbara; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Pérez, Juan Carlos Bedoya [Coorientador]
Resumo: A resistência de Acinetobacter baumannii à diferentes classes de antimicrobianos vem aumentando rapidamente, e isolados resistentes a todos os antibióticos comerciais disponíveis estão sendo reportados por todo o mundo A formação de biofilmes potencializa a adesão e persistência destas bactérias em diversos tipos de superfícies, aumentando riscos de contaminação Biofilmes também fornecem uma barreira física à ação de antimicrobianos e desinfetantes Estas características culminaram na classificação de A baumannii como o patógeno prioritário ao desenvolvimento de novos antimicrobianos pela Organização Mundial da Saúde A fluopsina C (FlpC) é um composto organocúprico de baixo peso molecular produzido pelo metabolismo secundário de poucas espécies de Pseudomonas e Streptomyces, e que apresenta um amplo espectro de atividade antimicrobiana em bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, incluindo cepas multirresistentes Nesta pesquisa, investigamos a atividade antibiofilme da FlpC em biofilmes de A baumannii extensivamente resistentes aos antimicrobianos (XDR, extensively drug-resistant) formados sobre poliestireno, e também, os efeitos de sua combinação com a polimixina B (PolB) contra células planctônicas A concentração inibitória mínima (CIM) da FlpC para todos os isolados de A baumannii XDR testados foi de 3,5 µg mL-1 Quando combinadas, FlpC e a PolB, um efeito aditivo foi observado, reduzindo os valores de CIM de ambos os antimicrobianos Biofilmes estabelecidos foram grandemente afetados pela exposição à FlpC durante 24 h, levando à remoção de 95,25% da biomassa do biofilme com 7, µg mL-1, seguida por 95,1% com 3,5 µg mL-1, em A baumannii IC 23 Adicionalmente, em 3,5 µg mL-1, observamos redução na viabilidade das células remanescentes, e também a dispersão da matriz do biofilme de IC 23 Os dados obtidos corroboram que a FlpC é um composto promissor com atividades antimicrobiana e antibiofilme contra isolados de A baumannii XDR e pode auxiliar no desenvolvimento de um novo fármaco e formulações desinfetantes, potencializando a remoção de patógenos de superfícies
Efeito da inoculação de bactérias diazotróficas de vida- livre e fungo micorrízico arbuscular (Glomus clarum) em arroz (Orysa sativa
Raimam, Milena Pupo; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Zangaro Filho, Waldemar; Albino, Ulisses Brigatto
Resumo: O arroz é cultivado normalmente em solos deficientes em nitrogênio, exigindo que este elemento seja acrescentado à cultura através de fertilizantes nitrogenados a base de uréia e nitrato, causando problemas de poluição ambiental A utilização da tecnologia da fixação biológica de nitrogênio (FBN) pode diminuir a aplicação destes fertilizantes, reduzindo riscos ambientais Este estudo avaliou os efeitos de quatro gêneros de bactérias fixadoras de N, isoladas da planta carnívora Drosera villosa var villosa, encontrada em solos oligotróficos, e sua interação com fungo micorrízico arbuscular (Glomus clarum), sobre o desenvolvimento de arroz cultivado nos sistemas de sequeiro e irrigado, em casa de vegetação Na condição de sequeiro foram testadas as cepas Methylobacterium sp, Burkholderia sp e Sphingomonas sp, e na condiçãoirrigado foram inoculadas as cepas Burkholderia sp, Pseudomonas sp E Sphingomonas sp As cepas foram inoculadas isoladas e na forma de pool, com ou sem G clarum Os experimentos foram realizados em blocos casualizados, com cinco repetições A presença de G clarum diminuiu ou não afetou o crescimento da planta nas duas condições de cultivo Por outro lado, o fungo estimulou a população de bactérias fixadoras de N na condição de sequeiro Os gêneros de bactérias tiveram diferentes efeitos sob as duas condições de cultivo Alguns gêneros aumentaram o crescimento de raiz e parte aérea em diferentes estágios de crescimento da planta em relação aos controles
Efeito de diferentes substratos na inoculação micorrízica, matéria seca, teores foliares de nitrogênio e fósforo e na produtividade de soja e milho
Barazetti, André Riedi; Andrade Filho, Galdino [Orientador]; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Zucareli, Claudemir
Resumo: O fósforo é um dos nutrientes essenciais mais exigidos durante o ciclo de vida vegetal, considerado um dos mais limitantes na produção agrícola O desenvolvimento de tecnologias que contribuam para um melhor aproveitamento do P do solo, gerando menor demanda por fertilizantes químicos é indispensável uma vez que se trata de um nutriente esgotável e não-renovável Fungos Micorrízico Arbusculares (FMA) são conhecidos por estabelecerem associações simbióticas com raízes de plantas, auxiliando na absorção de nutrientes, principalmente do P Neste contexto, a formulação de um inoculante a base de um FMA, que possa ser utilizado em larga escala, é uma alternativa para auxiliar na redução das quantidades de fertilizantes fosfatados utilizados O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da vermiculita, da turfa e do fosfato de rocha, como veículos na inoculação de sementes de soja (Glycine max) e milho (Zea mays) para o FMA Rhizophagus clarus produzido in vitro O experimento foi conduzido em área experimental da Universidade Estadual de Londrina, Brasil Foram elaborados sete tratamentos, distribuídos em cinco blocos casualizados, sendo: Tratamento Agronômico (TA); MA + Turfa + P (MAT+P); MA + Vermiculita + P (MAV+P); MA + Fosfato de Rocha + P (MAFR+P); MA + Turfa - P (MAT-P); MA + Vermiculita - P (MAV-P); MA + Fosfato de Rocha - P (MAFR-P) As plantas foram avaliadas quanto a: Colonização micorrízica; matéria seca; P e N da parte aérea e produtividade de grãos Para soja, foi observado incremento na produtividade de até 16,3% em relação a TA, com a utilização de vermiculita como veículo para o inóculo, sem adubação fosfatada Já as plantas de milho, utilizando turfa como veículo e adubação fosfatada, obtiveram ganhos de até 2% em produtividade