Efeitos da fumonisina B1, desoxinivalenol e ácido fítico sobre explantes jejunais de suínos : avaliação morfológica, imuno-histoquímica, expressão de citocinas e estresse oxidativo

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dc.contributor.advisorBracarense, Ana Paula Frederico Rodrigues Loureiro [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorSilva, Elisângela Olegário dapt_BR
dc.contributor.bancaSilva, Caio Abércio dapt_BR
dc.contributor.bancaVenâncio, Emerson Josépt_BR
dc.contributor.bancaLuciano, Fernando Bittencourtpt_BR
dc.contributor.bancaSantos, Joice Sifuentes dospt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T11:49:40Z
dc.date.available2024-05-01T11:49:40Z
dc.date.created2018.00pt_BR
dc.date.defesa23.07.2018pt_BR
dc.description.abstractResumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos tóxicos das micotoxinas desoxinivalenol (DON) e fumonisina B1 (FB1) sobre o intestino e investigar a ação moduladora do ácido fítico (IP6) por meio de um modelo ex vivo, analisando a morfologia, proliferação celular, apoptose, expressão de E-caderina e ciclooxigenase-2 (cox-2), estresse oxidativo e expressão de citocinas em jejuno de suínos Para tal, no primeiro experimento, foram utilizados cinco suínos com 24 dias de idade, os quais foram eutanasiados, o jejuno foi excisado, os explantes colhidos (4 explantes/animal) com um punch de 8 mm de diâmetro e submetidos a oito tratamentos (seis explantes/tratamento) : controle (somente meio de cultura), IP6 5mM, FB1 7µM, DON 1 µM, DON 1 µM+ FB1 7 µM, DON 1µM + IP6 5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM e DON 1 µM+ FB1 7 µM+IP6 5 mM, incubados durante quatro horas sob agitação constante em estufa a 37°C Após esse período, três explantes de cada tratamento foram fixados em solução de formalina tamponada a 1% e processados para realização do exame histológico e imuno-histoquímico para os anticorpos anti-ki-67, anti-caspase-3, anti-E-caderina e anti-cicloxigenase-2 Para a análise do estresse oxidativo, três explantes foram congelados em nitrogênio líquido, armazenados a -8C° e posteriormente processados para a avaliação dos níveis de glutationa reduzida (GSH), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e capacidade da atividade antioxidante por meio dos testes de 2, 2–azinobis-3-etil–benzotiazolina-6-ácido sulfônico (ABTS) e poder de redução do ferro (FRAP) Alterações morfológicas, diminuição da expressão de E-caderina, aumento da proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e ocorrência de estresse oxidativo foram mais evidentes nos explantes expostos aos tratamentos com DON A presença de IP6 reduziu significativamente as alterações morfológicas, proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e estresse oxidativo, e aumentou a expressão de E-caderina nos explantes jejunais expostos às micotoxinas Para avaliação da expressão de citocinas e peptídeos antimicrobianos, um segundo experimento com metodologia similar ao primeiro foi realizado Explantes jejunais foram colhidos (21 explantes/animal) e submetidos aos seguintes tratamentos (três explantes/tratamento): controle (somente meio de cultura), FB1 7µM, FB1 7 µM+IP6 2,5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM, DON 1 µM, DON 1µM + IP6 2,5 mM e DON 1µM + IP6 5 mM Após a incubação, os explantes foram congelados em nitrogênio liquido e armazenados a - 8°C para avaliação da expressão das citocinas pró-inflamatórias (IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-1, IFN-?, TNF-a) e anti-inflamatórias (IL-1) e ß-defensinas 1 (pBD-1) e 2 (pBD-2) por meio da reação em cadeia pela polimerase em tempo real A exposição às micotoxinas induziu a alterações na expressão das citocinas e ß-defensinas A presença de IP6, principalmente na dose de 5mM modulou os efeitos das micotoxinas, tornando a expressão da resposta inflamatória e antimicrobiana similar aos explantes controle Os resultados do presente estudo evidenciaram os efeitos tóxicos da FB1 e DON sobre o jejuno de suínos, assim como o efeito protetor do IP6 em modular as alterações morfológicas, imunológicas e do estresse oxidativo induzido por tais micotoxinaspt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The aim of the present study was to evaluate the toxic effects of mycotoxins fumonisin B1 (FB1) and deoxynivalenol (DON) on the intestine, and investigate the modulatory action of phytic acid (IP6) through of ex vivo model and assessment of morphology, cell proliferation, apoptosis, E-cadherin and cyclooxygenase-2 (cox-2) expression, oxidative stress and cytokines and antimicrobial peptides in jejune of swine In the first experiment, five pigs 24-days-old were euthanized and the jejunal explants were collected (4 explants/animal) using a punch of 8 mm in diameter and submitted to eight treatments (six explants/treatment): control (culture medium), IP6 5mM, FB1 7µM, DON 1 µM, DON 1 µM+ FB1 7 µM, DON 1µM + IP6 5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM and DON 1 µM+ FB1 7 µM+IP6 5 mM, and incubated at 37°C under orbital shaking After the incubation period, three explants per treatment were fixed in 1% neutral buffered formalin and processed for the histological examination and immunohisotchemistry assay using antibodies against ki-67, cleaved caspase-3, e-cadherin and cox-2 Three explants were immediately frozen in liquid nitrogen and posteriorly stored at -8°C to the assessment of reduced glutathione (GSH), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), 2,2'-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) and ferric reducing antioxidant power (FRAP) levels Morphological changes, decrease of E-cadherin expression and increase of cell proliferation, apoptosis, cox-2 expression and oxidative stress were more evident in the explants exposed to DON treatments The presence of IP6 significantly decreased the morphological changes, cell proliferation, apoptosis, cox-2 expression and oxidative stress, and increased the E-cadherin expression in the jejunal explants exposed to mycotoxins in all treatments A second experiment with similar methodology was performed to evaluate the cytokines and antimicrobial peptides expression The jejunal explants without serosa were collected (21 explants/animal) and submitted to treatments (three explants/treatment): control (medium culture), FB1 7µM, FB1 7 µM+IP6 25 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM, DON 1 µM, DON 1µM + IP6 25 mM and DON 1µM + IP6 5 mM After incubation, the explants were frozen in liquid nitrogen and posteriorly stored at -8°C to the assessment of pro- (IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-1, IFN-?, TNF-a) and anti-inflammatory (IL-1), and ß-defensins 1 (pBD-1) and 2 (pBD-2) by the reverse transcription polymerase chain reaction quantitative real time assay The exposition to mycotoxins induced to changes in the cytokines and ß-defensins expression The presence of IP6, mainly in the 5 mM concentration, modulated the mycotoxins effects, becoming the expression of inflammatory and antimicrobial response similar to the control explants The results of present study evidenced the toxic effects of FB1 and DON on the swine jejune, and the protective effect of IP6 in modulate the morphological and immunological changes, and the oxidative stress induced by these mycotoxinspt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/9135
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectMicotoxicoses em animaispt_BR
dc.subjectÁcido fíticopt_BR
dc.subjectSuínopt_BR
dc.subjectStres oxidativopt_BR
dc.subjectMycotoxicoses in animalspt_BR
dc.subjectPhytic acidpt_BR
dc.subjectSwinept_BR
dc.subjectOxidative stresspt_BR
dc.titleEfeitos da fumonisina B1, desoxinivalenol e ácido fítico sobre explantes jejunais de suínos : avaliação morfológica, imuno-histoquímica, expressão de citocinas e estresse oxidativopt_BR
dc.typeTesept_BR

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