Efeitos da fumonisina B1, desoxinivalenol e ácido fítico sobre explantes jejunais de suínos : avaliação morfológica, imuno-histoquímica, expressão de citocinas e estresse oxidativo
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Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos tóxicos das micotoxinas desoxinivalenol (DON) e fumonisina B1 (FB1) sobre o intestino e investigar a ação moduladora do ácido fítico (IP6) por meio de um modelo ex vivo, analisando a morfologia, proliferação celular, apoptose, expressão de E-caderina e ciclooxigenase-2 (cox-2), estresse oxidativo e expressão de citocinas em jejuno de suínos Para tal, no primeiro experimento, foram utilizados cinco suínos com 24 dias de idade, os quais foram eutanasiados, o jejuno foi excisado, os explantes colhidos (4 explantes/animal) com um punch de 8 mm de diâmetro e submetidos a oito tratamentos (seis explantes/tratamento) : controle (somente meio de cultura), IP6 5mM, FB1 7µM, DON 1 µM, DON 1 µM+ FB1 7 µM, DON 1µM + IP6 5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM e DON 1 µM+ FB1 7 µM+IP6 5 mM, incubados durante quatro horas sob agitação constante em estufa a 37°C Após esse período, três explantes de cada tratamento foram fixados em solução de formalina tamponada a 1% e processados para realização do exame histológico e imuno-histoquímico para os anticorpos anti-ki-67, anti-caspase-3, anti-E-caderina e anti-cicloxigenase-2 Para a análise do estresse oxidativo, três explantes foram congelados em nitrogênio líquido, armazenados a -8C° e posteriormente processados para a avaliação dos níveis de glutationa reduzida (GSH), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e capacidade da atividade antioxidante por meio dos testes de 2, 2–azinobis-3-etil–benzotiazolina-6-ácido sulfônico (ABTS) e poder de redução do ferro (FRAP) Alterações morfológicas, diminuição da expressão de E-caderina, aumento da proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e ocorrência de estresse oxidativo foram mais evidentes nos explantes expostos aos tratamentos com DON A presença de IP6 reduziu significativamente as alterações morfológicas, proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e estresse oxidativo, e aumentou a expressão de E-caderina nos explantes jejunais expostos às micotoxinas Para avaliação da expressão de citocinas e peptídeos antimicrobianos, um segundo experimento com metodologia similar ao primeiro foi realizado Explantes jejunais foram colhidos (21 explantes/animal) e submetidos aos seguintes tratamentos (três explantes/tratamento): controle (somente meio de cultura), FB1 7µM, FB1 7 µM+IP6 2,5 mM, FB1 7 µM+IP6 5 mM, DON 1 µM, DON 1µM + IP6 2,5 mM e DON 1µM + IP6 5 mM Após a incubação, os explantes foram congelados em nitrogênio liquido e armazenados a - 8°C para avaliação da expressão das citocinas pró-inflamatórias (IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-1, IFN-?, TNF-a) e anti-inflamatórias (IL-1) e ß-defensinas 1 (pBD-1) e 2 (pBD-2) por meio da reação em cadeia pela polimerase em tempo real A exposição às micotoxinas induziu a alterações na expressão das citocinas e ß-defensinas A presença de IP6, principalmente na dose de 5mM modulou os efeitos das micotoxinas, tornando a expressão da resposta inflamatória e antimicrobiana similar aos explantes controle Os resultados do presente estudo evidenciaram os efeitos tóxicos da FB1 e DON sobre o jejuno de suínos, assim como o efeito protetor do IP6 em modular as alterações morfológicas, imunológicas e do estresse oxidativo induzido por tais micotoxinas
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Palavras-chave
Micotoxicoses em animais, Ácido fítico, Suíno, Stres oxidativo, Mycotoxicoses in animals, Phytic acid, Swine, Oxidative stress