Validação da cultura de explantes uterinos de cadelas em diestro e alterações induzidas pela micotoxina zearalenona
Data
2024-10-30
Autores
Sambatti, Natália Ribeiro
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Resumo
A frequente incidência de problemas uterinos em cadelas demanda estudos aprofundados para compreensão e prevenção dessas afecções. A cultura de explantes surge como uma alternativa ética e eficiente, permitindo procedimentos experimentais mais controlados, realizados em um menor espaço de tempo e com a redução no número de animais em experimentação. Micotoxinas, como a zearalenona, afetam negativamente o desenvolvimento reprodutivo. Contudo, seus efeitos específicos no útero ainda não estão completamente compreendidos. Desta forma, o objetivo desta pesquisa foi padronizar em cadelas um método de cultivo uterino in vitro, bem como avaliar os efeitos histológicos e metabólicos, provocados pelo a-zearalenol (a-Zol), metabólito proveniente da zearalenona, no útero de cadelas em diestro, utilizando o modelo ex vivo. Dez úteros foram obtidos de cadelas saudáveis, entre um e oito anos, submetidas à ovariohisterectomia na fase estral de diestro. Os explantes uterinos foram obtidos com o auxílio de punch de 6mm e posteriormente incubados a 38ºC, em meio de cultivo DMEM enriquecido, sob agitação. Os explantes foram divididos em: controle, a-Zol em baixa (0,68 µM) e alta (3,4 µM) concentração. Após 24 horas de incubação em estufa, uma parte dos explantes foram fixados e processados para a realização do escore lesional e morfometria por meio da histologia e outra parte foi armazenada em freezer a – 80ºC para posterior análise da resposta ao estresse oxidativo. Além disso, parâmetros de homeostasia celular foram avaliados no sobrenadante do meio de cultivo. Os principais achados histológicos nos explantes expostos ao a-Zol foram achatamento do epitélio de revestimento e apoptose do epitélio de revestimento e glandular. Aumento significativo no escore lesional foi observado nos explantes expostos a ambas as concentrações de a-Zol em relação ao controle; o escore lesional não diferiu entre os grupos tratados. Não houve diferença significativa na morfometria entre os tratamentos, bem como na análise do sobrenadante do meio de cultivo. A maior concentração de a-Zol induziu aumento de carbonilação de proteínas e, em ambos os tratamentos ocorreu a oxidação de lipídeos de membranas. Conclui-se que o modelo ex vivo utilizado demonstrou efetividade na avaliação da toxicidade induzida pelo metabólito a-Zol em explantes uterinos de cadelas, resultando em alterações histológicas e alteração do estado redox, mesmo na menor concentração de a-Zol (0,68 µM)
Descrição
Palavras-chave
α-Zearalenol, Cultivo in vitro, Ciclo Estral, Histologia, Dano oxidativo, Útero, Micotoxinas, Toxicidade reprodutiva, Estresse oxidativo, Reprodução animal