Caracterização de determinantes de resistência adquirida aos antimicrobianos e de genes de virulência em isolados clínicos e ambientais de Pseudomonas spp. multirresistentes

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Palermo, Raquel Lima

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Resumo

Resumo: O surgimento de isolados de Pseudomonas spp multirresistentes aos antimicrobianos (MR-PS) é um problema de saúde pública, uma vez que a maioria dos determinantes de resistência aos antimicrobianos são adquiridos e podem ser disseminados entre isolados, em diversos ambientes, por meio da transferência lateral de genes O objetivo desta pesquisa foi realizar a vigilância epidemiológica de MR-PS no ambiente hospitalar e comunitário contribuindo para o controle de infecções hospitalares no Hospital Universitário de Londrina (HU) Foram analisadas a presença de genes que codificam resistência adquirida aos antimicrobianos e virulência, e a relação clonal entre os isolados A identificação e o perfil de resistência foram, primeiramente, realizados pelo sistema automatizado Vitek-2 (BioMéuriex®) para os isolados clínicos e por testes bioquímicos convencionais para os isolados ambientais seguido por identificação molecular baseada em análises do gene 16S rRNA para espécies de Pseudomonas Os genes codificadores de resistência aos beta-lactâmicos e carbapenêmicos de classe A, B e D de Ambler, quinolonas (qnr), aminoglicosídeos (rmt) e colistina (mcr-1) foram pesquisados por PCR e a identidade confirmada por sequenciamento O contexto dos genes codificadores de carbapenemases foi investigado por PCR-mapping e a relação clonal entre os isolados foi analisada por ERIC-PCR Um total de 198 isolados clínicos recuperados entre os anos de 215 e 216 foram selecionados para o estudo com base nos seguintes critérios: isolados únicos, consecutivos e não sensíveis a ceftazidima e/ou imipenem e meropenem Além disso, foram incluídos no presente trabalho sete isolados ambientais de MR-PS produtores de carbapenemases, os quais foram recuperados de efluentes e faziam parte de uma coleção de isolados de Pseudomonas spp do Laboratório de estudos moleculares e resistência aos antimicrobianos (LEMRA) do Ambulatório de Especialidades do HU (AEHU) Com exceção das polimixinas (1,% sensíveis), altas taxas de resistência foram obtidas para todos os antimicrobianos testados Taxas preocupantes foram detectadas para os carbapenêmicos em isolados clínicos: 81,5% e 82,5% para imipenem e meropenem, respectivamente Dentre os 198 isolados clínicos MR-PS, 38 (19,2%) apresentaram genes codificadores de beta-lactamases, dos quais 32 (16,1%) apresentaram genes codificadores de carbapenemases Desta forma, a nova distribuição dos genes codificadores de beta-lactamases foi: em 14 isolados o gene blaSPM-1, seguido por 1 isolados carreando o gene blaKPC-2, 2 blaIMP-16, 6 blaCTX-M-2 e 6 blaGES-5, indicando um aumento da taxa de isolados portadores de blaKPC e uma redução de isolados portadores de blaSPM em comparação com as pesquisas anteriores Os genes investigados que codificam resistência às quinolonas, aminoglicosídeos e colistina não foram detectados neste estudo Os 32 isolados clínicos de MR-PS que apresentaram genes de carbapenemases foram agrupados em 12 clones (A-L) distribuídos ao longo do período analisado em diversas unidades hospitalares Os isolados que carreiam o gene blaSPM-1 foram agrupados em um único clone (A), sugerindo uma disseminação clonal e que este clone A é o responsável pela manutenção desse determinante de resistência no HU Os isolados codificadores de blaIMP-16 foram agrupados em 2 clones que diferiram fenotipicamente do clone que se manteve no hospital por 1 anos caracterizado pela sensibilidade ao meropenem Dentre os 1 isolados portadores do gene blaKPC-2, obtiveram-se 7 clones revelando a adaptação deste determinante de resistência em nosso hospital, provavelmente movido pela pressão seletiva do uso de carbapenêmicos A presença de uma nova carbapenemase do tipo GES-5 foi detectada em 6 isolados pertencentes a um mesmo clone (B) Todos os isolados exibiram um padrão de genes de virulência que condiz com sua a capacidade patogênica, porém não apresentaram correlação com a produção de carbapenemases, mas podem estar relacionados a clones epidêmicos mundiais Os isolados ambientais apresentaram-se clonalmente distintos dos isolados clínicos, representando 7 clones diferentes (A-G) condizendo com a diversidade esperada em isolados ambientais Além disso, a frequência de genes de virulência foi menor, revelando uma menor capacidade patogênica quando comparado aos isolados clínicos A presença de isolados produtores de carbapenemases recuperados de efluentes é alarmante uma vez que este ambiente é caracterizado pela notável capacidade de disseminação da resistência Além disso, esses resultados mostram que as taxas e a distribuição dos genes de resistência adquirida aos antimicrobianos podem flutuar em uma instituição e que a sua vigilância é essencial para estabelecer as medidas de controle de infecção para resguardar a eficácia dos antimicrobianos no tratamento de infecções por Pseudomonas spp

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Palavras-chave

Pseudomonas, Drogas, Resistência em microorganismos, Pseudomonas, Drug resistance in microorganisms

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