Caracterização de determinantes de resistência adquirida aos antimicrobianos e de genes de virulência em isolados clínicos e ambientais de Pseudomonas spp. multirresistentes

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Microbiologiapt_BR
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dc.contributor.advisorOgatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorPalermo, Raquel Limapt_BR
dc.contributor.bancaTognim, Maria Cristina Bronharopt_BR
dc.contributor.bancaPaula, Suelen Balero dept_BR
dc.contributor.coadvisorCarrara-Marroni, Floristher Elaine [Coorientador]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T15:13:49Z
dc.date.available2024-05-01T15:13:49Z
dc.date.created2018.00pt_BR
dc.date.defesa09.03.2018pt_BR
dc.description.abstractResumo: O surgimento de isolados de Pseudomonas spp multirresistentes aos antimicrobianos (MR-PS) é um problema de saúde pública, uma vez que a maioria dos determinantes de resistência aos antimicrobianos são adquiridos e podem ser disseminados entre isolados, em diversos ambientes, por meio da transferência lateral de genes O objetivo desta pesquisa foi realizar a vigilância epidemiológica de MR-PS no ambiente hospitalar e comunitário contribuindo para o controle de infecções hospitalares no Hospital Universitário de Londrina (HU) Foram analisadas a presença de genes que codificam resistência adquirida aos antimicrobianos e virulência, e a relação clonal entre os isolados A identificação e o perfil de resistência foram, primeiramente, realizados pelo sistema automatizado Vitek-2 (BioMéuriex®) para os isolados clínicos e por testes bioquímicos convencionais para os isolados ambientais seguido por identificação molecular baseada em análises do gene 16S rRNA para espécies de Pseudomonas Os genes codificadores de resistência aos beta-lactâmicos e carbapenêmicos de classe A, B e D de Ambler, quinolonas (qnr), aminoglicosídeos (rmt) e colistina (mcr-1) foram pesquisados por PCR e a identidade confirmada por sequenciamento O contexto dos genes codificadores de carbapenemases foi investigado por PCR-mapping e a relação clonal entre os isolados foi analisada por ERIC-PCR Um total de 198 isolados clínicos recuperados entre os anos de 215 e 216 foram selecionados para o estudo com base nos seguintes critérios: isolados únicos, consecutivos e não sensíveis a ceftazidima e/ou imipenem e meropenem Além disso, foram incluídos no presente trabalho sete isolados ambientais de MR-PS produtores de carbapenemases, os quais foram recuperados de efluentes e faziam parte de uma coleção de isolados de Pseudomonas spp do Laboratório de estudos moleculares e resistência aos antimicrobianos (LEMRA) do Ambulatório de Especialidades do HU (AEHU) Com exceção das polimixinas (1,% sensíveis), altas taxas de resistência foram obtidas para todos os antimicrobianos testados Taxas preocupantes foram detectadas para os carbapenêmicos em isolados clínicos: 81,5% e 82,5% para imipenem e meropenem, respectivamente Dentre os 198 isolados clínicos MR-PS, 38 (19,2%) apresentaram genes codificadores de beta-lactamases, dos quais 32 (16,1%) apresentaram genes codificadores de carbapenemases Desta forma, a nova distribuição dos genes codificadores de beta-lactamases foi: em 14 isolados o gene blaSPM-1, seguido por 1 isolados carreando o gene blaKPC-2, 2 blaIMP-16, 6 blaCTX-M-2 e 6 blaGES-5, indicando um aumento da taxa de isolados portadores de blaKPC e uma redução de isolados portadores de blaSPM em comparação com as pesquisas anteriores Os genes investigados que codificam resistência às quinolonas, aminoglicosídeos e colistina não foram detectados neste estudo Os 32 isolados clínicos de MR-PS que apresentaram genes de carbapenemases foram agrupados em 12 clones (A-L) distribuídos ao longo do período analisado em diversas unidades hospitalares Os isolados que carreiam o gene blaSPM-1 foram agrupados em um único clone (A), sugerindo uma disseminação clonal e que este clone A é o responsável pela manutenção desse determinante de resistência no HU Os isolados codificadores de blaIMP-16 foram agrupados em 2 clones que diferiram fenotipicamente do clone que se manteve no hospital por 1 anos caracterizado pela sensibilidade ao meropenem Dentre os 1 isolados portadores do gene blaKPC-2, obtiveram-se 7 clones revelando a adaptação deste determinante de resistência em nosso hospital, provavelmente movido pela pressão seletiva do uso de carbapenêmicos A presença de uma nova carbapenemase do tipo GES-5 foi detectada em 6 isolados pertencentes a um mesmo clone (B) Todos os isolados exibiram um padrão de genes de virulência que condiz com sua a capacidade patogênica, porém não apresentaram correlação com a produção de carbapenemases, mas podem estar relacionados a clones epidêmicos mundiais Os isolados ambientais apresentaram-se clonalmente distintos dos isolados clínicos, representando 7 clones diferentes (A-G) condizendo com a diversidade esperada em isolados ambientais Além disso, a frequência de genes de virulência foi menor, revelando uma menor capacidade patogênica quando comparado aos isolados clínicos A presença de isolados produtores de carbapenemases recuperados de efluentes é alarmante uma vez que este ambiente é caracterizado pela notável capacidade de disseminação da resistência Além disso, esses resultados mostram que as taxas e a distribuição dos genes de resistência adquirida aos antimicrobianos podem flutuar em uma instituição e que a sua vigilância é essencial para estabelecer as medidas de controle de infecção para resguardar a eficácia dos antimicrobianos no tratamento de infecções por Pseudomonas spppt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The emergence of Pseudomonas spp (MR-PS) is a public health problem, since most antimicrobial resistance determinants are acquired and can be disseminated among isolates in a variety of environments through lateral gene transfer The objective of this research was to performance the epidemiological surveillance of MR-PS in the hospital environment and community contributing to the control of hospital infections at the Hospital Universitário de Londrina (HU) Were analyzed the presence of genes coding for antimicrobial resistance, virulence and the clonal relationship between the isolates The identification and resistance profile were first performed by the Vitek-2 automated system (BioMéuriex®) for clinical isolates and by conventional biochemical tests for environmental isolates followed by molecular identification based on analyzes of the 16S rRNA gene for Pseudomonas species The genes encoding resistance to beta-lactam and carbapenems from class A, B and D of Ambler, quinolones (qnr), aminoglycosides (rmt) and colistin (mcr-1) were screened by PCR and the identity confirmed by sequencing The context of the genes encoding carbapenemases was investigated by PCR-mapping and the clonal relationship between the isolates was analyzed by ERIC-PCR A total of 198 clinical isolates recovered between the years 215 and 216 were selected for the study based on the following criteria: single, consecutive and non-susceptible isolates for ceftazidime and/or imipenem and meropenem In addition, were included in this study seven environmental isolates of MR-PS producing carbapenemases, which were recovered from effluents and were part of a collection of Pseudomonas spp from the Laboratório de estudos moleculares e resistência aos antimicrobianos (LEMRA) of the Ambulatório de Especialidades do HU (AEHU) With the exception of polymyxins (1% sensitive), high resistance rates were obtained for all antimicrobials tested Concern rates were detected for carbapenems in clinical isolates: 815% and 825% for imipenem and meropenem, respectively Among the 198 MR-PS clinical isolates, 38 (192%) had beta-lactamases encoding genes, of which 32 (161%) had genes encoding carbapenemases Thus, the new distribution of the genes encoding beta-lactamase was: in 14 isolates the blaSPM-1 gene, followed by 1 isolates carrying blaKPC-2 gene, 2 blaIMP-16, 6 blaCTX-M-2 and 6 blaGES-5, indicating an increase in the rate of blaKPC carriers isolates and a reduction of blaSPM carriers isolates compared to previous research The investigated genes encoding resistance to quinolones, aminoglycosides and colistin were not detected in this study The 32 clinical isolates of MR-PS that showed carbapenemase genes were grouped into 12 clones (A-L) distributed over the period analyzed in several hospital units The isolates carrying the blaSPM-1 gene were grouped into a single clone (A), suggesting a clonal spread and that clone A is responsible for maintaining this resistance determinant in HU The isolated encoding blaIMP-16 were grouped into two clones differed phenotypically from the clone that was maintained in the hospital for 1 years and characterized by sensitivity to meropenem Among the 1 isolates carrying the blaKPC-2 gene, 7 clones were obtained, revealing the adaptation of this resistance determinant in our hospital, probably due to the selective pressure of carbapenem use The presence of a new carbapenemase type GES-5 was detected in 6 isolates belonging to the same clone (B) All isolates exhibited a pattern of virulence genes that matched their pathogenicity but did not correlate with the production of carbapenemases, but may be related to global epidemic clones The environmental isolates were clonally distinct from clinical isolates, representing 7 different clones (A-G), matching the expected diversity in environmental isolates In addition, the frequency of virulence genes was lower, revealing a lower pathogenicity when compared to clinical isolates The presence of carbapenemase producers isolated recovered from effluents is worrisome since this environment is characterized by the remarkable capacity of dissemination of resistance In addition, these results show that the rates and distribution of antimicrobial acquired resistance genes may float in an institution and that their surveillance is essential to establish infection control measures to safeguard the effectiveness of antimicrobials in the treatment of infections by Pseudomonas spppt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/16691
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectPseudomonaspt_BR
dc.subjectDrogaspt_BR
dc.subjectResistência em microorganismospt_BR
dc.subjectPseudomonaspt_BR
dc.subjectDrug resistance in microorganismspt_BR
dc.titleCaracterização de determinantes de resistência adquirida aos antimicrobianos e de genes de virulência em isolados clínicos e ambientais de Pseudomonas spp. multirresistentespt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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