Comparação do conteúdo lipídico e expressão gênica de embriões produzidos in vitro de vacas Bos taurus indicus cultivados com Forskolin ou Peptídeo Natriurético C
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Costa, Camila Bortoliero
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Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação do meio de cultivo com forskolin e peptídeo natriurético C (NPPC) sobre o desenvolvimento, conteúdo lipídico e níveis de transcritos de genes relacionados com a qualidade e metabolismo celular de embriões Bos taurus indicus produzidos in vitro Para o cultivo in vitro foram utilizados ovários (n = 42) de 21 fêmeas Nelore, coletados de abatedouro local e transportados em solução salina a 3-35º C até o laboratório Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados in vitro No dia 5 (D5) de cultivo in vitro os embriões foram divididos em três grupos experimentais e adicionadas as substâncias no meio de cultivo; grupo controle, forskolin (1 µM) e NPPC (1 nM) As taxas de blastocisto e eclosão foram avaliadas em D7, D9 e D1 Para a avaliação da concentração lipídica, foram coletados blastocistos (D7; n=1 /grupo) e corados com o corante Preto Sudão B As expressões dos genes GPX1, SREBF1, POU5F1, AKR1B1, HAND1, HP1, IFNT2 e SCD foram analisadas por qRT-PCR Para a análise estatística das taxas de cultivo in vitro foi utilizado o teste ANOVA do sistema SAS (p=,9); para o conteúdo lipídico, foi utilizado o teste ANOVA, seguido de teste Tukey (p?,5); na análise das expressões gênicas, foi utilizado software JMP As taxas de blastocisto entre os grupos, foram 39,5 % no grupo controle; 37,9 % grupo forskolin e 44,4 no NPPC As taxas de eclosão em D9 e D1 foram respectivamente, grupo controle (43,5 %; 48,4%), forskolin (55,7%; 62,9%) e NPPC (54,6%; 63,9%; p=,9) A concentração lipídica nos tratamentos foram de 883 UA (unidade arbitrária) grupo controle; 772 UA grupo forskolin e 881UA no grupo NPPC (p?,5); concentração lipídica/área (UA x1-1/µm2) foi de 1,1±,8 no grupo controle; ,9±,7 no grupo forskolin e 1,±,6 no grupo NPPC; concentração lipídica/volume (UA x1-13/µm3) 5,4±4,7; 4,3±4, e 4,6±2,9 nos grupos controle, forskolin e NPPC (p?,5) Em nosso estudo, os genes avaliados demonstraram diferentes respostas de acordo com a substância submetida in vitro (p=,9) Os genes POU5F1, HP1 e HAND1 obtiveram elevadas concentrações de transcritos nos embriões do grupo controle e NPPC O gene AKR1B1, obteve uma concentração de RNAm semelhante entre os tratamentos, sendo que os embriões tratados com forskolin se assemelharam aos embriões submetidos ao NPPC; e os embriões submetidos ao tratamento com o NPPC obtiveram abundância relativa de transcritos similar ao grupo controle(p=,9) Os transcritos do gene GPX1 obtiveram concentrações semelhantes no grupo controle, forskolin e NPPC Genes relacionados com o metabolismo de lipídeos, SREBF1 e SCD, apresentaram diferenças nas concentrações de transcritos Com relação do gene IFNT2, foi evidenciado maiores concentrações em embriões tratados com forskolin e NPPC Como conclusão, não houve diferença entre as taxas de blastocisto As taxas de eclosão em D1 foram maiores nos embriões tratados com forskolin ou NPPC A concentração lipídica dos embriões submetidos ao cultivo in vitro sem qualquer substância, com forskolin ou com NPPC mostrou-se constante Entretanto, os genes estudados apresentaram diferentes quantidades de transcritos de acordo com o tratamento submetido, mostrando assim efeito do tratamento sob o desenvolvimento inicial dos embriões, metabolismo celular relacionado com obtenção de energia e possível metabolização dos lipídeos
Descrição
Palavras-chave
Reprodução animal, Bovino, Embrião, Fertilização in vitro, Reprodução animal, Animal reproduction, Cattle, Fertilization in vitro, Embryos