Fusarium verticillioides : caracterização molecular e detecção em milho através de ensaio imunoenzimático
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Meirelles, Paula Garcia
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Resumo
Resumo: Fusarium verticillioides é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas Este fungo pode causar perdas econômicas significativas para produtores e processadores de grãos, criadores de animais, além de representar sérios riscos à saúde humana e animal Este trabalho teve como objetivo desenvolver um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a detecção de F verticillioides em amostras de milho, avaliar a correlação entre esta metodologia e técnicas tradicionais de detecção de fungos e fumonisinas, assim como avaliar polimorfismos no gene FUM6 associado à biossíntese de fumonisinas, através de polimorfismo conformacional de fita simples Os polimorfismos encontrados foram associados à produção de fumonisina B1 (FB1) Para o desenvolvimento do ELISA competitivo indireto, foram obtidos exoantígenos de 8 isolados de F verticillioides, sendo que os antígenos de 3 isolados (97K, 113F e 162A), devido a maior concentração de proteínas e maior número de bandas protéicas visíveis em eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), foram selecionados para a produção de anticorpos policlonais O soro imune anti-97K, com maior título no ELISA indireto (1:128) foi escolhido para os ensaios posteriores Quarenta amostras de milho recém-colhido foram analisadas quanto à concentração de exoantígenos de F verticillioides, contagem de bolores e leveduras, e determinação de ergosterol e fumonisinas dos grãos, visando avaliar a correlação entre estes parâmetros F verticillioides foi também cultivado em meio líquido para a avaliação da correlação entre biomassa e exoantígenos O perfil eletroforético dos exoantígenos produzidos para o desenvolvimento do ELISA apresentou bandas com massas moleculares aparentes variando entre 17 e 17 kDa Não foi observada correlação significativa entre exoantígenos determinados por ELISA competitivo indireto e contagem total de bolores e leveduras, contagem de Fusarium spp e níveis de fumonisinas Por outro lado, o coeficiente de correlação entre exoantígenos e ergosterol foi 52, enquanto que entre biomassa e exoantígenos de F verticillioides em cultivo em meio líquido foi 84 Três isolados de F verticillioides apresentaram perfil eletroforético diferente dos demais, demonstrando que existe polimorfismo para o loco fum6 O isolado 97J apresentou polimorfismo na região correspondente ao sítio P45 da enzima, enquanto que os isolados 97L e 119Fa apresentaram polimorfismos na região do sítio "FAD-binding 1" A mutação no domínio P45 não parece estar associada ao aumento ou diminuição da produção de fumonisinas, uma vez que o isolado 97K produziu níveis intermediários de FB1 (15 µg/g), porém os isolados com polimorfismo no domínio "FAD-binding" apresentaram elevada produção de FB1 (2643 e 2814 µg/g respectivamente, para 97L e 119Fa) Os resultados obtidos sugerem que o ELISA com exoantígenos apresenta potencial para detecção de Fusarium spp em amostras de milho e que o gene FUM6 pode ser um marcador molecular para linhagens altamente toxigênicas de F verticillioides
Descrição
Palavras-chave
Milho, Fusario, Fusarium verticillioides, Micotoxinas, Fumonisinas, Corn, Mocotoxins, Fusarium