02 - Mestrado - Biotecnologia
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Item Valorização da casca de cacau: extração de compostos antioxidantes e celulose(2025-08-18) Cerqueira, Julia Andrade; Oliveira, Suzana Mali de; Carvalho, Gizilene Maria de; Ivano, Léa Rita Pestana Ferreira Mello; Beluci, Natália de Camargo LimaResumo: A casca do grão de cacau é o principal resíduo da produção do cacau, representando 10 a 20% do peso total do fruto, contém substâncias de interesse comercial, como compostos fenólicos (CF) e celulose. Os CF são moléculas que apresentam atividade antioxidante, podendo ter aplicação na produção de alimentos e cosméticos. Enquanto a celulose, um polissacarídeo de ampla utilização, é aplicado na indústria de alimentos, cosmética, farmacêutica e de materiais. Os métodos atuais de extração são complexos e utilizam reagentes tóxicos para o meio ambiente, com isso, o objetivo deste trabalho foi estudar a valorização da CGC a partir da extração de CF e celulose empregando-se processos que visam minimizar a geração de efluentes. Empregou-se um pré-tratamento na casca in natura (CIN), obtendo-se a casca pré-tratada (CPT). Para a extração de CF foram empregados dois processos: a extração assistida por calor (EAC) e a extração assistida por ultrassom (EAU); e para a extração da celulose foi empregado o ácido peracético como agente de branqueamento em processo de etapa única. A CPT apresentou maior capacidade de absorção de água e óleo (9,40 g H2O/ g e 5,10 g óleo/ g), em contrapartida a CIN apresentou maior capacidade intumescimento (12,09 mL/g). As amostras submetidas a EAC resultaram em maiores concentrações de CF em comparação à EAU, com valores de 6,56 mg GAE/ g (CPT) e 16,67 mg GAE/ g (CIN). As atividades antioxidantes determinadas pelo método de DPPH e ABTS foram maiores na CIN submetida à EAC, apresentando 48 mg TE/ g e 256 mg TE/ g, respectivamente. A celulose derivada da casca in natura (CE-CIN) apresentou o maior índice de cristalinidade. Os resultados apontam alternativas sustentáveis para obter CF e celulose do resíduo do cacau, com processos de baixo impacto ambiental e mínima geração de efluentesItem Superexpressão de ortólogos ao AtAREB1 e aplicação exógena de ácido abscísico em soja sob déficit hídrico(2026-03-09) Silva, João Vitor da; Henning, Liliane Marcia Mertz; Costa, Denis Santiago da; Foloni, José Salvador SimonetiNa safra 2025/2026 o Brasil lidera a produção mundial de soja (Glycine max) com, aproximadamente, 178 milhões de toneladas, representando 42% do total global. Apesar dos dados positivos, é comum haver reduções na produtividade em função de períodos de déficit hídrico, principalmente durante os estágios de formação dos componentes de rendimento. As projeções climáticas indicam um cenário de aumento da frequência e intensidade de períodos de seca, reforçando a necessidade de estratégias de melhoramento voltadas à tolerância ao déficit hídrico. Nesse contexto, a superexpressão de genes envolvidos com a tolerância ao déficit hídrico, relacionados a via do hormônio Ácido Abscísico (ABA), representa uma importante estratégia. A superexpressão do fator de transcrição AtAREB1 de Arabidopsis thaliana na linhagem transgênica de soja 1Ea2939 promoveu o aumento da sensibilidade das plantas ao ABA, causando o fechamento dos estômatos, redução do crescimento da planta e síntese de enzimas que protegem as plantas contra o estresse osmótico. Contudo, cultivares transgênicas enfrentam restrições regulatórias, com necessidade de demorados e onerosos estudos de biossegurança, o que torna relevante o estudo de genes ortólogos nativos do genoma do organismo alvo. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo compreender os efeitos do ABA nos mecanismos de resposta à seca em soja por meio da geração de plantas transgênicas superexpressando ortólogos do gene AtAREB1, pela atualização do background genético da linhagem 1Ea2939 e por meio da aplicação exógena de ABA em plantas de soja. A transformação genética da cultivar elite BRS 573 via Agrobacterium tumefaciens resultou em eficiências de 2,61%, 1,79% e 1,24% para as construções contendo o gene AtAREB1, e seus potenciais ortólogos, Glyma.04G039300 e Glyma.06G040400, respectivamente. Esses valores são compatíveis com os encontrados na literatura para cultivares elite. A obtenção de eventos transgênicos na cultivar BRS 573 representou a atualização do background genético da linhagem tolerante à seca 1Ea2939 para uma base de maior potencial produtivo. Visando determinar os efeitos da aplicação exógena de ABA sobre respostas fisiológicas e agronômicas da cultura sob déficit hídrico, foi avaliada a aplicação exógena de ABA nas doses de 50, 100 e 200 µM via radicular na cultivar BR 16 e na linhagem 1Ea2939 submetidas ao déficit hídrico nos estádios fenológicos R1 e R5. Foi observada redução temporária da condutância estomática e da fotossíntese, com respostas dependentes da dose e do genótipo. A linhagem tolerante 1Ea2939 apresentou menor sensibilidade à redução da fotossíntese após a aplicação de ABA quando comparada à cultivar suscetível BR 16, indicando maior estabilidade fisiológica associada à ativação constitutiva da via mediada por AREB1. Em ambos os genótipos, os efeitos do ABA exógeno foram transitórios, com recuperação fisiológica após alguns dias, sugerindo absorção e degradação do fitormônio no substrato. Os resultados indicam que a modulação fisiológica promovida pelo ABA demonstrou ser uma estratégia promissora para o aumento da tolerância da soja ao déficit hídrico, resultando na preservação da biomassa de vagens e grãos na cultivar sensível sob restrição hídricaItem Filmes orodispersíveis biodegradáveis a partir de maltodextrina e pululana: produção e caracterização(2025-02-19) Matos, Beatriz Malaguti Veiga de; Oliveira, Suzana Mali de; Marim, Beatriz MarjorieA indústria farmacêutica tem cada vez um maior interesse no desenvolvimento de novas formas farmacêuticas a partir de matérias-primas de fonte renovável para a veiculação de princípios ativos. Este trabalho teve como objetivo desenvolver filmes orodispersíveis (ODFs) à base de maltodextrina e pululana, utilizando glicerol, sorbitol, polietilenoglicol 400 e xilitol como plastificantes. Os filmes foram produzidos pela técnica de casting e caracterizados quanto às suas propriedades físico-químicas, térmicas, espectroscópicas, de barreira ao vapor de água, solubilidade, grau de intumescimento e tempo de desintegração. A análise de FT-IR indicou a presença de interações intermoleculares entre os componentes, evidenciadas por deslocamentos nas bandas dos grupos hidroxila e carbonila. A TGA demonstrou que todos os filmes apresentaram estabilidade térmica até aproximadamente 300 °C. Pequenas perdas de massa foram observadas em temperaturas inferiores a 100 °C, associadas à eliminação de umidade residual, sem comprometer a integridade dos filmes, indicando potencial para aplicações comerciais que exigem resistência térmica. O tempo de desintegração dos filmes variou estatisticamente dentro de uma faixa próxima, demonstrando que as formulações desenvolvidas são promissoras para a produção de ODFs biodegradáveisItem Produção bacteriana de moléculas tensoativas para fins biotecnológicos(2024-03-08) Vicente, Bianca Jesus; Gasparin, Fabiana Guillen Moreira; Rocha, Cristiani Baldo da; Colodi, Franciely GroseProduzidos por microrganismos, os biossurfactantes são moléculas anfipáticas, biodegradáveis e de baixa toxicidade, com propriedades emulsificantes e tensoativas, além de possuírem maior estabilidade do que os surfactantes sintéticos sob condições extremas. Este estudo teve por objetivo produzir, extrair, caracterizar e aplicar biossurfactantes oriundos de bactérias dos gêneros Acinetobacter, Bacillus e Pseudomonas isoladas de alho roxo comercializado na região norte do Paraná. Para tanto, realizou-se um teste inicial com o intuito de verificar a capacidade de produção de biossurfactante das bactérias. A linhagem que produziu o biossurfactante com melhor índice de emulsificação de 24h (IE24) foi selecionada para prosseguimento da pesquisa. Após a seleção, avaliou-se a produção de biossurfactante em meios de cultivo com diferentes composições. Em seguida, verificou-se a estabilidade da emulsão em função de tempo, temperatura, pH e concentração salina. Avaliou-se a atividade emulsificante com diferentes compostos hidrofóbicos, a capacidade de dispersão de óleo de motor usado, a citotoxicidade, a atividade antiviral e antioxidante. Além disso, realizou-se a caracterização do biossurfactante extraído. Bacillus cereus UELAsF2.2 apresentou um IE24 (58,53 ± 4,01%) superior às demais culturas (p < 0,05), sendo escolhida para o prosseguimento do estudo. Dentre os diferentes meios de cultivo testados, os melhores resultados de IE24 foram nos meios Dyg’s total (64,87 ± 2,2%), Dyg’s sem glicose (62,13 ± 0,7%), Dyg´s sem glicose + 2% de óleo de soja usado (60,8 ± 1,6%), Dyg´s sem glicose e peptona + 2% de óleo de soja usado (60,43 ± 0,6%) e Dyg´s sem glicose e extrato de levedura + 2% de óleo de soja usado (63,47 ± 0,5%), não havendo diferença estatística entre eles. Os biossurfactantes produzidos nessas condições apresentaram ainda, capacidade de emulsificação para compostos hidrofóbicos como hexadecano (IE24= 64,5%), estabilidade da emulsão ao longo de 60 dias e frente a variações de temperatura e salinidade. Foi possível verificar que o meio de cultivo teve influência na estabilidade frente a variações de pH. O biossurfactante não foi considerado citotóxico para a linhagem celular Vero ATCC CCL81, com mais de 70% de viabilidade celular na concentração de 500 µg/mL. O biossurfactante exibiu atividade antiviral contra o Herpes vírus simples 1 (HSV-1) (cepa KOS) com 100% de inibição na concentração de 400 µg/mL. Apresentou também atividade antioxidante, determinada pelos métodos DPPH• e inibição dos radicais ABTS. As análises de FT-IR e HPLC mostraram que o biossurfactante produzido pela bactéria Bacillus cereus apresenta similaridades químicas de surfactina, pertencente à classe dos lipopeptídeos.Item Mapeamento genético de genes de resistência a Phakopsora pachyrhizi em Vigna unguiculata (feijão-caupi)(2026-05-27) Sousa, Yalle Pereira de; Marcelino-Guimarães, Francismar Corrêa; Iseppon, Ana Maria Benko; Arias, Carlos Alberto ArrabalA ferrugem asiática, causada por Phakopsora pachyrhizi, é uma importante doença da soja, sendo a resistência genética uma estratégia promissora para seu manejo. Este estudo teve como objetivo avaliar a resistência à ferrugem asiática em feijão-caupi (Vigna unguiculata) e identificar regiões genômicas associadas a essa resistência por meio do mapeamento de loci de caracteres quantitativos (QTLs). Para isso, foi utilizada uma população de linhagens recombinantes endogâmicas (RIL F7), derivada do cruzamento entre os genótipos contrastantes BR14-Mulato e IT85F-2687. A genotipagem foi realizada por genotyping-by-sequencing (GBS) e a fenotipagem por ensaios com folhas destacadas inoculadas com P. pachyrhizi. Foram avaliados oito caracteres: número de lesões (N. Lesões), severidade (P_sev), porcentagem de lesões com urédias (%LU), porcentagem de lesões com urédias abertas (%OU), número de urédias por lesão (NoU), número de urédias abertas por lesão (NoU OPEN), nível de esporulação (SL) e classificação visual (C_visual). O mapeamento identificou QTLs significativos para seis caracteres, totalizando quatro QTLs associados à resistência, sendo três localizados no cromossomo 10 e um no cromossomo 1. No cromossomo 10, um QTL na posição de 28,00 cM foi associado aos caracteres C_visual, NoU e a %LU, explicando 29,74%, 18,79% e 19,96% da variação fenotípica, respectivamente. Outros QTLs no cromossomo 10 foram associados ao N. Lesões, na posição de 6,00 cM e com maior efeito aditivo (-19,70), e a P_sev, na posição de 2,00 cM. No cromossomo 1, foi identificado um QTL associado a SL, na posição de 124,00 cM, explicando 11,96% da variação fenotípica. Os resultados evidenciam regiões genômicas promissoras associadas à resistência à P. pachyrhizi em feijão-caupi, subsidiando futuros estudos e estratégias de melhoramento genético.Item Silenciamento do Gene KTI1 via Crispr/Cas9 visando o aumento da digestibilidade da soja.(2024-04-29) Alcantara, Lucas Vinicius de Sousa; Henning, Liliane Marcia Mertz; Roggia, Isabel; Marin, Silvana Regina RockenbachA soja [Glycine max (L.) Merr.] é uma oleaginosa de importância econômica mundial, rica em aminoácidos e proteínas, é considerada uma das principais fontes para alimentação humana e animal. Mais de 90% da produção é destinada para produção de farelo de soja, o qual é usado na alimentação animal. Aproximadamente 50% da dieta de suínos e 26% de aves são baseadas no consumo de soja. Entretanto, apesar dos aspectos positivos, a soja possui fatores antinutricionais (FAs) que podem afetar a saúde animal, reduzir a qualidade nutricional do farelo e prejudicar a conversão alimentar. Os inibidores de proteases constituem o fator antinutricional mais importante para a soja. O inibidor de tripsina do tipo Kunitz (KTI) é responsável por inibir o funcionamento da tripsina, considerado o FA mais importante na alimentação de animais monogástricos. A tripsina é uma importante enzima animal, envolvida na digestão de diversas proteínas. A inibição da tripsina pode reduzir o crescimento animal entre 30 a 50% devido à hipertrofia/hiperplasia do pâncreas. O KTI no farelo de soja é desativado na indústria por aquecimento. Esse processamento, no entanto, reduz o valor nutricional do farelo pela destruição térmica dos aminoácidos e aumenta o custo energético da produção em 25%. O uso de variedades com baixo KTI ou livre de KTI pode reduzir custos no processamento e também, resultar em melhoria na conversão alimentar dos animais. Para atingir esse objetivo, neste trabalho realizou-se o silenciamento gênico via CRISPR/Cas (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins), do gene KTI1 na soja, que é um dos responsáveis pela produção do inibidor de tripsina do tipo Kunitz. Para obtenção das plantas editadas, realizou-se a caracterização do gene alvo por meio de ferramentas da bioinformática, seguido do desenho do RNA guia, o qual foi clonado em vetor contendo os elementos da maquinaria CRISPR/Cas. A transformação genética foi realizada por Agrobacterium tumefaciens. As plantas transformadas tiveram a região alvo da edição sequenciadas, a fim de, identificar a ocorrência de mutações. Como resultado foi possível obter plantas editadas com diferentes frequências de edição. Por meio de avanço de geração espera-se obter uma planta estável e em homozigose.Item Acetato de celulose: síntese, caracterização e aplicação em filmes biodegradáveis(2025-01-28) Silva, Ariane Cardoso da; Oliveira, Suzana Mali de; Marim, Beatriz Marjorie; Carvalho, Fabíola Azanha de; Beluci, Natália de Camargo LimaO presente estudo teve como objetivo de sintetizar acetato de celulose a partir da celulose extraída da casca de aveia empregando-se processo hidrotérmico, inovador, livre de solvente e catalisador, e aplicar para obtenção de filmes biodegradáveis. A celulose foi extraída da casca de aveia empregando-se peróxido de hidrogênio alcalino como agente de deslignificação, um processo simples e ambientalmente amigável, livre de organoclorados, que resultou na obtenção de materiais com alto teor de celulose (=83%) e redução significativa dos teores de hemicelulose e lignina. A partir de celulose nativa (CN) foram produzidas as amostras de acetato de celulose (AC), por acetilação hidrotérmica, com tempos de reação de 1 e 2 horas, denominadas de AC1h e AC2h, respectivamente. A acetilação hidrotérmica da celulose resultou na obtenção de monoacetatos de celulose, apresentando graus de substituição variando de 0,28 a 0,37. Essa modificação proporcionou um aumento na solubilidade em solventes orgânicos, na hidrofobicidade, sem alterar a morfologia e cristalinidade. Em seguida, os AC foram empregados para a obtenção de filmes biodegradáveis que, assim como as demais amostras, foram caracterizados por meio de análises de microscopia eletrônica de varredura (MEV), difração de raios X (DRX) e espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR). Os resultados da microscopia de CN indicaram uma desestruturação do complexo lignocelulósico após o processo de extração, nos quais as fibras de celulose ficaram individualizadas e mais evidentes. Nas amostras de AC, observou-se uma rugosidade na superfície das fibras de celulose, no entanto, não foram observadas diferenças morfológicas importantes entre as amostras de AC1h e AC2h. Não foram observadas alterações na cristalinidade das amostras de AC na análise de DRX. Os espectros de FTIR confirmaram a extração da celulose nativa da casca de aveia, observando-se a redução das bandas características dos grupos alquila entre 2950-2850 cm⁻¹, associada à diminuição de resíduos não celulósicos. A acetilação da celulose foi comprovada pelo surgimento da banda característica do grupamento carbonila (C=O) em torno de 1700-1750 cm⁻¹. Considerando-se os filmes produzidos, a incorporação do glicerol como plastificante foi confirmada pela alteração na banda de estiramento entre 3200 e 3500 cm⁻¹, característica das interações de hidrogênio. Os filmes obtidos com a amostra acetilada em 1 h (AC1h) apresentaram uma melhor integridade estrutural quando comparados aos filmes produzidos a partir de AC2h, possivelmente devido às alterações estruturais decorrentes do tempo de reação, uma vez que a literatura aponta que tempos prolongados podem favorecer a degradação da celulose e a hidrólise parcial da estrutura molecular. Os resultados demonstraram o potencial dos filmes de acetato de celulose como materiais biodegradáveis e biocompatíveis, com possíveis aplicações em setores variados, como embalagens na área alimentícia e máscaras faciais na área cosméticaItem Seleção de microrganismos inibidores do desenvolvimento de fungos em grãos de milho(2024-04-25) Ferranti, Beatriz Cortellini; Sartori, Daniele; Oliveira, André Luiz Martinez de; Rezende, Maria InêsO milho (Zea mays L.) é um dos principais grãos produzidos no Brasil, utilizado como fonte alimentícia animal e humana. Por outro lado, o milho está susceptível à infecção fúngica principalmente durante o período de armazenamento. Os gêneros Aspergillus e Penicillium são predominantes em grãos armazenados e muitas espécies de ambos os gêneros são potenciais produtoras de micotoxinas. Grãos de milho contaminados com micotoxinas, são impróprios para consumo humano e animal, resultando em grandes perdas econômicas. Uma das formas para minimizar a presença de fungos em grãos de milho é utilizar microrganismos que inibem o desenvolvimento de fungos, como algumas espécies do gênero Bacillus. Com este propósito o objetivo desse estudo foi selecionar a ação antagônica de 9 linhagens de Bacillus, com ação antagônica contra A. flavus/ oryzae UELZm4.106. A seleção do potencial antagônico foi feita inicialmente por Cultura Pareada e Difusão em Ágar. Em ambas as triagens foi utilizado 106 células/ mL de Bacillus e 103 conídios/ mL de A. flavus/ oryzae UELZm4.106. Tanto em Cultura Pareada quanto em Difusão em Ágar, somente 4 linhagens de Bacillus, UELAsF5.1, UELAsF4.66, UELAsF1.483 e UELAsA1.447, apresentaram potencial antagônico significativo, com potencial de inibição de 9,6 % até 35,96 %, respectivamente. As 4 linhagens de Bacillus selecionadas foram avaliadas por associação par a par, onde dos 6 tratamentos, apenas 3 pares (UELAsF5.1 + UELAsF4.66, UELAsF5.1 + UELAsA1.447 e UELAsF4.66 + UELAsA1.447) apresentaram inibição de A. flavus/ oryzae UELZm4.106. Os extratos livres de células, das mesmas 4 linhagens de Bacillus, também foram avaliados, porém, não inibiram A. flavus/ oryzae UELZm4.106. As 4 linhagens de Bacillus previamente selecionadas foram avaliadas em grãos de milho. Para tanto, foi utilizado 20 g de grãos de milho que foram submetidos a tratamentos de infecção artificial A. flavus/oryzae UELZm4.106 e tratamento com grãos naturalmente infectados com fungos. Ambos os tratamentos foram expostos às quatro linhagens de Bacillus separadamente e em seguida avaliado o número de conídios. Os resultados obtidos demonstraram ação antagônica das linhagens de Bacillus spp. contra A. flavus/oryzae e contra fungos diversos nos grãos artificialmente infectados (8,25 %) e naturalmente infectados (81,1 % a 88,89 %). Estes dados sugerem que as 4 linhagens de Bacillus apresentam potencial antagônico e são potenciais candidatas ao desenvolvimento de bioinsumos.Item Desenvolvimento de formulação para utilização como veículo líquido inoculante visando a alta produção de endósporos de Bacillus velezensis ZK(2025-09-05) Volponi, Jessica Naiara Gomes; Oliveira, André Luiz Martinez de; Rezende, Maria Inês; Sartori, DanieleA utilização de inoculantes em culturas agrícolas e florestais tem se mostrado uma prática eficiente para melhorar o desempenho agronômico e auxiliar em processos como o reflorestamento. Entre os microrganismos de interesse, o gênero Bacillus destaca-se por ser composto por bactérias Gram-positivas, aeróbicas e formadoras de endósporos, apresentando elevada tolerância às condições ambientais adversas. Essas características conferem a várias espécies do gênero importância significativa em aplicações biotecnológicas. Neste estudo, foram desenvolvidos veículos líquidos de inoculantes com o objetivo de avaliar a sobrevivência da estirpe Bacillus velezensis ZK ao longo do tempo. Para a formulação dos veículos, foram utilizadas diferentes concentrações de sacarose, extrato de levedura e extrato de malte. Cada veículo recebeu uma concentração inicial de inóculo de 1,0 x 104 UFC/mL. Foram elaborados 13 diferentes veículos líquidos e incubados sob agitação orbital (200 rpm) a 27 °C por até 120 horas. Após o período de incubação, alíquotas das culturas foram submetidas a diluições seriadas, precedidas por tratamento térmico a 80 °C por 10 minutos, com o objetivo de eliminar células vegetativas e selecionar apenas os endósporos viáveis de Bacillus velezensis ZK. Em seguida, volumes de 50 µL das diluições entre 10⁻⁴ e 10⁻⁶ foram inoculadas em placas com meio TSA (Tryptic Soy Agar) e incubados a 30 ± 2 °C por 24 horas para a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC). Entre as formulações testadas, os veículos BV5 e BV8 apresentaram os menores e maiores valores de produção de endósporos, com contagens de 9,20 x 107 UFC/mL e 8,69 x 108 UFC/mL, respectivamente, ambos utilizando sacarose como fonte de carbono. Com base nesses resultados, foi aplicada a metodologia de Superfície de Resposta (RSM) com três variáveis independentes: concentração de sacarose (x1), extrato de levedura (x2) e extrato de malte (x3), visando à otimização das formulações e para a máxima produção de endósporos. Assim, para melhor desempenho a formulação deve conter 2,2g L-1 de sacarose e 0,1g L-1 de extrato de levedura, excluindo extrato de malte o qual não houve efeito significativo na formulaçãoItem Atividade antimicrobiana de extratos orgânicos produzidos por Pseudomonas aeruginosa PAO1(2025-02-27) Lino, Thaísa Maria da Roda; Camilios, Josiane Alessandra Vignoli; Sartori, Daniele; Panagio, Luciano Aparecido; Melo, Marcelo Rodrigues de; Camilios Neto, DoumitPseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram-negativa oportunista conhecida pela produção de metabólitos secundários como fenazinas e quinolonas, importantes na virulência e quorum sensing, com atividade antimicrobiana descrita na literatura. Este estudo objetivou produzir, extrair e avaliar a ação antimicrobiana de extratos orgânicos derivados de P. aeruginosa PAO1. A produção ocorreu em cultivo submerso, seguida de extração ácido-base, gerando o extrato ácido (A), rico em fenazinas, e o extrato básico (B), contendo quinolonas. A caracterização foi realizada por cromatografia em camada elgada e espectrometria de massas, confirmando a presença da quinolona PQS no extrato B. A atividade antimicrobiana foi avaliada por microdiluição seriada em caldo contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus, P. aeruginosa, S. aureus resistente à meticilina (MRSA) e fungos (Aspergillus niger, A. flavus, A. fumigatus, Trichophyton rubrum, Fusarium verticillioides, Candida albicans e C. auris). Ambos os extratos apresentaram maior efeito sobre Gram-positivos: extrato A mostrou CIM de 313 µg/mL para S. aureus e 19,5 µg/mL para MRSA, enquanto o extrato B apresentou 19,5 µg/mL para S. aureus e 9 µg/mL para MRSA. Entre os fungos, A. niger foi o mais sensível (78 µg/mL para o extrato B). O sobrenadante livre de células também exibiu atividade, especialmente contra A. fumigatus (0,195%). Os resultados indicam que os extratos de P. aeruginosa PAO1 possuem amplo espectro antimicrobiano, destacando-se contra cepas resistentes, evidenciando seu potencial biotecnológico para novos agentes antimicrobianosItem Diversidade de rizóbios isolados de nódulos de feijoeiros selvagens (Strophostyles helvola e Strophostyles leiosperma) na américa do norte e descrição de novas espécies e simbiovares(2025-08-26) Kitagawa, Hellen Yukari; Hungria, Mariangela; Batista, Jesiane Stefania da Silva; Klepa, Milena SerenatoO nitrogênio é o elemento requerido em maior quantidade pelas plantas, por constituir várias moléculas, como os ácidos nucleicos, proteínas, hormônios e clorofila. A principal via de incorporação de nitrogênio atmosférico se dá por meio da fixação biológica de nitrogênio (FBN), sendo as bactérias diazotróficas simbióticas, coletivamente denominadas como rizóbios, as mais eficientes na capacidade de fixar e transformar o nitrogênio em uma forma assimilável para as plantas hospedeiras. Os rizóbios se associam simbioticamente com diversas espécies leguminosas, dentre elas os feijoeiros selvagens do gênero Strophostyles. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a diversidade de rizóbios nativos do centro-oeste e do leste dos Estados Unidos da América por meio da análise polifásica e da capacidade simbiótica de bactérias isoladas de nódulos de S. helvola e S. leiosperma. Foram realizadas a caracterização morfofisiológica, a análise de perfil genômico por BOX-PCR, o sequenciamento e análise filogenética do gene 16S RNAr e de quatro genes housekeeping (glnII, gyrB, recA e rpoB), possibilitando a análise de MLSA (Multilocus Sequence Analysis), de genes simbióticos e o sequenciamento do genoma completo. Na análise por BOX-PCR com 32 estirpes, considerando 70% de similaridade, foram identificados 15 perfis genéticos distintos, nove em posições isoladas e seis grupos. Na análise do gene 16S RNAr, foram identificados quatro gêneros: Mesorhizobium (23), Pararhizobium (5), Pseudomonas (3) e Agrobacterium (1). Na análise de MLSA, sete estirpes de Mesorhizobium apresentaram diferenças significativas com as espécies descritas anteriormente, indicando possíveis novas espécies. Destas estirpes, quatro tiveram o genoma sequenciado e apresentaram valor de Average Nucleotide Identify (ANI) inferior a 95-96% e hibridação DNA-DNA digital (HDDd) inferior a 70% com as espécies mais próximas. Na filogenia do gene nodC, 22 estirpes em estudo agruparam em um clado e a estirpe CNPSo 4689 apresentou uma posição isolada, ambos com alto suporte estatístico e baixa similaridade com os simbiovares descritos; o que pode indicar a existência de novos simbiovares. Nas estirpes com potencial para representarem novas espécies, foi confirmada a capacidade de nodular e fixar nitrogênio no hospedeiro S. helvola, exceto para CNPSo 4689, que foi incapaz de nodular. Com base nas análises realizadas neste estudo, os dados suportam a descrição de quatro novas espécies de Mesorhizobium, nomeadas de M. burtonii sp. nov., M. vincentii sp. nov., M. choctawi sp. nov. e M. houmai sp. nov., cujas estirpes-tipo selecionadas foram CNPSo 4670T, CNPSo 4671T, CNPSo 4688T e CNPSo 4689T, respectivamente. Além disso, a filogenia do nodC sugere a descrição de dois novos simbiovares, nomeados como sv. choctawi e sv. houmaiItem Produção de soforolipídios por Starmerella bombicola e desenvolvimento de formulação antimicrobiana para dermatite atópica canina(2025-04-23) Santana, Nathalia Fraile; Celligoi, Maria Antonia Pedrine Colabone; Ogatta, Sueli Fumie Yamada; Bigoto, Briani GiseleA dermatite atópica canina (DAC) é uma doença crônica, inflamatória e de origem genética, caracterizada por prurido intenso, que leva à coceira excessiva e lambedura, resultando em lesões cutâneas. Essas lesões favorecem infecções secundárias por microrganismos como a bactéria Staphylococcus pseudintermedius e o fungo Malassezia pachydermatis. O diagnóstico da DAC é realizado com base em uma avaliação clínica detalhada e exames complementares, e o tratamento é sintomático, utilizando corticoides e antibióticos, tanto tópicos quanto sistêmicos. A formulação de produtos cosméticos para cães com dermatite deve ser hipoalergênica, dermatologicamente testada e compatível com o pH fisiológico da pele canina. No mercado pet, há uma crescente demanda por produtos eficazes e ecologicamente corretos. Nesse contexto, os biossurfactantes, como os soforolipídios, têm se destacado por suas propriedades antimicrobianas, antioxidantes e hidratantes, além de serem biodegradáveis e sustentáveis. Produzidos pela levedura Starmerella bombicola, os soforolipídios apresentam menor risco de reações adversas e são promissores para o desenvolvimento de formulações tópicas para o tratamento da DAC. O objetivo deste estudo foi produzir soforolipídio, caracterizar e aplicar em formulação tópica para o tratamento dessa condição. Foi avaliado a eficácia dos soforolipídios contra microrganismos causadores de infecções secundárias na DAC, também foi avaliado a citotoxicidade do soforolipídio em pele de suínos. A partir desses resultados foi desenvolvido uma formulação tópica contendo soforolipídio, que apresentou atividade antimicrobiana para S. pseudintermedius e M. pachydermatis. A formulação se manteve estável nos testes de pré-estabilidade, organolépticos e no pHItem Seleção de bactérias produtoras de lipopeptídeos antimicrobianos e antioxidantes para aplicações biotecnológicas(2025-02-28) Millan, Edna Suzana António Jinga; Rocha, Cristiani Baldo da; Gasparin, Fabiana Guillen Morreira; Galhardi, Lígia Carla FaccinOs surfactantes, amplamente utilizados nas indústrias, são majoritariamente derivados do petróleo. Devido a preocupações ambientais e novas regulamentações, há crescente interesse por alternativas naturais, como os biossurfactantes microbianos, que são biodegradáveis e possuem propriedades biológicas específicas. Os lipopeptídeos, uma classe importante de biossurfactantes, incluem surfactinas, iturinas e fengicinas, com aplicações em cosméticos, saúde, agricultura e alimentos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi selecionar linhagens de Bacillus sp. produtoras de lipopeptídeos com propriedades antimicrobianas e antioxidantes. Primeiramente, foi realizado a detecção do gene sfp, envolvido na biossíntese da surfactina, no DNA genômico de sete linhagens Bacillus sp., por PCR. Em seguida, as linhagens foram cultivadas em meio contendo glicose e extrato de levedura, com 2% de inóculo, por 72 horas, 150 rpm, 37°C. A presença de biossurfactantes foi detectada por testes de índice de emulsificação e espalhamento de óleo. Os lipopeptídeos, extraídos por precipitação ácida seguida de extração orgânica, foram submetidos às análises de FTIR, espectrometria de massas, atividade antimicrobiana (antiviral, antifúngica e antibacteriana) e atividade antioxidante. Os resultados mostraram a amplificação de fragmento referente ao gene sfp no DNA de Bacillus sp. UELAsA5.1, Bacillus sp. UELAsF4.66 e Bacillus sp. UELAsA1.447. Os sobrenadantes das fermentações dessas três linhagens deslocaram a camada de óleo, e formaram emulsões estáveis com índices de emulsificação superiores a 50%, confirmando a presença de biossurfactantes com propriedades tensoativa e emulsificantes. As outras 4 linhagens não foram capazes de produzir biossurfactantes, nas condições experimentais usadas neste estudo. Os sobrenadantes das três linhagens selecionadas foram extraídos para obtenção de lipopeptídeos denominados LPA5.1, LPF4.66 e LPA1.447, que mostraram a presença de grupamentos químicos típicos de lipopeptídeos em análises de FTIR. Análises por espectrometria de massas reveleram a presença de isoformas de surfactinas nos três lipopeptídeos. O LPA5.1, na concentração de 12 mg/mL se destacou por sua atividade antifúngica contra Fusarium verticillioides, inibindo seu crescimento em 40%. O LPF4.66 foi capaz de reduzir em 51,8 % o radical DPPH, na concentração de 2mg/mL e apresentou atividade antiviral contra herpes simplex (HSV-1). O LPA1.447 apresentou baixa toxicidade, atividade antioxidante significativa (74,25%) e potente atividade antiviral contra HSV-1. O valor de IC50 (concentração que inibe 50% da atividade viral) foi de 43,9 µg/mL e o IS (índice de seletividade, que avalia a eficácia do composto com relação à toxicidade) foi de 10, destacando um potencial promissor de LPA1.447 como agente antiviral Esses resultados demonstram que os lipopeptídeos LPA5.1, LPF4.66 e LPA1.447 possuem atividade antiviral para aplicações biotecnológicas, como biocontrole na agricultura e uso na saúde como antivirais e antioxidantes naturaisItem Avaliação da sobrevivência de Heterorhabditis amazonensis após encapsulação com alginato de sódio(2025-02-22) Moura, Amália Gabriella Carvalho; Kobayashi, Renata Katsuko Takayama; Alves, Viviane Sandra; Brito, Benito Guimarães de; Ueno, Cláudio TakeoO Brasil destaca-se como um dos maiores produtores e exportadores de carde de frango, mas enfrenta desafios significativos no controle de pragas como Alphitobius diaperinus, que impacta negativamente a produção e saúde das aves. Por isso, novas alternativas de controle dessa praga vem sendo buscadas, e o nematoide entomopatogênico Heterorhabditis amazonensis (isolado UEL08) mostrou-se eficiente no controle desse inseto em condições de laboratório. No entanto, a produção in vitro e a formulação de produtos a base de nematoides entomopatogênicos ainda é um desafio no Brasil. Assim, este estudo teve como objetivo desenvolver uma estratégia de encapsulação para H. amazonensis, utlizando alginato de sódio e cloreto de cálcio, com o intuito de proteger o nematoide de fatores ambientais, bem como de avaliar condições ideais de armazenamento. A metodologia consistiu na formulação de cápsulas por meio da gelificação iônica, que foram acondicionadas em diferentes temperaturas (5°C, 10°C, 15°C, 25°C e 30°C). Foram realizados testes de viabilidade ao longo de 120 dias, avaliação de toxidade do citrato de sódio sobre o nematoide e quantificação dos nematoides encapsulados. Os resultados apontaram que a temperatura de 25°C foi a mais eficiente, mantendo 82% dos nematoides viáveis após 30 dias, enquanto temperaturas mais altas ou mais baixas comprometeram a sobrevivência. O citrato de sódio a 1% mostrou-se adequado para diluir as cápsulas sem comprometer a viabilidade, infectividade e reprodução dos nematoides. No entanto, contaminações por fungos foram observadas após 30 dias, indicando a necessidade de testes futuros com antifúngicos ou higienização prévia dos nematoides. O estudo conclui que a encapsulação com alginato é uma alternativa promissora para a formulação de H. amazonensis visando o desenvolvimento de produto para o controle do cascudinho-do-aviário com este inimigo natural, mas destaca a necessidade de mais estudos para garantir a segurança e a eficácia em condições reais de aviáriosItem Produção e modificação da Levana de Bacillus subtilis natto para aplicação na área da saúde(2024-03-11) Pereira, Beatriz Ticiani Vieira; Celligoi, Maria Antonia Pedrine Colabone; Orsato, Alexandre; Melo, Marcelo Rodrigues de; Rocha, Cristiani Baldo daA levana, exopolissacarídeo de frutose sintetizado pelo Bacillus subtilis natto, é reconhecida por suas diversas propriedades e aplicações biotecnológicas. Apesar da levana apresentar várias bioatividades relacionadas à sua estrutura, modificações químicas, como a sulfatação podem potencializar ou agregar novas atividades biológicas a essa macromolécula. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi produzir, modificar por sulfatação e avaliar a atividade antiviral, anticoagulante e antioxidante da levana nativa e das amostras sulfatadas. Um planejamento fatorial Box-Benhken 3³ incompleto, com as variáveis tempo de fermentação (h) (X1), concentração de sacarose (g/L) (X2) e o pH inicial (X3) foi realizado para avaliação da biomassa, consumo de sacarose e da produção de levana. A levana produzida na melhor condição foi submetida a dois processos de sulfatação, com diferentes proporções do complexo trióxido enxofre-piridina. A levana nativa e as amostras sulfatadas foram testadas quanto a ação antiviral, contra o Herpes simplex vírus tipo 1 (HSV-1); anticoagulante, frente ao ensaio de tromboplastina parcial ativado (KPTT) e tempo de protrombina (TP) e e antioxidante pelo método de DPPH. Os resultados mostraram uma produção de levana de 26,86g/L em 24h, 200g/L de sacarose e pH 7,0. As variáveis concentração de sacarose e pH foram significativas, demonstrando que alta concentração de sacarose e o pH próximo do neutro favorecem a produção de levana. O grau de substituição (DS) foi de 1,36 e 1,37 para a levana sulfata 1 e a levana sulfatada 2, respectivamente. O processo de sulfatação melhorou a resistência térmica da levana, com o aumento da temperatura de carbonização de 578°C para 740°C, podendo ser útil para os processos industriais. A atividade antiviral da levana aumentou com a sulfatação exaustiva, diminuindo a concentração inibitória de 50% (IC50) em 57%. As amostras sulfatadas prolongaram o KPTT de acordo com a concentração, enquanto a levana nativa não apresentou a atividade anticoagulante. Além disso, atividade antioxidante aumentou em 52% com a sulfatação. Esses resultados demonstraram que o processo de sulfatação potencializou a ação antiviral, anticoagulante e antioxidante da levana e esses dados podem contribuir para a criação de novas metodologias terapêuticas para a área da saúdeItem Soforolipídios de Starmerella bombicola e óleo de copaíba aplicados em uma formulação dermatológica antimicrobiana e antiviral(2025-10-23) Ferreira, Tainã de Oliveira; Celligoi, Maria Antonia Pedrine Colabone; Nakazato, Gerson; Bigotto, Briani GiseleCutibacterium acnes e o vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) são os principais causadores da acne e da foliculite herpética. A busca por moléculas ativas com propriedades biológicas pode indicar uma alternativa promissora. O objetivo desse estudo foi aplicar os soforolipídios e óleo de copaíba em formulações dermatologias com atividades antiacne e antiviral. Os soforolipídios foram produzidos em biorreator de bancada com glicose e ácido oleico atingindo 38,37g/L com predominância de forma lactônica diacetilada. Foram realizados os testes de citotoxicidade, atividades antimicrobiana, virucida e antiviral dos soforolipídios e do óleo de copaíba e com a associação dos ativos. Soforolipídios e óleo de copaíba tiveram ação contra C. acnes e HSV-1, assim foram desenvolvidas três formulações com estes ativos variando as concentrações de 0,3 a 0,9 g/% de soforolipídios e de 1,5 a 0,9 % do óleo de copaíba. A formulação com 0, 9 % de soforolipídios e 0,9 % de óleo de copaíba destacou-se pela melhor atividade antimicrobiana contra a C. acnes, com inibição de 91,45%. Assim esta formulação apresenta elevado potencial de aplicação dermatológica, contra doenças de pele, como acne vulgar e foliculite herpéticaItem Condicionamento biológico de solo com materiais compósitos biodegradáveis: influência no crescimento de tomate, na atividade microbiana e no perfil metabolômico sob diferentes níveis de disponibilidade hídrica(2025-04-25) Neumann, Amanda; Oliveira, André Luiz Martinez de; Rodrigues, Elisete Pains; Silva, Adriana Pereira da; Bauermeister, AnelizeO cenário mundial de mudanças climáticas e crescimento populacional impõe sobre a agroindústria o desafio de aumentar a produtividade dos cultivos com menor impacto ambiental, priorizando práticas sustentáveis. O trabalho teve como objetivo analisar os efeitos do déficit hídrico associado ao uso de biomaterial no perfil metabolômico do solo e no desenvolvimento da planta. O experimento foi conduzido em casa de vegetação por 60 dias, adotando um delineamento com duas condições bióticas: com plantio de tomate e sem plantio de tomate; dois tipos de substrato: com adição de biomaterial e sem adição de biomaterial; e dois níveis de disponibilidade hídrica: 70% C.C. (capacidade de campo) e 50% C.C. Foram feitas análises biométricas (altura de parte aérea, comprimento de raiz e biomassa seca) para analisar o efeito no desenvolvimento vegetal, e bioquímicas (??-glicosidase, arilsulfatase, respiração basal, carbono da biomassa microbiana e quociente metabólico) que trazem informação sobre atividade microbiana no solo. Também foram feitas análises de cromatografia gasosa e espectrometria de massas (GC-MS) para a identificação de alterações no perfil metabolômico. Os resultados biométricos mostram que a presença do biomaterial teve influência positiva no desenvolvimento da planta, demonstrando aumento significativo no comprimento da parte aérea e na biomassa de parte aérea e de raiz. Os resultados obtidos nas análises bioquímicas apresentaram efeito somente da presença/ausência de planta, sem efeito significativo de biomaterial ou déficit hídrico. Os resultados de metabolômica permitiram agrupar os diferentes tratamentos com base nos perfis dos substratos, influenciados pela presença de biomateriais, níveis de disponibilidade hídrica e interação com plantas de tomate. Foram observados compostos com potencial relevância para a atividade microbiana e o desenvolvimento vegetal, sugerindo que os biomateriais podem atuar como bioinsumos, promovendo o crescimento das plantas e auxiliando na mitigação do estresse hídricoItem Produção e avaliação das propriedades antioxidantes de lipopeptídeos bacterianos(2025-07-22) Bertoncini, Giovana Élika Silveira; Rocha, Cristiani Baldo da; Sartori, DanieleLipopeptídeos, metabólitos produzidos por espécies do gênero Bacillus, destacam-se por suas propriedades antioxidantes e seu potencial de aplicação nas indústrias alimentícia, cosmética e farmacêutica. A crescente demanda por antioxidantes naturais, em substituição aos sintéticos que podem representar riscos à saúde, ressalta a relevância de soluções biotecnológicas sustentáveis e renováveis. Nesse contexto, este estudo teve como objetivo produzir, caracterizar e avaliar as propriedades antioxidantes de lipopeptídeos produzidos pela linhagem Bacillus sp. UELAsF1.483, e aplicar os lipopeptídeos em formulações filmogênicas. A linhagem foi cultivada em meio contendo glicose e ácido glutâmico, com 2% de inóculo, por até 96 horas, a 150 rpm e 37°C. A presença de biossurfactantes foi confirmada por meio de ensaios de índice de emulsificação e espalhamento de óleo. Os lipopeptídeos foram extraídos por precipitação ácida seguida de extração orgânica e submetidos às análises de suas características estruturais e ensaios de atividade antioxidante, e desenvolvimento de formulação filmogênica. Os resultados indicaram que o sobrenadante induziu dispersão na camada de óleo e formou emulsões estáveis com índices de emulsificação superiores a 50%, confirmando a presença de biossurfactantes com propriedades tensoativas e emulsificantes, especialmente após 72 de fermentação. A atividade antioxidante aumentou significativamente após 48 horas de cultivo, estabilizando entre 35–40% em 72 horas. Com base nesses resultados, o tempo de fermentação de 72 horas foi escolhido para os experimentos subsequentes. Nesse intervalo, a produção de biossurfactantes alcançou 0,45 g/L. A análises estruturais confirmou a presença de grupos funcionais típicos de lipopeptídeos, identificando tempos de retenção compatíveis com padrões descritos na literatura. O lipopeptídeo produzido foi denominado LP.F1483 e apresentou 47,26% de inibição de radicais DPPH, em baixas concentrações, além de apresentar atividade antioxidante total, equivalente ao Trolox, antioxidante de referência. Além disso, o lipopeptídeo LP.F1483 foi incorporado em filmes biodegradáveis à base de amido e gelatina, 0%, 2.5 mg, 5 mg e 25 mg/100g polímero. A solubilidade em água aumentou de forma dependente da concentração de LP.F1483, atingindo 56,97% nos filmes com maior teor do aditivo, o que evidencia a desestabilização da matriz polimérica e maior afinidade com a água. A análise por espectroscopia FT-IR confirmou a presença de interações típicas entre os componentes dos filmes e grupos funcionais relacionados ao lipopeptídeo. Por fim, a atividade antioxidante nos filmes foi observada apenas na formulação com 25 mg de LP.F1483, que apresentou 45,53% de inibição de radicais DPPH, demonstrando um efeito dose-dependente e o potencial desses materiais para uso como embalagens ativas ou cosméticos funcionais. Esses achados destacam o potencial de Bacillus sp. UELAsF1.483 como uma ferramenta biotecnológica promissora, contribuindo para o desenvolvimento de alternativas naturais aos antioxidantes sintéticos e abrindo novas perspectivas para inovações sustentáveis nas indústrias cosmética, alimentícia e farmacêutica.Item Avaliação da atividade anti-inflamatória e antioxidante de di-ramnolipídeos produzidos por Pseudomonas aeruginosa.(2022-03-30) Sawoniuk, Isadora Caroline; Camilios Neto, Doumit; Casagrande, Rúbia; Melo, Marcelo Rodrigues de; Camilios, Josiane A. VignoliA pele é o maior órgão do corpo humano e sua principal função é agir como barreira química e física contra danos externos. A radiação UVB chama bastante atenção por estar atingindo constantemente a superfície da Terra e causando diversos danos na pele, como envelhecimento e o desenvolvimento de câncer. Assim a suplementação da pele com produtos naturais parece ser uma alternativa interessante para mitigar os efeitos nocivos da exposição aos raios UVB. Neste trabalho foi realizada a produção de ramnolipídeos por fermentação submersa, seguida de extração, para obtenção de extrato bruto concentrado, e processo de purificação com obtenção de Di- ramnolipídeos (Di-RL) de alto grau de pureza (99,9 %). A inflamação e o estresse oxidativo foram induzidos por radiação UVB com uma dose de 4,14 J/cm2 e o tratamento com Di-RL, in vivo, indicou uma considerável redução na inflamação cutânea evidenciada através: da diminuição do edema de pele; da diminuição de recrutamento de neutrófilos, da redução do espessamento da epiderme; da redução da contagem de mastócitos; e da redução da degradação de fibras de colágenos e da atividade/secreção da metaloproteínase – induzidos por irradiação UVB. Enquanto a proteção da pele contra o estresse oxidativo foi confirmado pelos níveis da glutationa reduzida (GSH), atividade da enzima catalase, que se manteve a níveis basais, além de reduzir a produção de hidroperóxidos lipídicos e de ânions superóxidos. Deste modo, os resultados obtidos no presente trabalho sugerem que os Di-RL apresentam atividade anti-inflamatória e antioxidante e consequente grande potencial para proteção da pele contra a irradiação UVB.Item Produção de proteases por Aspergillus welwitschiae.(2023-03-31) Paes, Amanda Bordignon; Sartori, Daniele; Pan, Nicole Caldas; Melo, Marcelo Rodrigues deAs proteases apresentam grande interesse comercial, com aplicações na indústria farmacêutica, de cosméticos, têxtil, alimentícia, como aditivos para detergentes, entre outros. Os fungos do gênero Aspergillus tem grande potencial biotecnológico por serem bons produtores de enzimas em substratos de custo reduzido, como os resíduos agroindustriais. O resíduo de malte é muito abundante e possui quantidade considerável de proteínas, adequado como fonte nutricional para a produção de proteases por microrganismos. A produção de proteases pode ser obtida a partir de linhagens selecionadas de microrganismos associadas aos parâmetros abióticos padronizados. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar parâmetros abióticos para a produção de proteases por Aspergillus welwitschiae UELAs 15.262 a partir do resíduo de malte. Foi avaliado a produção de proteases sob os parâmetros de temperatura, com variação de 28 °C até 42 °C e pH variando de 4,2 até 9,8. As maiores quantidade de proteases produzidas foram 95,95 ± 1,08 U/mL (35 °C, pH 9,8), 94,72 ± 3,27 U/mL (35 °C, pH 7,0), 91,65 ± 4,10 U/mL (30 °C, pH 9,0), 91,05 ± 5,71 U/mL (35 ºC, pH 4,2) e 87,72 ± 1,57 U/mL (30°C, pH 5,0). Dentre as condições que mais produziram proteases, quatro foram selecionadas para avaliar o tempo de produção enzimática. A 35 °C, pH 4,2, a maior quantidade de proteases foi obtida no terceiro dia de fermentação, enquanto nas demais condições a maior quantidade de proteases foi obtida no quarto dia de fermentação. O Extrato Bruto Enzimático (EBE) obtido no terceiro dia de fermentação nas condições 35 °C, pH 4,2 e 9,8, foram submetidos a avaliação de atividade de proteases em meio contendo leite em pó como substrato, a 25 °C e 37 °C. Em ambas as temperaturas as proteases permaneceram ativas por até 24 horas, contudo, a melhor atividade de proteases foi obtida a 37 °C. Esses resultados indicaram que A. welwitschiae UELAs 15.262 produziu proteases em resíduo de malte e que a temperatura tem influência na produção dessas enzimas. A avaliação de parâmetros abióticos associados à linhagem UELAs 15.262 é de grande importância para maior produção de proteases usando resíduos de baixo custo.