02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecular
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Navegando 02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecular por Autor "Almeida, Fernanda Simões de"
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Item Ação quimioprotetora do micronutriente Selênio em células HepG2 : avaliação da expressão de genes de estresse celular induzido por H2O2Zanelatto, Leonardo Campos; Mantovani, Mário Sérgio [Orientador]; Almeida, Fernanda Simões de; Oliveira, Rodrigo JulianoResumo: Dentre diferentes agentes analisados quanto ao potencial quimioprotetor para o câncer, os componentes da dieta são os mais bem avaliados Tais estudos apresentam evidências de que os alimentos fornecem substâncias bioativas que podem alterar a expressão gênica A atividade antioxidante do selênio parece ser responsável pela sua eficácia no tratamento de doenças que se correlacionam ao estresse celular Devido a tais aspectos, têm crescido o interesse pela investigação dos papéis de diferentes compostos de selênio como agente terapêutico em diversas doenças crônicas degenerativas, tais como os cânceres O presente estudo avaliou a ação moduladora/quimioprotetora da L-(+)-Selenometionina (SeMet) em células HepG2 frente ao estresse celular induzido pelo H2O2 por meio do ensaio MTT, do ensaio do cometa e da expressão gênica por RT-qPCR de genes relacionado ao estresse oxidativo (GPX1, SOD, CATALASE) de retículo endoplasmático (GADD153, ERN1, TRAF2) e de apoptose (CASP9) No ensaio MTT, a SeMet a 5, 1, 25 e 5 ng/mL apresentaram uma ação citoprotetora contra os danos causados por H2O2, enquanto que as concentrações mais elevadas (1 e 2 ng/mL) aumentaram o efeito citotóxico causado pelo H2O2 No ensaio do cometa, foi verificado que a concentração de 5 ng/mL no tratamento associado foi capaz de diminuir o efeito genotóxico provocado pelo peróxido de hidrogênio, porém o mesmo não ocorreu na concentração de 5 ng/mL No RT-qPCR, de forma semelhante aos resultados encontrados no cometa, observou-se que a SeMet a 5 ng/mL modulou os genes testados, mostrando um efeito antioxidante e antiapoptótico Em contrapartida, na concentração de 5 ng/mL a SeMet foi incapaz de modular os genes para a quimioproteção, por vezes perfazendo um efeito tóxico às células Esses resultados sugerem que a SeMet é capaz de modular positivamente os genes de estresse oxidativo e de retículo endoplasmático, provocando um efeito quimioprotetor e antioxidante frente ao estresse causado pelo H2O2 e pode ser uma alternativa na medicina preventivaItem Avaliação dos efeitos de b-glucanas sulfatadas e não sulfatadas extraídas de Agaricus brasiliensis em ensaios de genética toxicológica e a interferência nos dados induzidos por doxorrubicina em células MCF-7 e eritrócitosBaranoski, Adrivanio; Mantovani, Mário Sérgio [Orientador]; Almeida, Fernanda Simões de; Guterres, Zaira da RosaResumo: As ß-glucanas (ß-G), polissacarídeos produzidos por vários organismos diferentes, apresentam propriedades benéficas, como potencial antioxidante, estimulo do sistema imune e proteção do material genético No presente estudo, ß-G sulfatadas e não-sulfatadas extraídas de Agaricus brasiliensis apresentaram no Ensaio do MTT, que avalia um parâmetro de metabolismo, citotoxicidade dose-dependente sendo a sulfatada mais citotóxica, e quando associado à doxorrubicina (DXR), ß-G sulfatadas potencializaram a ação do quimioterápico No Ensaio do Vermelho Neutro, que avalia o potencial de incorporar e armazenar esse corante nos lisossomos por células viáveis, apenas em 24 horas, os tratamentos de 5 e 1 µg/mL de ß-G sulfatada apresentaram redução significativa de incorporação, nos demais tempos e concentração não houve diferença, assim como não houve diferença para ß-G não-sulfatadas com relação ao controle Também não apresentaram ação hemolítica ou mutagênica e nem proteção contra danos causados pela DXR nos ensaios de hemólise e cometa, respectivamente Não houve alteração significativa da proliferação celular em 96 horas para o tratamento com ß-G não-sulfatada, e apenas a concentrações de 1 µg/mL de ß-G sulfatada após 72 horas apresentou redução significativa de proliferação no ensaio do RTCA O estudo da expressão demonstrou que ambas ß-G, principalmente a sulfatada, não causam danos no DNA como observado no ensaio do genotoxicidade As ß-G não causam estresse às células e na concentração e tempo estudados, não interferem na expressão dos genes de ciclo celular avaliados Os resultados sugerem que ambas formas de ß-G interferem no metabolismo e não causam morte celular, e que ß-G sulfatadas possuem maior toxicidadeItem Estrutura genética de Euglossa iopoecila (Apidae, Euglossini) em remanescentes de Mata AtlânticaPenha, Rafael Elias da Silva; Sofia, Silvia Helena [Orientador]; Augusto, Solange Cristina; Almeida, Fernanda Simões deResumo: Euglossa iopoecila é uma das espécies de Euglossini com distribuição restrita à Mata Atlântica, sendo encontrada apenas em domínios de Floresta Ombrófila Densa Esta espécie apresenta uma variação de cor ao longo de sua amplitude de ocorrência e tem sido foco de uma discussão sobre seu real status taxonômico Levando em consideração a importância e a ausência de estudos genéticos de populações de E iopoecila, este trabalho teve como objetivo obter informações sobre a estrutura genética de populações desta espécie, distribuídas ao longo de remanescentes de Mata Atlântica, onde são encontrados indivíduos apresentando coloração variando de azul-violeta a verde Assim, foram analisadas amostras de cinco populações de E iopoecila, distribuídas em remanescentes florestais entre os estados do Paraná e Rio de Janeiro As cinco áreas de estudo foram: Reserva Natural Salto Morato – SM (PR), Ilhabela – IB, Ubatuba – UB e São Sebastião – SS (SP) e Reserva Biológica União – RJ, no estado do Rio de Janeiro Nas análises foram empregados marcadores microssatélites e mitocondrial (segmento de 651 pb do Cyt b) Os resultados com marcadores mitocondriais revelaram níveis mais elevados de estruturação genética entre as populações estudadas do que os detectados pelos marcadores microssatélites, fato que pode estar refletindo, em parte, o comportamento filopátrico das fêmeas destas abelhas Uma significativa correlação positiva foi encontrada entre distância genética e distância geográfica, sugerindo um maior fluxo gênico entre populações mais próximas geograficamente Nossos resultados também sugerem que a forte estruturação revelada pelo marcador mitocondrial pode estar relacionada a processos evolutivos mais antigos, envolvendo eventos históricos ocorridos durante o PleistocenoItem Estudo da estrutura genética de Leporinus elongatus (Pisces, Characiformes) no Complexo Canoas : rio ParanapanemaRamos, Juliano Vilas Boas; Sodré, Leda Maria Koelblinger [Orientador]; Ruas, Paulo Maurício; Almeida, Fernanda Simões deResumo: As barragens construídas ao longo de sistemas hídricos interrompem a dispersão e a migração dos organismos aquáticos, afetando principalmente a abundância das espécies de peixes migradores Mecanismos para transposição foram construídos em barragens visando minimizar esses impactos Poucas são as informações disponíveis sobre o efeito da construção de barragens na estrutura genética populacional da fauna Neotropical de peixes migradores A conservação da diversidade genética é de fundamental importância para sobrevivência de uma espécie a longo tempo, pois a manutenção de um pool gênico com variabilidade suficiente faz-se necessário para a adaptação da espécie a alterações ambientais Nesse contexto, marcadores moleculares RAPD e microssatélites, foram utilizados para avaliar a diversidade e estrutura genética da espécie migradora Leporinus elongatus no Complexo Canoas – rio Paranapanema – Brasil Dez grupos foram amostrados nas escadas para transposição de peixes das UHEs Canoas I e Canoas II durante o período reprodutivo em três anos consecutivos Ambos os marcadores evidenciaram uma alta diversidade genética para esses grupos Os marcadores microssatélites mostraram uma perda de heterozigosidade e uma considerável taxa de endocruzamento para a espécie A diferenciação genética encontrada entre os grupos, com ambos os marcadores utilizados, pode ser considerada de baixa a moderada Os dados obtidos com os parâmetros de diversidade genética (distância e identidade genética, FST e AMOVA) permitiram concluir que os grupos de L elongatus do Complexo Canoas estão estruturados como uma única população Os dados obtidos sobre a diversidade genética e estrutura populacional de L elongatus são de grande importância para o desenvolvimento de programas de manejo e conservação da espécie no Complexo Canoas, podendo também ser utilizados em programas de aqüiculturaItem Mutagênese e eficiência simbiótica de mutantes de Rhizobium tropici resistentes a azidaFiori, Amanda Karoline; Rodrigues, Elisete Pains [Orientador]; Almeida, Fernanda Simões de; Sartori, DanieleResumo: Os rizóbios são bactérias simbióticas muito conhecidas e estudadas devido à sua capacidade de fixar o nitrogênio atmosférico (N2) quando em simbiose com plantas leguminosas, como o feijoeiro (Phaseolusvulgaris L) O nitrogênio (N) é um nutriente essencial para o crescimento e produtividade dos organismos vivos e as plantas demandam grandes quantidades deste nutriente para seu desenvolvimento e produtividade A simbiose entre rizóbio e plantas leguminosas é manifestada pela formação de nódulos radiculares, nas quais essas bactérias fixam o nitrogênio atmosférico em benefício da planta recebendo em troca, nutrientes e proteção contra estresses bióticos e abióticos O feijão é reconhecidamente uma importante fonte de proteína na dieta da população brasileira, sendo o Brasil um dos principais produtores e consumidores deste grão A eficiência de fixação biológica de nitrogenio (FBN) em feijão tem suas limitações e estas podem ser atribuídas ao melhoramento da planta sob fertilização nitrogenada, à elevada competitividade e baixa eficiência de FBN de estirpes presentes do solo e a suscetibilidade do feijoeiro à doenças e estresses ambientais Melhorias na simbiose Rhizobium-feijão necessitam ser implementadas para aumentar a eficiência simbiótica e a FBN, visando elevar a produtividade desta cultura e diminuir os custos com fertilizantes Uma das abordagens que pode ser utilizada é o melhoramento de estirpes de rizóbio para aumento da eficiência simbiótica, nodulação e FBN por meio da mutagênese e seleção de estirpes melhoradas A azida sódica (NaN3) é um dos mais potentes agentes mutagênicos utilizados em plantas e em bactérias e seu uso, como agente de seleção em bactérias, principalmente rizóbios, tem possibilitado a obtenção de mutantes resistentes com maior eficiência simbiótica e capacidade de FBN Devido à importância de se melhorar as relações simbióticas entre rizóbios e leguminosas, o presente trabalho teve como objetivo obter mutantes de Rhizobiumtropici CIAT 889 resistentes a azida sódica e avaliar características fisiológicas importantes para simbiose e a eficiência simbiótica em plantas de feijão Como resultado desse processo, obteve-se seis mutantes (AzR14, AzR15, AzR16, AzR17, AzR18 e AzR19) que foram caracterizados com relação à formação de biofilme, produção de polissacarídeo, motilidade(Swarming) e produção de auxina e tiveram a eficiência simbiótica avaliada em três experimentos de inoculação, revelando que as plantas inoculadas com os mutantes AzR17, 18 e 19 obtiveram resultados superiores ou semelhantes à estirpe selvagem CIAT 899 Estes resultados mostram que a resistência a azida sódica em Rhizobium tropicipossibilita a seleção de mutantes com maioreficiência simbiótica e pode ser aplicada para melhorias da simbiose Rhizobiumtropici-feijão visando o desenvolvimento de biofertilizantes mais eficientes para a cultura do feijoeiro e a redução do custo e dos danos relacionados ao uso de fertilizantes nitrogenados na agriculturaItem "Novo complexo Bis (((Z)-4-((4-clorofenil)amino)- 4-oxobut-2-enoil)oxi) cobre : citotoxicidade em células 4T1 e potencial toxicogenético em camundongos Swiss"Oliveira, Edwin José Torres de; Oliveira, Rodrigo Juliano [Orientador]; Lepri, Sandra Regina; Almeida, Fernanda Simões deResumo: Complexos de cobre (II) são promissores candidatos para o desenvolvimento de novos tratamentos para diversos tipos de câncer, incluindo o câncer de mama O presente trabalho avaliou a atividade antitumoral in vitro e os efeitos toxicogenéticos in vivo de um novo complexo de cobre (II) O composto Bis(((Z)-4-((4-chlorophenil)amino)-4- oxobut-2-enoil)oxi)cobre (RC1) foi sintetizado e posteriormente utilizado nos ensaios biológicos Um total de 2,5x14 células 4T1 foram plaqueadas e submetidas à tratamento com as concentrações de 3,125; 6,25; 12,5; 25; 5; 1; 25; 5 e 1 µg/mL do composto RC1, durante 24, 48 e 72 horas A partir dos resultados de citotoxicidade a IC5 do composto RC1 foi calculada e utilizada nos demais ensaios in vitro Para análise da genotoxicidade utilizou-se o ensaio do cometa e para análise do tipo de morte celular a análise morfológica com coloração diferencial de brometo de etídio e acridina, e a marcação em citometro de fluxo com kit de detecção de apoptose PE Anexina V Ainda por citometria foi analisada a integridade da membrana das células 4T1, bem como o ciclo celular, após 24 horas de tratamento com o composto RC1 O ensaio de expressão gênica foi realizado por qPCR e genes relacionados à danos, reparo do DNA e apoptose foram estudados In vivo o potencial toxicogenético foi avaliado em camundongos Swiss com as concentrações de 3, 6 e 12mg/kg do composto RC1 por meio dos ensaios de cometa, micronúcleo e fagocitose Os resultados demonstraram que o composto RC1 induziu citotoxicidade nas células 4T1, possivelmente, via danos no DNA que levara ao aumento da expressão de ATM e p21, induzindo parada de ciclo celular em G1 O mecanismo de morte celular do RC1 em células 4T1 foi a apoptose desencadeado pelo aumento na expressão de BAX e CASP- 7, sem alterar a integridade de membrana das células 4T1 In vivo, o composto foi genotóxico em camundongos e causou aumento da frequência de danos genômicos (cometa), mas não cromossômicos (micronúcleo), no DNA e quando comparado ao quimioterápico de referência, cisplatina, foi menos genotóxico O RC1 também foi capaz de aumentar a frequência de fagocitose esplênica Esses resultados indicam que o novo complexo de cobre (II), descrito pioneiramente neste trabalho, apresenta potencial terapêutico no tratamento do câncer de mama