Análise do estresse oxidativo sistêmico em ratos submetidos ao tratamento com paclitaxel e seu agente solubilizador, Cremophor EL

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Patologia Experimentalpt_BR
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dc.contributor.advisorCecchini, Rubens [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorCampos, Fernanda Carolina dept_BR
dc.contributor.bancaBreganó, José Wanderpt_BR
dc.contributor.bancaPanis, Carolinapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T12:43:36Z
dc.date.available2024-05-01T12:43:36Z
dc.date.created2012.00pt_BR
dc.date.defesa23.03.2012pt_BR
dc.description.abstractResumo: A quimioterapia com paclitaxel (PTX) é uma das principais formas de tratamento de diversas neoplasias Devido à sua baixa solubilidade, é necessário o uso de Cremophor-EL (CREL), como veículo Embora os efeitos tóxicos do PTX e CREL sejam bem estabelecidas in vitro, os mecanismos in vivo pelos quais isso ocorre ainda não está claro Através de um modelo experimental mimetizando o tratamento quimioterápico realizado em humanos, o objetivo deste estudo foi investigar a participação do estresse oxidativo como um provável mecanismo de toxicidade do tratamento e elucidar se os efeitos tóxicos são devido à associação PTX-CREL ou somente ao veículo CREL Este trabalho foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação animal da Universidade Estadual de Londrina (CEEA n°82/1) Foram utilizados ratos Wistars (25g) canulados na veia femoral para infusão intravenosa (iv) com duração de uma hora Foram avaliados em dois tempos, imediatamente (após 1 hora de infusão) e 24 horas após a infusão e divididos em 2 sets de 4 grupos Grupo controle (CTR) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9%, grupo etanol (ET) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9% + etanol 5% v / v , grupo Cremophor (CREL) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9% + Cremophor 5% v / v em etanol e o grupo paclitaxel (PTX) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9% + paclitaxel 175mg/m2 (PTX = paclitaxel + cremophor EL + etanol + NaCl ,9%) No primeiro set, os grupos apenas receberam a infusão com duração de 1 hora No segundo set, receberam 72 horas antes dos mesmos protocolos descritos acima, 1mg/kg ip de vitamina E (vitE), para validar a participação do estresse oxidativo Os animais foram sedados com éter etílico e o sangue foi coletado via punção cardíaca Uma alíquota de sangue heparinizado total foi utilizado para determinar a cotagem de hemácias e leucócitos O plasma foi obtido a partir da centrifugação do sangue a 15 rpm, 1 minutos 4 °C, e armazenadas a -2°C Os eritrócitos foram lavados três vezes com solução salina ,9% a 4°C e utilizado imediatamente para as análises Foram realizadas as seguintes avaliações: lipoperoxidação eritrocitária e plasmática avaliada por quimiluminescência (QL), determinação da atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), glutationa reduzida (GSH), contagem de hemácias, perfil de hemoglobina para determinar metahemoglobina (metHB) e oxyhemoglobina (oxyHB), capacidade antioxidante total plasmática (TRAP), determinação de óxido nítrico (NO), hidroperóxidos e níveis de malondialdeído (MDA) Os dados foram analisados utilizando o programa GraphPad Prism 5, two-way ANOVA para cálculos de QL, one way ANOVA e teste t de Student, adotando p < 5 como significativo Os resultados mostraram aumento da QL eritrocitária no grupo CREL nos dois tempos analisados (P < 1) e reversão após 24 horas com o uso da vitE (P < 1) No grupo tratado com PTX a QL eritrocitária não obteve nenhuma diferença significante, diminuindo ainda mais a lipoperoxidação quando tratados com vitE em ambos os tempos analisados A atividade da enzima catalase teve um aumento significativo após 24 horas da infusão de CREL (P< 5), revertido pela vitE, também 24 horas após ( P < 1) O grupo infundido com PTX obteve diminuição da CAT em 24 horas após infusão, e 7 esta diminuição foi alterada pelo prévio tratamento com vitE no mesmo tempo A contagem de hemácias aumentou significatimente no grupo tratado com etanol 24 horas (P < 5) Os níveis de GSH não foram diferentes entre os grupos Os níveis de oxyHB, diminuiu no grupo infundido com PTX imediatamente e previamente tratados com vitE (P < 1), e aumentou no mesmo tempo (P < 1), no grupo tratado com CREL e vitE PTX obteve em 1 hora de infusão aumento de metHB e diminuição após 24 horas, ambos revertido por vitE (P < 5) O TRAP foi aumentado imediatamente no grupo CREL, diminuindo após 24 horas, mas apenas o efeito visto em 24h foi revertido pelo tratamento prévio de vitE (P< 1) No grupo PTX foi observado diminuição imediata do TRAP e vitE reverteu este parâmetro(P < 5) Houve aumento na QL plasmática no grupo PTX em ambos os tempos analisados, revertido pelo tratamento com vitE apenas imediatamente após 1 hora de infusão (P < 1) A lipoperoxidação plasmática do grupo CREL esteve diminuida tanto em 1 hora, quanto após 24 horas, contudo o tratamento com vitE aumentou o perfil da QL no grupo CREL apenas na análise imediata (P < 1) Nenhuma alteração significante em relação a SOD, NO, hidroperóxidos e MDA foram revelados Nossos dados mostraram que o tratamento com CREL é o principal responsável pelos danos oxidativos eritrocitários, enquanto PTX responde principalmente pelos efeitos plasmáticos, ambos através da geração de estresse oxidativo Estes resultados fornecem novas informações sobre a presença de estresse oxidativo, como um mecanismo de toxicidade sistêmica in vivo do tratamento com CREL e PTX e identificam a necessidade de desenvolver novas formulações menos tóxicas de PTXpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Paclitaxel (PTX) chemotherapy is one of the main forms of several cancer treatments Due to its low solubility, it is necessary the use of Cremophor-EL (CREL) as vehicle Although the toxic effects of PTX and CREL are well established in vitro, the in vivo mechanisms by which this occurs remain unclear Through an experimental model mimicking chemotherapy performed in humans, the aim of this study was to investigate the role of oxidative stress as a mechanism of treatment toxicity and determining whether the toxic effects are due to the association of PTX-CREL or only the vehicle This study was approved by the ethics committee in animal experimentation of the State University of Londrina (CEEA No 82/1) Wistars rats (25g) were used There were available in two times, immediately (after 1 hour of infusion) and 24 hours after the infusion and divided in 2 sets of four groups: Control group (CTR) received iv infusions of 3 ml of NaCl 9%, Ethanol group (ET) received iv infusions of 3 ml NaCl 9% + 5% ethanol v / v , Cremophor group (CREL) received iv infusions of 3 ml NaCl 9% + 5% Cremophor v / v (in ethanol) Paclitaxel group (PTX) that was infused iv at 3 mL NaCl 9% + paclitaxel 175mg/m2 (PTX = Paclitaxel + Cremophor EL + ethanol + NaCl 9%) In the first set, the groups only received an infusion lasting 1 hour The second set of animals received ip 1mg/kg of vitamin E (vitE) 72 hours before the same protocols described above to validate the role of oxidative stress The animals were sedated with ethyl ether and blood was collected by cardiac puncture An aliquot of whole heparinized blood was used to determine the red blood cells (RBCs) and leukocytes counts Plasma was obtained by blood centrifugation at 15 rpm, 1 minutes 4 ° C and stored at -2 ° C The erythrocytes were washed three times with saline 9% solution at 4 ° C and used immediately for analysis The following evaluations were performed: erythrocyte and plasma lipid peroxidation evaluated by chemiluminescence (CL), the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), levels of reduced glutathione (GSH), RBCs counts, hemoglobin profile to determine methemoglobin (metHb) and oxyhemoglobina (oxyHB), total plasma antioxidant capacity (TRAP), levels of nitric oxide (NO), hydroperoxides and malondialdehyde (MDA) Data were analyzed using GraphPad Prism 5, two-way ANOVA for CL assay, one way ANOVA and Student's t test for others parameters, adopting p <5 as significant CREL group showed an increased erythrocytic CL (P < 1) and reversal after 24 hours with vitE treatment (P < 1) PTX group did not differ in the erythrocyte CL and showed decreasing lipid peroxidation when treated with vitE in both periods analyzed CAT activity increased significantly after 24 hours of infusion of CREL (P< 5), reversed by vitE (P < 1), also after 24 hours PTX group decreased CAT after 24 hours changed by prior treatment with vitE at the same time RBCs counts increased only in the ET group at 24 hours (P < 5) GSH levels did not differ among groups The oxyHB levels, decrease in the PTX group immediately and pretreated with vitE (P < 1) and increase in the same time (P < 1), in the group treated with CREL and vitE PTX immediately increased metHB and decreased after 24 hours, both reversed by vitE (P < 5) TRAP was increased immediately in the CREL group and decreased after 24 hours, however, only the effect of the 24 hours was reversed by vitE (P< 1) PTX group, immediately after infusion, showed TRAP decrease and vitE reversed this parameter (P < 5) There was an increase of plasmatic CL in the PTX group in two times analyzed, reversed by vitE only immediately after infusion (P < 1) The lipid peroxidation of CREL group was decreased in both immediately as 24 hours after infusion, however, treatment with the vitE increased QL profile of CREL group (P < 1) No significant change in SOD, NO, MDA and hydroperoxides were revealed Our data showed that CREL treatment is primarily responsible for oxidative damage to erythrocytes, while PTX responds mainly by plasma effects, both through the generation of oxidative stress These results provide new information on the presence of oxidative stress as a mechanism of systemic toxicity in vivo treatment with PTX and CREL and identify the necessity to develop new formulations less toxic PTXpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10481
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectPatologia experimentalpt_BR
dc.subjectQuimioterapiapt_BR
dc.subjectEstresse oxidativopt_BR
dc.subjectCâncerpt_BR
dc.subjectTratamentopt_BR
dc.subjectExperimental pathologypt_BR
dc.subjectCancerpt_BR
dc.subjectChemotherapypt_BR
dc.subjectOxidative stresspt_BR
dc.subjectTreatmentpt_BR
dc.titleAnálise do estresse oxidativo sistêmico em ratos submetidos ao tratamento com paclitaxel e seu agente solubilizador, Cremophor ELpt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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