Análise do estresse oxidativo sistêmico em ratos submetidos ao tratamento com paclitaxel e seu agente solubilizador, Cremophor EL
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Campos, Fernanda Carolina de
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Resumo
Resumo: A quimioterapia com paclitaxel (PTX) é uma das principais formas de tratamento de diversas neoplasias Devido à sua baixa solubilidade, é necessário o uso de Cremophor-EL (CREL), como veículo Embora os efeitos tóxicos do PTX e CREL sejam bem estabelecidas in vitro, os mecanismos in vivo pelos quais isso ocorre ainda não está claro Através de um modelo experimental mimetizando o tratamento quimioterápico realizado em humanos, o objetivo deste estudo foi investigar a participação do estresse oxidativo como um provável mecanismo de toxicidade do tratamento e elucidar se os efeitos tóxicos são devido à associação PTX-CREL ou somente ao veículo CREL Este trabalho foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação animal da Universidade Estadual de Londrina (CEEA n°82/1) Foram utilizados ratos Wistars (25g) canulados na veia femoral para infusão intravenosa (iv) com duração de uma hora Foram avaliados em dois tempos, imediatamente (após 1 hora de infusão) e 24 horas após a infusão e divididos em 2 sets de 4 grupos Grupo controle (CTR) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9%, grupo etanol (ET) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9% + etanol 5% v / v , grupo Cremophor (CREL) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9% + Cremophor 5% v / v em etanol e o grupo paclitaxel (PTX) que recebeu infusão iv de 3 mL de NaCl ,9% + paclitaxel 175mg/m2 (PTX = paclitaxel + cremophor EL + etanol + NaCl ,9%) No primeiro set, os grupos apenas receberam a infusão com duração de 1 hora No segundo set, receberam 72 horas antes dos mesmos protocolos descritos acima, 1mg/kg ip de vitamina E (vitE), para validar a participação do estresse oxidativo Os animais foram sedados com éter etílico e o sangue foi coletado via punção cardíaca Uma alíquota de sangue heparinizado total foi utilizado para determinar a cotagem de hemácias e leucócitos O plasma foi obtido a partir da centrifugação do sangue a 15 rpm, 1 minutos 4 °C, e armazenadas a -2°C Os eritrócitos foram lavados três vezes com solução salina ,9% a 4°C e utilizado imediatamente para as análises Foram realizadas as seguintes avaliações: lipoperoxidação eritrocitária e plasmática avaliada por quimiluminescência (QL), determinação da atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), glutationa reduzida (GSH), contagem de hemácias, perfil de hemoglobina para determinar metahemoglobina (metHB) e oxyhemoglobina (oxyHB), capacidade antioxidante total plasmática (TRAP), determinação de óxido nítrico (NO), hidroperóxidos e níveis de malondialdeído (MDA) Os dados foram analisados utilizando o programa GraphPad Prism 5, two-way ANOVA para cálculos de QL, one way ANOVA e teste t de Student, adotando p < 5 como significativo Os resultados mostraram aumento da QL eritrocitária no grupo CREL nos dois tempos analisados (P < 1) e reversão após 24 horas com o uso da vitE (P < 1) No grupo tratado com PTX a QL eritrocitária não obteve nenhuma diferença significante, diminuindo ainda mais a lipoperoxidação quando tratados com vitE em ambos os tempos analisados A atividade da enzima catalase teve um aumento significativo após 24 horas da infusão de CREL (P< 5), revertido pela vitE, também 24 horas após ( P < 1) O grupo infundido com PTX obteve diminuição da CAT em 24 horas após infusão, e 7 esta diminuição foi alterada pelo prévio tratamento com vitE no mesmo tempo A contagem de hemácias aumentou significatimente no grupo tratado com etanol 24 horas (P < 5) Os níveis de GSH não foram diferentes entre os grupos Os níveis de oxyHB, diminuiu no grupo infundido com PTX imediatamente e previamente tratados com vitE (P < 1), e aumentou no mesmo tempo (P < 1), no grupo tratado com CREL e vitE PTX obteve em 1 hora de infusão aumento de metHB e diminuição após 24 horas, ambos revertido por vitE (P < 5) O TRAP foi aumentado imediatamente no grupo CREL, diminuindo após 24 horas, mas apenas o efeito visto em 24h foi revertido pelo tratamento prévio de vitE (P< 1) No grupo PTX foi observado diminuição imediata do TRAP e vitE reverteu este parâmetro(P < 5) Houve aumento na QL plasmática no grupo PTX em ambos os tempos analisados, revertido pelo tratamento com vitE apenas imediatamente após 1 hora de infusão (P < 1) A lipoperoxidação plasmática do grupo CREL esteve diminuida tanto em 1 hora, quanto após 24 horas, contudo o tratamento com vitE aumentou o perfil da QL no grupo CREL apenas na análise imediata (P < 1) Nenhuma alteração significante em relação a SOD, NO, hidroperóxidos e MDA foram revelados Nossos dados mostraram que o tratamento com CREL é o principal responsável pelos danos oxidativos eritrocitários, enquanto PTX responde principalmente pelos efeitos plasmáticos, ambos através da geração de estresse oxidativo Estes resultados fornecem novas informações sobre a presença de estresse oxidativo, como um mecanismo de toxicidade sistêmica in vivo do tratamento com CREL e PTX e identificam a necessidade de desenvolver novas formulações menos tóxicas de PTX
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Palavras-chave
Patologia experimental, Quimioterapia, Estresse oxidativo, Câncer, Tratamento, Experimental pathology, Cancer, Chemotherapy, Oxidative stress, Treatment