Avaliação da atividade antiproliferativa e metabólica do óleo essencial de orégano (Origanum vulgare L.) em células trofoblásticas BeWo infectadas com a cepa RH de Toxoplasma gondii

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dc.contributor.advisorCosta, Idessania Nazareth da [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorNunes, Angélica Paulinapt_BR
dc.contributor.bancaCosta, Ivete Conchonpt_BR
dc.contributor.bancaBosqui, Larissa Rodriguespt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T12:08:33Z
dc.date.available2024-05-01T12:08:33Z
dc.date.created2022.00pt_BR
dc.date.defesa19.04.2022pt_BR
dc.description.abstractResumo: A toxoplasmose é uma doença causada pelo protozoário Toxoplasma gondii Possui importância na saúde pública principalmente por promover, muitas vezes, quadros graves na infecção congênita O tratamento atual limita-se ao uso de espiramicina ou associação de sulfadiazina, pirimetamina e ácido folínico Os efeitos tóxicos causados pelos fármacos, levam à necessidade de novas estratégias terapêuticas Assim, o óleo essencial de orégano (Origanum vulgare L) (OEO) apresenta-se como uma alternativa promissora devido ao seu potencial antibacteriano, antifúngico e antiparasitário O objetivo deste trabalho foi analisar a capacidade antiproliferativa e mecanismos de ação diretos do OEO em taquizoítos de T gondii (cepa RH) Para investigar a toxicidade do OEO em células BeWo foi realizado o ensaio de MTT utilizando concentrações de ,7 a 15 µg/mL Para avaliar a viabilidade de taquizoítos após tratamento com OEO utilizou-se método de exclusão por azul de tripan Em seguida, foram calculados a concentração citotóxica (CC5), inibitória (CI5) e índice de seletividade (IS) A atividade antiproliferativa do tratamento com OEO foi determinada pelos índices de infecção e proliferação intracelular do parasito tratados com OEO utilizando concentrações 6,2; 12; 25 e 5 µg/mL e confirmados pela microscopia de luz por meio da coloração de azul de toluidina Os mecanismos envolvidos na morte direta do parasito também foram avaliados, sendo eles, níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO), potencial de membrana mitocondrial e gotículas lipídicas A apoptose e a permeabilização da membrana plasmática foram investigados por citometria de fluxo através da marcação com Anexina-V e iodeto de propídio, além de autofagia por monodansilcadaverina Para avaliar topologia (SEM) e ultraestrutura (TEM) foram realizadas análises de microscopia eletrônica de varredura e transmissão O tratamento com OEO apresentou baixa citotoxicidade nas células BeWo (CC5 de 114,8 µg/mL ± ,1), redução da viabilidade de taquizoítos (CI5 de 12,5 ± ,6 µg/mL), e IS de 9,18 Houve redução da proliferação intracelular de 55% e 84% nas concentrações de 25 e 5 µg/mL, respectivamente Em taquizoítos livres, o tratamento causou aumento dos níveis de EROs, despolarização da membrana mitocondrial e formação de gotículas lipídicas, bem como tumefação da mitocôndria observadas em TEM Estas alterações estão atreladas à indução do processo de autofagia e permeabilização de membrana plasmática, com extravasamento do conteúdo citoplasmático e alterações nucleares, confirmadas através de TEM e SEM, culminando em um processo de morte celular O tratamento com OEO demonstrou atividade anti-T gondii direcionando a morte do parasito por alterações metabólicas sem causar toxicidade às células, podendo ser um composto promissor no tratamento da toxoplasmosept_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Toxoplasmosis is a disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii It has in public health mainly for promoting, sometimes, serious conditions in the public majority Current treatment is limited to the use of spiramycin or the association of sulfadiazine, pyrimethamine and folinic acid The effects of medicines lead to the need for new therapies Thus, the essential oil of oregano (Origanum vulgare L) (OEO) presents itself as a promising alternative due to its antibacterial, antifungal and antiparasitic potential The objective of this work was to analyze the antiproliferative capacity and the mechanisms of the direct action of OEO in tachyzoites of T gondii (RH strain) To investigate the toxicity of OEO in BeWo cells, the MTT assay was performed using concentrations from 7 to 15 µg/mL To evaluate the viability of tachyzoites after treatment with OEO, the trypan blue exclusion method was used Then, the cytotoxic (CC5), inhibitory (IC5) and selectivity index (SI) concentrations were calculated The antiproliferative activity of the OEO treatment was determined by the rates of infection and intracellular proliferation of the parasite treated with OEO using concentrations 62; 12; 25 and 5 µg/mL and confirmed by light microscopy using toluidine blue staining The mechanisms involved in the direct death of the parasite were also evaluated, namely, levels of reactive oxygen species (ROS), mitochondrial membrane potential and lipid droplets Apoptosis and plasma membrane permeabilization were investigated by flow cytometry by labeling with Annexin-V and propidium iodide, in addition to autophagy by monodansylcadaverine To evaluate topology (SEM) and ultrastructure (TEM) scanning and transmission electron microscopy analyzes were performed OEO treatment showed low cytotoxicity on BeWo cells (CC5 of 1148 µg/mL ± 1), reduced tachyzoite viability (IC5 of 125 ± 6 µg/mL), and IS of 9 18 There was a reduction in intracellular proliferation of 55% and 84% at concentrations of 25 and 5 µg/mL, respectively In free tachyzoites, treatment caused increased levels of ROS, mitochondrial membrane depolarization and lipid droplet formation, as well as mitochondrial swelling seen in TEM These alterations are linked to the induction of the process of autophagy and permeabilization of the plasma membrane, with extravasation of the cytoplasmic content and nuclear alterations, confirmed by TEM and SEM, culminating in a process of cell death OEO treatment demonstrated anti-Toxoplasma directing the death of the parasite by metabolic changes without causing toxicity to the cells, which may be a promising compound in the treatment of toxoplasmosispt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/9496
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectToxoplasmosept_BR
dc.subjectToxoplasmosept_BR
dc.subjectTratamento alternativopt_BR
dc.subjectToxoplasmosept_BR
dc.subjectTratamentopt_BR
dc.subjectToxoplasmosis - Alternative treatmentpt_BR
dc.subjectToxoplasmosis - Treatment - Essential oil of oregano (Origanum vulgare L.)pt_BR
dc.titleAvaliação da atividade antiproliferativa e metabólica do óleo essencial de orégano (Origanum vulgare L.) em células trofoblásticas BeWo infectadas com a cepa RH de Toxoplasma gondiipt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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02 - Mestrado - Patologia Experimental