Desenvolvimento de método para diagnóstico da paracoccidioidomicose humana utilizando antígeno recombinante de Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisorOno, Mário Augusto [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorAssunção, Tatiana Reichert da Silvapt_BR
dc.contributor.bancaItano, Eiko Nakagawapt_BR
dc.contributor.bancaFlorian, Elaine Cristina Teixeirapt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:10:04Z
dc.date.available2024-05-01T14:10:04Z
dc.date.created2012.00pt_BR
dc.date.defesa29.02.2012pt_BR
dc.description.abstractResumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis É considerada a micose sistêmica de maior prevalência na América do Sul, principalmente no Brasil, o qual apresenta o maior número de casos A glicoproteína de 43 kDa, gp43, é o principal antígeno utilizado no diagnóstico e epidemiologia da PCM O objetivo deste trabalho foi produzir gp43 recombinante na forma solúvel para utilização no diagnóstico de PCM humana Para a produção da proteína recombinante, primeiramente o gene gp43 foi clonado em vetor de expressão pETTEV Algumas construções do gene neste vetor foram feitas com a finalidade de obter melhor expressão e solubilidade da proteína Para isso, foram realizadas estratégias para deleção de 2 aminoácidos das regiões N-terminal e/ou C-terminal A proteína, com deleção na região N-terminal (gp43?Nt), foi produzida em E coli BL21 e purificada por cromatografia de afinidade Sua reatividade foi avaliada empregando-se soros de pacientes com PCM A gp43?Nt, apesar de ter sido obtida na forma insolúvel, apresentou semelhanças em relação à gp43 nativa e foi reconhecida por soros de pacientes com PCM nos testes de ELISA indireto, Western blot e dot blot Os melhores resultados foram observados quando utilizada em dot blot, apresentando 1% de correlação com o teste de Imunodifusão Radial Dupla (IDRD) que é o método mais usado no diagnóstico da micose Portanto, o teste de dot blot com gp43?Nt pode ser útil no diagnóstico da PCM em humanospt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis It is considered the most prevalent systemic mycosis in South America, mainly in Brazil, which presents the largest number of cases The 43 kDa glycoprotein, gp43, is the main antigen used for diagnosis and epidemiology of PCM The objective of this work was the production of the recombinant gp43 in soluble form for use in the diagnosis of human PCM For the production of recombinant protein, first the gp43 gene was cloned in pETTEV expression vector Some gene constructs in this vector were made in order to obtain better expression and solubility of protein For this, were carried out strategies for deletion of 2 amino-acid in the N-terminal and/or C-terminal regions The protein, with deletion in N-terminal (gp43?Nt), was produced at E coli BL21 and purified by affinity chromatography Its reactivity was evaluated using sera from patients with PCM The gp43?Nt, despite having been obtained in insoluble form, showed similarities with native gp43 and was recognized by sera from patients with PCM in indirect ELISA test, Western blot and dot blot The best results were observed when used in dot blot, presenting 1% of correlation with the double radial immunodiffusion test (IDRD), which is the widely used method in the diagnosis of this mycosis Therefore, dot blot wiht gp43?Nt may be useful for PCM diagnosis in humanspt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/13232
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectParacoccidioidomicosept_BR
dc.subjectDiagnósticopt_BR
dc.subjectParacoccidioides brasiliensispt_BR
dc.subjectAntígenos de fungospt_BR
dc.subjectMicoses fungóidespt_BR
dc.subjectDiagnosispt_BR
dc.subjectFungal antigenspt_BR
dc.subjectFungoid mycosispt_BR
dc.subjectParacoccidioidomycosispt_BR
dc.titleDesenvolvimento de método para diagnóstico da paracoccidioidomicose humana utilizando antígeno recombinante de Paracoccidioides brasiliensispt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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