Polimorfismo genético, expressão gênica e proteica do receptor CXCR4 : implicações na patogênese do câncer de mama e possível correlação com o gene TP53

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dc.contributor.advisorWatanabe, Maria Angelica Ehara [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorKishima, Marina Okuyamapt_BR
dc.contributor.bancaReiche, Edna Maria Vissocipt_BR
dc.contributor.bancaHerrera, Ana Cristina do Amaralpt_BR
dc.contributor.bancaAriza, Carolina Batistapt_BR
dc.contributor.bancaOliveira, Karen Brajão dept_BR
dc.contributor.coadvisorGuembarovski, Roberta Losi [Coorientadora]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T15:09:22Z
dc.date.available2024-05-01T15:09:22Z
dc.date.created2017.00pt_BR
dc.date.defesa20.04.2017pt_BR
dc.description.abstractResumo: Os tumores de mama são caracterizados por um padrão metastático distinto, envolvendo linfonodos, medula óssea, fígado e pulmão A migração das células tumorais metastáticas apresenta muita semelhança com o tráfego de leucócitos Tem sido relatado que estas podem ser guiadas através da circulação até órgãos distantes que expressam quimiocinas, pois tais células possuem receptores específicos, como o CXCR4 (C-X-C motif chemokine receptor 4) Este receptor vem sendo implicado na disseminação de tumores malignos, sendo visto como um marcador promissor em vários tipos de neoplasias, incluindo as da mama O objetivo do presente estudo foi investigar a influência do polimorfismo genético de CXCR4 (C/T rs222814) sobre sua própria expressão gênica e protéica, bem como em relação a parâmetros prognósticos da doença, em 74 amostras de pacientes com câncer de mama geral Tivemos ainda como objetivo avaliar um polimorfismo (rs142522) no gene TP53, procurando estabelecer uma correlação com a expressão gênica de CXCR4, bem como com parâmetros prognósticos em uma amostra de 33 pacientes com câncer de mama, luminal/HER2 (-) DNA e RNA foram extraídos a partir de tecido tumoral e normal obtidos por ressecção cirúrgica utilizando-se kits específicos A genotipagem de CXCR4 foi realizada por reação em cadeia da polimerase seguida de análise de fragmentos de restrição(RFLP-PCR) A expressão gênica foi avaliada por PCR quantitativa em Tempo Real (q-PCR) e a expressão proteica por imunohistoquímica As frequências genotípicas das pacientes demonstraram que 88,24% apresentaram genótipo homozigoto CC e 11,76% apresentaram genótipo heterozigoto CT Nenhuma diferença significativa na distribuição dos genótipos foi observada de acordo com as características clinicopatológicas (grau histológico, grau nuclear, comprometimento de linfonodo, receptor de estrógeno e/ou progesterona, p53, Ki67 e superexpressão do oncogene HER2) Em geral, as amostras de câncer de mama apresentaram maior expressão de CXCR4 (5,7 vezes) em relação ao RNAm de mama normal, mas não foram observadas diferenças significativas em relação à variante alélica polimórfica, quanto à expressão proteica e também em relação aos parâmetros acima citados No ensaio imunohistoquímico, foi observada uma marcação citoplasmática mais intensa de CXCR4 nas amostras tumorais em relação ao tecido normal de mama (p<,1), mas esta não foi associada ao comprometimento linfonodal, expressão gênica ou ao polimorfismo rs222814 O estudo caso controle indicou uma associação positiva para o genótipo heterozigoto e para o portador do alelo C (modelo dominante) do gene TP53 em relação à suscetibilidade em amostras luminal/HER2(-) Foi verificada uma correlação significativa para a variante genética (alelo C) de TP53 em relação ao tamanho tumoral e ao índice de proliferação celular, e a expressão de CXCR4 apresentou correlação significativa com presença de metástase, nesta mesma amostra Adicionalmente, nenhum dos genótipos de TP53 influenciou a expressão gênica de CXCR4 De um modo geral, o presente estudo mostrou um aumento da expressão de CXCR4 nos tecidos tumorais de mama, tanto em nível gênico quanto proteico, o qual não foi influenciado pelo polimorfismo avaliado no mesmo gene Tais resultados sugerem que este receptor pode ser um marcador promissor no contexto geral da carcinogênese mamária, em especial no que se refere ao processo de metástase, mas deve ser investigado se esse padrão se repete nos outros subtipos tumorais da mamapt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Breast cancer (BC) is characterized by a distinct metastatic pattern involving lymph nodes, bone marrow, liver and lung It is known that metastatic tumor cells migration resembles the leukocyte trafficking It has been reported that these cells can be guided through the circulation to distant organs that express chemokines, since such cells have specific receptors, such as CXCR4 (C-X-C motif chemokine receptor 4) This receptor has been implicated in the spread of malignant tumors, being a promising marker in several types of neoplasia, including BC The objective of the present study was to investigate the influence of CXCR4 (C/T rs222814) polymorphism on its own gene and protein expressions, as well as in relation to disease prognostic parameters, in 74 BC general samples We also aimed to evaluate another polymorphism (rs142522) in the TP53 gene, searching to establish a correlation with CXCR4 expression, as well as with disease prognostic parameters in 33 luminal/HER2- BC samples DNA and RNA were extracted from tumor and normal tissues obtained by surgical resection using specific kits CXCR4 genotyping was performed by polymerase chain reaction followed by restriction fragment analysis (PCR-RFLP) Gene expression was assessed by Real-time quantitative PCR (q-PCR) and protein expression by immunohistochemistry Genotype frequencies of the patients showed that 8824% presented CC homozygous and 1176% presented CT heterozygous genotypes No significant difference in genotype distribution was observed according to clinicopathological features (histological grade, nuclear grade, lymph node involvement, estrogen and/or progesterone receptor, p53 staining, Ki67 staining and HER2 overexpression) In general, BC samples showed higher expression of CXCR4 (57 times) than normal adjacent tissue, but no significant differences were observed in relation to allelic variant, protein expression or prognostic parameters above mentioned In immunohistochemical assay, a more intense CXCR4 cytoplasmic staining was observed in tumor tissue in relation to normal adjacent tissue (p <1), but it was not associated with lymph node involvement, gene expression or CXCR4 polymorphism Case control study indicated a positive association for TP53 heterozygous genotype and for C allele carriers in relation to luminal/HER2(-) BC susceptibility A significant correlation was found for a genetic variant (C allele) of TP53 in relation to tumor size and cell proliferation index parameters CXCR4 expression also showed a significant correlation with metastasis parameter, in this same luminal/HER2- BC sample In addition, none of the TP53 genotypes influenced CXCR4 gene expression Overall, the present study showed an increase of CXCR4 expression in BC tissues, both at the gene and protein levels, which was not influenced by the evaluated polymorphism at the same gene All in all, these results suggest that this receptor may be a promising marker in the general context of breast carcinogenesis, especially regarding the metastasis process, but it should be investigated whether this pattern repeats in the other tumor subtypes of the breast cancerpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/16484
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectMamaspt_BR
dc.subjectCâncerpt_BR
dc.subjectPolimorfismo (Genética)pt_BR
dc.subjectCélulas cancerosaspt_BR
dc.subjectGenéticapt_BR
dc.subjectCancerpt_BR
dc.subjectGenetic polymorphismspt_BR
dc.subjectGene expressionpt_BR
dc.subjectBreastpt_BR
dc.titlePolimorfismo genético, expressão gênica e proteica do receptor CXCR4 : implicações na patogênese do câncer de mama e possível correlação com o gene TP53pt_BR
dc.typeTesept_BR

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