Caracterização parcial de fatores hemolíticos e citotóxicos de Arthrographis kalrae e imunomodulação no decorrer da infecção experimental murina

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dc.contributor.advisorItano, Eiko Nakagawa [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorNagashima, Luciene Airypt_BR
dc.contributor.bancaHirooka, Elisa Yokopt_BR
dc.contributor.bancaFurlaneto, Márcia Cristinapt_BR
dc.contributor.bancaWatanabe, Maria Angélica Eharapt_BR
dc.contributor.bancaOno, Mário Augustopt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:29:58Z
dc.date.available2024-05-01T14:29:58Z
dc.date.created2013.00pt_BR
dc.date.defesa26.11.2013pt_BR
dc.description.abstractResumo: Arthrographis kalrae é um fungo dimórfico, neurotrópico e cosmopolita que vem sendo descrito como um raro patógeno humano com diversas manifestações clínicas Este estudo investigou as atividades hemolítica e citotóxica de antígenos solúveis (cell-free antigens - CFA) de A kalrae e a resposta imunopatológica ao fungo durante a infecção murina experimental CFA total e suas frações cromatográficas (Sephadex G-15/12) foram testados em hemácias de camundongo para hemólise por teste em placa com leitura a 55 nm, e em linhagem celular P3U1 para citotoxicidade por método de metiltiazolil tetrazólio (MTT) Para caracterizar melhor o fator hemolítico, anticorpos anti-hemácias isogênicas sensibilizadas com CFA foram produzidos e testados em ensaio de inibição Também, teste de hemólise foi realizado após aquecimento do CFA e a reatividade dos anticorpos foi analisada após tratamento com periodato Na infecção experimental, camundongos Balb/c foram inoculados intravenosamente com A kalrae (5x16 células) e a carga fúngica (unidades formadoras de colônias - CFU - e antigenemia por ELISA de inibição), análise histopatológica do cérebro, respostas imunes humoral (IgG e sub-classes IgG1, IgG2b e IgG2a, por ELISA) e celular (hipersensibilidade tipo tadio - DTH) e níveis de citocinas (IFN-y, IL-4, IL-1 e IL-17) séricos e cerebrais foram avaliados 7, 14, 28 e 56 dias após infecção Os resultados obtidos demonstraram atividades hemolítica e citotóxica em concentrações distintas e em frações de alta e baixa massa molecular (MM), respectivamente Os anticorpos obtidos inibiram a hemólise, mas não a citotoxicidade A atividade hemolítica não foi afetada pelo aquecimento e a sua maior reatividade foi detectada nas frações ricas em carboidratos, sendo essa atividade reduzida por tratamento com periodato Em camundongos infectados foi detectada maior carga fúngica na fase inicial, principalmente no baço, fígado e cérebro, com pequena resposta inflamatória, com perda de peso e apresentando alterações comportamentais No decorrer da infecção houve diminuição da carga fúngica, porém com CFU positivo em alguns órgãos mesmo após 56 dias de infecção Houve um aumento gradual no nível de IgG anti-A kalrae (IgG1>IgG2a>IgG2b) com permanência alta de antigenemia e de menor peso corporal no decorrer de infecção, em relação ao grupo controle Foi detectado aumento de resposta de DTH em 14 dias, ocorrendo diminuição após esse período Houve diminuição de IFN-y (14 a 56 dias), aumento de IL-4 (7 e 56 dias) e aumento (7 dias) ou diminuição (56 dias) de IL-17 no soro Diminuição nos níveis das citocinas foi observada no cérebro 56 dias após a infecção Concluímos que A kalrae secreta fatores solúveis com atividade hemolítica e citotóxica, sendo o primeiro de natureza glicoproteica, termoestável e de alta MM, possivelmente distinto do fator citotóxico Concluímos também que o isolado A kalrae induz alteração comportamental, perda de peso, imunodepressão celular com modulação sistêmica de citocinas, possivelmente para padrão de resposta Th2, induzindo também modulação de citocinas no cérebro na infecção experimental em camundongospt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Arthrographis kalrae is a dimorphic, cosmopolitan and neurotropic fungus that has been described as a rare human pathogen with several clinical manifestations This study investigated the hemolytic and cytotoxic activities in A kalrae cell-free antigens (CFA) and the immunopathological response to the fungus during murine experimental infection Total CFA and its chromatography fractions (Sephadex G-15/12) were tested on mouse erythrocytes for hemolysis in plate assay by absorbance at 55 nm and on a P3U1 cell line for cytotoxicity by methylthiazolyl tetrazolium (MTT) method In order to characterize hemolytic factor, antibodies against isogenic erythrocytes sensitized with CFA (anti-E-CFA) were produced and tested in inhibition assay Additionally, hemolytic assay was performed after CFA heating and antibody reactivity of the chromatography fractions was analyzed after periodate treatment In experimental infection, Balb/c mice were challenged intravenously with A kalrae (5x16 cells) and the fungal load (colony-forming units – CFU - or antigenemia by inhibition-ELISA), histopathological analysis of the brain, humoral (IgG and IgG1, IgG2a and IgG2b subclasses, by ELISA) and cellular (delayed-type hypersensitivity - DTH) immune responses and levels of systemic and cerebral cytokines (IFN-y, IL-4, IL-1 and IL-17) were evaluated 7, 14, 28 and 56 days after infection Results showed hemolytic and cytotoxic activities in different concentrations and in high and low molecular mass (MM) fractions, respectively Anti-E-CFA antibodies were able to inhibit hemolysis but not cytotoxicity Hemolytic activity was not affected by heating and a higher reactivity was detected in the carbohydrate-rich fractions, which decreased after reduction by periodate treatment In infected mice, the fungal load was higher in the early phase, primarily in spleen, liver and brain, with little inflammatory response, with weight loss and presenting behavioral alterations There was a decreasing in fungal load over the course of infection, although with positive CFU in some organs even after 56 days of infection There was a gradual increase in the level of anti-A kalrae IgG (IgG1>IgG2a>IgG2b) and high antigenemia and lower body weight remained during infection Increased levels of DTH at 14 days were detected, with decrease after this period There was decreased IFN-y (14 to 56 days), an increase in IL-4 (7 and 56 days) and increased (7 days) or decreased (56 days) IL-17 levels in the serum Decreased levels of cytokines were observed in the brain 56 days after infection We conclude that A kalrae releases soluble factors with cytotoxic and hemolytic activities, with the latter potentially being a thermostable glycoprotein with a high MM, possibly distinct from the cytotoxic factor We also conclude that A kalrae induces behavioral alteration, weight loss, cellular immunodepression with systemic immunomodulation, possibly to the pattern of Th2 response, inducing cytokine modulation in the brain in experimental infection with A kalrae in micept_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/14304
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectFungos patogênicospt_BR
dc.subjectHemólise e hemolisinaspt_BR
dc.subjectCitocinaspt_BR
dc.subjectResposta imunept_BR
dc.subjectMicrobiologia médicapt_BR
dc.subjectPathogenic fungipt_BR
dc.subjectHemolysis and hemolysinspt_BR
dc.subjectCytokinespt_BR
dc.titleCaracterização parcial de fatores hemolíticos e citotóxicos de Arthrographis kalrae e imunomodulação no decorrer da infecção experimental murinapt_BR
dc.typeTesept_BR

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