Desenvolvimento e avaliação da técnica de nested-PCR para a detecção do RNA do Senecavirus A em leitões com síndrome multissistêmica neonatal
| dataload.collectionmapped | 02 - Mestrado - Ciência Animal | pt_BR |
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| dc.contributor.advisor | Alfieri, Amauri Alcindo [Orientador] | pt_BR |
| dc.contributor.author | Feronato, César | pt_BR |
| dc.contributor.banca | Lunardi, Michele | pt_BR |
| dc.contributor.banca | Freire, Roberta Lemos | pt_BR |
| dc.coverage.spatial | Londrina | pt_BR |
| dc.date.accessioned | 2024-05-01T12:08:48Z | |
| dc.date.available | 2024-05-01T12:08:48Z | |
| dc.date.created | 2016.00 | pt_BR |
| dc.date.defesa | 09.06.2016 | pt_BR |
| dc.description.abstract | Resumo: O Senecavirus A (SenV-A) foi descrito pela primeira vez em 22, nos Estados Unidos O vírus pertence à família Picornaviridae, gênero Senecavirus Inicialmente, o SenV-A não foi associada a uma patologia específica; entretanto desde 28 existem relatos da possível associação desse vírus com quadros clínicos de doença vesicular em suínos Em 215, o SenV-A foi associado a casos de doença vesicular em suínos nas fases de creche e terminação e a sinais clínicos de letargia, hiperemia cutânea, diarreia, sinais neurológicos e/ou morte súbita em leitões de granjas suinícolas brasileiras e estadunidenses Desde então, a infecção pelo SenV-A é considerada uma doença infecciosa emergente que tem sido associada com doença vesicular em suínos desmamados (creche) e adultos (terminação) e com uma síndrome multissistêmica em leitões de diferentes países, como os Estados Unidos, Brasil e China Entre os sistemas diagnósticos disponíveis para a investigação da infecção pelo SenV-A, as técnicas moleculares são as mais utilizadas Entretanto, muitas destas técnicas são de alto custo e exigem conhecimento técnico avançado para a sua execução e/ou interpretação O objetivo deste estudo foi estabelecer a técnica de nested-PCR para o diagnóstico de rotina para a infecção pelo SenV-A em leitões Amostras de tecidos (n=177) foram coletadas de 37 leitões provenientes de 18 granjas localizadas em quatro diferentes estados de três regiões geográficas distintas do Brasil A técnica de RT-PCR foi realizada para amplificar um produto de 542 pb das regiões VP3/VP1 do genoma do SenV-A Para a nested-PCR, um par de primers foi selecionado para amplificar um fragmento interno da VP1 com 316 pb Quinze (4,5%) e 23 (62,2%) dos 37 leitões avaliados foram positivos para o SenV-A pelas técnicas de RT-PCR e nested-PCR, respectivamente O RNA do SenV-A foi detectado em 61 (34,5%) das 177 amostras de tecidos pela RT-PCR, enquanto a nested-PCR revelou que 84 (47,5%) das 177 amostras foram positivas para o vírus (p<,5) Considerando os resultados de acordo com as granjas, 11 (61,1%) e 16 (88,9%) das 18 granjas foram positivas para o SenV-A na RT-PCR e na nested-PCR, respectivamente A análise de sequenciamento de nucleotídeos revelou similaridade de 98,7% a 1% entre as sequências de SenV-A brasileiras e de 86,6% a 98% com cepas de SenV-A de outros países, confirmando a especificidade dos amplicons A técnica de nested-PCR deste estudo foi capaz de amplificar o RNA do SenV-A em amostras biológicas, leitões e granjas que foram consideradas negativas pela RT-PCR e é proposta para a investigação de rotina da infecção pelo SenV-A, especialmente quando outras técnicas não estão disponíveis ou quando um grande número de amostras devem ser examinadas para a presença viral | pt_BR |
| dc.description.abstractother1 | Abstract: Senecavirus A (SenV-A) was first described in 22 in the United States The virus belongs to the Picornaviridae family, genus Senecavirus Originally, the SenV-A was not associated with a specific pathology; however since 28 there are reports of the likely association of this virus with clinical signs of vesicular disease in pigs In 215, the SenV-A was associated with cases of vesicular disease in pigs at nursery and finisher ages and with clinical manifestations of lethargy, cutaneous hyperemia, diarrhea, neurological signs, and/or sudden death in neonatal piglets of Brazilian and North American pig herds Since then, the SenV-A infection is considered an emerging disease that has been associated with vesicular disease in weaned and adult pigs and with a multisystemic syndrome in neonatal piglets of different countries, such as the United States, Brazil, and China Among the diagnostic systems available for the SenV-A infection investigation, the molecular techniques are more frequently used However, many of these techniques are expensive and require highly skilled expertise for their execution and/or interpretation This study aimed to establish a nested-PCR assay for the routine diagnosis of SenV-A infection in piglets Tissue samples (n=177) were collected from 37 piglets of 18 pig farms located in four different Brazilian states of three distinct geographical regions The RT-PCR assay was performed to amplify a 542 bp product size of VP3/VP1 regions of SenV-A genome For the nested-PCR, a primer set was defined to amplify an internal VP1 fragment of 316 bp Fifteen (45%) and 23 (622%) of the 37 piglets were positive for the SenV-A in the RT-PCR and nested-PCR assays, respectively The SenV-A RNA was detected in 61 (345%) of the 177 samples with the RT-PCR, while the nested-PCR assay showed that 84 (475%) of the 177 samples were with the virus (p<5) Considering the results according to the herds, 11 (611%) and 16 (889%) of the 18 pig herds were positive for the SenV-A in the RT-PCR and nested-PCR assays, respectively Nucleotide sequencing analysis revealed similarities of 987% to 1% among SenV-A Brazilian strains and of 866% to 98% with SenV-A strains from other countries, confirming the specificity of the amplicons The nested-PCR assay in this study was suitable to amplify the SenV-A RNA in biological specimens, piglets, and/or herds that were considered as negative in the RT-PCR assay, and is proposed for the routine investigation of the SenV-A infection, especially when other techniques are not available or when a great number of samples has to be examined for the virus presence | pt_BR |
| dc.description.notes | Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.uel.br/handle/123456789/9561 | |
| dc.language | por | |
| dc.relation.coursedegree | Mestrado | pt_BR |
| dc.relation.coursename | Ciência Animal | pt_BR |
| dc.relation.departament | Centro de Ciências Agrárias | pt_BR |
| dc.relation.ppgname | Programa de Pós-graduação em Ciência Animal | pt_BR |
| dc.subject | Leitão (Suíno) | pt_BR |
| dc.subject | Doenças | pt_BR |
| dc.subject | Doença vesicular de suíno | pt_BR |
| dc.subject | Diagnóstico molecular | pt_BR |
| dc.subject | Virologia veterinária | pt_BR |
| dc.subject | Diseases | pt_BR |
| dc.subject | Swine vesicular disease | pt_BR |
| dc.subject | Molecular diagnosis | pt_BR |
| dc.subject | Swine | pt_BR |
| dc.title | Desenvolvimento e avaliação da técnica de nested-PCR para a detecção do RNA do Senecavirus A em leitões com síndrome multissistêmica neonatal | pt_BR |
| dc.type | Dissertação | pt_BR |
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