Desenvolvimento e avaliação da técnica de nested-PCR para a detecção do RNA do Senecavirus A em leitões com síndrome multissistêmica neonatal
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Feronato, César
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Resumo
Resumo: O Senecavirus A (SenV-A) foi descrito pela primeira vez em 22, nos Estados Unidos O vírus pertence à família Picornaviridae, gênero Senecavirus Inicialmente, o SenV-A não foi associada a uma patologia específica; entretanto desde 28 existem relatos da possível associação desse vírus com quadros clínicos de doença vesicular em suínos Em 215, o SenV-A foi associado a casos de doença vesicular em suínos nas fases de creche e terminação e a sinais clínicos de letargia, hiperemia cutânea, diarreia, sinais neurológicos e/ou morte súbita em leitões de granjas suinícolas brasileiras e estadunidenses Desde então, a infecção pelo SenV-A é considerada uma doença infecciosa emergente que tem sido associada com doença vesicular em suínos desmamados (creche) e adultos (terminação) e com uma síndrome multissistêmica em leitões de diferentes países, como os Estados Unidos, Brasil e China Entre os sistemas diagnósticos disponíveis para a investigação da infecção pelo SenV-A, as técnicas moleculares são as mais utilizadas Entretanto, muitas destas técnicas são de alto custo e exigem conhecimento técnico avançado para a sua execução e/ou interpretação O objetivo deste estudo foi estabelecer a técnica de nested-PCR para o diagnóstico de rotina para a infecção pelo SenV-A em leitões Amostras de tecidos (n=177) foram coletadas de 37 leitões provenientes de 18 granjas localizadas em quatro diferentes estados de três regiões geográficas distintas do Brasil A técnica de RT-PCR foi realizada para amplificar um produto de 542 pb das regiões VP3/VP1 do genoma do SenV-A Para a nested-PCR, um par de primers foi selecionado para amplificar um fragmento interno da VP1 com 316 pb Quinze (4,5%) e 23 (62,2%) dos 37 leitões avaliados foram positivos para o SenV-A pelas técnicas de RT-PCR e nested-PCR, respectivamente O RNA do SenV-A foi detectado em 61 (34,5%) das 177 amostras de tecidos pela RT-PCR, enquanto a nested-PCR revelou que 84 (47,5%) das 177 amostras foram positivas para o vírus (p<,5) Considerando os resultados de acordo com as granjas, 11 (61,1%) e 16 (88,9%) das 18 granjas foram positivas para o SenV-A na RT-PCR e na nested-PCR, respectivamente A análise de sequenciamento de nucleotídeos revelou similaridade de 98,7% a 1% entre as sequências de SenV-A brasileiras e de 86,6% a 98% com cepas de SenV-A de outros países, confirmando a especificidade dos amplicons A técnica de nested-PCR deste estudo foi capaz de amplificar o RNA do SenV-A em amostras biológicas, leitões e granjas que foram consideradas negativas pela RT-PCR e é proposta para a investigação de rotina da infecção pelo SenV-A, especialmente quando outras técnicas não estão disponíveis ou quando um grande número de amostras devem ser examinadas para a presença viral
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Palavras-chave
Leitão (Suíno), Doenças, Doença vesicular de suíno, Diagnóstico molecular, Virologia veterinária, Diseases, Swine vesicular disease, Molecular diagnosis, Swine