Ação antibacteriana de enterocinas produzidas por espécies de Enterococcus sobre células planctônicas e biofilmes

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dc.contributor.advisorFurlaneto, Márcia Cristina [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorRocha, Kátia Realpt_BR
dc.contributor.bancaCosta, Giselle Aparecida Nobrept_BR
dc.contributor.bancaFrança, Emanuele Júlio Galvão dept_BR
dc.contributor.bancaRocha, Sérgio Paulo Dejato dapt_BR
dc.contributor.bancaPanagio, Luciano Aparecidopt_BR
dc.contributor.coadvisorFurla Neto-Maia, Luciana [Coorientadora]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:44:26Z
dc.date.available2024-05-01T14:44:26Z
dc.date.created2018.00pt_BR
dc.date.defesa28.11.2018pt_BR
dc.description.abstractResumo: Enterocococcus spp pertencem ao grupo bactérias ácido láticas produtoras de bacteriocinas (enterocinas) que apresentam atividade contra várias bactérias patogênicas de origem alimentar Este estudo foi realizado primeiramente para selecionar enterococos produtores de enterocinas contra Listeria innocua 12612, bem como seu espectro de ação contra outras bactérias oportunistas e em seguida avaliar a influência de suas enterocinas em biofilme bacteriano Para tal, os isolados potencialmente produtores de enterocinas (Ent+) contra L innocua 12612 foram caracterizados quanto a presença de genes estruturais para enterocinas e produção de componente hemolítico Em seguida foi obtido o sobrenadante de cultivo livre de células (CFS) dos Ent+, para avaliar sua ação contra L innocua 12612 por método de disco-difusão, após tratamento com calor (8°C e 1°C), enzimas proteolíticas (a- quimiotripsina, protease e tripsina), resistência a catalase, quantificação da atividade antibacteriana do CFS e do CFS parcialmente purificado por unidade arbitrária (UA), bem como determinar seu respectivo modo de ação e espectro antibacteriano contra outras bactérias Dos 76 enterococos de diferentes fontes, 11 foram considerados Ent+ (5 isolados provenientes de alimentos e 6 de ambiente), além disso 9 destes apresentavam ao menos um gene codificador de enterocina, entA, entB, entP, ent171 e/ou entX Não houve isolados com atividade hemolítica Após a obtenção dos CFS 7/11 dos isolados Ent+ (5 de alimentos e 2 de ambientes) apresentaram halo de inibição contra L innocua Esses 7 CFS foram termoestáveis, de natureza proteica e a ação antibacteriana por peróxido de hidrogênio foi descartada pela utilização de catalase, indicando a ação antagônica pela presença de enterocina Ao concentrar a enterocina (CFS parcialmente purificado) os valores de UA tenderam a aumentar O modo de ação observado foi bactericida A ativididade antagônica dos 7 CFS contendo enterocina contra outras 33 bactérias indicadoras ocorreu principalmente em L innocua, Listeria monocytogenes e Listeria ivanovii Os CFS que apresentaram maiores valores de UA e espectro de ação foram os provenientes de alimentos, provavelmente isso possa estar relacionada com a maior quantidade de genes codificadores de enterocinas por parte desses isolados Além disso, foram selecionados 4 CFS provenientes de alimentos para avaliar sua atividade anti-biofilme de Listeria spp, no desenvolvimento e após a pré- formação do biofilme por 24h a 3°C e 37°C O biofilme foi formado em superfícies abiótica e avaliado por biomassa total (cristal violeta), atividade metabólica (redução de XTT) e microscopio de fluorescência (com marcador de célula morta utilizando iodeto de propidio) Para tal, 8 Listeria spp foram avaliadas quanto a formação de biofime por biomassa total Dessas foram selecionados 3 Listeria spp (Listeria monocytogenes 232, Listeria ivanovii 256 e Listeria innocua 25) para serem submetidas ao tratamento com os CFS Os resultados mostraram que houve atividade anti-biofilme das Listeria spp, por parte de todos os CFS avaliados (desenvolvimento e no biofilme pré-formado), em ambas temperaturas avaliadas De uma maneira geral, a atividade anti-biofilme listerial provocadas pelos CFS, foi acompanhada por uma menor atividade metabólica, bem como redução da estrutura do biofilme e maior quantidade de células mortas nas imagens obtidas, quando comparado com o controle Concluindo, com base nos esforços consideráveis para a busca por novas bacteriocinas para serem aplicadas na área alimentícia principalmente contra Listeria, um importante patógeno alimentar, tem que os enterococos aqui avaliados apresentam-se como potenciais candidatos no controle de bactérias patogênicas sejam em células planctônicas ou sésseispt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Enterococcus spp belong to the group lactic acid bacteria, which produce bacteriocins (enterocins) that presents activity against several foodborne pathogens This study was firstly carried out to select enterococci producing enterocin against Listeria innocua 12612, as well as its spectrum of action against other opportunistic bacteria and then to evaluate the influence of its enterocins on bacterial biofilm For this, isolates potentially producing enterocin (Ent+) against L innocua 12612 were characterized for the presence of structural genes for enterocins and production of hemolytic component Then, the cell-free supernatant (CFS) of the Ent+ was obtained to evaluate its action against L innocua 12612 by disc-diffusion method, after heat treatment (8°C and 1°C), proteolytic enzymes (a-chymotrypsin, protease and trypsin), catalase resistance, quantification of the antibacterial activity of CFS and partially purified CFS by arbitrary unit (AU), as well as determine their respective mode of action and antibacterial spectrum against other bacteria Of the 76 enterococci from different sources, 11 were considered Ent+ (5 isolates from food and 6 from environment), in addition 9 of these had at least one enterocin encoding gene, entA, entB, entP, ent171 and /or entX There were no Ent+ isolates with hemolytic activity After obtaining the CFS 7/11 of the Ent+ isolates (5 from food and 2 from environments) presented halo of inhibition against L innocua These 7 CFS were thermostable, of a protein nature and the antibacterial action by hydrogen peroxide was discarded by the use of catalase, indicating the antagonistic action by the presence of enterocin By concentrating the enterocin (partially purified CFS) the AU values tended to increase The mode of action observed was bactericidal The inhibitory activity of the 7 CFS containing enterocin against other 33 indicator bacteria occurred mainly in L innocua, Listeria monocytogenes and Listeria ivanovii The CFS that presented higher values of AU and action spectrum were those from food, probably this may be related to the greater amount of genes coding for enterocins by these isolates In addition, 4 CFS from food were selected to evaluate their anti-biofilm activity of Listeria spp, in the development and after pre-formation of the biofilm for 24 h at 3 °C and 37 °C The biofilm was formed on abiotic surfaces and evaluated by total biomass (violet crystal), metabolic activity (XTT reduction) and fluorescence microscopy (with a dead cell marker using propidium iodide) For this, 8 Listeria spp were evaluated for biofilm formation by total biomass Of these, 3 Listeria spp (Listeria monocytogenes 232, Listeria ivanovii 256 and Listeria innocua 25) were selected to be submitted to treatment with CFS The results showed that there were anti-biofilm activity, by all evaluated CFS (development and preformed biofilm), in both evaluated temperatures In general, the listerial anti-biofilm activity by CFS was accompanied by a lower metabolic activity, as well as a reduction of the biofilm structure and a greater number of dead cells in the obtained images, when compared to the control In conclusion, based on the considerable efforts to search for new bacteriocins to be applied in the food area mainly against Listeria, an important food pathogen, the enterococci present here are potential candidates for the control of pathogenic bacteria in planktonic cells or sessilept_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15006
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameMicrobiologiapt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Microbiologiapt_BR
dc.subjectEnterococcuspt_BR
dc.subjectBactérias gram-positivaspt_BR
dc.subjectInfecções enterocócicaspt_BR
dc.subjectVirulência (Microbiologia)pt_BR
dc.subjectGram-positive bacteriapt_BR
dc.subjectEnterococcicas infectionspt_BR
dc.subjectVirulence (Microbiology)pt_BR
dc.titleAção antibacteriana de enterocinas produzidas por espécies de Enterococcus sobre células planctônicas e biofilmespt_BR
dc.typeTesept_BR

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