Detecção de Mycobacterium spp. como estratégia para o desenvolvimento de métodos moleculares para o diagnóstico da tuberculose
Data
2025-09-30
Autores
Gonçalves, Guilherme Bartolomeu
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Resumo
A tuberculose é causada por bactérias do complexo Mycobacterium tuberculosis — o qual possui espécies adaptadas aos animais e duas espécies adaptadas aos seres humanos: M. tuberculosis sensu stricto e Mycobacterium africanum. A doença ainda é estigmatizada e permanece como problema de saúde pública; sua epidemiologia é fortemente influenciada por condições socioeconômicas desfavoráveis, apresentando mortalidade significativa em escala global e nacional até os dias atuais. No Paraná mais de 2.300 casos novos foram reportados em 2023, dois quais 200 ocorreram em residentes de Londrina. A transmissão depende do contato com indivíduos com tuberculose ativa e o granuloma é o principal marco fisiopatológico, contribuindo para a cronicidade da infecção e a dificuldade terapêutica. O principal fator de risco é a imunosupressão. A vacinação é a principal estratégia profilática e o tratamento é longo e fundamentado na politerapia. Apesar de o cultivo ser o padrão-ouro para o diagnóstico da tuberculose, essa abordagem requer mais de três semanas para a liberação de resultados. Nesse sentido a Organização Mundial da Saúde (OMS) destaca a importância dos testes moleculares rápidos para a realização do diagnóstico precoce e início do tratamento, que efetivamente interrompe a transmissão da doença e contribui para a Estratégia pelo Fim da Tuberculose. No entanto, os testes comerciais recomendados pela OMS utilizam plataformas automatizadas que exigem equipamentos e insumos específicos e onerosos. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo otimizar uma qPCR in house para a detecção de Mycobacterium spp. Para isso, oligonucleotídeos iniciadores forward e reverse foram desenhados a partir da sequência consenso obtida após o alinhamento de 24 sequências do gene RNAr 16S de M. tuberculosis. Além disso, esse gene foi inserido no plasmídeo pUC57, que serviu como controle positivo para as reações de amplificação. Após a otimização das condições de amplificação por PCR convencional, a especificidade e sensibilidade analíticas foram determinadas por qPCR, e, posteriormente, o sistema de detecção foi validado em amostras biológicas. O par de iniciadores utilizado apresentou alta especificidade para o gênero, sem amplificação para outros microrganismos. A sensibilidade analítica foi de 10 cópias do controle positivo, indicando potencial para detecção de baixa carga bacilar. A validação com amostras biológicas mostrou concordância considerável com os resultados obtidos por métodos de referência, reforçando a aplicabilidade do sistema de detecção proposto, como ferramenta diagnóstica complementar. Dessa forma, o protocolo otimizado representa uma alternativa viável e de baixo custo para o diagnóstico molecular de tuberculose em contextos com recursos limitados, podendo contribuir para o enfrentamento da doença
Descrição
Palavras-chave
Tuberculose pulmonar, qPCR, Diagnóstico molecular, Saúde pública, Reação em cadeia da polimerase em tempo real, Técnicas de diagnóstico molecular