Caracterização genética de um novo membro do gênero Deltapapillomavirus (Papilomavírus bovino tipo 13) identificado em lesões epiteliais de bovinos e equinos
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Lunardi, Michele
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Resumo
Resumo: O papilomavírus (PV) pertence a um grupo muito diversificado de vírus que infecta grande variedade de espécies de vertebrados O PV está relacionado com proliferações da pele e mucosa de seus hospedeiros Em bovinos, o papilomavírus bovino (BPV) é o agente etiológico da papilomatose cutânea e dos cânceres da bexiga urinária e do trato gastrointestinal superior Nos equinos, os sarcóides são neoplasias fibroblásticas locais com característica agressiva, reconhecidas como o tumor de pele mais comum em equinos de todo o mundo Os sarcóides raramente regridem e, frequentemente, recorrem após a terapia Pela identificação sucessiva do DNA do BPV em sarcóides, e a demonstração da expressão de diversos genes virais nestas lesões, o envolvimento direto do BPV na patogênese do sarcóide foi corroborado Atualmente, doze tipos de BPV foram identificados e caracterizados em bovinos Estes BPVs estão classificados nos gêneros Deltapapillomavirus (BPV1 e 2), Xipapillomavirus (BPV3, 4, 6, 9, 1, 11, e 12) e Epsilonpapillomavirus (BPV5 e 8), com a exceção do BPV7 que pertence a um gênero ainda indefinido Além dos tipos de BPV caracterizados por meio da sequência completa do genoma viral, dezenas de prováveis novos tipos virais, identificados por meio de PCR com primers degenerados que amplificam fragmentos parciais do gene L1, têm sido descritos em rebanhos bovinos provenientes de regiões geográficas diversas Recentemente, estudos realizados no Brasil revelaram notável diversidade entre os BPVs detectados em papilomas bovinos, sendo descritos quatro prováveis novos tipos virais que foram designados BPV/BR-UEL2 a BPV/BR-UEL5 O presente estudo descreve a sequência genômica completa e o posicionamento filogenético de um destes novos tipos de BPV (BPV/BR-UEL4) identificado em bovinos e tentativamente denominado de papilomavírus bovino tipo 13 Adicionalmente, o envolvimento deste novo tipo de BPV em sarcóides equinos também é relatado Em cavalos, seis sarcóides que foram coletados cirurgicamente, a partir de várias regiões anatômicas de dois cavalos, foram avaliados com oito pares de primers degenerados Estes primers foram desenhados para detectar regiões conservadas dos genes L1 e E1 dos PVs cutâneos Os produtos de PCR obtidos foram sequenciados diretamente Nos sarcóides avaliados, as quatro sequências geradas dos produtos de PCR apresentaram 1% de identidade com o BPV13 O BPV13 foi identificado em um papilomas localizado na orelha de bovino pertencente a um rebanho da região sul do Brasil Para amplificar a sequência completa do genoma do BPV13, a amostra de DNA foi submetida à técnica de amplificação por círculo rolante (RCA) Para confirmar que o produto obtido era DNA de papilomavírus, PCR com primers degenerados foi realizada no produto RCA Estes produtos de PCR foram sequenciados e, baseando-se nestas sequências parciais dos genes E1 e L1, dois pares de primers para PCR de fragmentos longos foram selecionados para a amplificação da maior parte do genoma do BPV13 A sequência completa dos fragmentos longos clonados foi determinada por sequenciamento contíguo, iniciando-se a partir do sítio para os primers universais no vetor de clonagem pCR4-TOPO As falhas remanescentes nas sequências foram eliminadas por sequenciamento direto do produto RCA A sequência genômica completa do BPV13 possue 7961 pb, com conteúdo GC de 45,1%, e oito ORFs, codificando para seis proteínas não-estruturais (E1, E2, E4, E5, E6 e E7) e duas proteínas estruturais (L1 e L2) A análise filogenética, realizada a partir do alinhamento de sequência de nucleotídeos concatenada dos genes E7, E1, E2, L2 e L1 do BPV13 e de outros PVs de ungulados, mostrou que o BPV13 é um membro do gênero Deltapapillomavirus, que já contém os BPVs 1 e 2 A sequência do gene L1 do BPV13 apresentou identidade de 85,5-88,2% com as mesmas sequências dos BPVs 1 e 2 A identificação do BPV13 nos sarcóides examinados sugere a possibilidade de que muitos PVs isolados de sarcóides, e que foram previamente diagnosticados por meio de PCR com primers específicos para o BPV1/2, podem ter sido classificados erroneamente como BPV2, especialmente devido ao fato do sequenciamento direto não ter sido realizado para muitas amostras Assim como o relatado para os BPVs 1 e 2, é tentador sugerir que o BPV13 também é capaz de induzir fibropapilomas em seus hospedeiros naturais O agrupamento do BPV13 no gênero Deltapapillomavirus, o qual reune PVs que determinam fibropapilomas em artiodactilos ruminantes, assim como os achados da presença do gene E5 e da perda do motivo de ligação do fator pRB na proteína E7, dão suporte a esta hipótese Os PVs são espécie-específicos e a ocorrência de transmissão entre espécies é relatada como evento muito raro, somente ocorrendo entre espécies hospedeiras próximas, como a infecção de cavalos pelos BPVs 1 e 2 Assim como os outros representantes da espécie Delta4, este novo tipo viral foi identificado em associação com casos de sarcóide equino em rebanhos brasileiros A caracterização de novos BPVs colabora para a compreensão da filogenia do PV e para a interpretação das enfermidades relacionadas a estes vírus A obtenção de informações adicionais sobre a base molecular e epidemiologia dos BPVs caracterizados, assim como dos ainda não caracterizados, será necessária para a completa compreensão da patogenia das doenças associadas ao BPV
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Palavras-chave
Bovino, Doenças, Equino, Vírus do papiloma, Doenças do vírus do papiloma, Diseases, Diseases, Papillomaviruses, Veterinary virology, Horse - Cattle