Perfil de citocinas Th1, Th17 e Treg em lúpus eritematoso sistêmico : associação com a presença e atividade da doença

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciências da Saúdept_BR
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dc.contributor.advisorReiche, Edna Maria Vissoci [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorGuimarães, Poliana Macedopt_BR
dc.contributor.bancaOliveira, Karen Brajão dept_BR
dc.contributor.bancaLozovoy, Marcell Alysson Batistipt_BR
dc.contributor.coadvisorSimão, Andréa Name Colado [Coorientadora]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:58:01Z
dc.date.available2024-05-01T14:58:01Z
dc.date.created2016.00pt_BR
dc.date.defesa25.11.2016pt_BR
dc.description.abstractResumo: Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune complexa na qual que ocorre a perda de tolerância a antígenos próprios, caracterizada por processo inflamatório sistêmico e crônico e pela produção excessiva de citocinas inflamatórias e altos títulos de autoanticorpos Atualmente, existe um grande interesse clínico na identificação de biomarcadores que estejam intimamente associados à atividade da doença Nesse sentido, assume destaque um grande número de citocinas que contribuem para a resposta imune no LES Evidências sugerem que, além de citocinas produzidas pelas células Th1, como interferon gama (IFN-?), interleucina (IL)-12 e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) e as citocinas produzidas pelas células Th2, como IL-4 e IL-6, também as citocinas IL-17 e IL-1, produzidas pelas células Th17 e T reguladoras (Treg), respectivamente, estão envolvidas no desequilíbrio imunológico Além disso, o polimorfismo genético NcoI do TNF? (rs99253), fatores ambientais e alterações dos níveis séricos da vitamina D e cortisol estão envolvidos na modulação das citocinas, contribuindo para aumentar o estado inflamatório e podendo estar associados à atividade da doençaObjetivo: Delinear os perfis de citocinas associados com LES para a construção de modelos de previsão da presença e atividade da doença, bem como avaliar se o polimorfismo NcoI do TNF?, o índice de massa corporal (IMC) e os níveis séricos de vitamina D e cortisol estão associados aos níveis de citocinas no LES Sujeitos e Métodos: Participaram deste estudo 2 pacientes com LES e 196 controles saudáveis O LES foi diagnosticado utilizando os critérios revisados do American College of Rheumatology, 213, e a atividade da doença foi determinada utilizando pontuação Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) Os níveis plasmáticos das citocinas TNF-a, IFN-?, IL-1, IL-4, IL-6, IL-1, IL-12 e IL-17 foram determinados pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) de sanduíche Os perfis de citocinas foram estabelecidos como pró-inflamatório (IL-1+IL-6+TNF-a), Th1 (IL-12+IFN-?), Th2 (IL-4), Th17 (IL-6+IL-17) ou Treg (IL-1) Os níveis séricos de vitamina D foram determinados pelos níveis de 25-hidroxivitamina D[25(OH)D] utilizando imunoensaio quimioluminescente de micropartículas (CMIA), assim como os níveis séricos basais de cortisol Os niveis séricos de proteína C reativa ultrasensível (usPCR) foram determinados pelo método de CMIA Os títulos de autoanticorpos contra antígenos nucleares (ANA) foram avalidos por imunofluorescência indireta e anticorpos contra DNA de dupla cadeia (anti-dsDNA) por ELISA Os genótipos B1/B1, B1/B2 e B2/B2 do polimorfismo NcoI do TNFß foram determinados pela reação em cadeia da polimerase, seguida pela anãlise do polimorfismo do comprimento dos fragmentos de restrição Resultados: Os pacientes diferiram dos controles quanto ao sexo, idade e IMC, sendo mais frequentes no sexo feminino [187 mulheres (F) para 13 homens (M) vs 151 (F) para 43 (M), p<,1, com razão F:M de 14,4:1 e 3,5:1, respectivamente] Os pacientes foram mais idosos que os controles (41,2 anos ± 13,3 vs 36,5 ± 11,3, p<,1), assim como apresentaram maior IMC (27,6 kg/m2 ± 5,8 vs 25,1 ± 4,5, p<,1) Quando comparados aos controles, os pacientes apresentaram níveis mais elevados de usPCR e menores de cortisol (p=,1 e p<,1, respectivamente) Os níveis de 25(OH)D não diferiram entre os grupos (p=,229), mas foram inversamente associados aos níveis de IFN-? (p=,4) Não foi encontrada associação significativa entre os níveis de cortisol e os de citocinas (p=,84) Não houve associação significativa entre o polimorfismo Ncol do TNFß e a presença de LES (p=,226); no entanto, a análise multivariada demonstrou associações significativas entre os níveis de citocinas e ambos os genótipos B1/B1 (p=,18) e B1/B2 (p=,14) Os testes de efeitos entre os grupos demonstraram que o genótipo B1/B2 foi associado ao aumento de IL-4 (p=,46) e TNF-a (p=,8), enquanto o genótipo B1/B1 foi associado ao aumento de IL-17 (p=,1) Quando os medicamentos utilizados no tatamento dos pacientes com LES foram introduzidos como variável explicativa adicional na análise multivariada, não se observou alteração significativa dos resultados (p>,5) O resultado da análise multivariada mostrou que todos os perfis de citocinas foram significativamente mais elevados no grupo com LES do que no grupo controle (p<,1), exceto o perfil pró-inflamatório (IL-1+IL-6+TNF-a) que mostrou uma tendência a ser diminuído nos pacientes com LES (p=,76) A maior diferença significativa foi encontrada para o perfil Th1+Th17/Th2 no grupo de pacientes e controles Verificou-se um efeito significativo na multivariada para o polimorfismo Ncol do TNF-? nos perfis de citocinas (p=,3) Após avaliar os efeitos da multivariada para os genótipos sobre os oito perfis de citocinas, verificou-se um efeito positivo para o genótipo B1/B1 somente sobre os perfis Th17 (IL-6+IL-17, p=,7) e para o perfil Th17/Th2 (IL6+IL17/IL4, p=,2) Os perfis Th1+Th17 (IL-12+IFN-? + IL-6+IL-17), assim como a Treg (IL-1), ambos associados positivamente com LES (p<,1 e p=,1, respectivamente) e Th2 (IL-4), associada negativamente (p=<,1) foram preditores de LES, ou seja, 9,4% de todos os indivíduos foram corretamente classificados com a presença da doença, com sensibilidade de 66,7% e especificidade de 96,9% O SLEDAI foi predito pela razão Th1+Th17/Th2, Treg, IMC (todos positivamente, p<,5) e perfil pró-inflamatório (negativamente, p=,34) Conclusão: O perfil de citocinas Th1 + Th17 e Treg (IL-1), juntamente com a diminuição da produção de IL-4 foram associados à presença de LES, bem como com o SLEDAI, ANA, anti-dsDNA e IMC Sugere-se que este perfil de citocinas pode ser um candidato para a identificação de novos alvos terapêuticos, assim como um possível biomarcador da atividade da doençapt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Introduction: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a complex autoimmune disease, in which occurs loss of self antigens tolerance, characterized by a systemic and chronic inflammatory process, an excessive production of inflammatory cytokines and high titers of autoantibodies Currently, there is great clinical interest in the identification of biomarkers that are closely associated with disease activity In this sense, a large number of cytokines can modulate the immune response in SLE patients Evidences suggest that in addition to cytokines produced by Th1 cells, such as interferon gamma (IFN-?), interleukin (IL)-12 and tumor necrosis factor (TNF-a), and cytokines produced by Th2 cells, such IL-4 and IL-6, also IL-17 and IL-1 cytokines, produced by Th17 cells and T regulatory (Treg), respectively, are involved in immune imbalance observed in the disease In addition, the TNF? NcoI (rs99253) genetic polymorphism, environmental factors, changes in serum vitamin D and cortisol levels are involved in the modulation of cytokines and contribute to an increased inflammatory status and may be associated with disease activity Objective: To delineate cytokine profiles associated with SLE for the construction of predictive models of presence and activity of SLE, as well as to examine whether TNF? NcoI polymorphism, body mass index (BMI), vitamin D and cortisol influence cytokine levels in SLE Subjects and Methods: In this study 2 SLE patients and 196 healthy controls were involved participated in this study SLE was diagnosed using the revised criteria of the American College of Rheumatology, 213, and the disease activity was determined using Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) criteria Plasma levels of the TNF-a, IFN-?, IL-1, IL-4, IL-6, IL-1, IL-12 and IL-17 cytokines were determined by the sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) Cytokine profiles were established as pro-inflammatory (IL-1+IL-6+TNF-a), Th1 (IL-12+IFN-?), Th2 (IL-4), Th17 (IL-6+IL-17) or Treg (IL-1) Serum levels of vitamin D were determined by the levels of 25-hydroxivitamin D [25(OH)D] using chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA), as well as the baseline serum levels of cortisol High sensitivity C-reactive proetina (hsCRP) was determined using CMIA Antinuclear antibodies (ANA) were quantified using indirect immunofluorescence and anti-dsDNA antibodies were quantified using (ELISA) The B1/B1, B1/B2 and B2/B2 genotypes of the TNFß NcoI polymorphism were determined usign polymerase chain reaction and restriction length fragment polymorphism Results: Patients differed from controls for sex, age and BMI Patients were more frequent among females [187 females (F) for 13 males (M) vs 151 (F) to 43 (M), p <1, with F: M ratio of 144: 1 and 35: 1, respectively] Patients were older (412 years ± 133 vs 365 ± 113, p <1), as well as showed higher BMI than controls (276 kg/ m2 ± 58 vs 25 , 1 ± 45, p <1) When compared to controls, patients had higher hsCRP and lower cortisol levels (p=1 and p <1, respectively) The levels of 25(OH)D did not differ between the groups (p=229), but were inversely associated with IFN-? levels (p=4) There was no significant association between cortisol and cytokine levels (p=84) There was no significant association between the TNFß Ncol polymorphism and the presence of SLE (p=226); however, the multivariate analysis demonstrated a significant association between cytokine levels and B1/B1 and B1/B2 genotypes (p=18 and p=14, respectively) Effects tests between groups showed that the B1/B2 genotype was associated with increased IL-4 (p=46) and TNF-a (p=8), whereas B1/B1 genotype was associated with increased IL- 17 (p=1) When the drugs used to treat SLE patients were introduced as an additional explanatory variable in the multivariate analysis, there was no significant alteration of the results (p> 5) The results of the multivariate analysis showed that all cytokine profiles were significantly higher in SLE than in the control group (p <1), except the proinflammatory profile (IL-1+IL-6+TNF-a), which showed a trend toward to be decreased in SLE patients (p=76) The highest significant difference was found for the Th1+Th17/Th2 profile, for SLE patients and controls There was a significant multivariate effect for TNF? Ncol polymorphism in cytokine profiles (p=3) After evaluating the effects of the multivariate for genotypes of eight cytokine profiles, there was a positive effect on the B1/B1 genotype only on the Th17 (IL-6+IL-17, p=7) and Th17/Th2 (IL6+IL17/IL4, p=2) profiles The Th1+Th17 profile (IL-12+IFN-?+IL-6+IL-17), as well as IL-1, both positively associated with SLE (p <1 and p=1, respectively) and IL-4 negatively associated (p<1) were predictors of SLE, and 94% of all individuals were correctly classified as haring the disease, with 667% of sensitivity and 969% of specificity The SLEDAI was predicted by the ratio between Th1+Th17/Th2, as well as IL-1 and BMI (all positively, p <5) and proinflammatory profile (negatively, p=34) Conclusion: The Th1 + Th17 and Treg (IL-1) cytokine profile, together with decreased IL-4 were associated with SLE presence, as well as with SLEDAI, ANA, anti-dsDNA and BMI It is suggested that such a cytokine profile may be a candidate for new therapeutic targets as well as a possible biomarker of disease activitypt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúdept_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15854
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiências da Saúdept_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências da Saúdept_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciências da Saúdept_BR
dc.subjectLúpus eritematoso sistêmicopt_BR
dc.subjectCitocinaspt_BR
dc.subjectPolimorfismo (Genética)pt_BR
dc.subjectLupus erythematosus, Systemicpt_BR
dc.subjectCytokinespt_BR
dc.subjectGenetic polymorphismspt_BR
dc.titlePerfil de citocinas Th1, Th17 e Treg em lúpus eritematoso sistêmico : associação com a presença e atividade da doençapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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