Perfil de citocinas Th1, Th17 e Treg em lúpus eritematoso sistêmico : associação com a presença e atividade da doença
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Resumo: Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune complexa na qual que ocorre a perda de tolerância a antígenos próprios, caracterizada por processo inflamatório sistêmico e crônico e pela produção excessiva de citocinas inflamatórias e altos títulos de autoanticorpos Atualmente, existe um grande interesse clínico na identificação de biomarcadores que estejam intimamente associados à atividade da doença Nesse sentido, assume destaque um grande número de citocinas que contribuem para a resposta imune no LES Evidências sugerem que, além de citocinas produzidas pelas células Th1, como interferon gama (IFN-?), interleucina (IL)-12 e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) e as citocinas produzidas pelas células Th2, como IL-4 e IL-6, também as citocinas IL-17 e IL-1, produzidas pelas células Th17 e T reguladoras (Treg), respectivamente, estão envolvidas no desequilíbrio imunológico Além disso, o polimorfismo genético NcoI do TNF? (rs99253), fatores ambientais e alterações dos níveis séricos da vitamina D e cortisol estão envolvidos na modulação das citocinas, contribuindo para aumentar o estado inflamatório e podendo estar associados à atividade da doençaObjetivo: Delinear os perfis de citocinas associados com LES para a construção de modelos de previsão da presença e atividade da doença, bem como avaliar se o polimorfismo NcoI do TNF?, o índice de massa corporal (IMC) e os níveis séricos de vitamina D e cortisol estão associados aos níveis de citocinas no LES Sujeitos e Métodos: Participaram deste estudo 2 pacientes com LES e 196 controles saudáveis O LES foi diagnosticado utilizando os critérios revisados do American College of Rheumatology, 213, e a atividade da doença foi determinada utilizando pontuação Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) Os níveis plasmáticos das citocinas TNF-a, IFN-?, IL-1, IL-4, IL-6, IL-1, IL-12 e IL-17 foram determinados pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) de sanduíche Os perfis de citocinas foram estabelecidos como pró-inflamatório (IL-1+IL-6+TNF-a), Th1 (IL-12+IFN-?), Th2 (IL-4), Th17 (IL-6+IL-17) ou Treg (IL-1) Os níveis séricos de vitamina D foram determinados pelos níveis de 25-hidroxivitamina D[25(OH)D] utilizando imunoensaio quimioluminescente de micropartículas (CMIA), assim como os níveis séricos basais de cortisol Os niveis séricos de proteína C reativa ultrasensível (usPCR) foram determinados pelo método de CMIA Os títulos de autoanticorpos contra antígenos nucleares (ANA) foram avalidos por imunofluorescência indireta e anticorpos contra DNA de dupla cadeia (anti-dsDNA) por ELISA Os genótipos B1/B1, B1/B2 e B2/B2 do polimorfismo NcoI do TNFß foram determinados pela reação em cadeia da polimerase, seguida pela anãlise do polimorfismo do comprimento dos fragmentos de restrição Resultados: Os pacientes diferiram dos controles quanto ao sexo, idade e IMC, sendo mais frequentes no sexo feminino [187 mulheres (F) para 13 homens (M) vs 151 (F) para 43 (M), p<,1, com razão F:M de 14,4:1 e 3,5:1, respectivamente] Os pacientes foram mais idosos que os controles (41,2 anos ± 13,3 vs 36,5 ± 11,3, p<,1), assim como apresentaram maior IMC (27,6 kg/m2 ± 5,8 vs 25,1 ± 4,5, p<,1) Quando comparados aos controles, os pacientes apresentaram níveis mais elevados de usPCR e menores de cortisol (p=,1 e p<,1, respectivamente) Os níveis de 25(OH)D não diferiram entre os grupos (p=,229), mas foram inversamente associados aos níveis de IFN-? (p=,4) Não foi encontrada associação significativa entre os níveis de cortisol e os de citocinas (p=,84) Não houve associação significativa entre o polimorfismo Ncol do TNFß e a presença de LES (p=,226); no entanto, a análise multivariada demonstrou associações significativas entre os níveis de citocinas e ambos os genótipos B1/B1 (p=,18) e B1/B2 (p=,14) Os testes de efeitos entre os grupos demonstraram que o genótipo B1/B2 foi associado ao aumento de IL-4 (p=,46) e TNF-a (p=,8), enquanto o genótipo B1/B1 foi associado ao aumento de IL-17 (p=,1) Quando os medicamentos utilizados no tatamento dos pacientes com LES foram introduzidos como variável explicativa adicional na análise multivariada, não se observou alteração significativa dos resultados (p>,5) O resultado da análise multivariada mostrou que todos os perfis de citocinas foram significativamente mais elevados no grupo com LES do que no grupo controle (p<,1), exceto o perfil pró-inflamatório (IL-1+IL-6+TNF-a) que mostrou uma tendência a ser diminuído nos pacientes com LES (p=,76) A maior diferença significativa foi encontrada para o perfil Th1+Th17/Th2 no grupo de pacientes e controles Verificou-se um efeito significativo na multivariada para o polimorfismo Ncol do TNF-? nos perfis de citocinas (p=,3) Após avaliar os efeitos da multivariada para os genótipos sobre os oito perfis de citocinas, verificou-se um efeito positivo para o genótipo B1/B1 somente sobre os perfis Th17 (IL-6+IL-17, p=,7) e para o perfil Th17/Th2 (IL6+IL17/IL4, p=,2) Os perfis Th1+Th17 (IL-12+IFN-? + IL-6+IL-17), assim como a Treg (IL-1), ambos associados positivamente com LES (p<,1 e p=,1, respectivamente) e Th2 (IL-4), associada negativamente (p=<,1) foram preditores de LES, ou seja, 9,4% de todos os indivíduos foram corretamente classificados com a presença da doença, com sensibilidade de 66,7% e especificidade de 96,9% O SLEDAI foi predito pela razão Th1+Th17/Th2, Treg, IMC (todos positivamente, p<,5) e perfil pró-inflamatório (negativamente, p=,34) Conclusão: O perfil de citocinas Th1 + Th17 e Treg (IL-1), juntamente com a diminuição da produção de IL-4 foram associados à presença de LES, bem como com o SLEDAI, ANA, anti-dsDNA e IMC Sugere-se que este perfil de citocinas pode ser um candidato para a identificação de novos alvos terapêuticos, assim como um possível biomarcador da atividade da doença
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Palavras-chave
Lúpus eritematoso sistêmico, Citocinas, Polimorfismo (Genética), Lupus erythematosus, Systemic, Cytokines, Genetic polymorphisms