Efeito de terapias isoladas e combinadas com benzoiltiouréias, benznidazol e aspirina sobre o plexo mioentérico do esôfago de camundongos infectados cronicamente por Trypanosoma cruzi

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dc.contributor.advisorAraújo, Eduardo José de Almeida
dc.contributor.authorSilva, Emanuel Perez Floro da
dc.contributor.bancaUchôa, Ernane Torres
dc.contributor.bancaPavanelli, Wander Rogério
dc.coverage.extent103 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2026-08-04T20:41:26Z
dc.date.available2026-08-04T20:41:26Z
dc.date.issued2024-10-31
dc.description.abstractA doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é atualmente uma das doenças de maior impacto global. O curso clínico bifásico da DC (fase aguda e fase crônica) pode levar ao desenvolvimento da forma indeterminada, cardiodigestiva, cardíaca e digestiva. Esta última se caracteriza por dismotilidade do tubo digestivo devido à denervação do plexo mioentérico. O tratamento convencional utilizado é com Benzonidazol (BZ), o qual possui limitações e pode causar muitos efeitos adversos na fase crônica da doença, o que compromete a adesão ao tratamento. Assim, o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento da DC se faz necessário. Recentemente, demonstrou-se em testes in vitro o efeito tripanocida de benzoiltioureias (BTU) sobre o T. cruzi. Outro fármaco que tem demonstrado ser promissor para tratar DC é o ácido acetilsalicílico (ASA), o qual em doses controladas reduz a produção de citocinas pró-inflamatórias, atenuando a denervação mioentérica observada na DC. Assim, este estudo objetivou avaliar o efeito do tratamento isolado e combinado de BZ, BTU e ASA sobre o plexo mioentérico de camundongos BALB/c infectados cronicamente com T. cruzi. Para tanto, dois grupos de animais machos, de 8 a 12 semanas de idade, foram formados: um que foi infectado com 5 × 10² formas tripomastigotas de T. cruzi (cepa Y) e o outro que permaneceu não infectado. Imediatamente após a infecção, os animais de cada grupo inicial foram separados em 16 grupos (n=5/grupo), sendo que um não recebeu nenhum tratamento (controle) e os demais foram tratados, via gavagem, com 25 mg/Kg de BZ, 25 mg/Kg de ASA, e/ou 12,5 de mg/Kg BTU de forma isolada ou combinada. Cada camundongo recebeu 0,1 mL de cada droga diluída em água potável. O grupo controle recebeu água potável autoclavada. Os tratamentos foram realizados durante as quatro primeiras semanas (fase aguda) após a infecção, e depois de 90 dias (fase crônica), foi feita a eutanásia, quando foram coletados os esôfagos, em sequência foram fixados em paraformoldeído (PFA) e divididos para a realização das análises histopatológicas de cortes transversais do esôfago corados em Hematoxilina e Eosina (H.E.) e imunofluorescência para visualização de neurônios que compõem o plexo mioentérico do esôfago. Ao total, 1600 fotos dos cortes em H.E., e 8000 dos preparados totais da camada muscular submetidos à técnica de imunofluorescência foram analisadas manualmente no software ImageJ e a análise estatística foi realizada utilizando o software R. As análises dos diferentes parâmetros avaliados, utilizando ferramentas do ImageJ, evidenciou que a infecção causou hipertrofia das camadas musculares, com aumento da espessura deste estrato e número de núcleos de células musculares por área, assim como causou denervação do plexo mioentérico, com hipertrofia das subpopulações neuronais (nitrérgicas e estimadamente colinérgicas). Os tratamentos em animais não infectados também demonstraram capacidade para alterar características das camadas musculares, como por exemplo os tratamentos que combinavam os fármacos que causaram hipertrofia da camada muscular longitudinal e, além disso, o tratamento com ASA, que chamou atenção por sua capacidade de aumentar o número de núcleos de células musculares do esôfago e hipertrofiar neurônios nitrérgicos. Em animais infectados, os tratamentos utilizando BZ isoladamente ou combinado com BTU demonstraram maior eficiência no controle das alterações das camadas musculares causadas pela infecção. E somando-se a isso, a terapia isolada BZ inibiu a hipertrofia dos neurônios nitrérgicos, o que não foi observado quando BTU foi combinada ao BZ. Conclui-se que, dentre os tratamentos avaliados, nenhum apresentou efeito completo de proteção a todas as alterações estruturais ocasionadas pela infecção crônica por T.cruzi no esôfago de camundongos, contudo os tratamentos isolados utilizando BZ ou utilizando ASA reduziram significativamente a hipertrofia neuronal colinérgica. A associação de BTU ao BZ demonstrou ser o tratamento mais eficiente para minimizar as alterações causadas pela infecção, preservando mais neurônios e reduzindo a hipertrofia muscular de ambas as camadas musculares do esôfago. Dessa maneira, há evidências que indicam que o estudo da associação de BTUs ao tratamento medicamentoso padrão da DC pode se tornar um protocolo com efeito desejado mais efetivo e com menores efeitos adversos
dc.description.abstractother1Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is currently one of the diseases with the greatest global impact. The biphasic clinical course of CD (acute and chronic phases) can lead to the development of indeterminate, cardiodigestive, cardiac, and digestive forms. The latter is characterized by dysmotility of the digestive tract due to denervation of the myenteric plexus. The conventional treatment used is Benznidazole (BZ), which has limitations and can cause many adverse effects in the chronic phase of the disease, compromising treatment adherence. Therefore, the development of new therapies for the treatment of CD is necessary. Recently, in vitro tests have demonstrated the trypanocidal effect of benzoylthioureas (BTU) on T. cruzi. Another drug that has shown promise for treating CD is acetylsalicylic acid (ASA), which, in controlled doses, reduces the production of pro-inflammatory cytokines, attenuating the myenteric denervation observed in CD. Thus, this study aimed to evaluate the effect of isolated and combined treatments of BZ, BTU, and ASA on the myenteric plexus of BALB/c mice chronically infected with T. cruzi. Two groups of male animals, aged 8 to 12 weeks, were formed: one group was infected with 5 × 10² trypomastigote forms of T. cruzi (strain Y), while the other remained uninfected. Immediately after infection, the animals from each initial group were divided into 16 groups (n=5/group), with one group receiving no treatment (control) and the others treated via gavage with 25 mg/Kg of BZ, 25 mg/Kg of ASA, and/or 12.5 mg/Kg of BTU either individually or in combination. Each mouse received 0.1 mL of each drug diluted in potable water. The control group received autoclaved potable water. Treatments were conducted during the first four weeks (acute phase) after infection, and after 90 days (chronic phase), euthanasia was performed, during which the esophagi were collected, fixed in paraformaldehyde (PFA), and divided for histopathological analyses of cross-sections of the esophagus stained with Hematoxylin and Eosin (H.E.) and immunofluorescence to visualize the neurons comprising the myenteric plexus of the esophagus. In total, 1,600 images of the H.E. sections and 8,000 images of the total preparations of the muscular layer subjected to immunofluorescence were manually analyzed using ImageJ software, and statistical analysis was performed using R software. Analyses of the different evaluated parameters, using ImageJ tools, showed that infection caused hypertrophy of the muscle layers, with an increase in the thickness of this stratum and the number of muscle cell nuclei per area, as well as denervation of the myenteric plexus, with hypertrophy of neuronal subpopulations (nitrergic and estimated cholinergic). Treatments in uninfected animals also demonstrated the ability to alter characteristics of the muscle layers, such as treatments that combined drugs causing hypertrophy of the longitudinal muscle layer, and additionally, ASA treatment, which stood out for its ability to increase the number of muscle cell nuclei in the esophagus and hypertrophy nitrergic neurons. In infected animals, treatments using BZ alone or in combination with BTU showed greater efficiency in controlling the changes in muscle layers caused by the infection. Furthermore, the isolated BZ therapy inhibited the hypertrophy of nitrergic neurons, which was not observed when BTU was combined with BZ. It is concluded that, among the evaluated treatments, none presented complete protective effects against all structural alterations caused by chronic T. cruzi infection in the esophagus of mice; however, isolated treatments using BZ or ASA significantly reduced cholinergic neuronal hypertrophy. The combination of BTU with BZ proved to be the most effective treatment for minimizing the alterations caused by the infection, preserving more neurons and reducing muscular hypertrophy in both muscle layers of the esophagus. Thus, there is evidence suggesting that studying the combination of BTUs with the standard drug treatment for CD may lead to a more effective protocol with fewer adverse effects
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/19394
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Ciências Patológicas
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectNeurodegeneração entérica
dc.subjectTripanossomíase americana
dc.subjectSistema Nervoso Entérico
dc.subjectAgentes anti-T.cruzi
dc.subjectÁcido Acetilsalicílico
dc.subjectDoença de Chagas - Benzoiltioureias
dc.subjectDoença de Chagas (Trypanosoma cruzi) - tratamento isolado - aspirina - eficácia
dc.subjectAgentes tripanocidas - neurodegeneração entérica
dc.subjectAgentes tripanocidas - sistema nervoso entérico
dc.subject.capesCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.cnpqCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.keywordsEnteric neurodegeneration
dc.subject.keywordsAmerica trypanosomiasis
dc.subject.keywordsEnteric Nervous System
dc.subject.keywordsAnti-T.cruzi agents
dc.subject.keywordsAcetylsalicylic acid
dc.subject.keywordsChagas Disease - Benzoylthioureas
dc.subject.keywordsChagas disease (Trypanosoma cruzi) - isolated treatment - aspirin - effectiveness
dc.subject.keywordsTrypanocidal agents - enteric neurodegeneration
dc.subject.keywordsTrypanocidal agents - enteric nervous system
dc.titleEfeito de terapias isoladas e combinadas com benzoiltiouréias, benznidazol e aspirina sobre o plexo mioentérico do esôfago de camundongos infectados cronicamente por Trypanosoma cruzi
dc.title.alternativeEffect of isolated and combined therapies with benzoylthioureas, benznidazole and aspirin on the myenteric plexus of mice chronically infected with Trypanosoma cruzi
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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