Diagnóstico molecular e sorológico de Chlamydophila spp em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectados

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dataload.collectionmapped01 - Doutorado - Ciência Animalpt_BR
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dc.contributor.advisorFreitas, Julio Cesar de [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorZacarias, Francielle Gibson da Silvapt_BR
dc.contributor.bancaVasconcellos, Sílvio Arrudapt_BR
dc.contributor.bancaFerreira Neto, José Soarespt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T12:40:11Z
dc.date.available2024-05-01T12:40:11Z
dc.date.created2007.00pt_BR
dc.date.defesa31.07.2007pt_BR
dc.description.abstractResumo: Chlamydophila abortus (anteriormente classificada como Chlamydia psittaci sorotipo 1) tem sido descrita em muitos países, associada principalmente com distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos A detecção de C abortus é usualmente realizada por métodos sorológicos (fixação de complemento, ELISA) e de cultivo em células de linhagens ou ovo embrionado de galinha O diagnóstico pela amplificação do DNA pela PCR tem sido proposto por apresentar alta sensibilidade e especificidade Este trabalho teve por objetivo detectar Chlamydophila spp por técnicas molecular e sorológica em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectados Um sistema de PCR foi desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S do RNAr da família Chlamydiaceae, em órgãos de camundongos (n=15) experimentalmente infectados com a estirpe de referência S26/3 da C abortus Os resultados encontrados foram comparados a outro sistema de PCR previamente descrito para o gene Omp2 (outer major protein) Dos 15 camundongos inoculados com C abortus, 13 foram positivos na RNAr PCR e nove na Omp2 PCR O limite de detecção de C abortus pela RNAr PCR (1,5 unidades formadoras de inclusão -UFI) foi cem vezes superior à Omp2 PCR (15 UFI) A RNAr PCR também foi utilizada para a detecção da C abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal de ovelhas (n=9) e de cabras (n=2) e em sêmen de ovinos (n=1) e caprinos (n=5), coletados no período de 22 a 27 Um controle interno (PCR com os primers BOV1 e BOV2 para o gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino) foi utilizado nas amostras de aborto bovino para a avaliação da eficiência das técnicas de extração e de amplificação do DNA Todas as amostras de aborto, muco vaginal e sêmen foram negativas para C abortus na RNAr PCR O controle interno amplificou um produto de 626 pb para o gene ND5 em todas as amostras de aborto bovino Para o diagnóstico sorológico, 312 amostras de soro de fêmeas bovinas (idade > 24 meses) provenientes de 373 propriedades, com histórico de abortamento, foram testadas pela prova de fixação de complemento As propriedades rurais com abortamento foram selecionadas dentro do delineamento amostral do Plano Nacional para o Controle e Erradicação da Brucelose no estado do Paraná Ao total, 44 (1,42%) animais foram positivos com títulos >32 A soroprevalência estimada para Chlamydophila spp nas propriedades foi de 8,82% (6,15%-12,17%) A criação de animais confinados ou semiconfinados foi considerada uma associação de risco (OR= 2,21; p= ,31) Apesar da falta de evidência de C abortus nas amostras de aborto, muco vaginal e sêmen, avaliadas pela PCR neste trabalho, os resultados sorológicos positivos das fêmeas bovinas de propriedades com histórico de abortamento no estado do Paraná sugerem a presença da bactéria Assim, novos estudos sobre a ocorrência de Chlamydophila spp em rebanhos bovinos, ovinos e caprinos do país devem ser realizadospt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Chlamydophila abortus (previously Chlamydophila psittaci serotype 1) is reported in many countries, related with reproductive disorders mainly in ovine, bovine and goat Usually, C abortus detection is carry out by serologic methods (complement fixation test, ELISA) and in cell cultures or embryonated chicken eggs DNA amplification diagnosis by PCR showed high sensibility and specificity The aim of this study was to detect Chlamydophila spp by molecular and serologic methods in samples of experimentally and naturally infected animals A PCR was developed to amplified the 16S-23S rRNA intergenic space of Chlamydiaceae in organs of mice experimentally infected with S26/3 strain of C abortus (n=15) The results were compared with other PCR, previously described, and based in the Omp2 gene (outer major protein) of Chlamydiaceae family Of the 15 mice inoculated with C abortus, 13 had been positive in rRNA PCR and 9 in Omp2 PCR The detection limit of C abortus in rRNA PCR (1,5 UFI) was a hundred times superior to Omp2 PCR (15 UFI) This rRNA PCR was also used to detect C abortus in a collection of bovine abortions (n=85), sheep (n=12) and goat (n=8), in samples of ewe (n=9) and goat vaginal discharge (n=2) and ram (n=1) and goat semen (n=5), collected between 22 a 27 An internal control (PCR with BOV1 and BOV2 primers for gene ND5 of bovine mitochondrial DNA) was used in bovine abortion samples for evaluation of efficiency of DNA extration and PCR All abortion, vaginal discharge and semen samples were negative in PCR for C abortus The internal control amplified a product of 626 pb for ND5 gene in all bovine abortion samples To serologic diagnosis, 312 serum samples of cows (age > 24 months), from 373 herds with abortion were analyzed by complement fixation test These herds were selected inside the sampling design of National Program of Control and Erradication of Brucellosis in Paraná state Forty four (142%) animal were positive with titers > 32 The seroprevalence of Chlamydophila spp in the herds was 882% (615%-1217%) Confined or semi-confined breeding was a risk association (OR = 221, p = 31) Although the lack of evidence of C abortus in abortion, vaginal discharge e semen by PCR in this study, positive serologic results in cows from herds with abortions in Paraná state, Brazil suggest the occurrence of the bacterium infection Thus, more studies should be done about the occurrence of Chlamydophila spp in bovine, ovine and caprine in Brazilpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10195
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectAnimais domésticospt_BR
dc.subjectDoençaspt_BR
dc.subjectChlamydophila spppt_BR
dc.subjectAborto nos animaispt_BR
dc.subjectDiseasespt_BR
dc.subjectAbortion in animalspt_BR
dc.subjectDomestic animalspt_BR
dc.titleDiagnóstico molecular e sorológico de Chlamydophila spp em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectadospt_BR
dc.typeTesept_BR

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