Diagnóstico molecular e sorológico de Chlamydophila spp em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectados
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Resumo: Chlamydophila abortus (anteriormente classificada como Chlamydia psittaci sorotipo 1) tem sido descrita em muitos países, associada principalmente com distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos A detecção de C abortus é usualmente realizada por métodos sorológicos (fixação de complemento, ELISA) e de cultivo em células de linhagens ou ovo embrionado de galinha O diagnóstico pela amplificação do DNA pela PCR tem sido proposto por apresentar alta sensibilidade e especificidade Este trabalho teve por objetivo detectar Chlamydophila spp por técnicas molecular e sorológica em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectados Um sistema de PCR foi desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S do RNAr da família Chlamydiaceae, em órgãos de camundongos (n=15) experimentalmente infectados com a estirpe de referência S26/3 da C abortus Os resultados encontrados foram comparados a outro sistema de PCR previamente descrito para o gene Omp2 (outer major protein) Dos 15 camundongos inoculados com C abortus, 13 foram positivos na RNAr PCR e nove na Omp2 PCR O limite de detecção de C abortus pela RNAr PCR (1,5 unidades formadoras de inclusão -UFI) foi cem vezes superior à Omp2 PCR (15 UFI) A RNAr PCR também foi utilizada para a detecção da C abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal de ovelhas (n=9) e de cabras (n=2) e em sêmen de ovinos (n=1) e caprinos (n=5), coletados no período de 22 a 27 Um controle interno (PCR com os primers BOV1 e BOV2 para o gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino) foi utilizado nas amostras de aborto bovino para a avaliação da eficiência das técnicas de extração e de amplificação do DNA Todas as amostras de aborto, muco vaginal e sêmen foram negativas para C abortus na RNAr PCR O controle interno amplificou um produto de 626 pb para o gene ND5 em todas as amostras de aborto bovino Para o diagnóstico sorológico, 312 amostras de soro de fêmeas bovinas (idade > 24 meses) provenientes de 373 propriedades, com histórico de abortamento, foram testadas pela prova de fixação de complemento As propriedades rurais com abortamento foram selecionadas dentro do delineamento amostral do Plano Nacional para o Controle e Erradicação da Brucelose no estado do Paraná Ao total, 44 (1,42%) animais foram positivos com títulos >32 A soroprevalência estimada para Chlamydophila spp nas propriedades foi de 8,82% (6,15%-12,17%) A criação de animais confinados ou semiconfinados foi considerada uma associação de risco (OR= 2,21; p= ,31) Apesar da falta de evidência de C abortus nas amostras de aborto, muco vaginal e sêmen, avaliadas pela PCR neste trabalho, os resultados sorológicos positivos das fêmeas bovinas de propriedades com histórico de abortamento no estado do Paraná sugerem a presença da bactéria Assim, novos estudos sobre a ocorrência de Chlamydophila spp em rebanhos bovinos, ovinos e caprinos do país devem ser realizados
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Palavras-chave
Animais domésticos, Doenças, Chlamydophila spp, Aborto nos animais, Diseases, Abortion in animals, Domestic animals