Avaliação toxicogenética do extrato aquoso de Rhizophora mangle utilizando células de mamíferos em ensaios in vitro e in vivo

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Genética e Biologia Molecularpt_BR
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dc.contributor.advisorCólus, Ilce Mara de Syllos [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorLima, Maressa Cristiane Malini dept_BR
dc.contributor.bancaLosi-Guembarovski, Robertapt_BR
dc.contributor.bancaTavares, Denise Crispimpt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:03:05Z
dc.date.available2024-05-01T14:03:05Z
dc.date.created2011.00pt_BR
dc.date.defesa22.02.2011pt_BR
dc.description.abstractResumo: Rhizophora mangle L (Rhizophoraceae) é uma espécie nativa de manguezal e apresenta grande quantidade de polifenóis em sua casca É utilizada na medicina popular como anti-séptico, antifúngico e cicatrizante e no município de Vitória/ ES/ Brasil é utilizada como matéria-prima para a confecção das tradicionais panelas de barro O presente trabalho teve como objetivos avaliar as atividades citotóxica, pró-apoptótica, mutagênica e antimutagênica do extrato aquoso da casca de R mangle L, bem como verificar a expressão de genes do estresse oxidativo (SOD1, GPX1), do biometabolismo de drogas (GSTP1) e de apoptose (CASP9) em células de hepatoma de Rattus norvegicus (HTC) cultivadas in vitro O ensaio do MTT foi realizado com 2x14 células expostas a diferentes concentrações do extrato (4,37 a 112 µg/mL) por 24 horas O índice de apoptose em células HTC tratadas com três concentrações de extrato (17,5; 28,; 35, µg/mL) foi obtido utilizando-se o método de coloração diferenciada com laranja de acridina e brometo de etídeo As mesmas concentrações do extrato foram avaliadas quanto às suas possíveis mutagenicidade e antimutagenicidade in vitro pelo ensaio do micronúcleo, sendo empregados, para a avaliação da atividade protetora, os protocolos de pré-tratamento, pós-tratamento, tratamento simultâneo e tratamento simultâneo com incubação Para verificar a expressão gênica foi realizada a metodologia de RT-PCR em tempo real, utilizando-se 35, µg/mL de extrato para o tratamento das células HTC Também foi realizado ensaio de DL5 sob dose única intraperitonial e mutagenicidade in vivo, com sangue periférico de camundongos submetidos a tratamento agudo e sub-agudo com três concentrações do extrato de R mangle: 7 , 14 e 28 mg/Kg pc Os resultados obtidos mostraram que células HTC tratadas com extrato da casca de R mangle não apresentaram nenhuma alteração quanto à viabilidade celular A análise do índice apoptótico mostrou potencial pró-apoptótico do extrato a 35, µg/mL A DL5 in vivo foi de 56 mg/kg pc As três concentrações avaliadas não apresentaram mutagenicidade in vitro e in vivo e foi observado efeito protetor do extrato (35, µg/mL) em relação aos danos causados pela DXR (,75µg/mL) nos quatro protocolos de tratamentos usados As porcentagens de redução de danos calculadas permitem afirmar que o extrato exerceu forte proteção quando foram utilizados os protocolos de pré-tratamento e tratamento-simultâneo, indicando uma atividade desmutagênica A obtenção de porcentagens de redução de danos no DNA igual ou menor que 6% em tratamento simultâneo com pré-incubação leva à hipótese de que a atividade desmutagênica observada não ocorreu por interação extrato-DXR Portanto, o extrato provavelmente atuou impedindo que a DXR atingisse a molécula de DNA Dados da análise transcricional dos genes SOD1, GSTP1 e CASP9 mostraram aumento de expressão em células tratadas com extrato quando comparadas com o controle Portanto, o efeito protetor encontrado em células HTC provavelmente deve ser devido ao aumento das defesas antioxidantes que este extrato exerce sobre as células A indução de apoptose pelo extrato na concentração de 35, µg/mL também foi confirmada pela análise transcricional do gene CASP9, o que infere a atuação deste extrato por ativação de caspasespt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Rhizophora mangle L (Rhizophoraceae) is a native species of marsh and has a large amount of polyphenols in its bark It is used in folk medicine as an antiseptic, antifungal and healing In Vitória / ES / Brazil is used as raw material for the confection of traditional clay pots This study aimed to evaluate the cytotoxic, pro-apoptotic, mutagenic and antimutagenic effects of the aqueous extract of the bark of R mangle L, and the expression of genes involved in oxidative stress (SOD1, GPX1), biometabolism drugs (GSTP1) and apoptosis (CASP9) in hepatoma cells of Rattus norvegicus (HTC) in vitro The MTT assay was performed with 2x14 cells exposed to different concentrations of the extract (437 to 112 mg/mL) for 24 hours The rate of apoptosis in HTC cells treated with three concentrations of extract (175, 28, 35 mg/mL) was obtained using the method of differential staining with acridine orange and ethidium bromide The same concentrations of the extract were evaluated for their mutagenic and antimutagenic potentials in vitro by micronucleus assay For the evaluation of protective activity, the protocols of pre-treatment, post-treatment, simultaneous treatment and simultaneous treatment with incubation were employed Gene expression was verified performing the RT-PCR method, using 35 mg/mL of the extract for the treatment of HTC cells The evaluation of mutagenicity in vivo was also performed in peripheral blood cells of mice submitted to acute and subacute treatments with three concentrations of R mangle extract: 7, 14 and 28 mg/kg bw The results showed that HTC cells treated with the extract from the bark of R mangle showed no change on the cell viability Analysis of apoptotic cells showed pro-apoptotic potential of the extract in the concentration of 35 mg/mL The in vivo LD5 was 56 mg/kg bw The concentrations tested showed no mutagenicity in vitro and in vivo and it was observed protective effect of the extrac at 35 mg/mL in relation to the damages caused by DXR (75 mg/mL) in the four treatment protocols used The percentages of damages reduction indicate that the extract had a strong protective effect when the pre-treatment and treatment-simultaneously protocols were used, indicating an desmutagenic activity The percentages of damage reduction equal to or less than 6% by simultaneous treatment with pre-incubation led to the hypothesis that the activity observed was not caused by desmutagenic mechanism Therefore, the extract probably acted by preventing DXR to reach the DNA Data from transcriptional analysis of the genes SOD1, GSTP1 and CASP9 showed an increased expression in cells treated with the extract when compared with control Therefore, the protective effect found in HTC cells, is probably due to increase of antioxidant defenses that this extract exerts on the cells Induction of apoptosis by the extract at 35 g/mL was also confirmed by transcriptional analysis of CASP9, which implies the action of this extract by activation of caspasespt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/12844
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameGenética e Biologia Molecularpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.subjectPlantaspt_BR
dc.subjectToxicidade genéticapt_BR
dc.subjectCitogenética vegetalpt_BR
dc.subjectTestes de mutagenicidadept_BR
dc.subjectRizoforaceapt_BR
dc.subjectToxicity geneticpt_BR
dc.subjectPlant cytogeneticspt_BR
dc.subjectPlantpt_BR
dc.titleAvaliação toxicogenética do extrato aquoso de Rhizophora mangle utilizando células de mamíferos em ensaios in vitro e in vivopt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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