Desenvolvimento de método imunológico para detecção de Fusarium verticillioides em ração de aves

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Omori, Aline Myuki

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Resumo

Resumo: O fungo Fusarium verticillioides é um patógeno primário de milho capaz de produzir diversas micotoxinas causando prejuízos econômicos e problemas à saúde humana e animal Assim, é necessário o desenvolvimento de métodos para detectar esse fungo e fazer o controle de qualidade dos produtos à base de milho Os métodos tradicionais de identificação e detecção geralmente consomem muito tempo e apresentam baixa especificidade e reprodutibilidade A detecção de exoantígeno por meio de métodos imunológicos é uma alternativa rápida e sensível O objetivo deste trabalho, portanto, foi desenvolver um método imunológico para detectar F verticillioides em amostras de ração de aves Inicialmente, anticorpos policlonais IgY contra exoantígeno de F verticillioides 97K foram produzidos em galinhas e caracterizados por ELISA (“Enzyme-linked immunosorbent assay”) e “Western blot” O anticorpo IgY reagiu com o exoantígeno de F verticillioides 97K, porém apresentou reatividade cruzada com exoantígeno de outras espécies fúngicas A análise da reatividade do anticorpo com exoantígeno de diferentes isolados de F verticillioides por “Western Blot” mostrou que duas proteínas, de massas moleculares de 67 kDa e 113 kDa, foram reconhecidas em todos os exoantígenos dos diferentes isolados e portanto, apresentam potencial para serem antígenos espécie-específicos Assim, visando anticorpos mais específicos, anticorpos policlonais de coelho contra a proteína de 67 kDa do exoantígeno de F verticillioides 97K foram produzidos e caracterizados Este anticorpo apresentou menor reatividade cruzada com exoantígeno de outras espécies fúngicas e foi utilizado na detecção de exoantígeno de F verticillioides em amostras de ração por meio de ELISA competitivo indireto com limite de detecção de ,29 µg/mL A concentração de exoantígeno determinada por este método imunoenzimático apresentou forte correlação positiva com a concentração de fumonisina determinada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência na ração com coeficiente de correlação de Pearson de ,76, sugerindo que o ELISA competitivo indireto desenvolvido neste estudo tem potencial para ser utilizado na imunodetecção de F verticillioides em amostras de ração de aves

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Palavras-chave

Fungos toxigênicos, Fusario, Anticorpos policlonais, Técnicas imunoenzimáticas, Rações, Toxigenic fungi, Fusarium, Ave, Feeds

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