Polimorfismo genético do FOXP3 -3279 C/A (rs3761548) e sua associação com níveis plasmáticos de citocinas, atividade e prognóstico da artrite reumatoide

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dc.contributor.advisorSimão, Andréa Name Colado [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorSella, Ana Luísa Berti Guimarãespt_BR
dc.contributor.bancaReiche, Edna Maria Vissocipt_BR
dc.contributor.bancaOliveira, Sayonara Rangel dept_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T12:41:37Z
dc.date.available2024-05-01T12:41:37Z
dc.date.created2019.00pt_BR
dc.date.defesa05.05.2019pt_BR
dc.description.abstractResumo: Introdução Artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória crônica multissistêmica, associada à hipertrofia, hiperplasia e angiogênese do tecido sinovial que pode levar a destruição articular Tem sido demonstrado que fatores genéticos, imunológicos e ambientais estão envolvidos em sua etiopatogênese Sabe-se do envolvimento das células T reguladoras (Treg) no mecanismo de tolerância imunológica e desencadeamento da resposta inflamatória na AR Tais células expressam, em sua superfície, o fator de transcrição forkhead box proteína 3 (Foxp3) Esta proteína é codificada pelo gene FOXP3 e atua como ativador transcricional para outros genes O polimorfismo do FOXP3 -3279 C/A pode alterar a expressão desta proteína, sendo associada à susceptibilidade a diversas doenças autoimunes, como lúpus eritematoso sistêmico, doença de Graves, doença de Crohn, psoríase e AR Objetivo Avaliar a associação entre a variante genética do FOXP3 -3279 C>A (rs3761548) e a susceptibilidade à AR, prognóstico e atividade de doença, bem como níveis plasmáticos de citocinas Sujeitos e Métodos Foram recrutados 251 pacientes com AR diagnosticada de acordo com os critérios do Colégio Americano de Reumatologia e 183 indivíduos saudáveis O DNA genômico foi extraído de leucócitos para a análise do polimorfismo do FOXP3 -3279 C/A (rs3761548) e amplificado pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) Após amplificação de uma sequencia de 155 pares de bases do gene FOXP3, a mesma foi submetida à digestão com a enzima de restrição PstIOs produtos da digestão foram analisados pela metodologia de Polimorfismos no Comprimento dos Fragmentos de Restrição (RFLP,) utilizando gel de poliacrilamida (1%) e corados com nitrato de prata O alelo C foi definido com fragmentos de 8 e 75 pb, enquanto que o alelo A não sofre clivagem permanecendo com 155pb Os níveis séricos de anticorpo anti-peptídeo citulinado cíclico (anti-CCP) foram determinados por quimioluminescência em micropartículas, e os níveis de fator reumatoide e proteína C reativa foram determinados por imunoturbidimetria Os níveis plasmáticos das citocinas IL-1, IL-17A, fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) e do fator transformador do crescimento beta (TGF-ß) foram avaliados por imunofluorimetria utilizando a plataforma Luminex® Atividade de doença foi avaliada pelo escore DAS 28-VHS (Disease Activity Score) que avalia 28 articulações e utiliza a velocidade de hemosedimentação (VHS) como proteína de fase de aguda Foi considerada doença em atividade quando DAS 28-VHS >2,6 Resultados Pacientes com AR apresentaram aumento dos níveis de TNF-a (p=,21) e IL-1 (p< ,1) e diminuição dos níveis de TGF-ß, quando comparados ao grupo controle O genótipo CC (no modelo dominante) foi associado à diminuição de TGF-ß em pacientes portadores de AR (p=,27), mas não nos controles, independente do sexo e etnia Além disso, pacientes portadores do alelo C, em homozigose ou heterozigose, demonstraram maior frequência de pacientes com doença em atividade (p=,42) quando comparado ao grupo em homozigose para o alelo A Conclusão Este trabalho demonstrou que o polimorfismo -3279 C/A (rs3761548) não foi significativamente associado com susceptibilidade à AR na população do sul do Brasil Entretanto, pacientes com AR e com a presença do alelo C, em homozigose ou heterozigose, apresentaram níveis plasmáticos reduzidos de TGF-ß e maior frequência de pacientes com doença em atividade, sugerindo um possível papel deletério do alelo C na fisiopatologia da doençapt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Introduction: Rheumatoid Arthritis (RA) is a chronic, multi-systemic, inflammatory disease, related to hypertrophy, hyperplasia and angiogenesis of the synovial tissue that lead to joint destruction It has been shown that genetic, immunologic and environmental factors are related to its pathogenesis The enrollment of the T regulatory (Treg) cells in the immunologic tolerance mechanism and triggering of inflammatory response in RA is known Such cells manifest the transcription factor forkhead box p3 (Foxp3) in its surface This protein encoded by the FOXP3 gene acts as a transcriptional activator to other genes The FOXP3 -3279 C>A polymorphism may change the protein expression, being associated to autoimmune diseases susceptibility , such as systemic lupus erythematous, Graves’s Disease, Crohn’s Disease, psoriasis and RA Objective: Evaluate the association between FOXP3 -3279 C>A polymorphism (rs3761548) and RA susceptibility, prognosis and disease activity, and cytokine levels Subjects and methods: 251 subjects with the diagnosis of RA, using the criteria defined by American College of Rheumatology (ACR) and 183 healthy subjects were recruited Peripheral leucocyte genomic DNA was extracted, to FOXP3 -3279 C/A (rs3761548) polymorphism analysis and amplified using polymerase chain reaction (PCR) After amplification of a sequence of 155 base pairs (bp) of FOXP3, that was digested using restriction enzyme PstI The products of the digestion were analyzed according to the restriction Fragment length polymorphism (RFLP) by electrophoresis in polyacrylamide gel (1%) and stained with silver nitrate The C allele was defined with fragments of 8 and 75 bp, while the A allele did not undergo cleavage remaining with 155 bp The serum levels of antibody anti-citrullinated protein (anti-CCP) were assessed using chemoluminescense, while rheumatoid factor (RF) and C-reactive protein (CRP) were determined by immunoturbidimetry Cytokine levels as IL-1, IL-17A, tumoral necrosis factor alfa(TNF-a) and transforming growth factor beta d (TGF-ß) were evaluated by immunofluorometry using Luminex® plataform Disease activity was assessed using Disease Activity Score 28 (DAS 28) with erythrocyte sedimentation rate (ESR) as acute phase biomarker Disease activity was considered when DAS28-ESR>26 Results: RA patients had higher levels of TNF-a (p=21) e IL-1 (p<1) and lower levels of TGF- ß, when compared to the control group The CC genotype (in the dominating model) was associated to the decrease of TGF- ß in RA subjects (p=27), but not in the control subjects, regardless to sex or ethnicity Furthermore, those who expressed the C allele in homozygozis or heterozygozis demonstrated higher frequency of DAS 28 VHS in mild to severe activity (p=42) when compared to allele A Conclusion: This paper demonstrated that the -3279 C>A (rs3761548) polymorphism was not significantly associated to the susceptibility to RA, in a south-brazillian population However, in those patients with RA and C genotype, in homozygozis or heterozygozis, The levels of TGF- ß were lower and had worst disease parameters suggesting a deleterious role of the C allele in the disease activitypt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Fisiopatologia Clínica e Laboratorial) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Fisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10338
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameFisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências da Saúdept_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Fisiopatologia Clínica e Laboratorialpt_BR
dc.subjectArtrite reumatóidept_BR
dc.subjectPolimorfismo (Genética)pt_BR
dc.subjectCitocinaspt_BR
dc.subjectArthritis deformanspt_BR
dc.subjectGenetic polymorphismspt_BR
dc.titlePolimorfismo genético do FOXP3 -3279 C/A (rs3761548) e sua associação com níveis plasmáticos de citocinas, atividade e prognóstico da artrite reumatoidept_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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