Transformação genética do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana via Agrobacterium tumefaciens
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Reis, Maria Cecília dos
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Resumo: A metodologia de transformação genética mediada pela bactéria Agrobacterium tumefaciens (agro-transformação) foi aplicada com sucesso para o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana Conídios de B bassiana foram transformados utilizando-se o gene hph de Escherichia coli que confere resistência ao antibiótico higromicina B como marcador seletivo, sob controle de promotores heterólogos e a seqüência de término trpC de Aspergillus nidulans A eficiência de transformação foi de até 28 e 96 transformantes por 14 e 15 conídios alvos, respectivamente, utilizando três vetores binários distintos Alta estabilidade mitótica dos transformantes (8-1%) foi observada após 5 passagens sucessivas em meio não seletivo A ocorrência de transformantes abortivos foi observada para todos os vetores binários utilizados Os transformantes foram analisados quanto a presença do gene hph por PCR e Southern blot A análise de Southern revelou a ocorrência de integração de mais de uma cópia do gene hph no genoma dos transformantes O método de agro-transformação foi efetivo na obtenção de transformantes de B bassiana resistentes à higromicina, possibilitando seu emprego em estudos de mutagênese insersional neste fungo
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Palavras-chave
Agrobacterium, Aspergillus, Fungos patogênicos, Microbiologia, Microbiology, Pathogenic fungi