Perfil da H3K27 no desenvolvimento embrionário in vitro nos modelos suíno e bovino

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dc.contributor.advisorSeneda, Marcelo Marcondes [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorMarinho, Luciana Simões Rafagninpt_BR
dc.contributor.bancaSterza, Fabiana de Andrade Melopt_BR
dc.contributor.bancaBuratini Junior, Josépt_BR
dc.contributor.bancaPerecin, Felipept_BR
dc.contributor.bancaBordignon, Vilceupt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:49:27Z
dc.date.available2024-05-01T14:49:27Z
dc.date.created2015.00pt_BR
dc.date.defesa13.02.2015pt_BR
dc.description.abstractResumo: As marcações epigenéticas da lisina 27 da histona H3 (H3K27) parecem exercer 6 importante papel na regulação do desenvolvimento embrionário de mamíferos O 7 objetivo deste trabalho foi investigar o perfil de alterações da H3K27 e o efeito da 8 inibição da trimetilação da H3K27 em dois modelos animais: embriões suínos e 9 bovinos Para tanto, foram realizados dois experimentos O Experimento 1 teve como 1 intuito investigar o perfil de acetilação e metilação (simples, dupla ou tripla) da H3K27 11 (H3K27ac, me1, me2 e me3, respectivamente) durante a maturação oocitária e 12 desenvolvimento inicial de embriões suínos produzidos in vitro (PIV) O Experimento 2 13 objetivou investigar o efeito da adição do DZNep, inibidor do Complexo Repressivo 14 Polycomb 2 (PRC2), ao meio de cultivo embrionário em diferentes períodos no 15 desenvolvimento de embriões Além disso, foi avaliada a expressão de mRNA dos 16 genes das enzimas do PRC2 EZH2, EED e SUZ12; dos genes marcadores de 17 pluripotência OCT4 e NANOG e do gene marcador de diferenciação celular CDX2 No 18 Experimento 1, oócitos e embriões suínos foram fixados em diferentes estágios de 19 desenvolvimento (de vesícula germinativa a blastocistos em D8) e submetidos a um 2 protocolo de imunofluorescência para a identificação das marcas H3K27ac, me1, me2 e 21 me3 No Experimento 2, embriões clivados foram expostos ao DZNep nos dias 3 a 5 22 (DZNep D3-D5), nos dias 3 a 8 (DZNep D3-D8), nos dias 5 a 8 (DZNep D5-D8) ou 23 cultivados sem a adição do DZNep (Controle) No Experimento 1, o sinal fluorescente 24 da H3K27ac esteve presente em quase todos os estágios, atingindo o mínimo no estágio 25 de 8 células H3K27me1, me2 e me3 foram detectadas em oócitos e apresentaram sinal 26 fraco ou ausente durante o desenvolvimento embrionário, intensificando-se novamente 27 no estágio de blastocisto Três padrões distintos da H3K27me3 foram observados em 28 blastocistos suínos em D8 No Experimento 2, o grupo DZNep D3-D8 apresentou 29 menor taxa de blastocisto (6,9%) em comparação ao grupos DZNep D3-D5 (16,7%) e 3 DZNep D5-D8 (14,3%; p < ,1), sendo todas estas menores ao se comparar à taxa do 31 grupo Controle (33,9%) O número médio de células também foi reduzido de 118,2 ± 32 5,6 (Controle) para 7,4 ± 4,3 (DZNep D3-D5), 51,5 ± 2,5 (DZNep D5-D8) e 36,3 ± 1,6 33 (DZNep D3-D8; p < ,1) Os embriões expostos ao DZNep tiveram também o 34 desenvolvimento atrasado, apresentando menos embriões em estágios avançados de 35 desenvolvimento O DZNep não influenciou a expressão de mRNA dos genes SUZ12, 36 NANOG, OCT4 e CDX2 Entretanto, o grupo DZNep D3-D8 apresentou maiores níveis 37 de mRNA dos genes EZH2 e EED em comparação ao grupo Controle Os resultados do 38 Experimento 1 sugerem que as alterações epigenéticas da H3K27 são remodeladas 39 durante a embriogênese suína Sugerem também que os baixos níveis de H3K27me e altos níveis de H3K27ac indicam um estado transcricionalmente ativo da cromatina 41 durante o desenvolvimento inicial de embriões suínos PIV Com os resultados obtidos no Experimento 2, é possível concluir que a 1 ação do PRC2 é importante para o 2 desenvolvimento embrionário, uma vez que o DZNep reduziu a taxa de blastocistos, o 3 número de células embrionárias e a velocidade de desenvolvimento A exposição dos 4 embriões ao DZNep nos dias 3 a 8 aumentou a expressão de mRNA das enzimas 5 Polycomb EZH2 e EEDpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The epigenetic marks of lysine 27 of histone H3 (H3K27) appear to play an important 8 role in the regulation of embryonic development in mammals The aim of this study was 9 to investigate the profile of H3K27 modifications and the effect of inhibiting 1 trimethylation of H3K27 in two animal models: porcine and bovine embryos Therefore, 11 two experiments were conducted Experiment 1 had the purpose to investigate the 12 profile of acetylation and methylation (mono-, di- and trimethylation) of H3K27 13 (H3K27ac, me1, me2 and me3, respectivally) during oocyte maturation and early 14 development of in vitro-produced (IVP) porcine embryos Experiment 2 aimed to 15 investigate the effect of adding DZNep, an inhibitor of the Polycomb Repressive 16 Complex (PRC2), to the culture media in different periods of culture on embryo 17 development Furthermore, mRNA expression of genes encoding the PRC2 enzymes 18 EZH2, EED and SUZ12; the markers of pluripotency OCT4 and NANOG and the 19 marker of cell differentiation CDX2 was investigated In Experiment 1, oocytes and 2 embryos were fixed at different developmental stages (from germinal vesicle to D8 21 blastocysts) and submitted to an immunocytochemistry protocol to identify the 22 H3K27ac, me1, me2 e me3 marks In Experiment 2, cleaved embryos were exposed to 23 DZNep from day 3 to 5 (DZNep D3-D5), from day 3 to 8 (DZNep D3-D8), from day 5 24 to 8 (DZNep D5-D8) or cultured without DZNep (Control) In Experiment 1, the 25 fluorescent signal of H3K27ac was observed in most development stages, reaching a 26 minimum at the 8-cell stage H3K27me1, me2 and me3 signals were detected in oocytes 27 and showed a weak or absent signal during embryo development, rising again at the 28 blastocyst stage Three different patterns of the H3K27me3 mark were observed in 29 porcine D8 blastocysts In Experiment 2, DZNep D3-D8 had lower blastocyst rate 3 (69%) than DZNep D3-D5 (167%) and DZNep D5-D8 (143%; P < 5), which in 31 turn were lower than the rate of Control group (339%) Mean cell number was also 32 reduced from 1182 ± 56 (Control group) to 74 ± 43 (DZNep D3-D5), 515 ± 25 33 (DZNep D5-D8) and 363 ± 16 (DZNep D3-D8; P < 1) Embryos treated with 34 DZNep also had development delayed, evidenced by fewer embryos at later stages of 35 development DZNep did not influence mRNA expression of SUZ12, NANOG, OCT4 36 and CDX2 However, DZNep D3-D8 had higher mRNA levels of EZH2 and EED when 37 compared to the Control group Results from Experiment 1 suggest that the epigenetic 38 marks of H3K27 are globally remodeled during porcine embryogenesis Furthermore, 39 the low levels of H3K27me and high levels of H3K27ac indicate a transcriptionally 4 active chromatin state during porcine early embryonic development With the results 41 obtained from Experiment 2, it is possible to conclude that PRC2 is important for 42 embryo development, considering that DZNep decreased blastocyst rates, blastocyst cell number and speed of development Exposure 1 of embryos to DZNep from days 3 to 8 2 increased mRNA expression of the Polycomb enzymes EZH2 and EEDpt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15461
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectReprodução animalpt_BR
dc.subjectAspectos genéticospt_BR
dc.subjectGenética veterináriapt_BR
dc.subjectEmbriãopt_BR
dc.subjectDesenvolvimentopt_BR
dc.subjectGenetic aspectspt_BR
dc.subjectVeterinary geneticspt_BR
dc.subjectDevelopmentpt_BR
dc.subjectHistonespt_BR
dc.subjectEmbryos - Animal reproductionpt_BR
dc.titlePerfil da H3K27 no desenvolvimento embrionário in vitro nos modelos suíno e bovinopt_BR
dc.typeTesept_BR

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