Perfil da H3K27 no desenvolvimento embrionário in vitro nos modelos suíno e bovino
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Marinho, Luciana Simões Rafagnin
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Resumo
Resumo: As marcações epigenéticas da lisina 27 da histona H3 (H3K27) parecem exercer 6 importante papel na regulação do desenvolvimento embrionário de mamíferos O 7 objetivo deste trabalho foi investigar o perfil de alterações da H3K27 e o efeito da 8 inibição da trimetilação da H3K27 em dois modelos animais: embriões suínos e 9 bovinos Para tanto, foram realizados dois experimentos O Experimento 1 teve como 1 intuito investigar o perfil de acetilação e metilação (simples, dupla ou tripla) da H3K27 11 (H3K27ac, me1, me2 e me3, respectivamente) durante a maturação oocitária e 12 desenvolvimento inicial de embriões suínos produzidos in vitro (PIV) O Experimento 2 13 objetivou investigar o efeito da adição do DZNep, inibidor do Complexo Repressivo 14 Polycomb 2 (PRC2), ao meio de cultivo embrionário em diferentes períodos no 15 desenvolvimento de embriões Além disso, foi avaliada a expressão de mRNA dos 16 genes das enzimas do PRC2 EZH2, EED e SUZ12; dos genes marcadores de 17 pluripotência OCT4 e NANOG e do gene marcador de diferenciação celular CDX2 No 18 Experimento 1, oócitos e embriões suínos foram fixados em diferentes estágios de 19 desenvolvimento (de vesícula germinativa a blastocistos em D8) e submetidos a um 2 protocolo de imunofluorescência para a identificação das marcas H3K27ac, me1, me2 e 21 me3 No Experimento 2, embriões clivados foram expostos ao DZNep nos dias 3 a 5 22 (DZNep D3-D5), nos dias 3 a 8 (DZNep D3-D8), nos dias 5 a 8 (DZNep D5-D8) ou 23 cultivados sem a adição do DZNep (Controle) No Experimento 1, o sinal fluorescente 24 da H3K27ac esteve presente em quase todos os estágios, atingindo o mínimo no estágio 25 de 8 células H3K27me1, me2 e me3 foram detectadas em oócitos e apresentaram sinal 26 fraco ou ausente durante o desenvolvimento embrionário, intensificando-se novamente 27 no estágio de blastocisto Três padrões distintos da H3K27me3 foram observados em 28 blastocistos suínos em D8 No Experimento 2, o grupo DZNep D3-D8 apresentou 29 menor taxa de blastocisto (6,9%) em comparação ao grupos DZNep D3-D5 (16,7%) e 3 DZNep D5-D8 (14,3%; p < ,1), sendo todas estas menores ao se comparar à taxa do 31 grupo Controle (33,9%) O número médio de células também foi reduzido de 118,2 ± 32 5,6 (Controle) para 7,4 ± 4,3 (DZNep D3-D5), 51,5 ± 2,5 (DZNep D5-D8) e 36,3 ± 1,6 33 (DZNep D3-D8; p < ,1) Os embriões expostos ao DZNep tiveram também o 34 desenvolvimento atrasado, apresentando menos embriões em estágios avançados de 35 desenvolvimento O DZNep não influenciou a expressão de mRNA dos genes SUZ12, 36 NANOG, OCT4 e CDX2 Entretanto, o grupo DZNep D3-D8 apresentou maiores níveis 37 de mRNA dos genes EZH2 e EED em comparação ao grupo Controle Os resultados do 38 Experimento 1 sugerem que as alterações epigenéticas da H3K27 são remodeladas 39 durante a embriogênese suína Sugerem também que os baixos níveis de H3K27me e altos níveis de H3K27ac indicam um estado transcricionalmente ativo da cromatina 41 durante o desenvolvimento inicial de embriões suínos PIV Com os resultados obtidos no Experimento 2, é possível concluir que a 1 ação do PRC2 é importante para o 2 desenvolvimento embrionário, uma vez que o DZNep reduziu a taxa de blastocistos, o 3 número de células embrionárias e a velocidade de desenvolvimento A exposição dos 4 embriões ao DZNep nos dias 3 a 8 aumentou a expressão de mRNA das enzimas 5 Polycomb EZH2 e EED
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Palavras-chave
Reprodução animal, Aspectos genéticos, Genética veterinária, Embrião, Desenvolvimento, Genetic aspects, Veterinary genetics, Development, Histones, Embryos - Animal reproduction