Produção in vitro de embriões na espécie ovina : efeito do benzoato de estradiol na aspiração folicular e transporte de gametas e embriões em longas distâncias
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Resumo: O objetivo do presente trabalho foi comparar o número de folículos, oócitos e a taxa de recuperação em ovelhas submetidas ao protocolo One Shot com e sem o uso do Benzoato de Estradiol; e com base nos resultados do primeiro experimento, utilizou-se o melhor protocolo hormonal para obtenção de oócitos e assim relatar a viabilidade do transporte de gametas femininos e embriões ovinos produzidos in vitro por longas distâncias No primeiro experimento utilizou-se 33 ovelhas pluríparas, mestiças (1/2 sangue Texel), lanadas, não lactantes, idade média 5 anos e com ECC 3,±,3 que foram divididas em 3 grupos O grupo One Shot (n=1) recebeu 1,5 mg de norgestomet (Crestar®, Intervet, Holanda) no D e este foi mantido por 1 dias No D8 foi administrado ,4mg de D-cloprostenol sódico (Preloban®, Intervet, Holanda), 2 UI FSH (Pluset®, Hertape Calier, Espanha) e 3 UI de eCG (Folligon®, Intervet, Holanda) No grupo Benzoato (n=11), a única diferença em relação ao grupo One Shot foi a administração de ,6 mg de benzoato de estradiol (Estrogin®, Famavet, Brasil) em D No Grupo Sem Tratamento (n =12) os animais não receberam nenhum estímulo hormonal A coleta dos oócitos foi realizada através de laparotomia 36 horas (D1) após a administração das gonadotrofinas Foi observado aumento (P<,5) na média de folículos aspirados no grupo One Shot em relação ao grupo sem estímulo hormonal e o Benzoato (16,3±5,6; 9,5±2,4 e 12,1±4,1) As médias de oócitos recuperados e a taxa de recuperação foram superiores (P<,5) no grupo One Shot e no Benzoato em relação ao grupo Sem Tratamento, resultando em 14,2±9,/87,1% (142/163); 11,±6,2 /91,4% (122/134) e 6,8±3,5 /71,9% (82/114), respectivamente No segundo experimento, foram utilizadas 5 ovelhas pluríparas da raça Santa Inês com ECC médio de 3, que foram submetidas a tratamento hormonal One Shot A aspiração folicular (OPU) foi via laparotomia Os oócitos selecionados foram envasados em TCM 199 (Nutricell, Brasil), gaseificados com CO2 e armazenados em incubadora de transporte (WTA, Sorocaba, São Paulo) com ambiente controlado em 38,5 °C e 5% de CO2 O transporte dos oócitos por 583 km foi realizado por meio rodoviário durante 14 horas até o laboratório de produção in vitro de embriões (PIVE), onde os oócitos completaram o período de maturação, foram fecundados com a mesma partida de sêmen e tiveram o cultivo iniciado em meio de cultivo SOF ovine Após 4 dias, os embriões foram submetidos ao trajeto de retorno e enviados nas mesmas condições de transporte Obtevê-se uma média de 9,8 ± 3 (49 / 5) embriões por doadora e 25 mórulas da Grau I foram transferidas em 7 receptoras, sendo 3 a 4 embriões no estágio de mórula, no ápice do corno uterino ipslateral ao corpo lúteo O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia transretal 3 dias após a transferência Uma prenhez (14,3% - 1/7) foi confirmada de uma receptora que apresentava 4 CLs Um cordeiro saudável nasceu de parto eutócico após período gestacional normal Os resultados demonstram que o One Shot foi o melhor protocolo para obtenção de oócitos e é possível obter-se prenhez a partir da PIVE, com transportes de oócitos e embriões por até 14 horas
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Palavras-chave
Ovino, Fertilização in vitro, Ovino, Embrião, Hormônios, Sheep, Sheep, Embryos, Fertilization in vitro