Identificação molecular de deteriorantes mesófilos em leite cru refrigerado

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Ciência Animalpt_BR
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dc.contributor.advisorBeloti, Vanerli [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorMareze, Julianapt_BR
dc.contributor.bancaSantana, Elsa Helena Walter dept_BR
dc.contributor.bancaTamanini, Ronaldopt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T15:00:19Z
dc.date.available2024-05-01T15:00:19Z
dc.date.created2017.00pt_BR
dc.date.defesa22.02.2017pt_BR
dc.description.abstractResumo: A baixa qualidade do leite cru e reduzida vida útil do leite pasteurizado no Brasil causados pela deterioração dos constituintes do leite por parte dos microrganismos deteriorantes reflete diretamente seu potencial tecnológico para indústria Conhecer os microrganismos deteriorantes que constituem a microbiota do leite cru refrigerado possibilita identificar a origem destes contaminantes, desta forma permite-se estabelecer ações de controle para evitar sua presença no leite O objetivo deste estudo foi identificar geneticamente a microbiota mesofílica deteriorante do leite cru refrigerado da região de Castro-PR por meio de ferramentas moleculares afim de caracterizar a microbiota com atividade proteolítica e lipolítica Foram coletadas 18 amostras de leite cru refrigerado direto dos tanques de expansão de propriedades da região centro-oriental do Paraná As propriedades eram dotadas de ordenhadeira mecânica de circuito fechado com sistema de pré-resfriamento em placas e refrigeração por tanque de expansão A contagem de microrganismos mesófilos foi realizada em Petrifilm ACTM e para a verificação da atividade proteolítica e/ou lipolítica utilizou-se ágar leite suplementado (9:1) com solução leite em pó desnatado reconstituído (1%) e ágar tributirina suplementado (99:1) com tributirina, respectivamente Para extração de DNA das cepas de mesófilos foi utilizada a técnica da fervura e para amplificação parcial do gene 16S rRNA utilizou-se a técnica de PCR, utilizando os primers 27F e 1492R Utilizou-se a análise de RFLP para definir os grupos genéticos entre as cepas isoladas e facilitar a escolha dos exemplares para sequenciamento A média da contagem de microrganismos mesófilos foi de 3,58 log UFC/mL A microbiota mesofílica com atividade proteolítica e /ou lipolítica foi identificada através da amplificação e sequenciamento do gene 16S rRNA Todas as cepas foram identificadas com percentual de identidade de 1% a partir da comparação com dados dos GenBank Diante disso, selecionou-se 172 cepas, as quais apresentaram capacidade proteolítica e/ou lipolítica, onde 66 (38%) cepas apresentaram atividade proteolítica, 57 (33%) ambas atividades e (49) 29% apenas atividade lipolítica Bactérias Gram-positivas corresponderam 83,72% do total de cepas e 16,28% foram Gram-negativas A identificação genética das cepas mesofílicas com capacidade deteriorante mostrou predominância dos gêneros Lactococcus e Enterococcus (4,11%), seguida por Staphylococcus sp (13,94%); Streptococcus sp (13,36%), Acinetobacter sp (11,62%), Kurthia sp e Bacillus sp (5,23%), Rothia sp (4,6%) e Stenotrophomonas (1,16%) Em relação a atividade deteriorante os gêneros Lactococcus e Enterococcus apresentaram entre os isolados, maior atividade proteolítica enquanto que o Streptococcus dysgalactae apresentou maior atividade lipolítica Os gêneros Rothia sp e Kurthia sp foram isoladas pela primeira vez como deteriorantes do leite crupt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The low quality of raw milk and short shelf life of pasteurized milk in Brazil caused by deterioration of milk constituents by spoilage microorganisms directly reflects their technological potential for industry Knowing the spoilage microorganisms that constitute the microbiota of refrigerated raw milk makes it possible to identify the origin of these contaminants, in this way it is possible to establish control actions to avoid their presence in milk The objective of this study was to genetically identify the spoilage mesophilic microbiota of the refrigerated raw milk from Castro-PR through molecular tools in order to characterize the microbiota with proteolytic and lipolytic activity Eighteen samples of refrigerated raw milk were collected directly from bulk tanks of properties in the central-eastern region of Paraná The properties consisted of a closed-loop mechanical milking machine with pre-cooling system and refrigerated bulk tank The counts of mesophilic microorganisms were carried out in Petrifilm ACTM and for the proteolytic and / or lipolytic activity using supplemented milk agar (9: 1) with reconstituted skimmed milk powder (1%) and supplemented tributyrin agar (99: 1) with tributyrin, respectively For the extraction of DNA from the mesophilic strains, the boiling technique was used and for partial amplification of the 16S rRNA gene the PCR technique, using primers 27F and 1492R RFLP analysis was used to define the genetic groups among the isolated strains and to facilitate the selection of the species for sequencing The mean count of mesophilic microorganisms was 358 log CFU / mL The mesophilic microbiota with proteolytic and / or lipolytic activity was identified through the amplification and sequencing of the 16S rRNA gene All strains were identified with 1% identity percentage from GenBank data A total of 172 strains with proteolytic and / or lipolytic capacity were selected, where 66 (38%) strains showed proteolytic activity, 57 (33%) both activities and (49) 29% only lipolytic activity Gram-positive represented 8372% of total strains and 1628% were Gram-negative The molecular identification of mesophilic strains with spoilage potential showed predominance of Lactococcus and Enterococcus (411%), Staphylococcus sp (1394%); Streptococcus sp (1336%), followed by Acinetobacter sp (1162%), Kurthia sp and Bacillus sp (523%), Rothia sp (46%) and Stenotrophomonas (116%) In relation to the deteriorating activity, the genera Lactococcus and Enterococcus presented greater proteolytic activity among the isolates, whereas Streptococcus dysgalactae showed higher lipolytic activity The genera Rothia sp and Kurthia sp were isolated for the first time as spoilage of raw milkpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/16085
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência Animalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência Animalpt_BR
dc.subjectLeitept_BR
dc.subjectMicrobiologiapt_BR
dc.subjectLeitept_BR
dc.subjectResfriamentopt_BR
dc.subjectLeitept_BR
dc.subjectMilkpt_BR
dc.subjectMilkpt_BR
dc.subjectBacterial geneticspt_BR
dc.subjectCoolingpt_BR
dc.subjectMicrobiologypt_BR
dc.titleIdentificação molecular de deteriorantes mesófilos em leite cru refrigeradopt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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